全 文 ：《食品工业》2014 年第35卷第 7 期 156
HPLC法测定欧李果实中γ-氨基丁酸的含量
蔡愈杭，王小曼，戴文君
上海东锦食品集团有限公司（上海 201812）
摘 要 欧李果实含有丰富的γ-氨基丁酸, 采用超声波提取, 结合邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法对欧李果
实中γ-氨基丁酸的含量进行测定。在对欧李果实提取液柱前衍生后, 利用ZORBAX Elipse AAA C18色谱柱, 以40
mmol/L的磷酸氢二钠 (pH 7.8) 及V (甲醇)︰V (乙腈)︰V (水)=45︰45︰10, 为流动相进行梯度洗脱。以γ-氨基丁酸
质量浓度X (μg/mL) 对峰面积Y (mAU·min) 进行线性回归, 得回归方程Y=10.689 1X+6.130 2, 相关系数为0.999 6, 该
方法γ-氨基丁酸的最低检出限为0.064 ng。γ-氨基丁酸平均加标回收率为101.1%, RSD为1.60%。结果证明, 该方法
具有高效、结果准确、重复性好的特点。通过本法测得欧李果实中γ-氨基丁酸的含量为14.0 mg/100 g。
关键词 高效液相色谱法; 欧李; γ-氨基丁酸 (GABA); 邻苯二甲醛 (OPA)
HPLC Determination of γ-amino Butyric Acid Content in the Fruit of Cerasus humilis
Cai Yu-hang, Wang Xiao-man, Dai Wen-jun
Shanghai Tohkin Food Group Co., LTD. (Shanghai 201812)
Abstract The fruit of Cerasus humilis is rich in γ-amino butyric acid (GABA). Combined with ultrasonic extraction, high
performance liquid chromatography with o-phthaldialdelhyde (OPA) pre-colomn derivatization are used to measure GABA content
in the fruit of Cerasus humilis. After pre-colomn derivatzation of the extract from Cerasus humilis, separation of GABA is carried out
on ZORBAX Elipse AAA C18 column with the gradient elution of 40 mmol/L Na2HPO4 (pH 7.8) and V (methanol)︰V (acetonitrile)︰
V (water)=45︰45︰10. While concentrations of GABA X (μg/mL) on the peak area Y (mAU·min) liner regression, the regression
equation was Y=10.689 1X+6.130 2, with the correlation coeffi cient of 0.999 6. The lowest detection limit was 0.064 ng. The average
recovery with standard addition was 101.1%, while RSD was 1.60%. The results showed that the method was effi cient, accurate and
reproducible. By this method, the content of GABA in the fruit of Cerasus humilis was 14.0 mg/100 g.
Keywords HPLC; Cerasus humilis; GABA; OPA
欧李（Cerasus humilis），为蔷薇科（Rosaceae）
樱桃属（Ceraras），是生长在我国北方贫瘠沙化环
境中的特有野生树种[1]。近年来，欧李作为一种新兴
果树，营养价值备受关注。有文献报道[2]，欧李中含
有丰富的γ-氨基丁酸。
γ-氨基丁酸（γ-amino butyric acid，简称GABA）
是一种4碳非蛋白氨基酸，为哺乳动物中枢神经系统
重要的抑制性神经递质，具有降血压、安神、增强
脑活力、治疗癫痫及调节激素分泌等重要的生理功
能[3]。近年来，GABA作为新型的食品功能因子，建立
高效准确的检测方法尤为重要。有学者对高效液相色
谱法（HPLC）、改良纸层析法及Berthelot比色法进行
了比较，结果表明HPLC测定GABA的结果准确、灵敏
度高、适用范围广[4]。
利用GABA与衍生化试剂邻苯二甲醛（OPA）反
应生成具有较强荧光活性衍生化产物的原理，建立柱
前衍生高效液相色谱法测定欧李果实中GABA含量，
为进一步地开发欧李系列的功能性产品提供有效的分
析手段。
1 材料与方法
1.1 仪器与设备
HP1200 型高效液相色谱仪，FLD检测器：安捷伦
（中国）科技有限公司；AL104型电子天平：梅特勒-
托利多仪器上海有限公司；FE20K型酸度计：梅特
勒-托利多仪器上海有限公司；SK5210LHC型超声波
清洗仪：上海科导超声仪器有限公司；Millin-Q超纯
水制备机：密理博中国有限公司。
1.2 材料与试剂
欧李果实，采自河北，于实验室-20 ℃保存备用。
GABA标准品购于Sigma公司，含量≥99%；甲
醇、乙腈均为色谱纯；磷酸氢二钠、硼酸、2-巯基乙
醇均为分析纯；邻苯二甲醛为化学纯；所有用水均为
Millin Q超纯水。
1.3 试验方法
1.3.1 标准溶液配制
精确称取GABA标准品0.010 0 g，用水溶解并定容
至10 mL容量瓶中，此标准储备液质量浓度为1.0 mg/
工艺技术
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mL。分别移取标准储备液0.1 mL，0.3 mL，0.5 mL，
0.7 mL，0.9 mL于10 mL容量瓶中，用水定容得到系列
浓度标准溶液。
1.3.2 供试品配制
将欧李果实洗净、晾干、去核后捣成果泥。精
确称取果泥10.000 0 g，用水溶解并置于50 mL容量瓶
中，超声波（53 kHz，60%功率）提取60 min，冷却
至室温后用水定容至刻度。
1.3.3 柱前衍生反应[5]
称取10 mg OPA，用0.5 mL甲醇溶解后，加入30 μL
2-巯基乙醇及2 mL 0.4 mol/L硼酸盐缓冲液（pH 9.4），
制成OPA衍生试剂。取标准溶液或供试品10 μL，加入
90 μL OPA衍生试剂，混匀，反应1 min后进样。
1.3.4 色谱条件
色谱柱为ZORBAX Elipse AAA C18柱（150 mm ×
4.6 mm，3.5 μm）；流动相A为40 mmol/L 磷酸氢二
钠缓冲液（pH 7.8）；流动相B为V（甲醇）︰V（乙
腈）︰V（水）=45︰45︰10；柱温35 ℃；流速2.0
mL/min；进样量为20 μL；FLD波长中激发波长为340
nm，发射波长为450 nm。方法采用的梯度洗脱程序详
见表1。
表1 分离GABA梯度洗脱程序
步骤 时间 /min 流动相 /%A B
1 0 100 0
2 1.9 100 0
3 18.1 43 57
4 18.6 0 100
5 22.3 0 100
6 23.2 100 0
7 26.0 100 0
2 结果与讨论
2.1 标准曲线的绘制
按照1.3.1方法配制GABA系列浓度的标准溶液后，
根据1.3.3及1.3.4方法依次进行柱前衍生反应及HPLC测
定，以峰面积（Y）对质量浓度（X）绘制标准曲线。标
准曲线如图1所示，曲线方程为Y=10.689 1X+6.130 2，
相关系数为0.999 6。表明GABA进样量21.2 ng～190.8
ng与峰面积呈现良好的线性关系，可作为GABA的精
确定量分析方法。
图1 GABA标准曲线
2.2 最低检出限
按照1.3.1方法配制不同质量浓度的GABA标准溶
液后，依次进行柱前衍生反应及HPLC测定，当标准
溶液质量浓度为31.8 ng/mL，进样量为20 μL时，色
谱峰信噪比S/N大于3，因此GABA的最低检出限为
0.064 ng。
2.3 精密度试验
按照1.3.2方法制备欧李的果泥水提液后进行柱前
衍生反应，重复进样6次进行色谱分析。其测定结果
如表2所示，保留时间、峰面积、对称性的RSD均小
于1%；理论塔板数RSD为1.07%，表明该色谱系统适
用于GABA的含量测定。
表2 GABA的精密度
序号 保留时间 /min
峰面积 /
mAU·min 对称性 理论塔板数
1 9.693 305.0 0.824 116 082
2 9.686 306.8 0.824 115 906
3 9.680 302.4 0.818 115 783
4 9.678 308.5 0.823 115 731
5 9.678 301.7 0.830 118 270
6 9.679 307.6 0.831 118 287
平均值 9.682 305.3 0.825 116 676
SD 0.006 2.801 0.005 1 246.785
RSD 0.06% 0.92% 0.61% 1.07%
2.4 重复性试验
取按1.3.2方法制备的同一批欧李的果泥水提
液6份，进行色谱分析。测得峰面积分别为319.8
mAU·min，318.8 mAU·min，314.9 mAU·min，
322.0 mAU·min，319.7 mAU·min，316.5
mAU·min，RSD仅为0.80%。
2.5 加标回收率试验
取同一批欧李果泥，分别加入适量的GABA标准
溶液。按1.3.2方法制备成加标果泥水提液，其加标
浓度如表3所示。分别测定加标水提液中GABA质量
浓度（CX）及其对应的空白水提液中GABA质量浓度
（C0），提取回收率=（CX－C0）/CS×100%。6份加
标果泥水提液的回收率见表3，GABA平均提取回收率
为101.1%，RSD为1.60%。说明用GABA标准品作外标
定量，重现性良好。
表3 GABA的加标回收率
序号 空白质量浓度C0/μg·mL-1
加标质量浓度
CS/μg·mL-1
实测值 CX/μg·mL-1
回收率/
%
1 28.29 10.60 39.02 101.2
2 28.21 10.60 38.98 101.6
3 26.49 14.84 41.40 100.5
4 26.79 14.84 41.58 99.7
5 26.15 18.40 45.30 104.1
6 26.31 18.40 44.63 99.6
平均值 - - - 101.1
SD - - - 1.663
RSD - - - 1.60%
2.6 样品测定
工艺技术
《食品工业》2014 年第35卷第 7 期 158
锥栗超微粉面包焙烤特性研究
徐英菊1,2，林晓岚1*，杨成2
1. 福建农林大学食品科学学院（福州 350002）；2. 德州职业技术学院粮油食品工程系（德州 253034）
摘 要 研究了锥栗超微粉 (200目以上) 的制备工艺, 并利用超微粉的性质将其应用到锥栗超微粉面包中, 探究了
锥栗超微粉面包的焙烤特性, 最后测定了产品中的抗性淀粉含量, 结果显示添加锥栗超微粉后抗性淀粉含量能显著
提高。
关键词 锥栗超微粉; 面包; 焙烤特性; 研究
The Research of Baking Characteristics of Castanea henryi Superfine Powder
Bread
Xu Ying-ju1,2, Lin Xiao-lan1*, Yang Cheng2
1. Food Science and Technology College of Fujian Agriculture and Forestry University (Fuzhou 350002);
2. Department of Cereal and Oil Food Engineering of Dezhou Vocational And Technical College (Dezhou 253034)
Abstract The preparation technology of Castanea henryi superfi ne powder was studied. By using the properties of superfi ne
powder, apply it to Castanea henryi superfi ne powder bread. And the bread baking characteristics were explored. Then
the content of resistent-starch was measured. The results showed that the content of resistent-starch was increased observably.
Keywords Castanea henryi superfi ne powder; bread; baking characteristics; research
锥栗含有丰富的维生素类和矿物质元素[1]，可以
鲜吃、炒食、菜食、清炖，还可以磨粉制作糕点等副
食品。近几年随着锥栗的集约化经营，其产量有所提
高，产品发展形成了一定的规模，但当前锥栗仍以销
售鲜果出口为主，精深加工产品少[2]。随着锥栗产量
的日益增大，其精加工也显得尤为重要。将磨制的锥
按1.3.2方法，色谱图如图2所示。测定结果显示
该欧李果实中GABA平均含量为14.0 mg/100 g。
图2 GABA标准溶液（a）及欧李果实水提液（b）
的HPLC图
3 结论
采用超声波提取，结合邻苯二甲醛柱前衍生高效
液相色谱法对欧李果实中GABA的含量进行测定，具
有高效，结果准确，精密度及重现性好的特点。实
验室也利用方法对蓝莓、蔓越莓等多种水果进行了
GABA含量测定，测定结果不仅证明了欧李中GABA
含量最高，还证明了HPLC法适用于多种水果中GABA
的含量测定。因此，这不仅为后期开发欧李系列的功
能性产品提供了有力的理论依据，也为该系列产品中
GABA含量测定提供了有效的分析手段。
参考文献 ：
[1] 王有信, 何军. 欧李栽培与开发利用[M]. 北京: 金盾出版
社, 2004.
[2] 危晴, 刘俊英, 杨国伟, 等. 同位素内标法测定欧李果汁游
离氨基酸及成分分析[J]. 食品科学, 2011, 36(10): 262-265.
[3] 王辉, 项丽丽, 张锋华. γ-氨基丁酸(GABA)的功能性及在
食品中的应用[J]. 食品工业, 2013, 34(6): 186-188.
[4] 赵宏飞, 宋伟, 裴家伟, 等. 食品中γ-氨基丁酸检测方法比
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[5] 赵琳, 周小理, 周一鸣, 等. 高效液相色谱法测定苦荞及
其萌发物中γ-氨基丁酸的含量[J]. 食品工业, 2012, 33(6):
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工艺技术