全 文 ：土人参来源于马齿苋科土人参 Ｔａｌｉｎｕｍ
ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｃｑ．） Ｇａｅｒｔｎ.， 别名人参菜、 玉兰菜、
玉参等［１］。 土人参的根、 叶均可入药， 具有健脾润
肺、 补中益气、 止咳、 解毒、 通乳的作用［２］。 用于
气虚乏力、 体虚自汗、 脾虚劳倦、 泄泻、 肺劳咳痰
带血、 眩晕潮热、 盗汗自汗、 月经不调、 乳汁稀少
等病症［３］。 本研究采用正交设计法考察不同激素水平
对土人参诱导、 增殖、 生根的影响； 并通过培养试管
苗的方式， 有效缩短育种周期， 培育出不受外界环境
影响的高产、 稳定的土人参试管苗， 现报道如下。
１ 材料和方法
１． １ 实验材料 土人参植珠取自广州中医药大学
三元里校区生活区， 经药用植物学教研室杜勤教授鉴
定为马齿苋科土人参 Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｃｑ．）
Ｇａｅｒｔｎ．。 以土人参种子、 嫩茎和叶片作为外植体。
１． ２ 主要试剂与仪器 ６－苄基腺嘌呤 （６－ＢＡ， 上
海伯奥生物科技有限公司）； α－萘乙酸 （ＮＡＡ， 上
海丽珠东风生物技术有限公司）； 吲哚乙酸 （ＩＡＡ，
上海伯奥生物科技有限公司）； 吲哚丁酸 （ＩＢＡ，
上海伯奥生物科技有限公司）； 多效唑 （ＰＰ３３３，
上海伯奥生物科技有限公司）； ２，４－二氯苯氧乙酸
（２，４－Ｄ， 上海丽珠东风生物技术有限公司）； 蔗糖
（广州化学试剂厂）； 琼脂 （广东环凯微生物科技有
限公司）； ＸＳ１２３Ａ 电子分析天平 （瑞士 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ
公司）； ＶＳ－８４０－１洁净工作台 （上海博迅实业有限
公司医疗设备厂）； ＬＤＺＸ－５０ＦＢＳ立式压力蒸汽灭
菌器 （上海申安医疗器械厂）。
１． ３ 培养条件 光照强度约为 ２ ０００ ｌｘ， １２ ｈ ／ ｄ，
培养温度为 ２５℃。 培养基的 ｐＨ值为 ５．０ ～ ６．０， 于
１２１℃、 ０．１１ ｍＰａ条件下灭菌 ２０ ｍｉｎ。
１． ４ 外植体的表面消毒 取准备好的土人参种
子、 嫩茎和叶片， 在超净工作台以无菌水洗干净
后， 用体积分数 ７５％的乙醇浸泡 ３０ ｓ， 将种子放
入 １ ｇ ／ Ｌ ＨｇＣｌ２溶液中浸泡 １０ ｍｉｎ， 嫩茎、 叶片放
入 １ ｇ ／ Ｌ ＨｇＣｌ２溶液中浸泡 １２ ｍｉｎ。 然后再用无菌
水漂洗 ５ ～ ６次， 作为诱导用材料。
１． ５ 正交设计法优化诱导条件 采用正交设计
法， 选用 Ｌ９（３４）正交表 （见表 １）， 以 ＭＳ为基本培
养基， 考察 ６－ＢＡ、 ＮＡＡ、 ２，４－Ｄ对土人参种子、 嫩
茎、 叶诱导的影响。 将外植体经灭菌后进行培养， 按
不同组织分为 ３组， 每组 ５次重复。 ２０ ｄ后进行数
据统计分析， 计算： 诱导率＝ （诱导成功外植体数
量 ／接种外植体总数） × １００％； 总诱导率＝ （所有
材料中诱导成功的外植体数量 ／所有材料中接种外
植体总数） × １００％。
土人参快速繁殖培养基的优化
温昀斐 １， 梁家龙 １， 杜勤 １， 王振华 １， 田军 2
（1. 广州中医药大学， 广东广州 ５１０４０５； 2. 广州中医药大学科技产业园有限公司， 广东广州 ５１０４4５）
收稿日期： ２０１３－０８－２０
作者简介： 温昀斐 （１９９０－ ）， 女， 本科生； Ｅ－ｍａｉｌ： ｗｅｎｄｙ ｆｅｅ＠ｑｑ．ｃｏｍ
通讯作者： 王振华， 男， 副教授， 硕士研究生导师； Ｅ－ｍａｉｌ： wzh＠gzucm.edu.cn
基金项目： 中柬第三方检测平台建设 （2012广州市白云区科信局国际科技合作计划项目）
摘要： 【目的】 采用植物组织培养技术开展土人参快速繁殖和植株再生研究， 为建立土人参的快速繁殖再生体系奠定基础。
【方法】 以土人参的种子、 嫩茎和叶片为外植体， 采用正交设计法考察不同激素水平对土人参诱导、 增殖、 生根的影响， 获
得土人参最佳的诱导、 增殖和生根培养基， 并进一步将试管苗移栽到野外环境。 【结果】 以土人参种子作为外植体， 选择用
ＭＳ ＋ ３．０ ｍｇ ／ Ｌ ６－苄基腺嘌呤 （６－ＢＡ） 培养基培养 １ ～ ２周后能诱导出优质的丛生芽， 再选用 ＭＳ ＋ ３．０ ｍｇ ／ Ｌ ６－ＢＡ ＋ １．０
ｍｇ ／ Ｌ α－萘乙酸 （ＮＡＡ） ＋ １．５ ｍｇ ／ Ｌ 多效唑 （ＰＰ３３３） 培养基对其进行增殖培养， 可得到鲜质量增长率最大的健壮丛生芽；
生根培养基 ＭＳ ＋ ０．５ ｍｇ ／ Ｌ ＮＡＡ ＋ ０．５ ｍｇ ／ Ｌ 吲哚乙酸 （ＩＡＡ ） ＋ １．０ ｍｇ ／ Ｌ吲哚丁酸（ＩＢＡ）能促进丛生芽长出直径大、 长度较
长、 须根及绒毛较多的营养根， 得到试管苗； 将试管苗进行炼苗与移栽， 成活率 １００％， 且与播种栽培比较可显著缩短生长
时间。 【结论】 建立了土人参快速繁殖再生体系。
关键词： 土人参 ／生长和发育； 快速繁殖； 组织培养
中图分类号： Ｒ２８２．２ 文献标志码： Ａ 文章编号： １００７－３２１３ （２０１４） ０２ － ０２８９－ ０６
广州中医药大学学报
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
２０１４年 ３月第 ３１卷第 ２期
Ｍａｒｃｈ ２０１４，Ｖｏｌ． ３１，Ｎｏ． ２
·中药种植·
２８９
DOI:10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2014.02.030
试验号 籽ＮＮＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽ＩＡＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽ＩＢＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
１ １．０ ０．０ ０．０
２ １．０ ０．５ ０．５
３ １．０ １．０ １．０
８ ０．０ ０．５ １．０
９ ０．０ １．０ ０．０
４ ０．５ ０．０ １．０
５ ０．５ ０．５ ０．０
６ ０．５ １．０ ０．５
７ ０．０ ０．０ ０．５
表 ３ 不同激素水平对生根的影响 Ｌ９（３４）正交设计表
Ｔａｂｌｅ ３ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ
detected ｂｙ Ｌ９（３４） ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｍｅｔｈｏｄ
表 ２ 不同激素水平对增殖的影响 Ｌ９（３４）正交设计表
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
detected ｂｙ Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｍｅｔｈｏｄ
试验号 籽６－ＢＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽ＮＡＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽ＰＰ３３３ ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
１ ３．０ ０．０ ０．５
２ ３．０ ０．５ １．０
３ ３．０ １．０ １．５
８ １．０ ０．５ １．５
９ １．０ １．０ ０．５
４ ２．０ ０．０ １．５
５ ２．０ ０．５ ０．５
６ ２．０ １．０ １．０
７ １．０ ０．０ １．０
表 １ 不同激素水平对诱导率的影响 Ｌ９（３４） 正交设计表
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
detected ｂｙ Ｌ９（３４） ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ ｍｅｔｈｏｄ
试验号 籽６－ＢＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽ＮＡＡ ／ （ｍｇ·Ｌ－１） 籽２，４－Ｄ ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
１ ３．０ ０．０ ０．０
２ ３．０ ０．５ ０．５
３ ３．０ １．０ １．０
８ ０．０ ０．５ ０．０
９ ０．０ １．０ ０．５
４ １．５ ０．０ ０．５
５ １．５ ０．５ １．０
６ １．５ １．０ ０．０
７ ０．０ ０．０ １．０
１． ６ 正交设计法优化增殖条件 采用正交设计
法， 选用 Ｌ９（３４）正交表 （见表 ２）， 以 ＭＳ为基本培
养基， 考察 ６－ＢＡ、 ＮＡＡ、 ＰＰ３３３对土人参增殖的
影响。 将诱导出的丛生芽和愈伤组织接种到培养基
中， 按不同诱导组织分为 ２组， 每组 ５次重复。 培
养 ２０ ｄ后进行数据统计分析。 计算： 鲜质量增长
率 （％） ＝ ［生长后的鲜质量 （ｇ） － 接种时的鲜质
量 （ｇ）］ ／接种时的鲜质量 （ｇ） × １００％； “＋” 表
示生长情况一般， “＋＋” 表示生长情况较好，
“＋＋＋” 表示生长情况最好。
１． ７ 正交设计法优化生根条件 采用正交设计
法， 选用 Ｌ９（３４）正交表 （见表 ３）， 以 ＭＳ为基本培
养基， 考察 ＮＡＡ、 ＩＡＡ、 ＩＢＡ对土人参丛生芽的影
响。 选取健壮丛生芽进行实验， 每组 １０次重复。
２０ ｄ后进行数据统计分析。 计算： 结果采用计分
法实行， 按照根的直径 （ｄ）、 长短 （ｌ）、 须根及绒
毛的数量 （ｎ） 进行统计， 每项 ５ 分， 总分为 １５
分。 根的直径 ｄ≤０．３ ｍｍ 记 １ 分， ０．３ ｍｍ＜ｄ＜０．６
ｍｍ记 ３分， ｄ≥０．６ ｍｍ记 ５分； 根的长度 ｌ≤３ ｃｍ
记１ 分， ３ ｃｍ＜ｌ≤６ ｃｍ 记 ２ 分， ６ ｃｍ＜ｌ≤９ ｃｍ 记
３分， ９ ｃｍ＜ｌ≤１２ ｃｍ记 ４分， ｌ＞１２ ｃｍ记 ５分； 须
根及绒毛的数量 ｎ若极少或没有记 １分， ｎ若有或
较多记 ２ ～ ４ 分， ｎ 若有且密集记 ５ 分。 将以上
３项计分结果求和， 再取每组平均分为最终得分。
１． ８ 炼苗与移栽 筛选出根、 茎粗壮的试管苗进
行炼苗及移栽。 把培养基瓶盖打开， 在培养室内炼
苗 ２ ｄ后， 将小苗从培养容器中移出， 小心洗净根
部琼脂， 移栽到营养土中， 常规管理， ３０ ｄ后统
计存活率并记录植物生长情况。 计算： ｐ存活率＝ （ｎ
存活数量 ／ ｎ接种总数或播种总数） × １００％。
２ 结果与分析
２． １ 不同激素水平对诱导的影响 将土人参果实
剥开取出成熟种子， 嫩茎剪成 ３ ｃｍ小段， 叶片切
成 ２ ｃｍ × ２ ｃｍ小片， 经灭菌后接种于 １ ～ ９号培
养基中， 培养 ２０ ｄ， 结果见表 ４、 表 ５。
表 ４、 表 ５显示： 以第 ４试验号处理组诱导率
最高， 为 ９５．８３％， 诱导结果多为愈伤组织； 第 １
试验号处理组虽诱导率只有 ７１．７４％， 但诱导结果
多为丛生芽， 并以种子诱导率最高。 另外， 不同外
植体材料趋向于诱导出不同实验结果， 其中， 以种
子作为诱导丛生芽的材料最佳。 第 １试验号处理组
能将外植体诱导出生长良好的丛生芽， 其中， 经种
广州中医药大学学报 ２０１４年第 ３１卷２９０
表 ６ 不同激素水平对诱导率影响的极差分析
Ｔａｂｌｅ ６ Ｖｉｓｕａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ
ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ
Ｋｉ ６－ＢＡ ＮＡＡ ２，４－Ｄ
Ｋ１ １９９．５２ ２１４．００ ２２２．６１
Ｋ２ ２７９．９９ ２２３．０７ ２３９．２４
Ｒ ３７．３１ ４．１９ １７．８４
Ｋ３ １６８．０６ ２１０．５０ １８５．７２
表 ５ 外植体材料对诱导结果的影响及生长情况
Ｔａｂｌｅ ５ Ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｅｘｐｌａｎｔｓ
试验号 种子 生长情况 嫩茎 生长情况 叶 生长情况
１ 丛生芽 ＋＋＋ 丛生芽 ＋ 丛生芽 ＋＋＋
２ 愈伤组织 ＋ 愈伤组织 ＋＋＋ 愈伤组织 ＋
３ 愈伤组织 ＋ 愈伤组织 ＋＋ 愈伤组织 ＋
８ 丛生芽 ＋ 丛生芽 ＋ 愈伤组织 ＋
９ 丛生芽 ＋ 愈伤组织 ＋＋ 愈伤组织 ＋
４ 愈伤组织 ＋ 愈伤组织 ＋＋＋ 愈伤组织 ＋
５ 愈伤组织 ＋ 愈伤组织 ＋＋ 愈伤组织 ＋
６ 愈伤组织 ＋＋ 愈伤组织 ＋＋＋ 愈伤组织 ＋
７ 愈伤组织 ＋ 愈伤组织 ＋＋ 愈伤组织 ＋
表 ４ 不同激素水平对土人参诱导率的影响
Ｔａｂｌｅ ４ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｅ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
试验号
籽激素 ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
观察 ／个Ｎ
诱导率 ／ ％ｐ
１ ３．０ ０．０ ０．０ １５ ７８．７９
７ ０．０ ０．０ １．０ １５ ０．００
８ ０．０ ０．５ ０．０ １５ ３７．５０
９ ０．０ １．０ ０．５ １５ ４６．１５
２ ３．０ ０．５ ０．５ １５ ６０．００
６ １．５ １．０ ０．０ １５ ９３．３３
３ ３．０ １．０ １．０ １５ ２７．２７
４ １．５ ０．０ ０．５ １５ ８８．８９
５ １．５ ０．５ １．０ １５ ７６．９２
６６．６７
１００．００
８８．８９
１００．００
１００．００
１００．００
１００．００
１００．００
１００．００
２５．００ ７１．７４
１００．００ ７７．７８
１００．００ ５０．００
１００．００ ９５．８３
１００．００ ８９．２９
１００．００ ９４．８７
１００．００ ４６．４３
３７．５０ ５６．００
１００．００ ６５．６３
种子 嫩茎 叶片 总诱导率 ／ ％ｐ６－ＢＡ ＮＡＡ ２，４－Ｄ
第 ２期 温昀斐， 等． 土人参快速繁殖培养基的优化
子和叶片诱导出的丛生芽生长状况最好； 第 ２、 ４、
６试验号处理组能将嫩茎诱导出鲜绿并生长良好的
愈伤组织。
采用 ＳＰＳＳ １９．０软件对不同激素水平对总诱导率
的影响进行极差 （Ｒ） 分析， 结果见表 ６， 根据极差
大小顺序 Ｒ６－ＢＡ＞Ｒ２，４－Ｄ＞ＲＮＡＡ可知， 影响诱导率的因素主
次顺序为 ６－ＢＡ＞２，４－Ｄ＞ＮＡＡ。 根据各因素水平之和
（Ｋ） 值得出诱导率最高的培养基为ＭＳ ＋ １．５ ｍｇ ／Ｌ
６－ＢＡ ＋ ０．５ ｍｇ ／Ｌ ＮＡＡ ＋ ０．５ ｍｇ ／Ｌ ２，４－Ｄ， 而最佳丛
生芽诱导培养基为ＭＳ ＋ ３．０ ｍｇ ／Ｌ ６－ＢＡ。
２． ２ 增殖分化培养基的优化 筛选出经诱导后生
长良好的丛生芽及愈伤组织， 接种到 １ ～ ９号培养
基中， 培养 ２０ ｄ， 结果见表 ７。
表 ７结果显示： 以第 ３试验号处理组培养基增
殖所得鲜质量增长率最高， 为 ４８３．１５％。 不同接种
材料对其生长也有一定的影响： 由嫩茎和叶片诱导
出的丛生芽， 经增殖后虽能长成大量丛生芽， 但茎
较脆弱， 叶片较小； 而由种子诱导出的丛生芽经增
２９１
表 ９ 不同激素水平对土人参生根的影响
Ｔａｂｌｅ ９ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
试验号
籽激素 ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
观察 ／个Ｎ 生根情况 ｓ ／分
ＮＡＡ ＩＡＡ ＩＢＡ
１ １．０ ０．０ ０．０ １０ 根较细， 密集， 稍短， 表面有绒毛及须根 ４．００
８ ０．０ ０．５ １．０ １０ 根稍长， 有绒毛及须根 ９．００
９ ０．０ １．０ ０．０ １０ 根较粗， 稍长， 有多数绒毛及须根， 密集 １１．００
４ ０．５ ０．０ １．０ １０ 根密集， 很长， 有较多绒毛及须根 １０．００
５ ０．５ ０．５ ０．０ １０ 根稍粗， 很长， 密集， 有较多绒毛及须根 １１．８８
６ ０．５ １．０ ０．５ １０ 根多卷曲， 稍长， 有较多绒毛及须根 １０．５０
７ ０．０ ０．０ ０．５ １０ 根粗， 长， 不密集， 有较多绒毛及须根 １１．７５
２ １．０ ０．５ ０．５ １０ 根较细， 稀疏， 稍长， 表面有绒毛及须根 ７．７５
３ １．０ １．０ １．０ １０ 根较细， 稀疏， 稍长， 表面有绒毛及须根 ６．６７
表 ８ 不同激素水平对增殖影响的极差分析
Ｔａｂｌｅ ８ Ｖｉｓｕａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ
ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
Ｋｉ ６－ＢＡ ＮＡＡ ＰＰ３３３
Ｋ１ ８８８．８２ ５０４．６２ ６９３．４１
Ｋ２ ７００．５４ ６９７．３０ ６５２．２３
Ｒ ８１．６０ １７５．６１ ７８．５０
Ｋ３ ６４４．０１ １０３１．４５ ８８７．７３
表 ７ 不同激素水平对土人参增殖的影响
Ｔａｂｌｅ ７ Ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ
试验号
籽激素 ／ （ｍｇ·Ｌ－１）
观察 ／个Ｎ
１ ３．０ ０．０ ０．５ １０ １７８．７３
７ １．０ ０．０ １．０ １０ １５９．６１
８ １．０ ０．５ １．５ １０ ２２５．３９
９ １．０ １．０ ０．５ １０ ２５９．０１
２ ３．０ ０．５ １．０ １０ ２２６．９４
６ ２．０ １．０ １．０ １０ ２８９．２９
３ ３．０ １．０ １．５ １０ ４８３．１５
４ ２．０ ０．０ １．５ １０ １６６．２８
５ ２．０ ０．５ ０．５ １０ ２４４．９７
＋
＋＋
＋
＋＋
＋＋＋
＋＋＋
＋＋＋
＋
＋＋
＋
＋＋
＋＋＋
＋
＋＋
＋＋
＋
＋＋
＋
丛生芽 愈伤组织６－ＢＡ ＮＡＡ ＰＰ３３３
鲜质量增长 ／ ％ｐ
生长情况
广州中医药大学学报 ２０１４年第 ３１卷
殖后长势最好， 能长出茎较粗、 叶片较大的丛生
芽； 相反， 只有一部分愈伤组织能增殖出少量丛生
芽。 采用 ＳＰＳＳ １９．０软件对不同激素水平对鲜质量
增长率的影响进行极差分析， 结果见表 ８。 根据极
差大小顺序 ＲＮＡＡ＞Ｒ６-ＢＡ＞ＲＰＰ３３３可知， 影响诱导的因
素主次顺序为 ＮＡＡ＞６－ＢＡ＞ＰＰ３３３。 根据 Ｋ值得出
对增加鲜质量增长率的最佳培养基为 ＭＳ ＋ ３．０
ｍｇ ／ Ｌ ６－ＢＡ ＋ １．０ ｍｇ ／ Ｌ ＮＡＡ ＋ １．５ ｍｇ ／ Ｌ ＰＰ３３３。
２． ３ 生根培养条件优化及试管苗形成 筛选高约
４ ～ ６ ｃｍ的健壮丛生芽接种于 １ ～ ９号培养基中，
培养 ２０ ｄ， 结果见表 ９。
表 ９结果显示： 以第 ５试验号处理组和第 ７试
验号处理组效果最佳。 运用 ＳＰＳＳ １９．０软件对不同
激素水平对丛生芽生根的影响进行极差分析， 结果
见表 １０。 根据极差的大小顺序 ＲＮＡＡ＞ＲＩＢＡ＞ＲＩＡＡ可知，
影响诱导的因素主次顺序为 ＮＡＡ＞ＩＢＡ＞ＩＡＡ。 根据
Ｋ值得出生根最佳培养基为 ＭＳ ＋ ０．５ ｍｇ ／ Ｌ ＮＡＡ ＋
０．５ ｍｇ ／ Ｌ ＩＡＡ ＋ １．０ ｍｇ ／ Ｌ ＩＢＡ。
２９２
温昀斐， 等． 土人参快速繁殖培养基的优化
图 １ 不同移栽材料 ６０ ｄ后生长情况比较
Ｆｉｇｕｒｅ １ Ｇｒｏｗｔｈ ｓｔａｔｅ ｏｆ ｔｈｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ａｆｔｅｒ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ｆｏｒ ６０ ｄａｙｓ
表 １０ 不同激素水平对增殖影响的极差分析
Ｔａｂｌｅ １０ Ｖｉｓｕａｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｉｍｐａｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ ｌｅｖｅｌｓ
ｏｎ ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
Ｋｉ ＮＡＡ ＩＡＡ ＩＢＡ
Ｋ１ １８．４２ ２５．７５ ２３．５０
Ｋ２ ３２．３８ ２８．６３ ２８．７５
Ｒ ４．６５ ０．９６ ２．２７
Ｋ３ ３１．７５ ２８．１７ ３０．３０
ａ． 外植体播种 ｂ． 试管苗移栽
第 ２期
２． ４ 试管苗的炼苗与移栽 打开培养瓶盖， 在培养
室内炼苗 ２ ｄ后， 将试管苗从培养容器中移栽到营养土
中， 每天进行浇灌， 保持土质湿润， 常规管理。 另安排
一对照组， 取土人参外植体种子播种于另一花盆中， 同
样处理。 ３０ ｄ后， 试管苗成活率１００％， 播种发芽率
４０％。 ６０ ｄ后生长情况见图 １。
３ 讨论
土人参在药用、 食用、 观赏等方面均有较高价
值［２］。 现代研究表明： 土人参主要含有环烯醚
萜、 三萜皂苷、 香豆素类、 挥发油和糖类等成分［４－１０］，
具有抗氧化， 提高胃动素、 胃泌素， 抗炎、 抑菌等
药理作用［１１－１３］。 我国各地均有栽培和野生。 野生土
人参生长在西部高寒山区， 生长环境恶劣， 繁殖系
数较低。 栽培土人参质量控制不统一， 种植周期不
稳定［１４］。 土人参离体培养再生植株为控制土人参成
分质量、 快速繁殖种苗提供了一条可靠而有效的途
径， 有助于今后研制大量不受生长季节限制、 不携
带病毒、 质量可控且培养周期短的高产、 稳定的土
人参试管苗， 并为实现组培苗大规模的工厂化生产
或进行化学诱变育种提供可靠的技术参考［１５］， 对于
探讨各种激素在土人参组织分化中的作用及其机
制、 保存种质资源以及建立微型观赏植株方面也有
一定意义［１６］。
土人参种子、 嫩茎和叶表面较为光滑， 消毒灭
菌难度不大， 是十分理想的实验材料。 用体积分数
７５％的乙醇浸泡外植体后， 将其放入 １ ｇ ／ Ｌ ＨｇＣｌ２
溶液中进行处理， 外植体能得到有效的灭菌又不容
易导致培养过程中出现褐化现象。
本研究采用土人参嫩茎及叶作为外植体， 虽能
诱导出生长较快而鲜质量增长率大的丛生芽或愈伤
组织， 但丛生芽及愈伤组织难增殖生长出健壮丛生
芽。 而采用土人参种子作为外植体， 材料丰富易
得， 用 ＭＳ ＋ ３．０ ｍｇ ／ Ｌ ６－ＢＡ培养基能诱导出优质
的丛生芽， 且诱导时间较快， １ ～ ２周后可进行增
殖培养； 再经生根培养后， 可得到根长、 粗， 茎
粗， 叶片大的健壮试管苗； 进行炼苗与移栽后也能
快速开花结果， 与自然生长的方式比较能显著缩短
生长时间。 本研究建立了稳定的以土人参种子为外
植体经丛生芽增殖的快速繁殖方式。
一部分由嫩茎诱导出的愈伤组织在增殖培养过
程中逐渐形成深绿色较坚硬的突起， 可能与加入
６－ＢＡ有关。 张相岐等［１６］的研究结果也表明土人参
在较高浓度 ６－ＢＡ （１．０ ～ ３．０ ｍｇ ／ Ｌ） 情况下， 大部
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Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ Ｒａｐｉｄ Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ
ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｃｑ．） Ｇａｅｒｔｎ．
ＷＥＮ Ｙｕｎｆｅｉ1， LIANG Jialong1， ＤＵ Ｑｉｎ1， WANGZhenhua1， TIAN Jun2
（1. Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ， Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０４０５ Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ;
2. Science and Technology Park Co., Ltd, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510445 Guangdong, China）
Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｃｑ．） Ｇａｅｒｔｎ． ｂｙ
ｐｌａｎｔ ｔｉｓｓｕｅ －ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ， ｓｏ ａｓ ｔｏ ｌａｙ ａ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ ｔｈｅ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｅｄｓ， ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ａｓ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｗｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｏｒｍｏｎｅ levels ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｂｙ ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｄｅｓｉｇｎ
ｍｅｔｈｏｄ， ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ， ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓｉｓ， ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ ｔｈｅ ｔｅｓｔ－
ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔｌｅｔ ｔｏ ｆｉｅｌｄ ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｈｉｇｈ－ｑｕａｌｉｔｙ ｓｐｒｏｕｔｓ ｗｅｒｅ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ｗｈｅｎ ｔｈｅ ｅｘｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ
ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｓｅｅｄｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ＭＳ＋３．０ ｍｇ ／Ｌ ６－ｂｅｎｚｙｌａｄｅｎｉｎｅ （６－ＢＡ） ｆｏｒ １－２
ｗｅｅｋ （ｓ）， ａｎｄ ｔｈｅｎ ａ ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｓｔｒｏｎｇ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ｆｒｅｓｈ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎｃｒｅａｓｅ ｒａｔｅ ｗａｓ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ
ｓｐｒｏｕｔｓ ｗｅｒｅ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｉｎ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ＭＳ ＋ ３．０ ｍｇ ／Ｌ ６－ＢＡ ＋ １．０ ｍｇ ／Ｌ ＮＡＡ ＋ １．５ ｍｇ ／Ｌ ＰＰ３３３． Ｔｈｅ
ｒｏｏｔｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｅｄ ｏｆ ＭＳ ＋ ０．５ ｍｇ ／Ｌ ＮＡＡ ＋ ０．５ ｍｇ ／Ｌ ＩＡＡ＋１．０ ｍｇ ／Ｌ ＩＢＡ ｃｏｕｌｄ ｈｅｌｐ ｔｈｅ ｓｐｒｏｕｔｓ
ｒｅｇｅｎｅｒａｔｅ ｌａｒｇｅ－ｄｉａｍｅｔｅｒ ａｎｄ ｌｏｎｇ－ｌｅｎｇｔｈ ｒｏｏｔｓ ｗｉｔｈ ｍｏｒｅ ｆｉｂｅｒｓ ａｎｄ ｔｏｍｅｎｔｕｍｓ， ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｅａｓｙ ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ｉｎｔｏ
ｔｅｓｔ－ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ． Ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｔｅｓｔ－ｔｕｂｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｗｅｒｅ ｈａｒｄｅｎｅｄ ａｎｄ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ， ｔｈｅｉｒ ｓｕｒｖｉｖａｌ ｒａｔｅ ａｒｒｉｖｅｄ ｔｏ １００％，
ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｇｒｏｗｔｈ ｔｉｍｅ ｗａｓ ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ ｉｎ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｏｆ ｓｏｗｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｌａｎｔ ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ｏｆ Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｃｑ．） Ｇａｅｒｔｎ． ／ ｇｒｏｗｔｈ ＆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ；
Ｒａｐｉｄ ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ； Ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ
广州中医药大学学报 ２０１４年第 ３１卷
分愈伤组织变为暗绿色坚硬的类型， 部分愈伤组织
表面有瘤状突起。
赵俊等［１４］的研究中， 土人参愈伤组织诱导及继
代培养后期褐化现象较明显， 而在培养基中添加
１ ｇ ／ Ｌ的活性炭， 有助于降低褐化对继代增殖的影
响， 添加活性炭虽有一定效果， 但仍不能完全解决
褐化问题。 本研究鲜少出现褐化现象， 可能与对外
植体的灭菌方式、 时间以及诱导、 增殖培养天数有
关。 诱导与增殖培养各 １５ ～ ２０ ｄ后能得到健壮试
管苗， 且不易出现褐化现象。
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【责任编辑： 黄玲】
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