全 文 ：文章编号:1008-9926(2004)04-0259-03　　中图分类号:R965　　文献标识码:A
蕨麻素对化学性肝损伤保护作用机制的研究①
张新全② ,赵艳玲 ,山丽梅 ,魏振满 ,蔡光明
(中国人民解放军第 302 医院药学部　北京　100039)
摘　要:目的　研究蕨麻素对小鼠化学性肝损伤的保护作用的机制。 方法　采用四氯化碳(CCl4)、半乳糖胺(D-GalN)和对乙
酰氨基酚(AAP)所致小鼠化学性肝损伤模型进行研究 ,分别采用 TBA 法 、DTNB 法 、CHOD-PAP法和 IFCC法测定丙二醛(MDA)、
谷胱甘肽(GSH-PX)、甘油三酯(TG)和碱性磷酸酶(ALP)。结果　蕨麻素具有促进肝脏糖原合成和提高血清蛋白含量的作用
(P <0.01), 可明显降低肝匀浆脂质过氧化产物 MDA的含量(P <0.01)及提高血清和肝脏过氧化物酶活力(P <0.01), 可
使AAP 致肝损伤小鼠的ALP活性显著下降 ,并降低血清中 TG 含量。结论　蕨麻素可能通过影响肝脏代谢机能 , 增强抗氧化
作用 ,加强解毒能力机制发挥抗损伤作用。
关键词:蕨麻素;化学性肝损伤;机制
Study on Protective Mechanism of JMS on Chemical Liver Injury①
ZHANG Xin-Quan② ,ZHAO Yan-Ling ,SHAN Li-Mei ,WEI Zhen-Man ,CAI Guang-Ming
(Department of Pharmacy , 302nd Hospital of PLA ,Beijing　100039　China)
ABSTRACT:Aim To study the mechanism of JMS protective effects on experimental hepatic injury in mice.Methods
Using models of hepatic injury induced by hepatoxicity CCl4 , D-GalN and AAP , together with the technique of TBA ,
DTNB ,CHOD-PAP and IFCC ,MDA ,GSH-PX ,TG and ALP were examined respectively.Results JMS could promote syn-
thesis of hepatic glycogen and improve the level of serum protein.It also could significantly reduce the level of MDA and
increase activity of GSH-PX in hepatic homogenate.The level of ALP and TG in serum of liver injured mice induced by
AAP was also reduced greatly.Conclusions The mechanism of JMS protective effect on liver-injured mice should involve
influencing liver metabolism , improving capability of anti-oxidation and increasing the function of detoxification.
KEYWORDS:JMS;chemical liver injury;mechanism
　　蕨麻素由蔷薇科委陵菜属植物鹅绒委陵菜
(pitentilla anserine.L)中提取分离的活性部位 ,主要
成分为三萜类化合物刺梨苷(kajiichigoside F ,分子
式:C35H58O10)和野鸦椿酸(euscaphic acid ,分子式:
MΥ功能被明显抑制[ 6] 。另外 ,Mckinney LC 等人研
究认为:通过检测辐射后 MΥ中 NO 的代谢产物
NO
-
2 ,0.5 ～ 50Gy 单独辐射 24h 或 48h 后 ,对 NO 产
生没有直接影响 ,但可增强 MΥ对 LPS 和 IFN 刺激
的反应[ 7] 。这与我们目前所得结果不相一致 。可能
与辐射剂量 、检测时间有关。
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(收稿日期:2004-02-05;修回日期:2004-06-01)
(本文编辑　魏　萍)
·259·　解放军药学学报　第 20卷第 4期　　蕨麻素对化学性肝损伤保护作用机制的研究　　　　　　　　　　张新全　　
①② 作者简介:张新全(1959-),男 ,广东河源人 ,学士 ,主管药师。研究方向:中药新药研发。 Tel:(010)66933235基金项目:国家科技部生命科学中心资助的“九·五”国家新药基金课题(1999),专题合同号 96-901-05-160
C30H48O5)。有关研究表明 ,蕨麻素对化学性肝损伤
有一定程度的保护作用[ 1] ,且可调节机体免疫反应 ,
对卡介苗加脂多糖诱导的小鼠免疫性肝损伤亦有保
护作用 。为研究蕨麻素作用机制 , 采用 CCl4 和 D-
GalN等所致化学性肝损伤模型 ,从抗氧化和促进肝
脏代谢角度对其肝脏保护作用机制进行探讨 。
1　材料和方法
1.1　材料　蕨麻素 ,黄白色粉末(解放军 302医院
药学部 ,批号 011108);联苯双酯[(BPD)北京协和药
厂] 。四氯化碳(CCl4),分析纯;半乳糖胺[(D-GalN),
分析纯 ,解放军防化学院] ;对乙酰氨基酚(AAP)(上
海施贵宝有限公司 ,批号 20010902);5 , 5-二硫对硝
基苯酸(DTNB),1 ,1 ,3 ,3-四乙氧基并烷(TEP),(均为
Fluka产品);谷胱甘肽(GSH-PX),(中科院上海生化
所东风生化技术公司产品);甘油三酯(TG)和碱性磷
酸酶(ALP)(北京中生生物工程高技术公司)。
1.2　动物　昆明种小鼠 ,质量(20±2)g , ♀♂各半 ,
(军事医学科学院动物中心 ,动物合格证号:军医动
字 BDW-95007)。
1.3　实验方法
1.3.1　模型建立　(1)CCl4模型建立[ 2] 　健康小鼠
60只 ,分别设正常对照组 、CCl4 肝损伤模型组 、联苯
双酯组(BPD ,0.058g·kg-1·d-1)和蕨麻素的高 、中 、
低剂量三个组(0.3g·kg-1·d-1 , 0.15g·kg-1·d-1 ,0.
075g·kg-1·d-1)共6组 ,每组小鼠 10只 ,各组均 ig给
药。正常对照组和模型组给同体积 0.9%氯化钠溶
液。给药第 3d ,除正常对照组外 ,各组小鼠均 ip 0.
1%CCl4橄榄油 200ml·kg-1一次。全部动物于中毒
后36h ,摘取小鼠眼球 ,取眼眶静脉丛血液 ,收集血
样 ,并切取肝脏制备匀浆进行检测 。
(2)D-GalN 模型建立[ 2] 　健康小鼠 60只 ,除模
型组为 D-GalN 肝损伤模型组外其余分组及给药同
上。给药第3d ,除正常对照组外 ,各组小鼠均 ip D-
GalN0.9%氯化钠溶液 800mg·kg-1 。全部动物于中
毒后 16h取眼眶静脉丛血液 ,收集血样 ,并切取肝脏
制备匀浆进行检测。
(3)AAP 模型建立[ 3] 　健康小鼠 60 只 ,分组同
上。于给药第 6d ,除正常对照组外 ,其余 5组各组分
别 ig AAP 175mg·kg-1 。24h后 ,即第 7d 给药 1h后 ,
摘除小鼠眼球取血 ,分离血清 ,测定 ALP和 TG 。
1.3.2　检测方法　(1)蛋白质测定用上海荣盛试剂
公司试剂盒进行测定 。(2)肝匀浆中 MDA 含量测
定[ 4]﹞将小鼠肝脏用冷 0.9%氯化钠溶液灌流脱血
后 ,称取肝组织制成 100g·L-1肝匀浆 , TBA 法测定
MDA含量 。(3)谷胱甘肽过氧化物酶活性测定方法
进行[ 5] 。(4)肝匀浆中糖原含量测定按 DTNB 参考
文献方法进行[ 6] 。(5)血清中 TG 和 ALP 参照北京
中生生物工程高技术公司试剂盒方法进行测定。
1.3.3　数据处理　所有数据均以 x ±s 表示 ,采用 t
检验进行统计处理。
2　结果
2.1　JMS对化学性肝损伤血清蛋白及肝糖原含量
的影响　表 1结果表明 ,蕨麻素中高剂量组可升高
CCl4 损伤组血清中蛋白含量(P <0.01),对 D-GalN
引起的血清蛋白含量降低有一定影响 ,但差别不显
著。该药还可显著对抗 CCl4 、D-GalN所致肝糖原含
量的降低(P >0.05 , P <0.01),表明 JMS 肝脏保
护作用可能与促进蛋白和糖原合成有关 。
2.2　JMS 对化学性肝损伤肝匀浆 MDA GSH-PX含
量的影响　表 2结果表明 ,CCl4 、D-GalN损伤组肝匀
浆MDA含量显著升高(P <0.01),GSH-PX含量显
著降低(P <0.01),蕨麻素可逆转之 ,表明蕨麻素具
有保护肝脏及清除增多的脂质过氧化物的作用。
2.3　JMS对 AAP诱导小鼠肝损伤的影响　表3结
表 1　蕨麻素对化学性肝损伤血清蛋白及肝糖原含量的影响( x±s , n =10)
Tab 1　Effects of JMS on serum protein and hepatic glycogen contents
in chemical l iver injury( x±s , n =10)
组别 剂量(g·kg -1·d-1)
血清中蛋白质含量(g·L-1)
CCl4 D-GalN
肝糖原含量(mg·g -1组织)
CCl4 D-GalN
对照组 … 56.25±3.45 59.39±3.23 33.35±2.28 29.35±2.98
模型组 … 35.53±8.53c 33.42±5.18c 16.44±4.31c 17.13±6.98c
BPD 0.058 47.82±5.72g 44.81±6.65g 26.55±7.66g 24.52±4.83g
JMS 0.3 45.68±4.81g 38.33±5.62f 24.81±6.28g 22.19±6.24g
0.15 39.26±6.90f 34.22±6.92 19.51±6.83g 18.17±5.26g
0.075 36.58±5.64 34.19±7.13 18.62±7.88f 14.55±5.55f
　　注:与空白对照组相比 , cP <0.01;与模型组相比 , fP <0.05 , gP <0.01
·260· 　解放军药学学报　2004年 8月　第 20卷　第 4 期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 20　 No 4　Aug2004　　　　　
表 2　蕨麻素对化学性肝损伤肝匀浆中丙二醛及谷光甘肽含量的影响( x±s , n =10)
Tab 2　Effects of JMS on MDA and GSHPX contents in chemical l iver injury( x±s , n =10)
组别 剂量(g·kg -1·d-1)
谷胱甘肽(1000u·g-1)
CCl4 D-GalN
丙二醛(nmol·g-1组织)
CCl4 D-GalN
对照组 … 173.77±11.25 169.89±13.23 189.62±43.56 161.08±33.18
模型组 … 128.26±15.28c 133.42±18.91c 519.88±83.29c 433.96±68.96c
BPD 0.058 152.45±18.98g 148.87±22.98g 468.00±58.92g 397.55±78.63g
JMS 0.3 153.68±20.83g 152.64±33.79g 463.19±93.12g 366.87±83.22g
0.15 133.40±17.89f 146.58±19.13f 403.52±56.87g 312.09±68.52g
0.075 129.50±28.96 138.07±26.99f 338.83±87.90f 316.51±84.14f
　　注:与对照组比较 , cP <0.01;与模型组比较 , fP <0.05 , gP <0.01
果表明 ,AAP明显损害肝脏功能 ,使 ALP活性显著升
高 ,而蕨麻素可使AAP 致肝损伤小鼠的 ALP 活性显
著下降 ,与模型组相比 ,有显著性差异(P <0.05 , P
<0.01),且大剂量组明显降低血中甘油三酯(TG)含
量 ,提示蕨麻素具有一定的肝脏解毒作用。
表 3　蕨麻素对AAP 致小鼠化学性肝损伤的肝脏解毒作用( x ±s , n =10)
Tab 3 Detoxified effects of JMS on chemical liver injury induced
by APP in mice( x ±s , n =10)
组　别 剂量(g·kg -1·d-1)
动物数
(只)
ALP
(nmol·L-1)
TG
(mmol·L -1)
对照组 … 10 0.09±0.01 0.79±0.21
模型组 … 10 0.21±0.04c 1.91±0.13c
BPD 0.058 10 0.13±0.02f 0.96±0.11g
JMS 0.3 10 0.13±0.01g 1.10±0.18g
0.15 10 0.15±0.01f 1.24±0.18g
0.075 10 0.16±0.01f 1.43±0.21g
　注:与空白组比较 , cP <0.01;与模型组比较 , fP <0.05 , gP <0.01
3　讨论
蕨麻素的主要成分为三萜类化合物。既往研究
表明 ,蕨麻素可明显减轻大鼠和小鼠由 CCl4引起的
肝损伤 ,具有较强的清除自由基和保护细胞作用[ 7] 。
在此基础上 ,本实验采用 CCl4 ,D-GalN和 AAP 三种
肝损伤模型 ,系统地研究蕨麻素的保肝作用机制 ,分
析其肝脏保护的作用机理 。
CCl4 和 D-GalN 是二种常用的肝毒剂。CCl4 致
毒机制[ 8]为经肝微粒体细胞色素 P450代谢生成自由
基CCl3 ,攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化 ,
或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合 ,破坏肝
细胞膜结构和功能的完整 ,蛋白合成障碍 ,甘油三脂
蓄积 ,胞浆中可溶性酶如ALT 溶入血中使ALT升高。
D-Gal-N致毒机制[ 9]是在代谢过程中 ,与体内磷酸尿
苷大量结合形成稳定的尿苷衍生物 ,造成体内尿苷
耗竭 ,从而 ,使依赖磷酸尿苷进行生物合成的核酸 、
糖蛋白 、糖原等物质合成减少和受阻 ,导致肝损伤。
另外 ,D-GalN还可通过产生自由基引起脂质过氧化 ,
造成肝细胞膜损伤。
研究结果表明 ,蕨麻素可降低损伤组血清 ALT
和AST的升高;促进损伤组血清蛋白含量增加 ,肝糖
原合成增加 ,从肝脏代谢功能方面表明了蕨麻素增
强肝细胞抗损伤能力;还可降低损伤组肝脏 MDA含
量 , 提高肝脏 GSH-PX 活力 。GSH-PX 可将 H2O2、
MDA氧化成水和无毒醇 ,提示蕨麻素具有较强的清
除自由基和抗氧化损伤能力。蕨麻素可使AAP 诱导
的肝损伤小鼠血清中碱性磷酸酶(ALP)活性显著下
降 ,且大剂量组明显降低血中甘油三酯(TG)含量 ,提
示蕨麻素具有一定的肝脏解毒作用 ,表明蕨麻素具
有增加肝脏解毒能力的作用 。蕨麻素护肝作用机制
还可能与其它多个环节有关 ,有待进一步深入研究 。
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(收稿日期:2004-04-28;修回日期:2004-05-14)
(本文编辑　宋金斗)
·261·　解放军药学学报　2004年 8月　第 20卷　第 4 期　　　　Pharm J Chin PLA　Vol 20　 No 4　Aug2004