全 文 ：药学学报 A e t aP h a r m a e e u t i e aS i n ie a19 87 ; 2 2 ( 4 ) : 3 05、 30 7
一叶荻碱对 5种神经递质受体和蛙脊髓膜
电位的影响
屈 志 炜 张 均 田
(中国医学科学院药物研究所药理研究室 , 北京 )
一叶荻碱是从一叶荻 (冼 。。 玄en g a 。叹方。 瓦。 os a R he d) 叶子中分离得到的一种生物碱 。
该药的主要药理作用是兴奋脊髓 , 可归属于致痉剂类 “ ’ 。 最近的工作证明 , 一叶荻碱对急性
脑缺氧有一定保护作用 , 且能促进正常小鼠学习和 改善酒精所致的 记忆获得 和记亿再现不
良`卜 4 ’ 。 本文报告一叶荻碱中枢作用的可能机制 。
材 料 和 方 法
本研究所用动物为雄性 W i s t a r 大鼠 ,体重 2 0 0~ 2 5 0 9 和牛蛙 ( R a n a e a t e s b e艺a n a ) , 体重
为 1 0 0~ 1 5 0 9 。
硝酸一叶荻碱由本所实验药厂提制 。 丫一氨基丁酸 ( G A B A ) , 甘氨酸和牛磺酸由 日本大正
制药株式会社供给 。 测定 刀一 , 口 : 一和 a Z一去 甲肾上腺素受体所用放射配基 口H ] D H A 、 户H〕
w B 4 1 0 1和〔3 H ]可乐宁 ( C l o n i d i n e ) 均为英国 A m e r sh a m 公司出品 。 测定 M 一胆碱受体所用
〔3 H〕Q N B 和测定 G A B A 受体所用 〔3 H〕m u s e i m o l 以及 D H A 购自 S i g m a 公司 。 阿托品硫酸
盐系 T& H S m iht 公司出品 。 呱哇嗦 ( rP a oz s in) 和可乐宁为北京制药工业研究所惠赠 。
上述五种受体测定的主要条件列于下表 :
具体操作步骤详见文献`“一了 ) 。
采用牛蛙离体脊髓灌流标本观察一叶荻碱对 G A B A , 甘氨酸和牛磺酸引起膜去极化的影
T a b l
。
T h e m a i n e o n d i
t r a n s m i t t e r r e e e P t o r s
f o r t h e b i n d i n g a s s a y s o f 5 k i n d s o f n e u r o
N e U r o t r a n S-
m i t t e r
r e c e P t o r
T i s s u e
t i o n B
C O n - I n e u b a t i o n
S O U r C e
C e n t r a t i o n
( m g P r o t -
e i n / m l )
R a d io l i g a n d 1 B l
a n k
B u f f e r 1一 ( 。一 {忽
a 一 N o r a d r e n e r g i e
口 x
R a t b r a i n
m e m b r a n e
八甘n几0nQ.,刀卫卜几.一ó咋白,ù1 {
s
H
一
P r a z o s i n P h o s Ph a t e
门口之甘`
.口工d且`.人
rT1 1
3
H
一 e l o n i d i n e
1 1
,
H
一
D H A
刀一 N o r a d r e n e r g i e
A e e t y lc h o l in e
B e i j in g d u e k
e r y t h r o e y t e s
R a t b r a in 1 l
s
H
一
Q N B
G A B A R
a t b r a in 0
.
5 l
s
H
一
M u s e i m o l
1卜 m o l / L
P r a z o s l n
2林 m o l / L
e lo n id i n e
1卜 m o l / L
D H A
0
.
1卜 m o l / L
a t r o P i n e
0
.
1卜 m o l / L
G A B A
T r i S
一 e i t r a t e
F o r e v o r y r o c e p t o r
, u s i n g f il t r a t i o n
一
G F / c 3
x 2 m l w a s h w i t h e o ld b u f f e r t o s e P a r a t e f r e e a n d b o u o d r a -
d io l ig a n d
本文于 1 98 6年 吕月 2 6 日收到 .
药学学报 A e taP h a rme e a u tie aS i nie a1 987 ; 2 2( 4 ): 3 0 5 ~30 7
响 。 关于制备脊髓标本和记录膜电位变化等技术详见以前报道` 8, 。
结 果
一 . 一叶获碱对五种神经递质受体的作用
以〔“ H〕m us o i m ol 为放射配基 , 测定一叶荻碱和 G A B A 对大鼠全脑 G A B A 受体的亲和
力 。 从图 1竞争曲线可见 , G A B A 竞争性地抑制 [ ” H」m us o im ol 与 G A B A 受体的特异结合 ,
其 I C 。。 为 。 . 2 X 1 0刁 m ol / L 。 从图 1 以及以后数次 重复试验 , 一叶荻碱的 I C 5 o 始终 介于
2 0一 4~ 2 0
一 石 m o l / L 之间 。
在其它受体试验中 , 未观察到一叶荻碱对大鼠脑膜 a ,一 , 甸一去甲肾上腺素受体和 M 一胆
碱受体以及北京鸭红细胞膜 刀一去甲肾上腺素受体具有亲和力 。
二 . 一叶荻碱对蛙脊髓膜电位的影响
从牛蛙分离出脊髓 , 用蔗糖间隙法测定一叶荻碱对 G A B A , 甘氨酸和牛磺酸引起的膜
去极化的影响 。 图 2 表明 , 当一叶荻碱的浓度为 1 m m ol / L 时 , G A B A 引起的膜去 极化受到
明显抑制 , 但一叶荻碱并不抑制由甘氨酸或牛磺酸所引起的膜去极化 , 甚至反而对甘氨酸所
致的膜去极化有所加强 。
儿个BGA
G A日A
` 办 水
\ \ 一, - . ~ ~一 , 一 .~ 口口 . , ,6 5 4 伙牛T a U 扩\ 、今T a U
一 L o g ( d r u g ) ( m o l / L )
F 19 1
.
C o m P e t i t i o n o f G A B A a n d s e c u r i n i n e
w i t h
各
H
一
m u s e i m o l f o r s P e e i f i e b in d i n g t o
G A B A r e e e P t o r s o f r a t b r a i n
.
-— . G A B A ; 。— 。 S e e r i n i n e
F 19 2
.
E f f e e t o f s e e u r in in e o n th e d o r s a l r o o t
r e s p o n s e i n d u e e d b y G A B A
,
g l y e in e ( G l y )
a n d t a u r in e ( T a u ) i n t h e f r o g s P in a l e o r d
.
L e f t r e e o r d s r e P r e s e n t e o n t r o l r e s p o n s e i n d u
-
e e d b y a m in o a e id s
,
a n d r ig h t r e e o r d s r e p r e
-
s e n t a m i n o a e id r e s P o n s e s a f t e r t h e a P P l i e a
-
t i o n o f s e e u r i n i n e ( 1 m m o l / L )
.
N o t e t h a t
9 l y e in e r e s P o n s e w a s s l ig h t ly a u g m e n t e d
.
C a
-
l i b r a t io n : 1 m V ; 4 m in
.
在现有致痉剂中 , 按作用机制分类 , 士的宁属于甘氨酸受体拮抗剂 ; 印防己毒素和荷包
牡丹碱属于 G A B A 受体拮抗剂 ` 9 ’ 。 本研究采用放射配基结合法观察到一叶荻碱对 G A B A 受
体呈特异性结合 , 用电生理学方法发现一叶荻碱能抑制 G A B A 引起的脊髓膜去极化 , 而不
抑制甘氨酸或牛磺酸所致的膜去极化 , 说明它是一种 G A B A 受体拮抗剂 。 在我们进行研究
药学学报 Ae t a P h a r m a e eu t ie a S in ie a 1 897 ;22 ( 4 ) :3 05、 307 30 7
时 , B e ut le r 等的研究得到与我们相同的结论 , 他们观察到一叶荻碱取代 “ H 一 G A B A 的 I C 。。
为 5 “ 1 0一 s m o l / L `’ ” ’ 。
关键词 一叶荻碱 ; G A BA 受体拮抗剂 ; 去极化
致谢 蛙脊髓膜电位试验承日本大正制药株式会社研究所协助完成 。
参 考 文 献
J `
1
. 张慧芸 . 一叶获碱与土的宁的毒性比较 . 中华医学杂志 19 7 4 ; :4 2 3 4 .
2
.
Z h a n g J T a n d S a i t o H
.
E f f e e t s o f s e e u r i n i n e o n o n e t r a i l P a s s i v e a v o id a n e e l e a r n i n g i n m ie e
.
J a p J
P 无a r 解a e o l 1 98 7 I n P r e s s .
3
.
Z h a n g J T
, e t a l
.
E f f e c t s o f v i r o s e e u r i n i n e o n s P i n a l r e f le x a n d o n e t r i a l P a s s i v e a v o id a n e e le a r n i n g
.
I b i d
1 9 8 7 I n P r e s s
.
4
. 屈志炜 、 张均田 . 一叶荻碱的脑保护作用及其作用机制的初步分析 . 全国第二届神经药理学术会议论 文摘 要汇编 .
1 9 8 5 : 10 4
.
5
. 冯亦璞 , 等 . 肾上腺素能受体的测定方法及我们的一些经验 . 中华核医学杂志 19 8 3 ; 3 : 8 .
6
. 钮心一 、 任志鸿 , 蓑若碱衍生物与 M 一胆碱受体相互作用的构效关系 . 药学学报 1 98 4 ; 19 : 3 26 .
7
.
E n n a S J a n d S n y d e r S H
.
P r o P e r t i e s o f G A B A b i n d i n g i n r a t b r a i n
.
B r a f儿 R e 吕 1 9 7 7 ; 12 4 : 18 5 .
8
.
K u r a e h i M
, e t a l
.
E f f e e t o f t a u r i n e o n d e p o l a r i z a t io n s i n d u e e d b y L
一
g l u r a m a t e a n d o t h e r e x e i t a t o r y
a m in o a e i d s i n t h e i s o l a t e d s P i n a l e o r d o f t h e f r o g
.
J a 夕 J P h a 犷饥 a e o l 1 9 8 3 ; 3 3 : 12 4 7 .
9
.
F r a n z D N
.
C o n t r a l n e r v o u s s y s t e m s t im u l a n t s I n : G i l m a n A G e d
.
T h e P h a : 二 a e o l o g i e a l B a : 葱: o f T h e , a -
夕 e“ t i e s 6 t h e d . N e w Y o r k : M a e m i l l a n P u b l i s h i n g C o , 1 98 0巧 8 5、 5 8 8 .
1 0
.
B e u t le r JA
, e t a l
.
S e e u r i n i n e a lk a lo i d s : A n e w e la s s o f G A BA r e e e P t o r a n t a g o n i s t
.
B 犷 a i n R e 召 1 98 5 ; 33 0 :
1 3 5
.
. J 自一一
I N F L U E N C E O F S E C U R I N I N E O N 5 K I N D S O F N E U R O 一
T R A N S M I T T E R R E C E P T O R S A N D M E M B R A N E P O T E N T I A L
O F F R O G S P I N A L C O R D
O U Z h i
一
W e i a
n d Z H A N G J u n
一
T i a n
( D e夕a , t , e。 ` 01 p h a , 仍 a e o l o g y , I 二 s t `t o t e of 盯 a t e r i a 叮e d玄。 a , C h i。 。 , 。 A e a d 。协 y ol 万 e d￡e a l s c玄e 介 e e 。 )
A B S T R A C T U s i n g r a d i o l i g a n d b i n d i n g a s s a y m e t h o d
, s e e u r i n i n e w a s s h o w n t o
b e s p e e i f i e a l l y b o u n d t o G A B A r e c e p t o r s o f r a t b r a i n w i t h I C o o o f 1 0
一 4
~ 1 0
一 sm o l /
L
.
H o w e v e r
, s e e u r i n i n e d i d n o t e x h ib i t a f f i n i t y f o r a l
一 , a Z一 a d r e n o e e P t o r s a n d
M
一 e h o l i n e r g i e r e e e P t o r s o f r a t b r a i n a n d t h e 刀一 a d r e n o c e P t o r s o f d u e k e r y t h r o e y t e
m e m b r a n e
.
I n i s o l a t e d a n d P e r f u s e d b u l l f r o g s P i n a l e o r d e x P e r im e n t
,
t h e d e P o l a r i -
z a t i o n i n d u e e d b y G A B A w a s s l i g h t l y d e P r e s s e d b y s e e u r i n i n e ( 1 m m o l / L )
,
b u t n o
a n t a g o n i s t i e e f f e e t o n g l y e i n e o r t a u r i n e e V o k e d d e P o l a r i z a t i o n w a s o b s e r v e d w i t h
s e e u r i n i n e
.
T h e s e r e s u l t s i n d i e a t e t h a t s e c u r i n i n e 15 a w e a k G A B A a n t a g o n i s t
.
K e y w o r d s S e c u r i n i n e ; G A B A r e c e P t o r a n t a g o n i s t ; D e P o l a r i z a t i o n