全 文 ：第３４卷　第４期　　　　　　　　　　　　　　　陕西科技大学学报　　　　　　　　　　　Ｖｏｌ．３４Ｎｏ．４
　２０１６年８月 　　　　　　　　　　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　　　　　　Ａｕｇ．２０１６
＊　文章编号：１０００－５８１１（２０１６）０４－０１４５－０５
猫儿屎内生真菌ＤＳ５８次生代谢产物
化学成分的分离鉴定及活性研究
杨秀芳，张影珍，马养民＊
（陕西科技大学 化学与化工学院 教育部轻化工助剂化学与技术重点实验室，陕西 西安　７１００２１）
摘　要：从猫儿屎内生真菌黑曲霉ＤＳ５８的发酵物中分离出６个化合物，通过化合物的理化性
质、波谱数据鉴定出这６个化合物分别为４－甲氧基－６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮、ｃａｍｐｙｒｏｎｅ
Ａ、３－羟基－３甲氧基羰基戊二酸、４－乙酰氨基丁酸、ｍａｌｆｏｒｍｉｎ　Ａ１ 和ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ，其中４－甲
氧基－６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮是首次被发现的新化合物，３－羟基－３甲氧基羰基戊二酸是
首次从真菌发酵物中分离得到．并对分离获得的化合物的抑菌活性、抗氧化活性进行测试，结
果表明：２，５－二羟基苯乙酸及其衍生物具有广普的抑菌作用和良好的抗氧化活性，３－羟基－３甲
氧基羰基戊二酸对番茄灰病菌和白菜黑斑病菌的 ＭＩＣ为３１．５μｇ／ｍＬ．
关键词：猫儿屎；内生真菌；代谢产物；化学成分；生物活性
中图分类号：ＴＱ０４１＋．７　　　　文献标志码：Ａ
Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｅｃｏｎｄａｒｙ
ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｆｒｏｍ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ＤＳ５８ｏｆ　Ｄｅｃａｉｓｎｅａ　ｆａｒｇｅｓｉ
ＹＡＮＧ　Ｘｉｕ－ｆａｎｇ，ＺＨＡＮＧ　Ｙｉｎｇ－ｚｈｅｎ，ＭＡ　Ｙａｎｇ－ｍｉｎ＊
（Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ａｕｘｉｌｉａｒｙ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　＆ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｓｈａａｎｘｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　＆Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉ′ａｎ　７１００２１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｉｘ　ｋｎｏｗｎ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｈａｄ　ｂｅｅｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ．ｎｉｇｅｒ　ＤＳ５８ｏｆ　Ｄｅ－
ｃａｉｓｎｅａｆａｒｇｅｓｉｉ．Ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒａ　ａ－
ｎａｌｙｓｉｓ．Ｓｉｘ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ａｎｄ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　４－ｍｅｔｈｏｘｙ－６－（３－ｍｅｔｈｙｌ－ｂｕｔｙｒｙｌ）－
ｐｒａｎ－２－ｏｎｅ，ｃａｍｐｙｒｏｎｅ　Ａ，３－ｈｙｄｒｏｘｙ－３－（ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｐｅｎｔａｎｅｄｉｏｉｃ　ａｃｉｄ，４－ａｃｅｔａｍｉｄｏｂｕ－
ｔａｎｏｉｃ　ａｃｉｄ，ｍａｌｆｏｒｍｉｎ　Ａ１ａｎｄ　ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ．４－ｍｅｔｈｏｘｙ－６－（３－ｍｅｔｈｙｌ－ｂｕｔｙｒｙｌ）－ｐｒａｎ－２－ｏｎｅ　ｉｓ
ａ　ｎｅｗ　ｏｎｅ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｎａｔｕｒａｌ．３－ｈｙｄｒｏｘｙ－３－（ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）ｐｅｎｔａｎｅｄｉｏ－
ｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｕｎｇｉ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ′ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ
ａｃｔｉｖｉｔｙ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｔｅｓｔ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　２，５－ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ　ｂｅｎｚｅｎｅａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｉｔｓ
ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ａｒｅ　ｗｉｄｅｌｙ　ｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｓｉｓ　ａｎｄ　ｇｏｏｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ，３－ｈｙｄｒｏｘｙ－３－（ｍｅｔｈｏｘｙｃａｒ－
ｂｏｎｙｌ）ｐｅｎｔａｎｅｄｉｏｉｃ　ａｃｉｄ　ｈａｓ　ａｎ　ｅｆｆｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎｈｉｂｉｔ　ｉｎ　ｐｌａｎｔ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｆｕｎｇｉ．Ｔｈｅ　ＭＩＣ　ｏｆ　Ｂｏｔ－
ｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ　ａｎｄ　Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ　ｂｒａｓｓｉｃａｅ（Ｂｅｒｋ．）ｉｓ　３１．５μｇ／ｍＬ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｅｃａｉｓｎｅａ　ｆａｒｇｅｓｉｉ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ；ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ；ｂｉｏａｃ－
ｔｉｖｉｔｉｅｓ
＊ 收稿日期：２０１６－０２－１１
基金项目：陕西省科技厅自然科学基础研究计划项目（２０１４ＪＺ００３）
作者简介：杨秀芳（１９６３－），女，陕西铜川人，教授，研究方向：天然产物的提取及开发
通讯作者：马养民（１９６３－），男，陕西乾县人，教授，博士生导师，研究方向：天然产物，ｍａｙａｎｇｍｉｎ＠ｓｕｓｔ．ｅｄｕ．ｃｎ
陕西科技大学学报 第３４卷
０　引言
猫儿 屎 （Ｄｅｃａｉｓｎｅａ　ｆａｒｇｅｓｉｉ），系 木 通 科
（Ｌａｒｄｉｙａ　ｂａｌａｅｅａｅ），属落叶灌木［１］．猫儿屎的浆果
形如缩小的香蕉，故又称野香蕉，成熟后颜色由
绿变成蓝色或蓝紫色，是亟待开发的野生植物资源
之一，主要分布于甘肃、安徽、湖北、湖南、浙江、江
西及西南等省区，陕西秦巴山区猫儿屎野生资源也
极其丰富［２］．其味辛、甘、性平，根及果实甘、凉［３］，
据记载有解毒、杀菌、利尿、催生、镇痛等功效，主治
肺结核、咳嗽、风湿性关节痛、阴痒和疝气等症［４］．
目前对猫儿屎的研究仅限于该植物的化学成
分，孔杰［５］从猫儿屎植物的茎中分离并鉴定了１０
个皂苷化合物．对猫儿屎内生真菌的研究仅在本课
题组开展，王鹏飞等［６］从秦岭太白山猫儿屎的根、
茎、叶中分离到内生真菌９１株，通过形态学鉴定这
９１株内生真菌分属于６目７科１５属，其中曲霉属
为优势种属，通过活性测试，得到４株（ＤＳ３７、
ＤＳ５８、ＤＬ０６和ＤＬ１４）强活性菌株．本研究以ＤＳ５８
为目标菌株，对ＤＳ５８菌株进行ＩＴＳ序列测定，最
终将 ＤＳ５８菌株鉴定为黑曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ．ｎｉ－
ｇｅｒ），Ｇｅｎｂａｎｋ登录号为ＫＪ６２３７００［７］．本文在前报
道［７］的基础上，对猫儿屎内生真菌ＤＳ５８次生代谢
产物的化学成分进行了再研究，又分出６个化合
物，并对其结构进行了鉴定．另外，对猫儿屎内生真
菌ＤＳ５８分离获得的１４个化合物的活性进行了分
析测试．其研究结果将为猫儿屎内生真菌资源的综
合开发利用提供理论依据．
１　材料与方法
１．１　菌株
菌株ＤＳ５８分离自秦岭太白山猫儿屎植物的
茎部，经纯化培养后以ＰＤＡ斜面培养基４℃保存；
４株活性测试细菌绿脓杆菌、乳链球菌、金黄色葡
萄球菌、大肠杆菌；４株植物病原真菌番茄灰霉病
菌、白菜黑斑病菌、烟草霜霉病菌、苹果树腐烂病
菌．以上菌株均保存于课题组实验室．
１．２　仪器、培养基和试剂
Ｂｒｕｋｅｒ　ａｖａｎｃｅ　ＩＩＩ－４００ＭＨｚ超导核磁共振仪
（瑞士布鲁克公司）；ＥＶ３１１型旋转薄膜蒸发仪（北
京莱伯特科仪器有限公司）；柱层析硅胶（２００～
３００目）和薄层层析硅胶Ｇ（青岛海洋化工有限公
司）；ＸＴ５型显微熔点测定仪（北京市科仪电光仪
器厂）；ＹＸ－２８０３型手提式蒸汽压力灭菌锅（江阴
滨江医疗设备有限公司）；ＺＨＪＨ－Ｃ１１０９８型超净工
作台（上海智城分析仪器制造有限公司）；ＨＦ２０００
型酶标仪（北京华安麦科生物技术有限公司）；
ｃｏｓｔａｒ９６孔酶标板（３５９０）（美国Ｃｏｒｎｉｎｇ　Ｃｏｓｔａｒ公
司）．真菌培养基（马玲薯浸出液２００ｇ，琼脂２０ｇ，
葡萄糖２０ｇ，蒸馏水１　０００ｍＬ，ｐＨ　７．０）；细菌培养
基（牛肉膏０．５ｇ，琼脂２．０ｇ，蛋白胨１．０ｇ，ＮａＣｌ
０．５ｇ，水１００ｍＬ，ｐＨ　７．０～７．２，１２１℃灭菌２０
ｍｉｎ）．试剂均为国产分析纯．
１．３　代谢产物的提取分离、鉴定
将风干的固体发酵物用乙酸乙酯萃取６次，减
压浓缩得２３０．２４ｇ．采用硅胶柱色谱分离，以石油
醚∶乙酸乙酯梯度洗脱，得到６个组分（Ｆｒ．１－Ｆｒ．
６），其中从Ｆｒ．１、Ｆｒ．２中依次得到化合物１～８，从
Ｆｒ．３中得到化合物９、１０，从Ｆｒ．４中得到化合物
１１，从Ｆｒ．５中得到化合物１２，从Ｆｒ．６中得到化合
物１３和１４．所有化合物经１　Ｈ－ＮＭＲ、１３　Ｃ－ＮＭＲ和
ＥＳＩ－ＭＳ分析确定结构．
１．４　抑菌活性测定
分别选取绿脓杆菌、乳链球菌、金黄色葡萄球
菌、大肠杆菌、苹果腐烂病菌（Ｃ．ｍ）、烟草赤星病菌
（Ｐ．ａ）、番茄灰霉病菌（Ｂ．ｃ）、白菜黑斑病菌（Ａ．ｂ）
作为测试菌，采用最小抑菌浓度法对猫儿屎内生真
菌ＤＳ５８次生代谢产物分离得到的化合物的抑菌
活性进行测试，具体操作方法见参考文献［８］．
１．５　抗氧化活性测定
参照文献［９］，采用９６孔板，以Ｖｃ为对照品，
对分离得到的具有酚羟基结构的化合物进行清除
ＤＰＰＨ的抗氧化测试．重复实验３次，计算样品对
ＤＰＰＨ自由基清除率．
２　结果与分析
２．１　菌株ＤＳ５８代谢产物
从菌株ＤＳ５８固体发酵物中共分离得到１４个
化合物，其中化合物１至８的结构解析已作报道，
见参考文献［７］，下面就另６个化合物结构解析如
下．
化合物９：白色针状晶体，易溶于氯仿．ｍｐ．
１０１．８℃～１０２．４℃，分子式Ｃ１１Ｈ１４Ｏ４，ＨＲＥＳＩ－
ＭＳ　ｍ／ｚ，２３３．０７９　２［Ｍ ＋ Ｎａ］＋ （计 算 值 为
２３３．０７９　０）．１　Ｈ－ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ， ＣＤＣｌ３ ）δ
（ｐｐｍ）：６．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，Ｈ－５），５．７３（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，Ｈ－３），３．８７（３Ｈ，ｓ，４－ＯＣＨ３），２．８０
·６４１·
第４期 杨秀芳等：猫儿屎内生真菌ＤＳ５８次生代谢产物化学成分的分离鉴定及活性研究
（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ－８），２．２２～２．２８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
９），０．９１（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６４Ｈｚ，Ｈ－１０，１１）；１Ｃ－ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１９３．４７（Ｃ－７），１６９．９０
（Ｃ－４），１６２．４２（Ｃ－２），１５４．８９（Ｃ－６），１０３．７２（Ｃ－５），
９３．５１（Ｃ－３），５６．３９（４－ＯＣＨ３），４６．８０（Ｃ－８），２４．２７
（Ｃ－９），２２．５２（Ｃ－１０，Ｃ－１１）．对比相关文献［１０］，结
合ＨＭＢＣ、ＤＥＰＴ－１３５确定化合物９为４－甲氧基－
６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮，结构式如图１所示．
图１　化合物９的结构
化合物１０：白色晶体（甲醇），ｍｐ．１４７℃～１４８
℃．１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３），δ（ｐｐｍ）：８．３２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，－ＮＨ），６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８
Ｈｚ，Ｈ－５），５．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ，Ｈ－３），４．３９
（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ－７），１．７９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－８），
３．８０（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３Ｏ－４），１．４４～１．２２（２Ｈ，ｍ，Ｈ－
９），１．８７（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２），０．８３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，
Ｈ－１０），０．７８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ－１１）；１３　Ｃ－ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ（ｐｐｍ）：１７０．６９（Ｃ－４），１６９．１９
（Ｃ－１′），１６３．８２（Ｃ－２），１６３．２４（Ｃ－６），９９．９９（Ｃ－５），
８７．８２（Ｃ－３），５６．３７（４－ＯＣＨ３），５４．９１（Ｃ－７），２５．９４
（Ｃ－８），２４．５３（Ｃ－９），２２．３５（Ｃ－２′），１５．４１（Ｃ－１１），
１０．７８（Ｃ－１０），与文献［１１］对比，结合ＤＥＰＴ－１３５确
定化合物１０为ｃａｍｐｙｒｏｎｅ　Ａ，结构式如图２所示．
图２　化合物１０的结构
化合物１１：白色针状结晶（甲醇），ｍｐ．１６３℃
～１６５ ℃．１　Ｈ－ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ
（ｐｐｍ）：１２．２９（２Ｈ，ｓ，－ＣＯＯＨ），５．４８（１Ｈ，ｓ，－
ＯＨ），３．６３（３Ｈ，ｓ，－ＯＣＨ３），２．６４～２．８２（４Ｈ，
ＡＢ峰，Ｊ＝１５．３ Ｈｚ，－ＣＨ２）；１３　Ｃ－８ＮＭＲ（１００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：７３．３７（－ＣＯＯＣＨ３），
１７１．０５（－ＣＯＯＨ），７２．８７（Ｃ－３），５１．９４（－
ＯＣＨ３），４２．９２（－ＣＨ２）．以上数据与文献［１２］所
报道的基本一致，确定化合物１１为３－羟基－３甲氧
基羰基戊二酸，结构式如图３所示．
图３　化合物１１的结构
化合物１２：无色晶体（甲醇），ｍｐ：１２１ ℃～
１２３℃．１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：
１２．０５（１Ｈ，ｓ，－ＣＯＯＨ），７．８２（１Ｈ，ｓ，－ＮＨ），
３．００～３．０５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－４），２．１９～２．２３（２Ｈ，ｔ，Ｊ
＝７．２Ｈｚ，Ｈ－２），１．５７～１．６４（２Ｈ，ｍ，Ｈ－３），１．７９
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－６）；１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ
（ｐｐｍ）：１７４．１９（－ＣＯＯＨ），１６９．０８（Ｃ－５），３７．８５
（Ｃ－４），３１．０２（Ｃ－２），２４．５５（Ｃ－３），２２．５４（Ｃ－６）．与
文献［１３］的数据基本一致，结合ＤＥＰＴ－１３５，确定
化合物１２为４－乙酰氨基丁酸，结构式如图４所示．
图４　化合物１２的结构
化合物１３：白色絮状物，难溶于甲醇．ＨＲＥＳＩ－
ＭＳｍ／ｚ，５５２．２２８　６ ［Ｍ ＋ Ｎａ］＋ （计 算 值 为
５５２．２２９　０）．１　Ｈ　ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ
（ｐｐｍ）：８．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８４Ｈｚ，ＮＨ－１８），８．６３
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７６Ｈｚ，ＮＨ－１２），８．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．７６Ｈｚ，ＮＨ－１），７．３９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１２Ｈｚ，ＮＨ－
６），７．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，ＮＨ－２１），４．７２（１Ｈ，
ｄｄｄ，Ｊ＝１５．２８，１０．９２，４．５６Ｈｚ，Ｈ－２１），４．４７（１Ｈ，
ｄｄｄ，Ｊ＝１５．２，９．２，６．４Ｈｚ，Ｈ－６），３．９３（１Ｈ，ｓ，Ｈ－
１），３．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５２，６．３６Ｈｚ，Ｈ－１２），
３．１９（２Ｈ，ｍ，１９－ａ），３．５２（１Ｈ，１９－ｂ），３．１９（２Ｈ，ｍ，
２２－ａ），３．２５（１Ｈ，２２－ｂ），２．０５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），１．５６
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－８），１．３２（１Ｈ，ｍ，７－ａ），１．４２（１Ｈ，ｍ，７－
ｂ），１．１４（１Ｈ，ｍ，１４－ａ），１．５３（１Ｈ，ｍ，１４－ｂ），０．８９
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，ＣＨ３－９），０．８７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６
Ｈｚ，ＣＨ３－１０），０．８２～０．８４（９Ｈ，叠加的ｄ，Ｊ＝６．８４
Ｈｚ，ＣＨ３－３，ＣＨ３－４，ＣＨ３－１５），０．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
６．８４Ｈｚ，ＣＨ３－１６）；１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－
ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１７３．９６（２０－ＣＯＮＨ－），１７２．９９（１１－
ＣＯＮＨ－），１７２．７５（１７－ＣＯＮＨ－），１７０．５２（５－
·７４１·
陕西科技大学学报 第３４卷
ＣＯＮＨ－），１６９．６８（２３－ＣＯＮＨ－），５８．７６（Ｃ－１），
５７．９７（Ｃ－１２），５２．８４（Ｃ－２１），５２．３２（Ｃ－１８），５０．２７
（Ｃ－６），４６．１５（Ｃ－１９），４５．１５（Ｃ－２２），４０．８２（Ｃ－７），
３３．９３（Ｃ－１３），２６．７６（Ｃ－２），２４．６９（Ｃ－１４），２４．４３
（Ｃ－８），２２．６７（Ｃ－９），２１．７１（Ｃ－１０），１９．６５（Ｃ－３），
１８．６６（Ｃ－４），１４．８８（Ｃ－１６），９．９４（Ｃ－１５）．与文献
［１４］的数据基本一致，结合 ＤＥＰＴ－１３５和 ＨＳＱＣ
确定化合物１３为 ｍａｌｆｏｒｍｉｎ　Ａ１，结构式如图５所
示．
图５　化合物１３的结构
化合物 １４：黄绿色粉末状，ｍｐ．２２３ ℃ ～
２２４℃．１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：
１５．１２（１Ｈ，ｓ，５′－ＯＨ），１２．９２（１Ｈ，ｓ，５－ＯＨ），
１０．１９（１Ｈ，ｓ，８－ＯＨ），６．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，９′－
Ｈ），６．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．２６Ｈｚ，７′－Ｈ），７．０９（１Ｈ，ｓ，
７－Ｈ），６．９９（１Ｈ，ｓ，６－Ｈ），６．５３（１Ｈ，ｓ，３－Ｈ），６．２２
（１Ｈ，ｓ，３′），３．９３（３Ｈ，ｓ，６′－ＯＣＨ３），３．５９（３Ｈ，ｓ，
８′－ＯＣＨ３），３．４１（３Ｈ，ｓ，１０－ＯＣＨ３），２．４８（３Ｈ，ｓ，
２－ＣＨ３），２．１５（３Ｈ，ｓ，２′－ＣＨ３）．１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００
ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）δ（ｐｐｍ）：１８３．９５（４′－ＣＯ－），
１８２．３５（４－ＣＯ－），１６８．４８（Ｃ－２′），１６７．９６（Ｃ－２），
１６２．０６ （Ｃ－５′），１６１．１４（Ｃ－８′），１６０．８３ （Ｃ－６′），
１５８．４５（Ｃ－８），１５６．８８（Ｃ－１０），１５５．５５（Ｃ－５），１５４．７４
（Ｃ－１０ｂ），１５０．２７（Ｃ－１０ａ′），１４０．１５（Ｃ－６ａ），１４０．０７
（Ｃ－９ａ′），１１６．２２（Ｃ－９），１１０．０２（Ｃ－３），１０８．１０（Ｃ－
４ａ），１０７．６０（Ｃ－５ａ′），１０６．５７（Ｃ－１０ａ，Ｃ－３′），１０５．２４
（Ｃ－７），１０５．１８（Ｃ－１０′），１０４．４４（Ｃ－６），１０３．３３（Ｃ－
４ａ′），９６．８９（Ｃ－９′），９６．４１（Ｃ－７′），６０．９９（１０－
ＯＣＨ３），５６．０９（６′－ＯＣＨ３），５５．０６（８′－ＯＣＨ３），
２０．１５（２′－ＣＨ３），１９．８８（２－ＣＨ３），查阅相关文献
［１５，１６］，确定化合物１４为ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ，结构
式如图６所示．
图６　化合物１４的结构
２．２　化合物抑菌活性
从菌株ＤＳ５８发酵物中分离得到的１４个化合
物抑菌活性测试结果见表１、表２所示．
表１　化合物对细菌抑菌活性测试结果
化合物
最小抑菌浓度 ＭＩＣ／（μｇ／ｍＬ）
革兰氏阳性菌
金黄色葡萄球菌 乳链球菌
革兰氏阴性菌
大肠杆菌 绿脓杆菌
β－谷甾醇＊（１） ２５０ ＞５００　 ２５０ ＞５００
５α，８α－环二氧麦角甾－６，２２－二烯－３β－醇＊（２） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
５－羟基－２（３Ｈ）－苯并呋喃酮＊（３） ６２．５　 １２５　 ６２．５　 ６２．５
２，５－二羟基苯乙酸乙酯＊（４） ６２．５　 １２５　 ６２．５　 ３１．２
２，５－二羟基苯乙酸甲酯＊（５） １５．６　 ６２．５　 ３１．２　 ３１．２
琥珀酸＊（６） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
２，５－二羟基苯乙酸＊（７） ６２．５　 ６２．５　 １２５　 １２５
ｃａｎｎａｂｉｆｏｌａｃｔｏｎｅ　Ａ＊（８） １２５　 １２５　 ６２．５　 ６２．５
４－甲氧基－６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮（９） １２５　 １２５　 ６２．５　 ６２．５
ｃａｍｐｙｒｏｎｅ　Ａ（１０） ＞５００ ＞５００　 ２５０　 ２５０
３－羟基－３甲氧基羰基戊二酸（１１） １２５　 ２５０　 ６２．５　 １２５
４－乙酰氨基丁酸（１２） １２５　 ２５０　 １２５　 ６２．５
ｍａｌｆｏｒｍｉｎ　Ａ（１３） ６２．５　 １２５　 ６２．５　 ６２．５
ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ（１４） ３１．２　 １２５　 ６２．５　 １２５
硫酸链霉素 ７．８　 ７．８ － －
青霉素钠 － － １．９５　 １．９５
　　注：“－”为未设置实验 “＊”为原来分离出的化合物，具体见参考文献［７］．
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第４期 杨秀芳等：猫儿屎内生真菌ＤＳ５８次生代谢产物化学成分的分离鉴定及活性研究
表２　化合物对植物病原菌的抑菌活性测试结果
化合物
最小抑菌浓度 ＭＩＣ／（μｇ／ｍＬ）
Ｂ．ｃ　 Ａ．ｂ　 Ｐ．ａ　 Ｃ．ｍ
β－谷甾醇＊（１） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
５α，８α－环二氧麦角甾－６，２２－二烯－３β－醇＊（２） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
５－羟基－２（３Ｈ）－苯并呋喃酮＊（３） ６２．５　 ６２．５　 ６２．５　 ３１．２
２，５－二羟基苯乙酸乙酯＊（４） ６２．５　 ３１．２　 ６２．５　 ３１．２
２，５－二羟基苯乙酸甲酯＊（５） ６２．５　 ３１．２　 ３１．２　 ３１．２
琥珀酸＊（６） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
２，５－二羟基苯乙酸＊（７） ６２．５　 ３１．２　 ６２．５　 １２５
ｃａｎｎａｂｉｆｏｌａｃｔｏｎｅ　Ａ＊（８） １２５　 ６２．５　 ６２．５　 １２５
４－甲氧基－６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮（９） １２５　 ６２．５　 ６２．５　 ６２．５
ｃａｍｐｙｒｏｎｅ　Ａ（１０） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
３－羟基－３甲氧基羰基戊二酸（１１） ３１．２　 ３１．２　 ６２．５　 ６２．５
４－乙酰氨基丁酸（１２） ＞５００ ＞５００ ＞５００ ＞５００
ｍａｌｆｏｒｍｉｎ　Ａ（１３） ６２．５　 １２５　 １２５　 １２５
ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ（１４） １２５　 １２５　 ２５０　 ２５０
酮康唑 ７．８１　 ７．８１　 １５．６　 ３１．２
　　由表２可知，化合物３、４、５、７、８、９、１１、１３、１４
对４株细菌和４株真菌表现出不同的抑制作用，其
中化合物３、４、７、９对细菌和真菌有良好的抑制作
用，化合物５的抑菌效果最强，对金黄色葡萄球菌
的 ＭＩＣ为１５．６μｇ／ｍＬ，化合物１１表现出良好的
抗真菌能力，对番茄灰霉病菌、白菜黑斑病菌 ＭＩＣ
为３１．２μｇ／ｍＬ．
２．３　化合物抗氧化活性
对分离得到的具有酚羟基化合物３、４、５、７、８、
１４进行抗氧化活性测试，结果如表３所示．其中化
合物３的抗氧化活性最好（ＩＣ５０＝４．１２４μｇ／ｍＬ），
且它的同系物抗氧化能力均与Ｖｃ相当．
表３　自由基清除率测试结果
样　品 拟合方程 ＩＣ５０／（μｇ／ｍＬ）
５－羟基－２（３Ｈ）－苯并呋喃酮（３） ｙ＝３．９４７ｘ＋３３．７２　 ４．１２４
２，５－二羟基苯乙酸乙酯（４） ｙ＝０．２９５ｘ＋４８．３３　 ５．６６１
２，５－二羟基苯乙酸甲酯（５） ｙ＝０．５１２ｘ＋４７．２１　 ５．４４９
２，５－二羟基苯乙酸（７） ｙ＝４．７５５ｘ＋２２．４７　 ５．７９０
ｃａｎｎａｂｉｆｏｌａｃｔｏｎｅ　Ａ（８） ｙ＝０．５２９ｘ＋４６．６５　 ５．７８９
ａｓｐｅｒｐｙｒｏｎｅｓ　Ａ（１４） ｙ＝０．０４４ｘ＋３３．９２　 ３６５．４８
Ｖｉｔａｍｉｎ　Ｃ　 ｙ＝７．２４８ｘ＋５．２８９　 ６．１６９
３　结论
（１）从猫儿屎内生真菌黑曲霉ＤＳ５８的固体发
酵物中又分离得到了６个化合物，其中４－甲氧基－
６－（３－甲基－丁酰基）－吡喃－２－酮是新化合物，３－羟基－
３甲氧基羰基戊二酸是首次从真菌代谢物中得到．
结合文献［７］可知，株菌ＤＳ５８可产生２，５－二羟基
苯乙酸及其衍生物．
（２）化合物的生物活性（抑菌活性和抗氧化活
性）显示菌株ＤＳ５８产生的２，５－二羟基苯乙酸及其
衍生物具有广普的抑菌效果和良好的抗氧化活性．
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【责任编辑：蒋亚儒】
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