全 文 :收稿日期:2004-12-08; 修订日期:2005-04-18
基金项目:广东省中医药局科技基金资助项目(No.101127)
作者简介:梅全喜(1962-),男(汉族),湖北蕲春人 , 现任广州中医药大学
附属中山中医医院教授 ,主任中药师 , 主要从事中药研究开发与药剂工
作.
三角草抗蛇毒作用的实验研究
梅全喜 , 钟希文 , 高玉桥 , 林 慧 , 吴惠妃
(广州中医药大学附属中山中医医院 ,广东 中山 528400)
摘要:目的:研究三角草抗蛇毒损伤的药理作用。方法:SD 大鼠随机分为蛇毒损伤组;三角草低 、高剂量组;季德胜蛇药
片组。以上各组动物各给药 3 d , 1 次/ d。末次给药后 1 h 以五步蛇蛇毒液皮下注射。另设一正常对照组。各组动物进
行中毒表现观察 、计算动物死亡率和药物对蛇毒损伤动物的保护率以及取血作凝血分析。结果:与蛇毒损伤组相比 , 除三
角草高剂量组外 ,其余药物治疗组动物的局部和全身症状较轻 , 死亡率较低(P<0.05);F IB , PT , TT 无明显变化(P >
0.05)。结论:低剂量三角草及季德胜蛇药片均对五步蛇毒中毒大鼠有保护作用;但三角草的高剂量对蛇毒中毒大鼠无
保护作用 ,相反具有一定的毒副作用。
关键词:三角草; 蛇毒损伤
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2005)07-0584-02
Experiment Study of Sanjiaocao against Snake Venom Poisoning
MEI Quan-xi , ZHONG Xi-wen , GAO Yu-qiao , LIN H ui , WU Hui-fei
(Zhongshan Hospi tal of Trad it ional Chinese Medicine A f f i liated Universi ty of Tradi t ional Chinese
Medicine o f Guangzhou , Zhongshan , Guangdong 528400 , China)
Abstract:Objective:To study Sanjiaocao against Snake venom poisoning.Methods:Measured off the animals models of SD
rats by r adom ly dividing into four g roups:snake-poisoned g roup;low and high dose of Sanjiao cao g roups;JI De-sheng
anti-snake-po ison tablets gr oup.These animals above w ere administrated drug s one time each day and three day s in all.
Agkistrodon acutus venom was subcutaneously injected af te r one hour o f the last administration.One normal g roup was
se t a t the same time.Obse rved the behaves of these animals;counted the dea th rate and safeguard ra te and analy sed the
function of blo od coagulation.Results:Compared with the snake-poisoned g roup , these medicined g roups had lighter
symptoms of body and low er rate of le thality , except the high do se of Sanjiaocao g r oups.The va rietie s o f F IB , PT , TT
were no t basically alter able(P>0.05).Conclusion:Low dose Sanjiaocao and JI De-sheng anti-snake-poison tablets
may pro tect the animals injury by snake venom poisoning.The high do se Sanjiao cao can no t pr otect the tissue s of body
from the damage , howeve r , high do se Sanjiaocao has rather to xicity and side effect.
Key words:Sanjiaocao; Snake-poison injury
治疗蛇毒损伤的药物有抗蛇毒血清 、化学药物和中草药。三
角草为百合科植物三角草的全草或根 , 具有清热解毒 、消炎止痛
的功效 , 广东地区民间常用于治疗毒蛇咬伤 、跌打肿痛。本课题
组相关的药理研究表明:三角草具有抗炎 、镇痛 、改善局部微循环
作用[ 1 ,2] 。本实验以大鼠作蛇毒模型 , 进一步研究三角草抗蛇毒
的药理作用。
1 材料和方法
1.1 动物 SPF级 SD系大鼠 ,雌雄各半 , 体重(300±50)g ,由广
东省医学实验动物中心提供 , 动物合格证号:SCXK(粤)2003-
0002 , 粤监证字:2004A021。
1.2 药品及试剂 三角草全草采自广东省中山地区 ,自然阴干后
备用。原植物经广州中医药大学李薇鉴定为百合科植物三角草
Chlorophy tum laxum R.Br。称取三角草干品 1 kg ,将药材切碎
置烧杯中 , 加 5 ~ 10 倍水浸渍药材 , 以高出少许为度 , 浸泡 30
min ,加热煮沸 45 min , 过滤 ,滤渣再加 5 ~ 6 倍水量 , 加热煮沸 30
min ,过滤 , 合并两次滤液 , 最后浓缩至 500 ml , 即相当于每毫升
药液含生药 2 g , 放置冰箱保存备用 ,临用前以生理盐水稀释成所
需浓度 ,根据临床用量 , 按体表面积换算成大鼠灌胃量为 13.5
ml/ kg;季德胜蛇药片 0.4 g/片 , 批号:040905 , 江苏南通精华制
药有限公司产。研磨成粉末 , 再加入 0.5%的 CMC-Na溶液 , 配
制成0.36 g/ ml混悬液;五步蛇蛇毒(纯化干粉), 广州蛇毒研究
所惠赠(小鼠尾静脉注射 LD50为 1.6 mg/kg ,大鼠皮下注射剂量
系根据体表面积换算而成 , 经反复筛选 , 本实验将此蛇毒造模的
最佳剂量定在 1.0 ml/kg), 蛇毒临用时以无菌生理盐水配成蛇
毒液供实验用。
1.3 仪器 全自动血凝仪(法国 S TAGO 公司)。
1.4 动物分组及给药方法 大鼠在实验前称重 ,并按体重大小随
机分为 5 组 ,蛇毒损伤组 15 只 ,雌性 7 只 , 雄性 8 只 ,其余各组每
组 14 只 ,雌雄各半 , 分为蛇毒损伤组(灌胃等量0.5%的CMC-Na
混悬液);三角草低 、高剂量组(分别以 13.5 , 27 g 生药/kg 灌胃 ,
即分别相当于成人日服用量的 5 倍 、10 倍);季德胜蛇药片组 , 以
5.4 g/ kg 灌胃(相当于成人日服用量的 10倍)。另设正常对照组
(灌胃等量 0.5%的 CMC-Na混悬液)。 以上各组动物共给药 3
d , 1次/ d。末次给药后 1 h ,除正常对照组外 , 其余各组均按 1.0
ml/ kg 于大鼠背部剪毛的消毒处皮下注射蛇毒液 , 注毒后用手压
迫进针口约 1 min , 以防蛇毒液从进针口流出。正常对照组皮下
注射等量生理盐水。
1.5 观察指标
1.5.1 中毒表现的观察 注射蛇毒(或注射等量生理盐水)24 h
内均由专人定时观察并记录各组动物各个时间段内的局部症状
以及呼吸 、食欲 、活动等全身状况 ,以动物的死亡数累计各组的实
验结果 ,计算各组动物死亡率和保护率(对照组死亡率-给药组
死亡率=保护率)。按死亡率的百分率显著性检测进行统计分
析[ 3] 。
1.5.2 实验室检查 各组动物均在注射蛇毒毒液(或注射等量生
理盐水)后24 h , 以20%乌拉坦按 0.7 ml/ 100 g 体重腹腔注射麻
醉动物 ,每只动物腹主动脉取血 3 ml ,送检作血液凝血分析。主
要指标有血浆凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白
原(F IB)、国际标准化比率(INR)[ 4] 。
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时珍国医国药 2005 年第 16卷第 7期 LISH IZHEN MEDICINE AND MA TERIA MEDICA RESEA RCH 2005 VOL.16 NO.7
1.6 统计学处理 各组计量资料均以 x±s表示 ,组间各项指标
结果的比较采用 SPSS 10.0 软件进行方差分析;计数资料以%表
示。由于注毒后有一部分大鼠中毒死亡 ,并在取血过程中由于操
作失误 ,造成实验标本例数的缺失 , 故最后纳入计量统计的各组
数据不相同。
2 结果
2.1 中毒表现 各组大鼠从注射蛇毒后 3 h ,注射处局部皮肤均
开始出现不同程度的紫绀 、硬块 , 前肢肿胀 , 行动迟缓 , 并均有不
同程度的嗜睡 、懒动 、全身无力 、不吃饲料 、不饮水和呼吸急促等
中毒症状(死亡的除外)。这些症状在蛇毒损伤组动物中表现较
为明显 ,该组死亡 6 只。其余给药组注毒后亦出现少数死亡 , 并
出现嗜睡 、懒动和呼吸急促症状 , 但症状比蛇毒损伤组轻一些 , 有
些大鼠还稍有活动 , 或吃饲料或饮水。活着的大鼠其嗜睡 、懒动
和呼吸急促等症状约在 24 h 后基本消失 ,但注毒局部皮肤均出
现紫绀 、溃烂或结痂。解剖可见大鼠背部注毒部位附近的肌肉有
血肿块形成 ,肠脏颜色黯红 , 肝脏出现部分肉眼可见坏死 ,采血时
可见血色较正常对照组黯红 , 血流缓慢 、粘稠。正常对照组全部
大鼠均无中毒症状 ,也无大鼠死亡。
表 1 各组药物对蛇毒损伤大鼠的保护作用
组别 动物数
死亡
数
死亡率
(%)
保护率
(%) P 值
蛇毒损伤 15 6 40
三角草低剂量 14 1 7.1 32.9 <0.05
三角草高剂量 14 5 35.7 4.3 >0.05
季德胜蛇药片 14 1 7.1 32.9 <0.05
2.2 死亡率及保护率 由表 1 可以看出除三角草高剂量组外 , 其
余给药组的死亡率与对照组比较 ,经统计学处理 , 有显著性差异 ,
表明三角草的低剂量及季德胜蛇药片均对五步蛇毒中毒大鼠有
保护作用 ,但三角草的高剂量对蛇毒中毒大鼠无保护作用 ,相反
具有一定的毒性作用 , 这可能是三角草的高剂量引起的毒副反
应[ 5] 。为此 ,我们进行了三角草水提物的急性毒性实验 。
表 2 各给药组蛇毒损伤大鼠的凝血检测结果( x±s)
组别 动物数 F IB/ g· L-1 PT/ s T T/ s
正常对照 9 0.97±0.85 25.53±10.02 56.30±69.93
蛇毒损伤 9 1.08±0.96* 62.97±54.32* 124.39±109.82*
三角草低剂量 9 1.49±0.73* 38.92±46.03* 71.41±95.85*
三角草高剂量 9 1.13±0.58* 33.17±42.60* 58.78±89.01*
季德胜蛇药片 11 1.16±0.99* 44.43±48.62* 101.16±110.09*
与正常组比较 , *P>0.05
2.3 实验室检测指标 从表 2 可知各给药组蛇毒损伤大鼠的凝
血检测指标与正常对照组比较 , 均无明显变化。这表明 , 反映血
液高凝状态的实验室检测指标与大鼠的中毒表现不相符。
2.4 三角草水提物小鼠急性毒性实验
2.4.1 药物样品 三角草干品加水浸泡 30 min , 水煎煮两次 , 1
h/次 ,过滤 , 合并滤液 , 水浴浓缩至适当浓度。
2.4.2 动物选择 昆明种小鼠 40 只 , 体重(20±2)g , 雌雄各半 ,
由广东省医学实验动物中心提供 , 合格证号:SCXK(粤)2003-
0002 ,粤监证字:2004A019。给药前禁食不禁水 6 h , 给药后继续
禁食不禁水 4 h。
2.4.3 饲养条件 SPF 级动物实验室 , 温度:20 ~ 22℃, 湿度:
60%~ 80%。
用孙氏改良寇氏综合计算法[ 6] 算小鼠的 LD50 , 结果见表 3。
三角草水提物小鼠 LD50 :87.7 g/ kg(生药)。 LD50的 95%可信
限:(82.0 ~ 93.8)g/ kg;LD50的平均可信限:(87.7±5.9)g/ kg。
2.4.4 动物给药后情况 动物给药后均静卧 , 死亡前多呼吸急
促 、抽搐;解剖见肠部充盈 ,其它脏器无异常。
表 3 三角草水提物小鼠经口 LD 50测定结果
组
别
剂量
C/ g· kg-1 lg d/ x
死亡
数
死亡率
P
P2
1 96.0 1.982(d1 , x m) 7 0.7 0.49
2 84.5 1.927(d2) 2 0.2 0.04
3 74.5 1.872(d3) 2 0.2 0.04
4 65.5 1.816(d4) 1 0.1 0.01
∑P=1.2 ∑P2 =0.56
n=10
3 讨论
三角草为清热解毒 、消肿止痛的草药。从本次实验结果可以
看出 ,低剂量的三角草对五步蛇毒损伤大鼠具有一定的保护作用
(P <0.05),能改善大鼠的蛇毒中毒表现 , 但高剂量三角草对大
鼠有一定的毒副作用 , 这与我们得出的三角草水提物小鼠 LD50
(87.7 g 生药/kg)结果相符(即相当于成人每日常用量 0.43 g 生
药/kg 的 204 倍), 证明高剂量三角草具有一定的毒副作用 , 但实
验检测指标均未能反应出其作用(P >0.05), 尚有待进一步探
讨。
参考文献:
[ 1 ] 梅全喜 ,钟希文 ,张晓君, 等.三角草镇痛 、抗炎作用研究[ J] .中药
材 , 2000 , 23(10):632-632.
[ 2 ] 梅全喜 ,钟希文 , 吴惠妃 ,等.跌打镇痛液对家兔耳微循环的影响
[ J] .中药材 ,2002 , 25(7):493-494.
[ 3 ] 杜方麓 ,田文艺 ,田育望 ,等.毛萝 中各部位对眼镜蛇毒中毒小鼠
的保护作用研究[ J] .湖南中医学院学报 , 1994 , 14(3):51-52.
[ 4 ] 唐荣德 ,李景新 ,蒋三员 ,等.眼镜蛇伤模型造模探讨及多项指标的
动态观察[ J] .蛇志 , 2003 , 15(2):25-28.
[ 5 ] 江苏新医学院.中药大辞典 , 上册[ M ] .上海:上海人民出版社 ,
1977:62-62.
[ 6 ] 李仪奎.中药药理实验方法学[ M ] .上海:上海科学技术出版社 ,
1991:535-535.
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