全 文 ：A 3B2C3D3E1 ,即 pH7.5, 浸取时间 1 h, 浸取温度
90℃,乙醇浓度 95%,浸提比 1∶10。我们发现 , 18
组正交实验中的最高浸提条件 A3B2C1D3 E1与最佳
理论提取条件 A3 B2C3D3 E1有 4个因素水平相同。
2.2.2　理想条件下的茶树菇多糖的提取:在正交
试验结果的基础上 ,我们选择 18组中最高的提取率
组 A3 B2C1D3 E1和最佳理论提取率组 A3 B2C3D3E1
同时提取茶树菇多糖 ,理论提取率组的提取率为
9.82%,略高于正交试验中的最高提取率 9.70%。
3 　结论
3.1 　茶树菇多糖的最佳提取条件 　A3 B2C3D3E1
即 pH7.5,浸取时间 1 h ,浸取温度 90℃,乙醇浓度
95%,浸提比 1∶10。
3.2 　茶树菇多糖提取工艺　茶树菇 烘干 、软
化 、匀浆 1∶10蒸馏水 测定 pH 7. 5 90℃下水浴
提取 1h 离心 (3000 r /m in, 20 m in), 得上清液
水浴浓缩 浓缩液 95%乙醇醇析过夜 离心 (3000 r /m in,
20 m in),得沉淀物 乙醇 、乙醚各 3次 脱脂 干燥 茶树菇
粗多糖。
参 考 文 献
[ 1] 沈萍萍 , 付庭治 . 真菌多糖研究进展 . 南京大学学报 ,
1991, 27(3):524-529.
[ 2] 王红梅 , 鲍大鹏 ,杨立民 . 柱状田头菇胞内外多糖的提
取和测定 . 安徽农业技术师范学院学报 , 2000, 14(3):
18-20.
[ 2] 许旭萍 ,佘晨兴 , 李惠珍 ,等 .柱状田头菇的栽培及生物
化学研究概况 . 药物生物技术 , 2003, 10(2):117-120.
[ 4] K iho, e t al. S tructura l feature s and hypog lycem ic ac tivities
o f tw o po ly saccharide s from a ho t-w ate r ex teac t o fAgrocybe
cy lindraces. Ca rbohd ra tc Resea rch, 1994, 251:81.
[ 5] 杨月明 .茶树菇栽培技术 .北京:金盾出版社 , 2001:2-
3.
[ 6] 李建武 、萧能赓 、余瑞元 , 等 . 生物化学实验原理和方
法 . 北京:北京大学出版社 , 2004:125-130.
[ 7] 张龙翔 , 张庭芳 ,李令媛主编 . 生物化学实验方法与技
术 . 北京:高等教育出版社 , 1997:1-3.
(2006 - 08 -28收稿)
基金项目:陕西省科技攻关项目(No.2005K10-G1)作者简介:李义平(1971-),男,陕西西安人 ,讲师 ,在职博士 ,研究方向:中药物质基础分析。*通讯作者:贺浪冲 ,男 ,教授 ,博士生导师。
红毛七总生物碱提取工艺研究
李义平 ,杨广德 ,贺浪冲*
(西安交通大学医学院药学系 ,陕西西安 710061)
　　摘要　目的:对红毛七总生物碱提取工艺进行研究 , 为其大规模工业生产应用奠定基础。方法:以红毛七总生
物碱中塔斯品碱为指标 , 建立塔斯品碱的 HPLC分析方法 , 采用正交设计方法考察盐酸水浸提的最佳工艺 , 然后考
察使用阳离子交换树脂分离红毛七总生物碱的工艺条件。结果:盐酸水浸提的最佳工艺为 7倍量 , 1%盐酸 ,浸提 3
次。以 2 m l /m in流速上 LSD001阳离子交换树脂柱 , 10倍柱体积 4%氨水乙醇为洗脱溶剂 ,红毛七总生物碱得率为
1. 35%,总生物碱中塔斯品碱含量为 6.80%。结论:该方法工艺较简单 ,成本低 , 产率高。
关键词　红毛七;总生物碱;阳离子交换树脂;工艺研究
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)02-0220-04
Study on the Extraction of the Total A lkaloids from Caulopyhllum robustum
LI Y i-p ing, YANG Guang-de, HE Lang-chong
(Faculty o f Pharm acy, School o fM ed icine, X i’ an Jiao tong University, X i’ an 710061, China)
Abstrac t　Objective:To study the techno log ica l param eters of the ex traction proce ss of the to ta l a lka lo ids from Caulopyhllum rob-
stum. M ethods:Taspine, w hich is m ain component o f the tota l a lkaloids from Cau lopyhllum robustum , w as se lec ted as an evalua ting
m arker and de te rm ined by HPLC. The orthogona l testw as used to op tim ize ex tracting cond itions in the process o f ac id w a te r ex trac tion.
Then the optim ized conditions for purification using ca tion exchange resin we re investiga ted. Resu lts:The op tim ized cond itions in the
proce ss o f acid w a te r ex trac tion w ere 1% hydro chloric ac id as m uch as seven tim es of the m edicine am ount fo r 24hs and three tim es.
Then the extrac tion o f acid w ater wa s purified w ith a co lum n of m acroporous cation exchange resin LSD001 a t 2 m l /m in o f flow rate,
220 中药材 Jou rna l of Ch ineseM edicina lM ate ria ls　　第 30卷第 2期 2007年 2月
then eluted w ith 10BV of 4% aqueous amm on ia e thano l. The ex traction ra tio o f the to ta l alka lo ids w as 1.35% and the content of ta-
spine of the tota l alka lo ids was 6. 80%. Conclusion:This technology is simp ly, cheap e ffective and feasib le fo rm anufac ture in g rea t
scale.
K ey words　Caulopyh llum robustum;Tota lA lta lo ids;C ation exchange resin;Techno log ica l study
　　红毛七为小檗科植物类叶牡丹 (Cau lopyhllum
robustum )的根和根茎 ,具有祛风通络 ,活血调经的
功效〔1、2〕。红毛七主要化学成分为生物碱及皂甙 ,
其中生物碱有 N-甲基金雀花碱 (N-me thy lcy tisine)、
d-羽扇豆烷宁 (d-Lupanine)、塔斯品碱 (Taspine)、木
兰花碱 (M agnoflorine)等 ,皂甙为葳严仙皂甙 (Caulo-
sides)A、B、C、D、E等〔3、4〕 ,其中生物碱具有降压 、抗
炎 、抗肿瘤等作用 〔4 ～ 8〕。
红毛七总生物碱可采用乙醇提取 、浓缩得浸膏 、
浸膏碱化后 、氯仿萃取的方法制备 , 但该法比较烦
琐 ,且不适宜大规模制备。本文以塔斯品碱为指标 ,
考察酸水浸泡后 ,阳离子交换树脂法制备红毛七总
生物碱的工艺条件。
1 　仪器与试药
高效液相色谱仪 LC-10ATvp 色谱泵 、 SPM-
10Avp二极管阵列检测器 (岛津公司 ,日本 );色谱
柱:K romsilC18ODS柱 (150 mm ×4.6mm , 5μm);红
毛七药材购自西安药材市场 ,经西安交通大学药学
系生药教研室鉴定为正品药材;LSD001型阳离子交
换树脂 (西安蓝晓科技有限公司 ,中国 );塔斯品碱
(由西安交通大学天然药物研究与工程中心分离 ,
经 UV、 IR、NMR、MS分析与文献报道一致 , HPLC测
定纯度 >99%);甲醇(色谱纯 , Fishe r);三蒸去离子
水 (实验室自制);N aH2PO4 (分析纯 ,西安化学试剂
厂 );十二烷基磺酸钠 (分析纯 , S igma)。
2 　方法和结果
2.1 　塔斯品碱含量测定方法的建立
2.1.1　色谱条件:色谱柱:K rom sil C18ODS柱 (150
mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相:甲醇-60 mmo l /L SDS
(70∶30),磷酸调 pH值为 3;流速:1.0 m l /m in;检测
波长:245 nm;柱温:室温;灵敏度:0.02 AUFs。
2.1.2　方法学考察:塔斯品碱的线性回归方程为
Y =6005.1X +1148.5, r =0.9998, 线性范围为
0.2188 ～ 56.00 μg /m l;精密度试验 RSD=1.38%(n
=6);重现性试验 RSD =1.89%(n=6);加样回收
率试验得平均回收率为 99.18%, RSD =3.56%(n
=9)。方法学考察结果显示 ,本文建立的 RP-HPLC
法测定塔斯品碱含量的方法准确 、灵敏 、可靠。
2.2 　红毛七药材酸水浸提工艺优化　在红毛七药
材酸水浸提过程中 ,受到盐酸浓度 、酸水倍量和提取
次数的影响。为探索其最佳工艺条件 ,以盐酸浓度 、
酸水倍量和提取次数为因素 ,采用正交设计实验方
法 ,确定酸水浸提的最佳工艺。正交设计实验的因
素和水平见表 1。取干燥粉碎的红毛七药材 9份 ,
每份 10 g,按正交设计表 L9 (34)设计的实验方案
(见表 2)进行浸提 ,滤过 ,合并各组酸水液 ,取各组
酸水液 1.0 m l,用含量测定方法的流动相稀释至 5
m l,取 20μl注入高效液相色谱仪进行测定 。塔斯
品碱的提取率见表 2,由表 2可见红毛七酸水浸提
过程 ,盐酸浓度为主要影响因素 ,对塔斯品碱的提取
率影响显著 (F >F0. 05 =5.140)。结果显示 ,酸水浸
提的最佳工艺为 7倍量 , 1%盐酸 ,浸提 3次。
　表 1 　正文实验设计的因素和水平
因素 水平
盐酸浓度(%) 0.0625 0. 25 1
酸水倍量(mL /g) 6 7 8
提取次数(每次 24h) 2 3 4
　表 2 　实验方案及提取率
实验组 盐酸浓度(%) 酸水倍量(m l /g) 提取次数(每次 24h) 提取率(%)
1 0.0625 6 2 0. 155
2 0.0625 7 3 0. 179
3 0.0625 8 4 0. 183
4 0.25 6 3 0. 226
5 0.25 7 4 0. 240
6 0.25 8 2 0. 192
7 1 6 4 0. 237
8 1 7 2 0. 252
9 1 8 3 0. 277
均值 1 0.172 0.206 0. 200
均值 2 0.219 0.224 0. 227
均值 3 0.255 0.217 0. 220
极差 0.083 0.018 0. 027
2.3　阳离子交换树脂分离红毛七总生物碱的工艺
优化
2.3.1　树脂预处理:用蒸馏水浸泡新购的树脂 ,使
其充分膨胀后 ,加入 4倍量 2 mo l /L盐酸搅拌 2 h,
除去酸后水洗至中性 ,加入 4倍量的 2 mo l /L氢氧
化钠溶液搅拌 2 h,除去碱后水洗至中性 ,再加入 4
倍量 2 mo l /L盐酸搅拌 2 h,除去酸后水洗至中性。
2.3.2 　树脂的筛选:选用 5种树脂 (001 ×7、
221 中药材 Jou rna l of Ch ineseM edicina lM ate ria ls　　第 30卷第 2期 2007年 2月
LSD001、D001、D113、D111)测定静态吸附量以筛选
树脂。准确称取经预处理好的湿树脂 1 g,装入 250
m l的磨口三角瓶中 ,精密加入 100m l经浸提的酸水
液 ,盖紧瓶塞在 25℃下的恒温水浴振荡器上振摇 24
h。充分吸附后 ,滤过 ,测定吸附液中塔斯品碱的浓
度 ,计算吸附量(见表 3)。从表 3可见 ,强酸性大孔
型阳离子交换树脂 LSD001对塔斯品碱的吸附容量
最大 ,所以选择 LSD001作为分离用树脂。
　表 3 　不同树脂对塔斯品碱的静态吸附量
树脂型号 特征 吸附容量(m g /g)
001×7 强酸性凝胶型 3.93
LSD001 强酸性大孔型 8.36
D002 强酸性大孔型 7.38
D113 弱酸性大孔型 3.75
D111 弱酸性大孔型 2.25
2.3.3　不同吸附流速对吸附效果的影响:取经预
处理好的湿 LSD001树脂 10 g,装入色谱柱中 (柱高
柱径比大于 3),分别以 1, 2, 3, 4, 5m l /m in吸附流速
加入经浸提的酸水液 ,以改良碘化铋钾试剂检测柱
下端流出液生物碱反应为阳性时 ,停止上样 ,计算流
过的酸水量 (见表 4)。从表 4可见 ,随着吸附流速
的加快 ,吸附体积越小 ,生物碱的泄漏越严重 ,但流
速过慢则会延长生产周期 ,提高成本 ,流速 1 ～ 2m l /
m in时吸附体积差别不大 。综合考虑 ,选择吸附流
速 2 m l /m in为宜 。
　表 4 　不同吸附流速对吸附效果的影响
流速(m l /m in) 吸附体积(m l)
1 352
2 333
3 272
4 241
5 211
2.3.4　洗脱溶剂的选择:将静态吸附后的 LSD001
树脂进行静态洗脱 ,测定静态洗脱量以选择洗脱溶
剂 。取经预处理好的湿树脂 1 g,装入 250 m l的磨
口三角瓶中 ,精密加入 100 m l经浸提的酸水液 ,盖
紧瓶塞在 25℃下的恒温水浴振荡器上振摇 24 h。
充分吸附后 ,过滤 ,分别加入氨水浓度为 2%, 4%,
6%, 8%和 10%的乙醇溶液 100 m l,在 25℃下的恒
温水浴振荡器上振摇 12 h ,滤过 ,测定洗脱液中塔斯
品碱的浓度 ,计算洗脱率(见表 5)。从表 5可见 ,除
2%氨水乙醇的洗脱率略低外 , 4% ～ 10%氨水乙醇
的洗脱率相近 ,综合考虑试剂消耗等因素 ,选择 4%
氨水乙醇作为洗脱溶剂。
　表 5 　不同溶剂的洗脱作用比较
洗脱溶剂 洗脱率(%)
2%氨水乙醇 88. 5
4%氨水乙醇 94. 3
6%氨水乙醇 96. 2
8%氨水乙醇 94. 6
10%氨水乙醇 95. 1
2.3.5 　动态洗脱曲线的考察:取经预处理好的湿
LSD001树脂 10 g,装入色谱柱中 (柱高柱径比大于
3),以 2m l /m in吸附流速加入经浸提的酸水液 ,以
改良碘化铋钾试剂检测柱下端流出液生物碱反应为
阳性时 ,停止上样 ,水洗至流出液中性 ,以每小时 1
倍柱体积用 2%, 4%, 10%氨水乙醇洗脱 ,每 10 m l
收集为一份 ,测定每份中塔斯品碱的浓度 ,以洗脱体
积是树脂体积的倍数为横坐标 ,以塔斯品碱洗脱百
分含量为纵坐标绘制动态洗脱曲线(见图 1)。从图
1可见 , 12倍柱体积 2%氨水乙醇的洗脱率较低 ,
4%和 10%氨水乙醇在 10倍柱体积时的洗脱率均
为 81.1%,综合考虑试剂消耗和生产成本因素 ,选
择 10倍柱体积 4%氨水乙醇进行洗脱 。
图 1　动态洗脱曲线图
2.3.6 　工艺的重复实验和产物的含量测定:取
500 g红毛七药材 , 7倍量 , 1%盐酸 ,浸提 3次 ,每次
24 h,滤过 ,合并酸水液以 2m l /m in流速上 LSD001
阳离子交换树脂柱 ,至改良碘化铋钾试剂检测流出
液生物碱反应为阳性时停止 ,水洗至中性 , 10倍柱
体积 4%氨水乙醇洗树脂柱 ,合并洗脱液回收溶剂 ,
干燥 ,得红毛七总生物碱 6.76 g,红毛七总生物碱得
率为 1.35%,按 2.1项测定总生物碱中塔斯品碱含
量为 6.80%。
3　讨论
红毛七中所含生物碱以塔斯品碱为主〔1〕 ,塔斯
品碱属于叔胺生物碱 ,极性较小 ,流动相中加入十二
烷基磺酸钠 ,采用反相离子对色谱进行分析 ,可以防
止拖尾 ,峰形好 。经反复实验 ,十二烷基磺酸钠的浓
度为 20mmo l /L, pH值在 2.5 ～ 3之间时 ,可得到适
222 中药材 Jou rna l of Ch ineseM edicina lM ate ria ls　　第 30卷第 2期 2007年 2月
当的保留时间 ,出峰位置无杂质干扰。塔斯品碱的
紫外光谱显示 ,其最大吸收在 245 nm ,摩尔吸收系
数为 25800〔7〕 ,检测波长选择在 245 nm使得分析方
法有较高的灵敏度。
红毛七中所含生物碱的极性与碱性差异较大 ,
使用乙醇提取 ,碱化后氯仿萃取的方法制备 ,不能将
所含生物碱全部提取 ,另外此法也不适于大规模制
备 。红毛七中主要生物碱成分为塔斯品碱 ,本文中
以塔斯品碱为考察指标 ,采用盐酸酸水浸提 ,酸水液
pH为 3 ～ 4,使生物碱呈离子状态 ,直接上阳离子交
换树脂柱分离 ,得到的总生物碱含有全部生物碱 。
选择洗脱溶剂时 ,使用氨水乙醇可使生物碱呈分子
态而解吸 ,同时有利于下一步浓缩。
强酸性大孔型阳离子交换树脂具有吸附量大 、
选择性好 、易解吸 、易再生 、效率高等优点 ,国内外研
究者已广泛将其用于生物碱的提取 ,取得了显著的
效果〔9 ～ 12〕。本实验利用强酸性大孔型阳离子交换
树脂分离红毛七中总生物碱 ,工艺较简单 ,成本低 ,
可用于大规模工业生产。
参 考 文 献
[ 1] 宋立人 ,洪恂 , 丁绪亮 ,等 .现代中药学大辞典 .第一版
(上). 北京:人民卫生出版社 , 2001:934.
[ 2] 中国科学院植物研究所 . 高等植物图鉴(第一册 ). 北
京:科学技术出版社 , 1985:763.
[ 3] 国家医药管理局中草药情报中心站 . 植物药有效成分
手册 . 北京:人民卫生出版社 , 1986:678.
[ 4] 张志英 , 李继瓒 . 陕西种子植物名录 . 西安:陕西旅游
出版社 , 2000:39.
[ 5] 焦淑萍 , 于铁力 .类叶牡丹根茎水煎剂抗炎作用研究 .
吉林医学院学报 , 1997, 17(1):8-9.
[ 6] 姜虹 , 焦淑萍 .类叶牡丹根茎水煎剂镇痛作用研究 .吉
林医学院学报 , 1997, 17(2):8-9.
[ 7] Pe rdue G P, B lom ste r R N, B lake D A, et a l. Sou th A-
m erican plantsⅡ . Taspine iso la tion and anti-inflamm atory
activ ity. J. Pham. Sci, 1979, 6(1):124-126.
[ 8] Esrn Kü pe li, Mübe rra Kosar. A com para tive study on the
anti-inflamm a to ry, an tinociceptive and antipy re tic effects of
isoqu inoline alkaloids from the roo ts o f Turkish Berberis
spec ie s. L ife Sciences, 2002, 72(10):645-657.
[ 9] 杨志钧 ,殷瑜 , 洪文荣 ,等 .大孔阳离子交换树脂对井冈
霉素的吸附研究 . 离子交换与吸附 , 2005, 21(6):551-
556.
[ 10] 霍务贞 ,李苑新 , 姜红宇 ,等 . 阳离子交换树脂纯化喘
平复方总生物碱的工艺研究 . 中药新药与临床药理 ,
2005, 16(6):446-449.
[ 11] 侯世祥 , 田恒康 ,等 .大孔吸附树脂在中药复方分离纯
化工艺中的应用 . 中药新药与临床药理 , 2000, 11
(3):131-133.
[ 12] 王英豪 . 大孔吸附树脂分离提取中药碱类成分的探
析 . 福建中医学院学报 , 2006, 16(2):51-52.
(2006 - 10 -31收稿)
作者简介:李智(1982-),男 ,山东人 ,硕士 ,研究方向:中药现代化。*通讯作者:韩静 ,博士 ,硕士导师 , Tel:13019304500, E-m ail:H J-8080@ 163. com。
甘草浸膏吸湿性的研究
李　智 1 ,韩　静 1* ,李成顺2 ,蔡　薇 1 ,岑　琴 1
(1.沈阳药科大学制药工程学院 ,辽宁沈阳 110016;2.辽河油田妇婴医院 ,辽宁盘锦 124010)
　　摘要　目的:对甘草浸膏的吸湿性进行研究 , 筛选出最优的辅料配方 , 并测得最佳处方的临界相对湿度 , 为工
业化生产提供合理的相对湿度环境。方法:采用在 25℃, 不同的相对湿度下选用多种辅料 , 比较其吸湿性。 结果:
甘草浸膏粉与乳糖 、微晶纤维素配伍(1∶0. 5∶0.5)为最合适处方 ,并测其临界相对湿度为 60%。结论:利用以上结
果可以解决工业生产中药浸膏易吸湿结块等问题。
关键词　吸湿性;甘草;临界相对湿度
中图分类号:R286.02　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)02-0223-03
Study ofHydroscopic ity ofGlycyrrhiza ura lensis F isch
LI Zhi1 , HAN Jing1 , L I Cheng-shun2 , CA IW e i1 , CEN Q in1
(1.Schoo l o f Pha rmaceutica l Eng ineering, Shenyang Pha rm aceutica l Un ive rsity, Shenyang 110016, China;2.H ospita l of w om an and
Infant, L iaohe o il fie ld, Panjin 124010, Ch ina)
Abstrac t　Objective:To study hyd roscopicity ofGlycyrrhiza uralensis F isch and screen the best compound ing o f adjuvant, and
223 中药材 Jou rna l of Ch ineseM edicina lM ate ria ls　　第 30卷第 2期 2007年 2月