全 文 ：图 3　甲醇空白的 HPLC图
3　讨论
以熊果酸的含量作为考察指标 , 筛选并确定最佳的提取方
式 , 实验选择了超声提取方式。目前 , 超声技术被广泛应用于中
草药有效成分的提取 , 超声波产生强烈振动 、空化效应 、搅拌作用
等 , 可以加速药物有效成分进入溶剂 ,从而提高提取效率 ,缩短提
取时间 , 并且避免了高温对提取成分的影响。超声提取与回流提
取 、索氏提取方式比较 ,提取时间短 ,提取效率高。
以熊果酸的含量作为考察指标 , 筛选并确定最佳的提取方
法 , 首先考察了 20%乙醇 、40%乙醇 、60%乙醇 、 80%乙醇和无水
乙醇对其含量的影响 ,实验结果表明 80%乙醇提取熊果酸的提
取率最高。
取熊果酸对照品溶液 , 在 190 ～ 400 nm进行光谱扫描 , 其最
大吸收波长为 194 nm,但溶剂甲醇在短波长处均有吸收 , 为了减
少干扰 , 又尽量不降低灵敏度 , 选择 210 nm作为检测波长。
根据实际情况和熊果酸的有关含量测定的文献报道 [ 10] , 采用
不同的流动相系统进行实验。本实验中考察了乙腈 -水, 甲醇 -
水 ,乙腈 -磷酸和甲醇 -磷酸洗脱系统 , 结果选定乙腈 -0.1%磷
酸水溶液(85∶15)作为熊果酸含量测定的流动相。结果表明均能
达到基线分离 , 柱效高 ,峰形好 ,能够完全满足色谱定量的要求。
采用正交实验法优化提取方法 ,考察了提取溶剂 、溶剂用量 、
提取时间和提取次数对提取结果的影响 ,实验结果表明熊果酸的
最佳提取方法是以 25倍量的 80%乙醇超声提取 2次 , 40 min/
次。
熊果酸的浓度在 0.012 5 ～ 0.150 0 mg/ml范围内与峰面积
呈良好的线性关系 , r=0.999 6;平均回收率为 99.35%, RSD为
1.52%。
采用 HPLC法 ,以外标法测定熊果酸的含量 , 方法简便 、快
速 , 准确度好 ,精密度高 ,可用于美味猕猴桃根药材熊果酸的质量
控制。
参考文献:
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的含量 [ J] .中国中药杂志 , 2006, 31(18):1533.
收稿日期:2008-05-29;　修订日期:2008-08-22
基金项目:国家自然科学基金(No.20502021);云南省应用基础研究面上项目(No.2008CD067)
作者简介:李治滢(1969-),女(白族),云南大理人 ,现任云南大学省微生物研究所助理研究员 ,学士学位 ,主要从事真菌分类学和资源学研究工作.
滇南黄草乌内生真菌抗菌活性的筛选
李治滢 ,杨丽源 ,李绍兰 ,陈有为 ,吴少华
(云南大学省微生物研究所 ,云南 昆明　650091)
摘要:目的 从滇南黄草乌 AconitumvilmorimianumKom.植物的根和茎中分离内生真菌 , 并进行初步鉴定和抗菌活性筛
选。方法 经显微形态观察进行内生真菌的分类鉴定 , 同时采用纸片法进行抗菌活性筛选。结果 从滇南黄草乌植物中
分离获得 37株内生真菌 ,其中 14株内生真菌有抗菌活性 ,占菌株数的 37.84%;镰孢霉属(Fusarmm)是抗菌活性菌株的
优势种属;青霉属(Penicinium)的抗菌活性高且抗菌谱广。 结论 滇南黄草乌植物内生真菌中广泛分布着有抗菌活性的
菌株。
关键词:滇南黄草乌;　内生真菌;　抗菌活性
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)05-1027-02
AntibacterialActivityofEndophyticFungiinAconitum
LIZhi-ying, YANGLi-yuan, LIShao-lan, CHENYou-wei, WUShao-hua
(YunnanInstituteofMicrobiology, YunnanUniversity, Kunming650091, China)
Abstract:ObjectiveToisolateandidentifysomeendophyticfungifromtherootandstemofAconitumvilmorimianumKom.
plantanditsantibacterialactivitiesweretested.MethodsEndophyticfungiweremorphologicalyidentifiedanditsantibacterial
activitieswerescreenedbyscriptesting.Results 37strainsofEndophyticfungiwereisolatedfromtherootandstemofAxonitum
vilmlrimianumKomplant, 14 trains(37.84% oftotalstrains)ofthemhadtheinhibitoryactiononmicroorganism, andFusarium
specieswasobviouslydominantfamiliesamongantibacterialactivitiesstrains, Peniciliumspecieshadevidentinhibitoryactivity.
ConclusionTherearemanyantibacterialstrainsinAconitumvilmorimianumKom.
Keywords:AconitumvilmorimianumKom;　Endophyticfungi;　Antibacterialactivity
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期
　　黄草乌为毛莨科乌头属植物 AconitumvilmorimianumKom,的
干燥块根 , 俗称大草乌。野生滇南黄草乌是植物卡氏乌头的侧生
块根 , 别名藤乌 、黄草乌 、小草乌 , 属藤本耐寒植物 [ 1] 。 黄草乌 ,
云南素有大补药之称 , 是云南白药等名贵中成药的主要原料之
一 , 有搜风 、除湿 、活血 、止痛等功效。
加强对乌头属植物的活性成分 、药用价值的研究 ,以开发新
的药用植物资源 , 从而缓解我国中药资源日益减少与药用植物资
源需求量的不断增加之间突出矛盾。毛茛科是含有毒植物种类
最多科之一 , 其中乌头属是我国最早记载的有毒植物 〔2〕 , 在开发
利用的同时必须采取正确的措施以降低其毒性。本研究的目的
旨在为保护滇南黄草乌植物资源 、开发新型抗菌药物 、解决多年
来困扰临床的乌头碱的毒性问题寻找新途径。
1　材料与方法
1.1　植物样品 滇南黄草乌 AconitumvilmorimianumKom植物采
自云南省会泽县大海乡中草药种植基地 ,海拔 3 150 m。
1.2　指示菌 本次实验所用的指示菌均由云南省微生物研究所
真菌资源与菌种保藏室提供。所用指示菌参照国家新药筛选中
心的植物内生菌抗菌筛选模型进行选取。
金黄色葡萄球菌 Staphylococcusaureus(G+), 藤黄八叠球菌
sarcinalutea(G+), 大肠埃希氏杆菌 Escherichiacoli(G-), 铜绿
假单孢菌(绿脓杆菌)Pseudomonasaeruginosa(G-)。 白假丝酵
母(白色念株菌)Candidaalbicans, 星形石膏样毛癣菌(须疱毛癣
菌)Trichophytongypseumasteroides。
1.3　培养基 PDA培养基(马铃薯葡萄糠培养基), 临用时每毫
升培养基中加 80单位的青霉素以抑制细菌生长;促孢培养基
(KH
2
PO
4
, MgSO
4
· 7H
2
O, KNO
3
, KCl,葡萄糖 , 蔗糖);营养肉汤培
养基(蛋白胨 , 牛肉膏 , NaCl);沙博弱氏培养基(葡萄糖 , 蛋白
胨)。
1.4　内生真菌的分离 首先用自来水冲洗净川乌植物的根 、茎表
面的泥沙 , 接着进行表面消毒 [ 3〗, 在无菌条件下切成 0.3 cm×
0.3 cm大小的片段种植在 PDA培养基里 , 置于(28±1)℃温箱
中静止培养。培养 3 ～ 12 d后 , 在接种点周围可见有菌丝生长 ,
挑取植物组织周围的菌丝转接入 PDA试管斜面 , 经纯化即得川
乌植物内生真菌。
1.5　内生真菌的分类鉴定 采用插片培养方法 , 对分离获得的内
生真菌进行显微形态特征的观察 、分类鉴定。分类检索参照文
献 [ 4, 5] 。
1.6　内生真菌的抗菌活性筛选
1.6.1　内生真菌的发酵培养 将分离获得的内生真菌分别接入
PDA液体培养基中 , 于(28±2)℃, 200 r/min的摇床上振荡培养
6 d, 加等体积的 95%酒精浸提 48 h以上 , 过滤弃菌丝体浓缩浸
提液 , 制成菌株的发酵样品备用。
1.6.2　指示菌的培养 将待试的 4株细菌接入营养肉汤液体培
养基 、2株真菌接入沙博弱氏斜面 , 置于(37 ±1)℃温箱培养待
用。
1.6.3　抗菌实验 采用滤纸片法 , 在无菌状态下用无菌水洗下指
示菌真菌的菌休制成菌悬液 , 供试细菌采用混皿 、真菌采用涂皿
的方法做成供试平皿(平均每皿加指示菌 0.1 ～ 0.4 ml), 将蘸有
内生真菌发酵提取浓缩物的无菌滤纸片轻放其上 , 置于(37 ±
1)℃培养 24 ～ 72 h, 测量抑菌圈直径大小。
2　结果
2.1　滇南黄草乌内生真菌的分离 从滇南黄草乌植物中分离获
得内生真菌 37株 ,根部 15株 , 茎部 22株 ,经分类鉴定共有 12个
属见表 1。
从表 1可以看出 , 滇南黄草乌的内生真菌在根部和茎部的分
布 , 无论是在种群和数量分布上 , 茎部分离的内生真菌略显著于
根部 , 并且其种群组成基本不同(除无孢类群 MyceliaSterelia
外),根部是以毛壳菌属(Chaetomium)为优势属 , 有 3株占根部内
生真菌的 20.00%,面茎部则以镰孢霉属(Fusarium)为优势属 , 有
7株(占茎部的 31.82%)。
表 1　滇南黄草乌植物内生真菌的分布
分离部位 内生真菌 数量 /株 合计 /株
根 毛壳菌属(Chaetomium) 3 15
青霉属(Penicilum) 1
木霉属(Trichoderma) 1
粉孢霉属(Oidium) 2
拟鞘孢属(Chalaropsis) 2
无孢菌群(MyceliaSterelia) 6
茎 匐柄霉属(Stemphylium) 3 22
镰孢霉属(Fuasrium) 7
交链孢霉属(Alternaria) 3
枝孢属(Cladosporium) 1
葡萄孢属(Botrytis) 1
黑孢霉属(Nigrospora) 2
槲果孢属(Balanium) 2
无孢类群(MyceliaSterelia) 3
2.2　滇南黄草乌内生真菌的抗菌活性及活性菌株的分布 在滇
南黄草乌内生真菌活性菌株中 , 有 14株内生真菌对 1株或多株
指示菌有拮抗作用(见表 2)。
表 2　滇南黄草乌植物内生真菌的抗菌活性菌株及其分布
属名 抑菌圈直径 l/mmA B C D E F
分离
部位
匐柄霉属(Stemphylium) 21 19 茎
镰孢霉属(Fusarium) 17 17 茎
镰孢霉属(Fusarium) 15 12 茎
镰孢霉属(Fusarium) 12 20 19 茎
毛壳菌属(Chaetomium) 17 根
青霉属(Penicilum) 22 38 21 21 17 根
无孢类群(Myceliasterilia) 30 11 茎
无孢类群(Myceliasterilia) 14 茎
枝孢霉(Cladosplrium) 16 茎
镰孢霉属(Fusarium) 20 32 茎
葡萄霉属(Botrytis) 19 16 14 茎
镰孢霉属(Fusarium) 15 24 茎
镰孢霉属(Fusarium) 11 茎
槲果孢属(Balanium) 25 18 茎
　　A.大肠埃希氏杆菌 Escherichiacoli;B.藤黄八叠球菌 Sarcinalutea;C.
金黄色葡萄球菌 Staphylococusaureus;D.铜绿假单孢菌 Pseudomonas
aeruginosa;E.白假丝酵母 Candidaalbicans;F.星形石膏样毛癣菌 Tricho-
phytongypseumasteroids
从表 2可看出 , 滇南黄草乌内生真菌抗菌活性菌株主要分布
在茎部 ,有 12株占抗菌活性菌株的 85.71%, 根部只有 2株占
14.29%。
在有抗菌活性的菌株的种群分布上 , 12株共分布在 7个属
(未包括无孢类群), 其中以镰孢霉属为优势属 , 有 6株占抗菌活
性菌株的 42.86%,并且对皮肤致病菌(白假丝酵母 Candidaalbi-
cans和星形石膏样毛癣菌 Trichophytongypseumasteroides)的抗菌
作用显著;而以青霉属(penicillium)抗菌素菌活性高及抗菌谱广 ,
它对本次实验中的 5株指示菌有拮抗作用且抗菌素菌活性高
(抑菌圈直径≥15 mm)。
3　讨论
从以上实验结果看出 ,滇南黄草乌植物内生真菌中广泛存在
有抗菌活性的菌株 ,并且抗菌活性和种群都有多样性特点。镰孢
霉属不仅是滇南黄草乌植物的优势属种 ,而且也是茎部内生真菌
的优势种 , 同时还是有抗菌活性菌株的优势属种 , 并且对皮肤致
病菌有显著的拮抗作用。有待进一步研究。
本次滇南黄草乌内生真菌的研究中 ,无论是在内生真菌的种
群分布 ,还是有抗菌活性菌株的分布 , 茎部的明显多于根部 ,这可
能与滇南黄草乌的毒性有关。
分布在根部的 1株青霉属的抗菌活性高且抗菌谱广 ,这可能
与根部含乌头碱成分的种类及含量有关。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5
近年来 , 不断有从各种内生真菌中发现新抗生素和抗肿瘤物
质的报道。我们从滇南黄草乌中筛选有抗菌活性的菌株 ,并在今
后的工作中进行有效活性成分的分离 ,不仅对保护滇南黄草乌植
物资源 、开发新型抗菌药物 , 还可以为解决多年来困扰临床的乌
头碱的毒性问题寻找到一条新路子。
致谢:云南会泽县大海乡中草药种植基地提供的植物样品 ,
在此表示谢意。
参考文献:
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收稿日期:2008-10-10;　修订日期:2008-12-18
基金项目:国家自然科学基金(No.30271619);
北京市自然科学基金(No.7042054)
作者简介:胡元会(1963-),男(汉族),陕西武功人 ,现任中国中医科学院
广安门医院心内科主任医师 ,博士生导师, 博士学位 ,主要从事中医药防
治心力衰竭的研究工作.
心复康口服液对心梗后心衰大鼠心肌
三磷酸腺苷含量的影响
胡元会 1 , 吴华芹 1 ,马铁民2 ,陈双厚 1 ,刘瑞华1 ,张百舜 1 ,程慧平1 ,褚瑜光 1 , 房玉涛 1 ,
石　洁 1 ,何建成3 ,曹雪滨 4
(1.中国中医科学院广安门医院 ,北京　100053;　 2.北京大学医学部基础医学院 ,北京　100029;
3.上海中医药大学基础医学院 ,上海　201203;　4.中国人民解放军二五二医院 ,河北 保定　071000)
摘要:目的 观察心复康口服液对心梗后心衰大鼠梗塞周围心肌中三磷酸腺苷(ATP)含量的影响。方法 采用结扎 SD
大鼠左冠状动脉前降支致心梗后心衰大鼠模型 ,用心复康口服液于术后 24h灌胃给药 , 以卡托普利作为阳性对照药。给
药 2, 4, 6, 8周 ,观察大鼠梗死周围心肌 ATP含量。结果 与模型组比较 , 心复康口服液和卡托普利组皆明显增加梗死周
围心肌中 ATP含量(P<0.01)。结论 心复康口服液可升高梗死周围心肌组织中 ATP含量从而改善心梗后心衰大鼠心
肌能量代谢。
关键词:心复康口服液;　高能磷酸化合物;　心力衰竭;　大鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)05-1029-02
EffectofXinFuKangOralLiquidontheContentofATPinCardiacTissueofHeartFail-
ureRatsafterMyocardialInfarction
HUYuan-hui1 , WUHua-qin1 , MATie-min2 , CHENShuang-hou1 , LIURui-hua1 , ZHANGBai-shun1 , CHENGHui-
ping1 ,CHUYu-guang1 , FANGYu-tao1 ,SHIJie1 , HEJian-cheng3 ,CAOXue-bin4
(1.GuanganmenHospital, ChinaAcademyofChineseMedicalSciences, Beijing100053, China;2.Depart-
mentofPathophysiology, SchoolofBasicMedicalSciences, BeijingUniversity, Beijing100029, China;3.Acade-
myofBasicMedicalSciences, ShanghaiUniversityofTCM, Shanghai201203, China;4.DepartmentofCardi-
ology252 HospitalofPLA, Baoding, 071000, China)
Abstract:ObjectiveToobservetheefectofXinfukang(XFK)OralLiquidonthecontentofATPincardiactissueofheartfail-
uremyocardialinfarction.MethodsTheAMImodelwasestablishedbyligatingleftanterialdescendingcoronaryartery.24hlat-
er, theratswerefedXFKOralLiquidbyoralgarage.Captoprilservedascontrol.After2, 4, 6, 8 weekstreatment, thecontentof
ATPwasdetermined.ResultsComparedwithmodelgroup, thecontentofATPwasobviouslyincreasedinXFKOralLiquidgroup
andcaptoprilgroup(P<0.01).ConclusionXFKOralLiquidcaninhibittheobstacleofenergymetabolismbyincreasingthe
contentofATP.
Keywords:XFKOralLiquid;　Energy-richphosphate;　Heartfailure;　Rats
　　心肌缺血时 , 心肌细胞氧供与氧耗失衡 , 产生心肌能量代谢
障碍 , 是心力衰竭进展的一个重要因素 , 优化心肌能量代谢重塑
成为目前治疗心力衰竭的新策略 [ 1] 。心复康口服液是我们临床
治疗心力衰竭的经验方 ,临床和实验研究均证实该药可保护缺血
心肌 , 改善心脏功能 [ 2 , 3] 。本实验旨在观察心复康口服液对心肌
组织高能磷酸化合物的影响 ,以进一步探讨中药抗心衰的机制。
1　仪器与材料
1.1　仪器 TA1003型精密电子天平(上海天平仪器厂);采用岛
津 LC-10A型高效液相仪 ,包括 CBM-10主机 、SPD-10AUV-
VIS双波长分光光度计 、LC-10AD双泵 、DGU脱气机。
1.2　试剂与药物 心复康口服液(xinfukangoralliquid, XFK)成
分主要由黄芪 、人参 、丹参 、灵芝 、红花等组成。 Captopril(中美上
海施贵宝制药有限公司 ,批号:0304033)。 ATP标准品(Sigma公
司)。
1.3　动物 正常雄性 SD大鼠 , 体重 230 ～ 260 g, 60只 , 北京维通
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期