全 文 ：收稿日期:2010-09-05;　修订日期:2011-01-05
基金项目:甘肃省科技厅国际合作项目(No.0804WCGA126);
甘肃省青年科技基金(No.099RJYA008);
环境化学与生态毒理学国家重点实验室开放基金(No.KF2008
-17)
作者简介:刘婷婷(1985-),女(汉族),甘肃永靖人 ,现为兰州大学基础医
学院硕士研究生 ,主要从事中西医结合抗肿瘤研究工作.
＊通讯作者简介:程卫东(1963-), 男(汉族),甘肃兰州人 , 现任兰州大学
基础医学院教授 ,博士研究生导师 ,博士学位 ,主要从事中西医结合治疗
常见病研究工作.
墓头回提取物作用白血病 K562细胞蛋白
双向电泳方法的建立
刘婷婷 1 ,卫东锋1 ,赵春燕 2 ,苏　刚 3 ,吴剑华2 ,卢　艳 2 ,曹慧明2 ,程卫东 1＊
(1.兰州大学基础医学院中西医结合临床研究所 ,甘肃 兰州　730000;
2.兰州大学药学院药物化学研究所 ,甘肃 兰州　730000;
3.兰州大学基础医学院遗传研究所 ,甘肃 兰州　730000)
摘要:目的 建立适用于体外培养的 K562细胞总蛋白的双向电泳图谱 ,提高电泳分辨率和重复性 , 以进一步了解中药墓
头回作用于白血病细胞的新机制。方法 采用标准裂解法提取 K562细胞总蛋白 ,后续进行丙酮沉淀和三氯乙酸 /丙酮沉
淀 , 分别比较一步裂解法所得蛋白和丙酮沉淀法 、三氯乙酸 /丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱 ,优选最佳的样品制备
方法。此外在等电聚焦时 , 聚焦电压在传统聚焦条件上进行优化。结果 丙酮沉淀法不仅能减少蛋白降解 ,而且增加蛋
白的溶解性 , 因此丙酮沉淀法所得蛋白的双向电泳图谱显示出更好的溶解性和重复性 , 在聚焦条件上对传统聚焦条件的
优化使横向和纵向拖尾有明显改善 ,所得图谱蛋白点更清晰 , 分离更完全 , 能获得分辨率较高的双向电泳图谱。结论 在
标准裂解液提取蛋白基础上结合丙酮沉淀法更适于制备 K562细胞的双向电泳样品 ,等电聚焦(IEF)电泳时适当延长除
盐时间能更有效的分离 K562细胞全蛋白 , 而且后续实验证明此方法同样成功建立了墓头回作用白血病 K562细胞蛋白
和肿瘤组织蛋白 2-DE图谱。
关键词:K562细胞;　双向电泳;　三氯乙酸 /丙酮沉淀;　丙酮沉淀;　墓头回
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.08.030
中图分类号:R543.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2011)08-1871-03
InterventionofK562 CellbyDiversifoliousPatriniaRootExtractandEstablishmentof
theTwo-DimensionalElectrophoresisMaps
LIUTing-ting1 , WEIDong-feng1 , ZHAOChun-yan2 , SUGang3 , WUJian-hua2 , LUYan2 , CAOHui-ming2 , CHENG
Wei-dong1
(1.DepartmentofCombiningChineseandWesternMedicine, SchoolofBasicMedicalSciences, LanzhouUniversi-
ty, Lanzhou730000;2.InstituteofPharmacologicalChemistry, ColegeofPharmacology, LanzhouUniversity,
Lanzhou730000;3.DepartmentofHeredity, SchoolofBasicMedicalSciences, LanzhouUniversity, Lanzhou
730000)
Abstract:ObjectiveToestablishthetwo-dimensionalelectrophoresis(2-DE)mapofK562celproteinandtofurtherunder-
standthenewmechanismofdiversifoliouspatriniarootworkedonleukemiacell.MethodsStandardlysisbufferwasusedforex-
tractingtotalprotein, andthenprecipitatedbyacetoneprecipitationandTCA/Acetoneprecipitationrespectively.Besides, thefocus
voltagewasoptimizedunderthetraditional2-DEfocusconditions.ResultsAcetoneprecipitationnotonlydecreasedproteinde-
composition, butalsoincreasedproteinsolubility, thereforeobtainingthe2-DEmapwithhigherresolutionandbeterreproduc-
ibility.Theoptimizedfocusingconditionimprovedhorizontalandvertcaltailobviously, andahigh-resolution2 -DEmapwith
clearerproteinspotsandmorecompleteseparationwasobtained.ConclusionAcetoneprecipitationonthebasicofstandardlysis
buferismoresuitableforpreparingthe2-DEK562celsample.Inaddition, thelongerdesalinizationtimeinisoelectricfocusing
(IEF)canseparatewholeproteineffectivelyandtheoptimizedmethodscanbeusedwidelyforextractiontheproteinoftumortis-
sues.
Keywords:K562 cel;　Two-dimensionalelectrophoresis;　K562 cel;　TCA/acetoneprecipitation;　Acetoneprecipita-
tion;　Diversifoliouspatriniaroot
　　蛋白质组学是以蛋白质组为研究对象的学科。 1937年 Tise-
lius改进了 Reiner的方法 , 提出利用电泳技术分析复杂混合物的
蛋白质 ,例如血清蛋白质 [ 1] ,双向电泳技术已被广泛应用到生命
科学的各个领域 , 如细胞生物学 [ 2] 、神经生物学等。双向电
泳 [ 3, 4]作为蛋白质组研究的三大关键核心技术之一 ,仍然是目前
分析组份复杂蛋白质分辨率最高的工具。蛋白质组学所应用的
核心技术包括样品制备 、分离 、质谱分析和生物信息分析 ,而双向
凝胶电泳分离蛋白质的关键是组织或细胞样品的制备 ,即蛋白质
的提取 ,目前常用的方法有一步提取法(采用单一裂解液和单一
的裂解步骤)。由于目前的蛋白质样品制备方法获得的样品中
往往含有干扰物质(如盐离子 、核酸 、脂类和多糖等)和溶解不完
全等缺陷 , 因此还需要盐析 、等电点沉淀和有机溶剂分级分离等
方法对蛋白样品进行纯化。本实验在标准裂解法得到蛋白的基
础上 , 采取丙酮沉淀法和三氯乙酸 /丙酮沉淀法纯化蛋白质 , 制
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备 K562细胞的蛋白样品 , 并在 IEF电泳过程中对传统电泳条件
进行改良 , 通过比较不同提取方法所得蛋白质和改良传统聚焦条
件后的双向电泳图谱 ,优化了 K562细胞双向电泳样品制备的方
法。
慢性髓细胞白血病(CML)是起源于造血干细胞的恶性克隆
性疾病。大量研究提示 , CML细胞抗凋亡能力的增强是其发病
的主要原因 , 也是 CML细胞耐受化疗而不能被彻底清除的主要
因素之一 [ 5, 6] 。 K562细胞作为一种慢性髓细胞白血病细胞系的
一种 , 它的相关研究对临床血液系统肿瘤的攻克意义重大。因此
本文采用裂解法基础上的有机溶剂沉淀法纯化白血病 K562细
胞总蛋白 , 进行 2-DE,通过比较 2-DE图谱 ,选择适合 K562细
胞的蛋白提取和纯化的方法 ,同时运用此方法成功建立了中药墓
头回干预的 K562细胞 、S180小鼠肿瘤组织的双向电泳图谱 , 为进
一步软件分析寻找差异点 ,质谱分析差异点蛋白奠定基础。
1　材料与仪器
1.1　细胞株 人慢性粒细胞白血病(CML)细胞系 K562细胞株
为本实验室常规培养 。
1.2　墓头回 墓头回提取物经醇煎 、萃取 、蒸馏 、干燥等过程而制
成。
1.3　瘤组织 S180瘤组织为本实验室 S180肿瘤小鼠模型保存。
1.4　试剂 尿素 、硫尿 、三羟甲基氨基甲烷(Tris), 3 -[ (3-胆酰
胺丙基 )-二乙胺 ]丙磺酸 (CHAPS)、十二烷基磺酸钠(SDS),
二硫苏糖醇(DTT)、三氟乙酸四甲基乙二胺(TEMED)、乙二胺四
乙酸(EDTA), PMSF(Sigma公司)两性电解质(Ampholine)丙烯
酰胺 、甲叉双丙烯酰胺 、过硫酸胺 、碘乙酰胺 、考马斯亮蓝 G-250
和甘油为 Sigma公司产品 , 其余药品丙酮 、三氯乙酸(TCA)均为
国产分析纯试剂。
1.5　设备 PROTEANIEFCel系统和 PROTEANⅡ xi系统 、
Mili2Q超纯水系统(Millipore公司)、MICRO17TR高速低温离心
机(Hanil公司)。
2　方法与结果
2.1　试剂配制
2.1.1　裂解液 7 mol/L尿素 、 2 mol/ L硫脲 、 4%CHAPS、 40
mmol/LTris、现加 5 mmol/LPMSF和 65 mmol/LDTT、0.2%(V/
V)bio-lyte, - 70 ℃保存。
2.1.2　平衡液 1 参照双向凝胶电泳说明书配制平衡母液 ,使用
时每 5 ml的平衡母液中加入 100 mgDTT。
2.1.3　平衡液 2 使用时每 5ml的平衡母液中加入碘乙酰胺 125
mg。
2.1.4　20 %三氯乙酸 /丙酮沉淀液 TCA10 g, 丙酮 40 ml, DTT
0.05 g,定容至 50ml。
2.1.5　Bradford工作液 乙醇 0.05 ml, 磷酸(85%)1.04 ml,考马
斯亮蓝 G-250 0.007 g,定容至 10ml。
2.1.6　上样缓冲液以及 12.5%凝胶液 均参照双向凝胶电泳说
明书配制。
2.2　样品处理 K562细胞培养于含 10%灭活(56℃, 30 min)小
牛血清的 RPMI1640培养液中 ,培养液含 NaHCO3 2.0 g/L、青霉
素 100 U/ml、链霉素 100 U/ml。置于 37℃、5%CO2培养箱内培
养 , 细胞生长到合适密度后 ,采用下列方法制备电泳样品后 ,使
用 Bradford的方法测定样品中蛋白浓度。
2.2.1　标准裂解法(方法 1)培养悬浮 K562细胞 , 细胞计数器
计数后 , 调整浓度为 1×107 /ml离心 K562悬浮细胞后 , 用预冷的
PBS洗细胞 3次 , 1 500 r/min离心 10min,弃上清 , 重复 3次。然
后每 1×107细胞加 1 ml裂解液(7mol/ L尿素 、 2 mol/ L硫脲 、
4%CHAPS、 40 mmol/LTris、现加 65 mmol/ LDTT、 5 mmol/L
PMSF和 0.2 % (V/V)Bio-Lyte, pH3 ～ 10)或加入 5倍体积裂
解液 , 放于冰上静置裂解 30 min,液氮反复冻融 3次 ,加入 RNase
50 μg/ml、DNase200 μg/ml4℃放置 15 min, 超声破碎细胞 , 300
W, 工作 3s,间歇 2 s, 24个循环 , 4℃, 16 000 r/min离心 1h,取上
清 , 分装储存于 -70℃保存 [ 7] 。
2.2.2　丙酮沉淀法(方法 2)4倍体积 -20℃预冷丙酮(-20℃
放置 1 h)加入标准裂解法所得蛋白中 , -20℃静置过夜 , 4℃,
16 000r/min离心 1 h, 弃上清丙酮液 , 所得沉淀用 80 %, 100 %
冷丙酮各洗 1次 , -20℃放置挥发丙酮后得到蛋白质干粉。加裂
解液充分溶解蛋白质沉淀 , 4℃ 16 000 r/min离心 30 min, 取上
清 , 分装 - 70℃保存 [ 8] 。
2.2.3　三氯乙酸 /丙酮沉淀(TCA/丙酮)(方法 3)[ 9 , 10] 标准裂
解液所提取蛋白中加入 4倍体积 20 %三氯乙酸 /丙酮溶液(三氯
乙酸溶于丙酮 ,含 0.1% DTT), -20℃过夜 ,然后 15℃、 16 000 r/
min离心 1 h, 倾去上清;用含 0.1% DTT的冰丙酮漂洗蛋白质沉
淀 3次 , 去除三氯乙酸;挥发残余的丙酮后 ,加裂解液充分溶解蛋
白沉淀;然后 4℃, 16 000 r/min离心 30 min, 取上清 ,分装 -70℃
保存。
2.3　蛋白浓度测定
2.3.1　牛血清白蛋白(BSA)标准曲线 采用 Bradford法定量 [ 11]
以牛血清白蛋白为标准蛋白制作标准曲线:在 6支离心管中各加
入 1 mg/mlBSA蛋白标准溶液各 0, 5, 10, 15, 20, 25 μl, 然后分别
对应加入 0.9%生理盐水 100, 95, 90, 85, 80, 75 μl, 使终体积为
100 μl,混匀 ,分别配制成一系列不同浓度的 BSA溶液。以上各
管均加入 Bradford工作液 1 ml,混匀后 , 每管取 200 μl加入 96孔
板 , 每种浓度设 3个平行孔 ,静置 3min, 测定 A595值 , 重复 3次 , 取
其平均值(见表 1)。以不同浓度的 BSA蛋白 0 ～ 25 μl为横坐
标 , A
595
的平均值为纵坐标 ,绘制标准曲线(见图 1)。
2.3.2　K562细胞蛋白浓度测定 分别取 3种方法所得蛋白溶液
1 μl, 各管再加 0.9%生理盐水 99 μl和 Bradford工作液 1 ml, 所
得溶液取 200 μl加入 96孔板 ,每管设 3个平行孔静置 3 min后
测定 A595值 , 重复 3次 ,取其平均值 , 3种提取蛋白方法(方法 1,
2, 3)所得蛋白吸光度均值分别为 0.440, 0.378, 0.346。 根据标
准曲线所得方程:Y=0.026 7X+0.260 9计算得:方法 1所得蛋
白浓度为 6.707 8 μg/μl, 方法 2所得蛋白浓度为:4.385 7 μg/
μl,方法 3所得蛋白浓度为:3.1873 μg/μl。
表 1　不同浓度BSA蛋白的吸光值
BSA/μl OD
0 0.226
5 0.421
10 0.528
15 0.705
20 0.773
25 0.913
图 1　Bradford法测定蛋白浓度标准曲线
2.4　双向凝胶电泳
2.4.1　第一向等电聚焦电泳 将预制好的第一向凝胶(7 cm, pH
3 ～ 10)组装到电泳槽上 , 从冰箱中取 -20℃冷冻保存的水化上样
缓冲液 (7 mol/L尿素 、 2 mol/ L硫脲 、 4%CHAPS、 65 mmol/L
DTT、0.2%(V/V)bio-lyte, pH 3 ～ 10、0.001%溴酚蓝)融化 , 取
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含 200μg蛋白质的上述蛋白质提取液 ,补充上样缓冲液至 150
μl,充分混匀。冰箱取 -20℃冷冻保存的 IPG预制胶条(7cmpH
3 ～ 10),于室温放置 10 min。将所有的蛋白质样品加入到聚焦盘
或水化盘中后 , 用镊子轻轻的去除预制 IPG胶条上的保护层。在
每根胶条上覆盖 2 ～ 3ml矿物油 , 对好正 、负极 , 盖上盖子。设置
等电聚焦程序 , 除盐聚焦条件开始采用传统(标准)升压聚焦条
件(17℃, 50 V12h, 250 V30min, 500 V30 min, 4 000 V线性升
压 3h, 4 000V聚焦 20 000vh, 500 V保持任意时间)。经改良后
升压聚焦条件(17℃, 50 V12 h, 250V1 h, 500 V1 h, 4 000 V线
性升压 4h, 4 000 V聚焦 20 000vh, 500 V保持任意时间)。等电
聚焦结束后 , 从电泳槽中取出胶条 ,双蒸水冲洗胶条 ,置胶条于平
衡液 1(胶条平衡缓冲母液 5 mlDTT100mg, DTT用时现加)中浸
泡并摇床震荡 15min;用润湿的滤纸吸掉胶条上多余的平衡液。
后续将胶条浸泡于平衡液 2(胶条平衡缓冲液母液 5ml碘乙酰胺
125mg用时现加)中浸泡并摇床震荡 15min用润湿的滤纸吸掉
胶条上多余的平衡液 。
2.4.2　第二向 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 第一向等电聚焦凝胶
经过平衡后 , 将 IPG胶条从样品水化盘中移出 , 使胶面完全浸末
在 1×电泳缓冲液中 ,然后将胶条胶面朝上放在凝胶的长玻璃板
上将胶条向下推 , 使之与聚丙烯酰胺凝胶胶面完全接触 , 在低熔
点琼脂糖封胶液完全凝固后。将凝胶转移至电泳槽中进行第二
向电泳;电泳参数设置:(参照伯乐公司双向电泳实验手册), 在
电泳槽加入电泳缓冲液后 ,接通电源 ,起始时用的低电压(80 V)
待样品在完全走出 IPG胶条 , 浓缩成一条线后 , 再加大电压
(120 V), 待溴酚蓝指示剂达到底部边缘时即可停止电泳。分别
扫描得到一步裂解法和后续两种沉淀纯化方法所得凝胶图 2(a,
b, c)以及优化聚焦条件后的电泳图 3(b)。为了验证上述优化条
件的的适用性 , 分别提取墓头回干预白血病 K562后的细胞蛋白
质和 S180小鼠瘤组织蛋白质进行双向电泳 ,结果显示此方法大大
减少了盐离子对图谱的干扰 , 蛋白质点清晰 , 无明显拖尾(图 4),
提高了后续寻找差异点蛋白的准确性。
a-标准裂解法　　b-TCA/丙酮沉淀法　　c-丙酮沉淀法
图 2　不同提取方法所得 K562细胞蛋白 7cm 2-DE图谱
a-传统升压聚焦条件　　　b-改良后升压聚焦条件
图 3　K562细胞丙酮沉淀蛋白不同聚焦条件下 7cm2-DE图谱
3　讨论
二维凝胶电泳 (Two-dimensionalgelelectrophoresis, 2 -
DE)是目前唯一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术 ,
而组织细胞蛋白质的抽提则是该技术的关键 ,选择合适的样品制
备方法对获得满意的二维电泳图谱非常重要。
在本研究中 , 我们用分级提取步骤比较了标准裂解法 , 和此
基础上的三氯乙酸 /丙酮沉淀法和丙酮沉淀法处理样品后进行的
双向电泳后的图谱(分别列于图 2a, b, c)。如图 2-a所示 , 标准
裂解法所提取蛋白所得的蛋白浓度高 , 但分离蛋白点较少 , 高丰
度蛋白的分离与其它两种方法差别不大 ,但在低丰度蛋白的表达
上 , 其它两种方法要优于标准裂解法。
图 4　墓头回干预 k562细胞组(a)和小鼠S180瘤组织(b)
7cm 2-DE图谱(优化条件后)
方法 2三氯乙酸 /丙酮沉淀法对样品处理后进行双向电泳分
析(图 2-b)发现 , 此处理方法会造成蛋白质的大量丢失 ,在双向
电泳图谱上表现为蛋白点的数量较少。这是因为根据 TCA沉淀
蛋白的作用机制 ,对碱性蛋白的富集效果较好 , 但对等电点小于
溶液 pH值的酸性蛋白富集效果差 , 会大量丢失。另外 , 有机溶
剂的多次作用造成了蛋白质溶解性变差 ,同时也加剧了蛋白质的
丢失。
方法 3丙酮沉淀法处理后样品 , 获得的双向电泳图谱(图 2
-c)显示 ,蛋白点数多且清楚 , (如图所标识方框内区域)尤其是
低丰度蛋白的表达要优于前两种方法 , 虽有纵向拖尾 , 分析可能
和等电聚焦时除盐时间不足 , 导致盐离子干扰了蛋白的分离有
关。
同时 ,本实验还对等电聚焦条件进行了优化分析。观察图 2
-c可以发现 , 蛋白纯化后的图谱仍存在纵向条纹 , 分析可能是
一向等电聚焦时除盐力度不够 ,样品中存在的盐离子干扰了二向
凝胶电泳时蛋白的有效分离 , 所以继续对聚焦时间进行了优化 ,
结果如图 3所示。
图 3-a显示了传统聚焦条件下的 K562细胞丙酮沉淀蛋白
的 2 -DE图谱 , 蛋白点模糊 , 边缘不锐利 , 且有横向拖尾迹象。
这是因为盐离子的存在可以增加 IPG胶条的导电性 , 限制等电聚
焦电压的上升 , 使得蛋白质在离子移出胶条之前不能聚焦 , 从而
延长聚焦时间 ,并在双向电泳图谱中造成水平方向的纹理。这可
能与传统聚焦条件时由于除盐时间短 ,盐离子干扰了蛋白的分离
关系密切。因此 ,本实验改良了传统聚焦条件 , 增加了除盐过程
的时间 , 并调低了二向的电压 , 延长了整个凝胶电泳中蛋白按分
子量大小分离的时间。获得的图谱如图 3-b所示 , 可以看出 , 聚
焦条件的优化使得蛋白的分离达到了最大化 ,图谱所示蛋白点的
分离良好 , 蛋白质点更为清晰 , 并有效减少了纵向和横向的拖尾
现象。证明适当延长聚焦时的除盐时间和二向凝胶的蛋白分离
时间可以使蛋白点更清晰 ,更加有利于蛋白质的分离。
为了验证此方法是否适用于其它细胞和组织 ,分别对墓头回
干预的 K562细胞蛋白和小鼠 S180瘤组织蛋白进行双向电泳 , 图
谱(图 5)显示此方法能大大提高蛋白的溶解性 , 减少蛋白分离不
完全以及由于盐离子等存在导致的拖尾等缺点。
综上所述 ,本实验针对蛋白质双向图谱中的关键问题之一:
细胞的提取裂解 ,比较了标准裂解法 ,和此基础上的丙酮沉淀法
以及三氯乙酸 /丙酮沉淀法三者的双向电泳图谱。结果显示 , 3
种方法在高丰度蛋白的分离上区别不大 ,而丙酮沉淀法对低丰度
蛋白的分离良好 ,图谱显示蛋白点多于其它两种方法。同时 , 针
对传统聚焦条件提出了改进方案 , 延长除盐时间 , 减少了盐离子
对蛋白分离的干扰 , 使蛋白在纵向按分子量大小分离时效果良
好 , 获得了背景清晰 , 蛋白点分离良好的蛋白质图谱。 并提取经
墓头回干预的白血病 K562细胞和 S180荷瘤小鼠瘤组织蛋白进行
双向电泳 ,实验证明此方法切实可行。
本实验所采取的操作过程较之其他蛋白纯化方法更为简单 ,
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.8 时珍国医国药 2011年第 22卷第 8期
所涉及的分析纯试剂造价不高 , 结果可靠且重复性较好 , 为进一
步进行白血病 K562细胞及其他细胞的蛋白质组学研究提供了
有益参考。
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收稿日期:2010-07-31;　修订日期:2011-02-30
基金项目:遵义医学院博士启动基金;贵州省国际合作项目基金(No.2009GZ52794);贵州省科学技术基金(No.2008GZ02660)
作者简介:石凤鸣(1963-),男(汉族),贵州黄坪人 ,现任遵义医学院第五附属(珠海)医院主管药师 ,学士学位 ,主要从事临床药学和药事管理工作.
＊通讯作者简介:陈　阳(1977-),男(汉族),贵州贵阳人 ,现任遵义医学院珠海校区副教授 ,博士学位 ,主要从事中药有效成分的提取 、分离及分析研
究工作.
栀子指纹图谱及不同生长期
西红花苷和栀子苷含量的研究
石凤鸣1 ,王文君 2 ,陈　雏 3 ,蔡　乐 3 ,张　浩 3 ,陈　阳2＊
(1.遵义医学院第五附属(珠海)医院 , 广东 珠海　519000;　
2.遵义医学院珠海校区 ,广东 珠海　519041;　
3.四川大学华西药学院 , 四川 成都　610041)
摘要:目的 研究不同产地栀子指纹图谱及不同生长期西红花总苷和栀子苷含量。方法 采用高效液相色谱法建立了全
国不同产地栀子的指纹图谱 , 并测定了不同产地及同一产地不同采收期药材西红花苷和栀子苷的含量。结果 各地栀子
药材与对照指纹图谱的相似度分别为 0.980, 0.992, 0.978, 0.989, 0.948, 0.991, 0.986, 0.996, 0.993, 0.965。不同产地栀
子的栀子苷平均含量为 4.11%;西红花总苷含量最低为 1.41%,最高达 3.08%, 相差一倍以上。而不同采收期药材测定
结果显示 , 西红花总苷含量从 8月中旬的 0.009%增加到 11月中旬的 1.32%, 之后趋于下降。而栀子苷含量则在刚结果
的 8月中旬最高 , 之后逐渐下降。结论 各产地栀子药材表现较高的相似度 , 说明栀子药材所含化学成分随产地变化小。
西红花苷含量随着栀子的成熟而显著增加 ,但过度熟透的果实也不利于西红花苷的稳定。而栀子苷主要在果实形成后
的短期内生成 , 此后由于果实的生长 , 其浓度反而下降。
关键词:栀子;　西红花苷;　栀子苷;　指纹图谱
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.08.031
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2011)08-1874-03
FingerprintsofGardeniaFruitsandtheConteutChangesofCrocinandGeniposidein
DifferentCollectionPeriods
SHIFeng-ming1 , WANGWen-jun2 , CHENChu3 , CAILe3 , ZHANGHao3 , CHENYang2＊
(1.TheFifthAficiatedHospitalofZunyiMedicalColege, Zhuhai, Guangdong519000, China;2.Departmentof
Chemistry, ZunyiMedicalColegeZhuhaiCampus, Zhuhai519041, China;3.WestChinaSchoolofPharma-
cology, SichuanUniversity, Chengdu610041, China)
Abstract:ObjectiveToinvestigateHPLCfingerprints, totalcrocinandgeniposidecontentsofgardeniafruits.MethodsAn
HPLCmethodforfingerprintofgardeniafruitswasemployedtoevaluatethesimilaritiesof10 sampleswhichwerecollectedfrom
diferentareas.Andthen, totalcrocinandgeniposidecontentsofherbsfromdiferentareas, aswelascultivatedindiferentcol-
lectionperiodsfromthesamearea, weredeterminedusingthesameHPLCmethod.ResultsSimilaritiesofvariouscultivarswere
calculatedtobe0.980, 0.992, 0.978, 0.989, 0.948, 0.991, 0.986, 0.996, 0.993and0.965, respectively.Averagecontent
ofgeniposideofdifferentcultivarswas4.11%.Above2foldsoftotalcrocincontentwasobservedamongvariouscultivars.Total
crocincontentincreasedfrom0.009% inmid-Augustto1.32% inmid-November, andthendecreasedgradually.However,
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时珍国医国药 2011年第 22卷第 8期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.8