全 文 ：北方园艺２０１６（０７）：９３～９８ ·生物技术·
第一作者简介：赵霰霖（１９９０－），女，硕士研究生，研究方向为植物
生理生态。Ｅ－ｍａｉｌ：６７６３５３６６９＠ｑｑ．ｃｏｍ．
责任作者：龚宁（１９６３－），女，硕士，教授，研究方向为植物生理生
化。Ｅ－ｍａｉｌ：ｇｎ２０３３＠１２６．ｃｏｍ．
基金项目：贵州省中药材现代产业技术体系建设专项资助项目
（ＧＺＣＹＴＸ－０２）；贵州省科学技术基金资助项目（黔科合Ｊ字（２００８）
２０９７）。
收稿日期：２０１５－１２－１４
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０７０２４
外源ＡＢＡ对金线兰抗氧化酶活性及其同工酶的影响
赵 霰 霖，司 庆 永，龚 　 宁
（贵州师范大学 生命科学学院，贵州 贵阳５５０００１）
　　摘　要：以金线兰组培苗为试材，采用提取粗酶液的方法，研究外源脱落酸（ＡＢＡ）对金线兰
超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、过氧化物酶（ＰＯＤ）、抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰＸ）、过氧化氢酶 （ＣＡＴ）４
种抗氧化酶活性及其同工酶的影响。结果表明：高浓度ＡＢＡ的长时间处理对提高ＳＯＤ和ＰＯＤ
活性较为显著；低浓度ＡＢＡ处理下ＡＰＸ活性变化幅度较大，其中高浓度ＡＢＡ处理２４ｈ时ＡＰＸ
活达到最大值；不同浓度ＡＢＡ处理下ＣＡＴ活性均呈“Ｍ”型的变化趋势。同工酶电泳分析发现，
不同浓度的ＡＢＡ处理，在一定时间范围内均可诱导产生新的ＰＯＤ和ＡＰＸ酶带，而不诱导新的
ＳＯＤ和ＣＡＴ酶带的表达。
关键词：金线兰（Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．）；ＡＢＡ；抗氧化酶；同工酶
中图分类号：Ｑ　９４５；Ｓ　５６７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０７－００９３－０６
　　植物通过激发防御系统或改变代谢途径应对各种
胁迫，植物抗胁迫能力的提高通常与抗氧化系统活性的
提高有关。在逆境条件下植物体内的抗氧化酶会发生
一系列生理生化变化，以提高植株抵抗逆境胁迫的能
力［１］。脱落酸（ＡＢＡ）是由植物体叶黄质合成的类倍半
萜化合物［２］。作为一种“胁迫激素”，在植物寒害、盐害、
干旱等胁迫－感知－反应过程中起重要作用［３－５］。
金线兰（Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．）是
珍贵的药用植物，容易受到逆境影响，对外界环境的适
应性较差，已成为１７种濒临灭绝的中草药之一。目前
已有金线兰对高低温和干旱胁迫的生理响应机制的报
道［６－８］，但外源ＡＢＡ对其抗氧化酶活性及同工酶的影响
的研究鲜见报道。现通过不同浓度的ＡＢＡ处理金线兰
组培苗，测定ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＡＰＸ、ＣＡＴ活性，同时对同工酶
进行研究，探讨外源ＡＢＡ对抗氧化酶的活性及同工酶
的影响，以期为金线兰抗逆机理的研究提供理论参考。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料金线兰组培苗由贵州师范大学金线兰课
题组提供。
１．２　试验方法
１．２．１　材料的培养　将处于增殖期且生长时间一致的
金线兰组培苗转接到生根培养基中，培养６０ｄ后，选取
长势一致的生根组培苗，备用。培养条件：光照时间
１２ｈ／ｄ，光照强度２　０００ｌｘ，温度（２１±２）℃。
１．２．２　材料的处理　选取长势一致的生根金线兰组培
苗，分别放入添加１０、３０、５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ的ＭＳ培养基
中，置于培养室处理６、１２、２４、４８、７２ｈ，以放入 ＭＳ培养
基为对照，取相同部位的成熟叶片进行试验，分别测定
金线兰组培苗的ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＡＰＸ、ＣＡＴ活性。
１．２．３　粗酶液的制备　参照王爱国等［９］的方法制备
粗酶液。金线兰成熟鲜叶去掉主脉，准确称取１ｇ，加入
５ｍＬ 预冷的酶提取缓冲液，冰浴充分研磨，于
１２　０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，上清液即粗酶液，冷藏备用。
１．３　项目测定
１．３．１　ＳＯＤ活性测定　参考王爱国等［９］的方法稍作
修改，先加入１５０μＬ粗酶液，然后依次加入２．７ｍＬ
１４．５ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｌ－甲硫氨酸，０．１ｍＬ　３ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ，
０．１ｍＬ　２．２５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮＢＴ和０．１ｍＬ　６０μｍｏｌ／Ｌ核黄
素。混匀后倒入比色杯，在光照强度３　０００ｌｘ下光照
１０ｍｉｎ，反应后立即避光，将反应液颠倒几次混匀后立即
测ＯＤ５６０值，以不加粗酶液而加酶提取液为最大光还原
管，以ＰＢＳ液代替ＮＢＴ作为空白，以能抑制ＮＢＴ光化
还原５０％为１个酶活力单位Ｕ，酶活力单位为Ｕ／ｇ　ＦＷ。
反应被抑制率（％）＝（（对照ＯＤ５６０－对照空白ＯＤ５６０）－
（样品ＯＤ５６０－样品空白ＯＤ５６０））／（对照ＯＤ５６０－对照空
白ＯＤ５６０）×１００；酶活力（Ｕ／ｇ　ＦＷ）＝反应被抑制率／
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·生物技术· 北方园艺２０１６（０７）：９３～９８
（５０％×３ｍＬ反应混合液中加入的样量）。
１．３．２　ＰＯＤ活性测定　采用愈创木酚法［１０］。３ｍＬ反
应混合液（６００ｍＬ　５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ　ｐＨ　７．８＋０．２８ｍＬ
愈创木酚＋０．１９ｍＬ　３０％Ｈ２Ｏ２）中加入５０μＬ酶液，
迅速摇匀立即测ＯＤ４７０，每３０ｓ读数１次，以每分钟
ＯＤ４７０升高０．１ＯＤ值为１个酶活力单位 Ｕ，单位为
Ｕ·ｍｉｎ－１·ｇ－１　ＦＷ。
１．３．３　ＡＰＸ活性测定　参照ＤＡＬＴＯＮ等［１１］的方法，
略作改进。３ｍＬ反应混合液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ　ｐＨ　７．０＋
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ－Ｎａ２＋０．５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＡｓＡ，１０ｍｍｏｌ／Ｌ
Ｈ２Ｏ２）加入１００μＬ粗酶液启动反应，连续记录ＯＤ２９０，１０ｓ
读数１次，以每分钟ＯＤ２９０降低０．１ＯＤ值为１个酶活力
单位Ｕ，单位为Ｕ·ｍｉｎ－１·ｇ－１　ＦＷ。
１．３．４　ＣＡＴ活性测定　参照程鲁京等［１２］钼酸铵显色
法，略作改进。所有药品在室温下恒温，然后在空白管
（Ｂ２）加１ｍＬ　６５μｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２Ｏ２基质液，空白管（Ｂ３）中加
入１ｍＬ　６０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ缓冲液（ｐＨ　７．４），空白管（Ｂ１）
中加１ｍＬ　６５μｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２Ｏ２基质液，样品管（Ｕ）中加
０．２ｍＬ粗酶液和１ｍＬ　６５μｍｏｌ／Ｌ　Ｈ２Ｏ２ 基质液，３７℃水
浴保温１ｍｉｎ后加入１ｍＬ　３２．４ｍｍｏｌ／Ｌ钼酸铵溶液，混
匀后在Ｂ２管和Ｂ３管分别加入０．２ｍＬ　６０ｍｍｏｌ／Ｌ钠－
钾磷酸盐缓冲液（ｐＨ　７．４）；在Ｂ１管加入０．２ｍＬ粗酶
液。５ｍｉｎ后于４０５ｎｍ处以蒸馏水调零比色，记录吸光
度值（Ａ）。酶活力以清除Ｈ２Ｏ２ 的毫克数表示，按下式
计算，单位为 ｍｇ·ｍｉｎ－１·ｇ－１　ＦＷ。酶活力（ｍｇ·
ｍｉｎ－１·ｇ－１　ＦＷ）＝（ＡＢ１－ＡＵ）／（ＡＢ２－ＡＢ３）×（６５×１×
３４）／（０．２×０．２×１　０００）。
１．３．５　同工酶分析　分离胶浓度为７．５％，浓缩胶浓度
为２．５％。ｐＨ　８．３Ｔｒｉｓ－Ｇｌｙ电极缓冲液。上样量为４０μＬ。
电泳开始时，电流设为１０ｍＡ，当指示剂溴酚蓝进入分
离胶后，调电流至１５ｍＡ。电泳时间视酶分子量而定，
一般至指示剂距凝胶前沿１ｃｍ。１）加样：浓缩胶聚合完
成后，缓慢拔出样品梳，注入预冷已稀释１０倍的电极缓
冲液。用微量进样器吸取４０μＬ处理后的酶液（１００μＬ
酶液＋２０μＬ　４０％的蔗糖溶液＋１０μＬ　２％的溴酚蓝指示
剂），依次加入加样槽中。２）酶活性染色：ＳＯＤ活性染色
参照ＢＥＡＵＣＨＡＭＰ等［１３］的方法略作改进。电泳结束
后，将胶浸泡于染色液２．４５×１０－３　ＭＮＢＴ中，避光浸泡
２０ｍｉｎ，并不时摇动，蒸馏水漂洗，再放入０．０３６ｍｍｏｌ／Ｌ
（ｐＨ　７．８）磷酸缓冲液（含０．０２８ｍｍｏｌ／Ｌ　ＴＭＥＤＡ，
２８μｍｏｌ／Ｌ核黄素），避光浸泡１５ｍｉｎ，并不时摇动，蒸馏水
漂洗，放入０．０５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＢＳ（含０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２－ＥＤＴＡ）
（ｐＨ　７．８），４×８Ｗ日光灯下照光２０～３０ｍｉｎ，直至出现
无色谱带，蒸馏水漂洗２～３次，拍照。ＰＯＤ活性染色参
照ＲＡＨＮＡＭＡＬ等［１４］的方法稍作改动。染色液为
０．１ｇ联苯胺＋５ｍＬ无水乙醇＋１０ｍＬ　１．５ｍｏｌ／Ｌ乙酸
钠＋１０ｍＬ　１．５ｍｍｏｌ／Ｌ乙酸＋７５ｍＬ的蒸馏水，溶解并
过滤待用。胶片用蒸馏水冲洗３次后，在染液中加入
０．１４ｍＬ　３０％Ｈ２Ｏ２，迅速摇匀后将胶片放入，待酶带完
全出现后（约２０ｍｉｎ），用自来水冲洗２～３次，拍照。
ＡＰＸ活性染色采用抗坏血酸?联苯胺染色法。染色液成
分为ＡｓＡ　７０．４ｍｇ＋联苯胺溶液（２ｇ联苯胺溶于１８ｍＬ
温热冰醋酸中，再加入蒸馏水７２ｍＬ）２０ｍＬ＋１．２％
Ｈ２Ｏ２溶液２０ｍＬ＋蒸馏水６０ｍＬ。蒸馏水润洗胶片２
次，再加入４０～５０ｍＬ的染色液，直到清晰的ＡＰＸ带显
现为止，将染色液倒掉，并用自来水冲洗几次，然后照
相。ＣＡＴ活性染色参照 ＷＯＯＤＢＵＲＹ的方法［１５］，电泳
结束后，用蒸馏水清洗胶片，０．０５％Ｈ２Ｏ２溶液浸泡２０ｍｉｎ
后用蒸馏水冲洗几次，再加入染色液（含有０．５％氯化
铁，０．５％铁氰化钾），直到显带为止，照相，整个过程中要
注意避光。
２　结果与分析
２．１　外源ＡＢＡ对金线兰抗氧化酶活性的影响
２．１．１　ＡＢＡ对金线兰ＳＯＤ活性的影响　由图１可知，
对照组（ＣＫ）的ＳＯＤ活性稳定，低浓度（１０μｍｏｌ／Ｌ）的
ＡＢＡ在短时间（≤６ｈ）处理内稍有下降趋势，随着处理
时间变长，ＳＯＤ活性有所提高，且在相同时间内ＡＢＡ浓
度越高，金线兰ＳＯＤ活性上升幅度越明显。由此说明，
较高浓度的ＡＢＡ处理下对ＳＯＤ活性的影响较大。
图１　ＡＢＡ对金线兰ＳＯＤ活性的影响
Ｆｉｇ．１　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ　ｉｎ
Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．１．２　ＡＢＡ对金线兰ＰＯＤ活性的影响　由图２可知，
对照组（ＣＫ）的ＳＯＤ活性稳定，３种浓度的 ＡＢＡ处理时
间小于１２ｈ时，ＰＯＤ活性均低于对照，随着处理时间的
延长，ＰＯＤ活性有所回升。３０μｍｏｌ／Ｌ的ＡＢＡ处理２４ｈ
时达到最大值，随着时间延长，ＰＯＤ活性迅速下降。而
在１０、５０μｍｏｌ／Ｌ浓度的ＡＢＡ处理下，ＰＯＤ的活性则是
长期处理的高于短期处理的，可能是金线兰ＰＯＤ需要
一定时间来适应外源ＡＢＡ的变化并作出相应的生理
响应。
２．１．３　ＡＢＡ对金线兰ＡＰＸ活性的影响　由图３可知，
对照组（ＣＫ）的ＳＯＤ活性稳定，１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理下，
４９
北方园艺２０１６（０７）：９３～９８ ·生物技术·
图２　ＡＢＡ对金线兰ＰＯＤ活性的影响
Ｆｉｇ．２　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＰＯＤ　ｉｎ
Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
ＡＰＸ活性呈现“Ｗ”型变化，即下降－上升－下降－上升的过
程，３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理下，ＡＰＸ活性变化不明显，
５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理０～２４ｈ，ＡＰＸ活性持续增加，在
２４～７２ｈ处理时，ＡＰＸ活性先减小后又增大，但均高于对照
组（ＣＫ）。可见，较高浓度ＡＢＡ能有效提高ＡＰＸ活性。
图３　ＡＢＡ对金线兰ＡＰＸ活性的影响
Ｆｉｇ．３　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＡＰＸ　ｉｎ
Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．１．４　ＡＢＡ对金线兰ＣＡＴ活性的影响　由图４可知，
对照组（ＣＫ）的ＣＡＴ活性稳定，在不同浓度ＡＢＡ处理
下，ＣＡＴ活性均呈现“Ｍ”型的变化，即上升－下降－上升－下
降的过程。１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理变化幅度较大，在处理
１２ｈ时，ＣＡＴ活性最小，低于对照组。３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处
理时，ＣＡＴ活性均高于对照组。５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理
时，短期处理明显提高ＣＡＴ活性，长期处理则提高不明
显，而在７２ｈ处理时，ＣＡＴ活性低于对照组（ＣＫ）。说明
在适宜的浓度范围内，ＡＢＡ处理能有效地提高ＣＡＴ
活性。
图４　ＡＢＡ对金线兰ＣＡＴ活性的影响
Ｆｉｇ．４　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＣＡＴ　ｉｎ
Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．２　外源ＡＢＡ对金线兰抗氧化酶同工酶的影响
２．２．１　ＡＢＡ对金线兰ＳＯＤ同工酶谱的影响　金线兰
经过３种浓度的ＡＢＡ处理后，组培苗ＳＯＤ同工酶分析
结果见图５，随着处理浓度和时间不同，酶带呈现一定强
弱的差异，但各处理和对照相比，都是共有５条带，处理
后并未产生新的酶带，即没有ＳＯＤ同工酶产生。
　　注：１．对照；２．处理６ｈ；３．处理１２ｈ；４．处理２４ｈ；５．处理４８ｈ；６．处理７２ｈ；Ａ．１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理；Ｂ．３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理；Ｃ．５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处
理。下同。
Ｎｏｔｅ：１．ＣＫ；２．Ｔｒｅａｔｉｎｇ　６ｈｏｕｒｓ；３．Ｔｒｅａｔｉｎｇ　１２ｈｏｕｒｓ；４．Ｔｒｅａｔｉｎｇ　２４ｈｏｕｒｓ；５．Ｔｒｅａｔｉｎｇ　４８ｈｏｕｒｓ；６．Ｔｒｅａｔｉｎｇ　７２ｈｏｕｒｓ；Ａ．１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；
Ｂ．３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ；Ｃ．５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｂｅｌｏｗ．
图５　不同浓度ＡＢＡ对金线兰ＳＯＤ同工酶的影响
Ｆｉｇ．５　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ＳＯＤ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．２．２　ＡＢＡ对金线兰ＰＯＤ同工酶谱的影响　金线兰
经过３种浓度的ＡＢＡ处理后，组培苗ＰＯＤ同工酶分析
结果见图６，处理浓度和时间的不同，酶带呈现一定强弱
的差异。其中，１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理下中间的１条酶带
迁移率（Ｒｆ）为０．２７５的酶带消失，２４ｈ和７２ｈ时新增
了１条Ｒｆ为０．１３７的酶带；３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理未产
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·生物技术· 北方园艺２０１６（０７）：９３～９８
生新的酶带；５０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理１２ｈ和２４ｈ下，下面
的Ｒｆ为０．３９１、０．４０６和０．４２０　３条酶带几乎消失，随着
处理时间的延长又出现。其中，处理４８ｈ后，新增了２
条Ｒｆ分别为０．１３７和０．１９９的酶带。
图６　不同浓度ＡＢＡ对金线兰ＰＯＤ同工酶的影响
Ｆｉｇ．６　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ＰＯＤ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．２．３　ＡＢＡ对金线兰ＡＰＸ同工酶谱的影响　金线
兰经过３种浓度的 ＡＢＡ处理后，组培苗 ＡＰＸ同工
酶分析结果见图７，处理浓度和时间不同，酶带呈现
一定强弱的差异。其中，１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ在处理２４ｈ
时新增了Ｒｆ为０．１５６的酶带；３０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ在处
理１２ｈ时新增了Ｒｆ 为０．１５６的酶带；５０μｍｏｌ／Ｌ
ＡＢＡ在处理６ｈ和４８ｈ时均有１条Ｒｆ为０．１５６的
酶带。
图７　不同浓度ＡＢＡ对金线兰ＡＰＸ同工酶的影响
Ｆｉｇ．７　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ＡＰＸ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
２．２．４　ＡＢＡ对金线兰ＣＡＴ 同工酶谱的影响　金线兰
经过３种浓度的ＡＢＡ处理后，组培苗ＣＡＴ同工酶分析
结果见图８，处理浓度和时间的不同，酶带呈现一定强弱
的差异，但ＣＡＴ同工酶带始终只有２条，各处理与对照
的条带基本一致，即ＡＢＡ处理对金线兰的ＣＡＴ同工酶
的表达没有明显的影响。
图８　不同浓度ＡＢＡ对金线兰ＣＡＴ同工酶的影响
Ｆｉｇ．８　Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ＣＡＴ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ｏｆ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
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北方园艺２０１６（０７）：９３～９８ ·生物技术·
３　讨论
ＡＢＡ做为一种广泛存在的植物激素，在植物逆境
过程中起着重要的调节作用［１６］。李雪梅等［１７］在研究中
发现，单独用ＡＢＡ处理能够提高小麦抗氧化酶（ＣＡＴ、
ＳＯＤ、ＰＯＤ）活性。廖咏梅等［１８］用外源ＡＢＡ处理白术叶
片，能够不同程度提高白术抗氧化酶（ＣＡＴ、ＳＯＤ、ＰＯＤ）
活性。该试验表明，外源ＡＢＡ参与了金线兰抵御逆境
消除体内自由基的过程，可以影响金线兰抗氧化酶活
性，使金线兰ＳＯＤ、ＰＯＤ、ＡＰＸ、ＣＡＴ活性发生了明显变
化，且呈现出一定的波动，可能金线兰对外源 ＡＢＡ需要
一个适应的过程。适当的ＡＢＡ处理均能不同程度的提
高金线兰４种抗氧化酶的活性，说明其活性变化与脱落
酸的浓度和作用时间有关。在一定的浓度和作用时间
范围内，外施ＡＢＡ可提高金线兰抗氧化酶活性，产生保
护作用。
同工酶电泳发现，１０μｍｏｌ／Ｌ　ＡＢＡ处理２４ｈ可诱
导Ｒｆ为０．１３７的ＰＯＤ酶带，处理４８ｈ时可诱导Ｒｆ为
０．１３７和０．１９９的ＰＯＤ酶带；在特定的时间下，３种浓度
的ＡＢＡ处理均可诱导Ｒｆ为０．１５６的ＡＰＸ酶带。说明
ＡＢＡ对ＰＯＤ和ＡＰＸ的表达起调控作用。代其林等［１９］
在干旱胁迫下对豇豆幼苗的研究得出，外源ＳＡ能够诱
导新的ＳＯＤ、ＰＯＤ酶带，不诱导新的ＣＡＴ酶带。邢承华
等［２０］研究发现，短时间的铁毒胁迫下，水稻叶片通过增
加ＰＯＤ和ＣＡＴ同工酶条带数和酶峰值来防御胁迫，而
长时间铁毒胁迫则会抑制ＰＯＤ和ＣＡＴ同工酶的表达。
从该试验可知，外源ＡＢＡ处理能够使金线兰某些特定
抗氧化酶表达，从而能够激活其相应保护机制，减少逆
境对自身的伤害。
总之，外源ＡＢＡ可以影响金线兰抗氧化酶活性，对
ＡＰＸ和ＰＯＤ的同工酶表达有调控作用，推测ＡＢＡ能够
使金线兰某些特定抗氧化酶同工酶表达，从而能够激活
相应保护机制，减少和缓解逆境对自身的伤害。结合抗
氧化酶活性与同工酶谱的分析，可以看出，高浓度ＡＢＡ
处理对酶活的影响较为显著，而同工酶的产生与酶活没
有明显的相关性，酶活性的表达不只是通过诱导新的同
工酶进行调节，同时可能存在其它调节途径。
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Ｅｎｚｙｍｅｓ　ｉｎ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．
ＺＨＡＯ　Ｘｉａｎｌｉｎ，ＳＩ　Ｑｉｎｇｙｏｎｇ，ＧＯＮＧ　Ｎｉｎｇ
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ，Ｇｕｉｚｈｏｕ　５５０００１）
７９
·生物技术· 北方园艺２０１６（０７）：９８～１０３
第一作者简介：包艳存（１９７９－），女，硕士，农艺师，研究方向为芦笋
栽培育种。Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｙｃｎｋｙ＠１６３．ｃｏｍ．
收稿日期：２０１５－１２－１６
ＤＯＩ：１０．１１９３７／ｂｆｙｙ．２０１６０７０２５
芦笋“冠军”亲本组培快繁技术研究
包 艳 存，李 书 华，李 保 华，郑 红 霞，牟 　 萌，厉 广 辉
（山东省潍坊市农业科学院 生物所，山东 潍坊２６１０４１）
　　摘　要：以芦笋“冠军”父、母本为试材，采用不同浓度ＮＡＡ、６－ＢＡ、ＫＴ、ＩＢＡ激素配比，进行启
动、增殖、生根、过渡培养试验，研究了适宜其父、母本茎尖快繁的培养基。结果表明：ＭＳ＋ＮＡＡ
０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．１ｍｇ／Ｌ为母本启动培养基，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１０ｍｇ／Ｌ＋
６－ＢＡ　０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．２ｍｇ／Ｌ为父本启动培养基；ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ
０．１ｍｇ／Ｌ为母本继代增殖培养基，ＭＳ＋ＮＡＡ　０．２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　０．０５ｍｇ／Ｌ为父
本继代增殖培养基；１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．０５ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ
为母本生根培养基，１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　２．０ｍｇ／Ｌ
为父本生根培养基，父、母本在适宜的生根培养基上，均生出８条以上的第Ⅰ类型根，生根率达
９５％以上，并建立了适宜的过渡移栽技术规程，过渡移栽成活率达９５％以上。
关键词：芦笋；“冠军”；茎尖组培；过渡移栽
中图分类号：Ｓ　６４４．６０３．６　文献标识码：Ａ　文章编号：１００１－０００９（２０１６）０７－００９８－０６
　　芦笋（Ａｓｐａｒａｇｕｓ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）属百合科天冬门属，学
名石刁柏，是雌雄异株宿根性多年生植物。芦笋有“蔬
菜之王”和“世界十大名菜之一”之称。嫩茎是其食用部
分，其质嫩味鲜，营养价值全面且丰富，风味独特，深受
世人的喜爱［１－２］。
芦笋品种“冠军”是潍坊市农业科学院育成的优良新
品种，高产、优质、抗病性强，是目前国内栽培的主要国产
品种，２００８年９月通过山东省农作物品种审定委员会审定
并定名［３］。芦笋雌雄异株，亲本繁殖困难，靠分株法繁殖
速度太慢。而组织培养快速繁殖方法，能较好地保持良
种的优良性状，繁殖系数高，２０世纪８０年代以来，国内
不少学者开始对芦笋组织培养进行了研究，并取得了较
大进展［４］。现在前人研究的基础上，结合多年芦笋组培
　　　　
经验，对“冠军”的父、母本组培快繁和过渡移栽技术进
行了系统研究，以期为该品种的快速繁育推广打下坚实
的基础。
１　材料与方法
１．１　试验材料
供试材料为芦笋“冠军”父、母本的嫩茎。
１．２　试验方法
试验于２００５—２００８年在中国芦笋研究中心多年研
究的基础上进行。
１．２．１　表面灭菌　供试材料幼茎的表面携带着各种微
生物，在把茎尖接种到培养基之前必须进行彻底的表面
消毒［５］。前人经验表明，出土嫩茎的绿色部分是最佳的
外植体材料，不仅污染率低，而且腋芽萌发率高，外植体
建立的成功率也较高［６］。因此课题组从田间取回幼茎，
先用自来水流水冲洗５ｍｉｎ，然后用中性洗涤液逐条清
洗，但不能损伤顶芽和侧芽，再用自来水流水冲洗１５ｍｉｎ，
　　
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｓｅｅｄｌｉｎｇ　ｏｆ　Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．ａｓ　ｔｅｓｔ　ｍａｔｅｒｉａｌ，ｕｓｉｎｇ　ｃｒｕｄｅ　ｅｘｔｒａｃｔ
ｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅ　ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ　ＡＢＡ　ｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ（ＳＯＤ，ＰＯＤ，ＡＰＸ，ａｎｄ　ＣＡＴ）ａｎｄ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ　ｗａｓ
ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｌｏｎｇ　ｔｉｍｅ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｎ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ　ａｎｄ　ＰＯＤ　ｗａｓ
ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ；ＡＰＸ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｕｎｄｅｒ　ｌｏｗ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｃｈａｎｇｅ　ｗａｓ　ｂｉｇｇｅｒ，ａｎｄ　ＡＰＸ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｒｅａｃｈｅｄ
ｔｈｅ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｕｎｄｅｒ　ｈｉｇｈ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｆｏｒ　２４ｈｏｕｒｓ；ａｎｄ　ＣＡＴ　ｓｈｏｗｅｄ‘Ｍ’ｓｈｉｆｔｉｎｇ　ｔｒｅｎｄ　ｕｎｄｅｒ
ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ．Ｂｙ　ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｉｓｏｚｙｍｅｓ，ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＡＢＡ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｄｕｃｅ　ｎｅｗ　ｂａｎｄｓ　ｏｆ
ＰＯＤ　ａｎｄ　ＡＰＸ　ｉｎ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｔｉｍｅ，ｂｕｔ　ｎｏ　ｎｅｗ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＳＯＤ　ａｎｄ　ＣＡＴ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉ（Ｗａｌ．）Ｌｉｎｄｌ．；ＡＢＡ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅｓ；ｉｓｏｚｙｍｅ
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