全 文 ：第 7卷第 3 期
1 9 9 0年 7 月 甘肃中医学院学报G a n s t : C o l l e g e T . C . M .
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1 9 9 0
M T
`
r 检测墓头回
对自血病细胞毒作用的实验研究
兰州医学院血液病研究所 孙万里 姚小键
卯新 民 姚兰芳 魏 虎来 赵怀顺
兰 州医学院附属一院内科 王艺彬
内容提要 : 本文报道中药墓头 回 同三 浏 白血 病 ( M : 、 C M I 、 C M L一 A ) 病人外周 血单个
刁妙时胞体外培养48 小时 , 而后 加入 M江、 T结养 4 小 时 , 进行比 色分析 。 结果表明墓头回 对急
性 白血病细胞毒作用非常显著 , 对慢性拉 细胞 白血病细 胞作 用不明显 , 同时证明 M ` f ` r 法 是
一种快速 、 教感 、 简单 、 适用的浏 定加 胞代砚于的方 法 。
, 关健词 : M T T 、 白血病 、 墓头 回
墓头回系败酱科植物 , 有糙叶败酱及异
叶败酱 , 其根或全草有收敛 、 .止血 、 生肌 、
消肿之功 效 ( ` ) . 主 治 白 血 病 ( “ ) 、 宫 颈
炎 ( . ) 、 血小板减少性紫座 ( ` )等 。 近年来研
究证明墓头回有杀伤肿瘤细胞作用 ( “ ’ “ ) 。为
进一步探讨其抗肿瘤机制 , 我们研究了墓头
回对白血病病人外周血单个核细胞的杀伤作
用 , 并采用快速 、 简便 、 敏感的 M T ` r法进
行检测 .
材料和方法
一 、 芍物及配制 : 墓头 回水提取物由本
室制备 , 浓度为 2 0 m g / m l , 药源 来 源 于
甘肃庆阳 。 用 R P M 工一 1 6挂。配 制 成 、 。 m g /
m l
、
s m g / m l
、
2
.
s m g / m l
、
1
.
Zm : /
: : 、 1
、
0
.
6 m g / m l
。
M T T 溶解于 P B S中 , s m g / m l ,
过滤除菌 , 避光 4 ℃保存用 。
二 、 细胞 : 临床按 F A B标准诊断确诊的三
例病人 , 分别是急性粒细胞自血病 ( M : ) 、
慢性粒细胞 白血病急 粒 变 ( C M L一 A ) 、
慢性粒细胞 白血病 。 在未化疗前 , 常规静脉
采血 , 肝素抗凝 ( 5 0 u / 1叭 ) , 经淋 巴细胞
分层 液分离出单个核细胞 , 其中自血病细胞
占厂;〕呢以上 , 用含 40 肠胎 牛血清的 R P M I一
1 . 鑫。稀释成 2 火 1 0 “ / 。 l备用 .
三 、 细胞培养 : 经灭菌的切孔板 ( 天津
产 ) , 加入细胞悬液及不同浓度药物各 1 0 0 0 1 ,
使其每孔为 Z x : 。 。 夕田胞 , 墓头回浓度分别为
s m g / m l
、
2
.
s m g / m i
、
1
.
2 5 。 : g / m l
、
0
.
6
二 : / m l 、 0 . 3 m g / m l . 每组 4 孔 , 对照孔加
入等量的 R P M 二一 1 c 40 ,不同浓度的药物均设
不加绷胞对照孔 。置 3了℃ 、 端C O : 培养箱中培
养 : 8小时 , 每孔用移液器吸出 1 0 0八培养液 ,
加 入 1 o m 1M ` r T磷酸缓冲液 , 继续培养 4小时 。
四 、 细胞毒检测 ; 培养结束 后加 入 10
时盐酸 异丙醇 ( I N 盐酸 : 异丙 醇 为 l :
艺4 ) 终止反应口 “ ) 。 用移液器吹打 使 其蓝
紫色沉淀物充分溶解 , 以完全堵养液加 M T T
孔校正零点 , 用 D G 一 3 。之2型酶联免疫 检 测
仪测定 5了。 n m 和沉撇 m 波长的光密度值 ( O D
值 ) , 取 4 孔 O D 值均数减去同浓度药 物 对
照孔O D值均数 。
五 、 数据处理 : 抑制率计算公式为 :
` 了万 ` 片 `吻 ., ~ ~ ~ , r ` 辛 r 了护号 于 咭 , ` ` ,. . . . ` . . , . . 目. . .口 ” , ` . . . .
抑制率 =
处理孔二园浓度药物对照孔 o D 值
·
3 5
·
一一 一 口一 .一一一一一州叫刻l司划」(一 对照孔 O D 值 ǎ咨月à军分常X 1 0 0肠其余数据均采用方差分析及直线回归统
计处理 ,
结 果
一 、 墓头 回对 白血病细胞毒性 : 墓头 回
对 M : 、 c M 工一 A 急性白血病外周血单个核
细胞有明显的杀伤作用 , 其 O D值与对 照组
有非常 显著性差异 ( 见表 1 ) , P值 < 0 . 0 1 ,
C M J
J 无明显作用 , 与对照组无显著差异 , P
值 > 0 . 关 。 M : 、 c M L一人 、 C M L 分别在
墓头 回。 . 3 m 匕/ m l 、 o . 6 m g / m l 、 1 . 2 5 m g
/ m l以 仁时有细胞毒作用 。 M : 与 C M L 一 A
O D值有显著性差异 , P 值 < 0 . 。 : , 两 者 与
C M J
J有非常显著性差异 , P 位 < 0 . 0 1 。 因此 ,
三例自血病外周血单个演细胞对墓头 回敏感
性依次为 M : 、 C M 工一A 和 C M 工。
表 1 三匆白血病缨胞对墓头回反应的 O D值
_
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一丫一 ` 广厂 ’户一/。 少 O、 。 6 2 。 5 0 , 。 0 0
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药物
浓度
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O D值 ( X 一卜 S D )
C M L M
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0
.
3 9 土 0 . 1 2 0 . 3 9 上 0 . 12 0 . :飞9 土 0 . 1 2
二 、 墓 头回抑制 白血病细胞 代 射M T r
与O D 值之 间的关系 : 图 1 可见 , 随着 墓 头
回剂量的增加 , 其反映 M T T代谢率的。 D 值
逐渐减少 , 抑制率明显增加 , M : 、 C M 工_ 一人
在 s m g / m l时 , 抑制率接近 10 肠 , 而 C M L
仅有 5 4 肠 。 其药物刘量与O D 值呈直 线回归
关系 ( 图 2 ) , 相关系数 分 别 为一 0 . 9 、
一。 . 91 、 一。 . 听 , 均有非常显著性差异 . 其
M
: 、
C M L A抑制率明显优于 C M L 。
讨 论
墓头回水提取物抗癌作用 已有 不 少 报
道 、 “ ’ “ , 但未见对白血病原代细胞杀 伤作
用的报道 , 我们实验结果表明墓头回对急性
粒细胞 白血病细胞有明显抑制作用 , 另 已有
报道墓头回具有促进正常细胞增殖 作 用 、 “ 、
及促进主动免疫功能 ” ) 。 因此 , 临 床上 可
运用此药物与其他药物联合治疗自血病 , 我
们的实验结果提示了这种可能性 .
M T T 〔 ( 3一 〔4 , 5一 ` i m o t h y l t h i a -
: 。 1一 z一 y l ) 〕 一 2 , 5 一 d 1 p h e n y l 一
t e t r a z o l i “ m b r o m i d e )为一淡黄色的哇氮
盐 , 活细胞特别是增殖的细胞线粒体内脱氢
酶作用 , 产生蓝紫色的甲月替沉淀沉积于细胞
内或周围 , 而且形成的量与细胞的增殖程度
呈比例关系 。 M T T 比色法和 3 H 一 T d : 掺入
法在测定 细胞增殖时反映的内容不 同 , 前者
反映细胞增殖时能量代谢 , 后者反映细胞增
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心气虚证的血流动力学研究
蓝文芳
内容提要 : 本文观察了 2 3例中医辨证为
· 合气虚证患者的血流动力学和血液流变学诸
项参数 , 结果表明参数与健康人比较有显著
变化 , 这证明心气虚证具有相同的病理生理
墓础 ; 这些参数的改变既能做为临床辨证的
参考标准 , 又可做为指导治疗和判断疗效的
科学依据 。
辨证论治是中医学指导临床诊治疾病的
刘家骏 曹玉山
基本法则 , 辨证则是决定治疗的前 提 和 依
据 ; 为探索中医辨证的科学依据 , 我们对 2 3
例辨证为心气虚的患者的血流动力学和血液
流变学诸项参数进行了测试 , 研究了其变化
规律 , 现将结果报告如下 :
一 、 病 例选择
根据一九八六年五月郑州全国中西结合
与老年病研究会所拟定的中医虚证辨证参考
殖时的 D N A合成 . 白血病原代细胞在 体 外
培养 , 在不加特殊刺激物情况下 , 基本上处
于非增殖状态 , 代谢也较低 , 因 其 无 D N A
合成则不适用 3 H 一 T dr 掺入法 ,而 M T T法可
基本上反映出细胞活力及代谢 状 况 ( 7 ’ 吕 。
可以选择出肿瘤细胞对不 同药物的敏感性以
指导临床用药 ( ` 。 ) , 以及进行中 、 西药体外对
细胞杀伤作用和代谢的影响的研究 , 因其不
使用同位素及特殊设备且又避免了细胞活力
计数的主观因素影响 , 所以是一种快速 、 简
便 、 经济 、 准确的方法 。 为基层单位开展这
项工作提供了一种简单适用的侧定方法 。
参考文献
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U s e o f t h e
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