全 文 ：China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 35 中国药房 2011年第22卷第35期
路及下游的致炎细胞因子TNF-α和 IL-6的表达有关。但是，
MEBO是如何调控TLR4/LPS信号通路中的调节分子从而促
进烫伤创面愈合的，需要进一步研究。
参考文献
[ 1 ] Thomas JA，Tsen MF，White DJ，et al. TLR4 inactivation
and rBPI（21）block burn-induced myocardial contractile
dysfunction[J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol，2002，
283（4）：H1 645.
[ 2 ] Wang HM，Cao WF，Peng YZ，et al. Changes in plasma
levels of LPS，TNFalpha and IL-6 in burn patients with
severe infection treated with imipenem or cefoperazone[J].
Zhonghua Shao Shang Za Zhi，2004，20（2）：95.
[ 3 ] Kelly JL，OSullivan C，ORiordain M，et al. Is circulat-
ing endotoxin the trigger for the systemic inflammatory re-
sponse syndrome seen after injury?[J]. Ann Surg，1997，
225（5）：530.
[ 4 ] Myrianthefs PM，Baltopoulos GJ. Circulating cytokines
and outcome prediction of burned children with concomi-
tant inhalation injury[J].Crit Care，2008，12（3）：155.
[ 5 ] Finnerty CC，Herndon DN，Przkora R，et al. Cytokine ex-
pression profile over time in severely burned pediatric pa-
tients[J]. Shock，2006，26（1）：13.
[ 6 ] Akira S，Takeda K. Toll-like receptor signalling[J]. Nat Rev
Immunol，2004，4（7）：499.
[ 7 ] Hemmi H，Takeuchi O，Kawai T，et al. A Toll-like recep-
tor recognizes bacterial DNA[J].Nature，2000，408（6 813）：
740.
[ 8 ] Ahmad-Nejad P，Häcker H，Rutz M，et al.Bacterial CpG-
DNA and lipopolysaccharides activate Toll-like receptors
at distinct cellular compartments[J]. Eur J Immunol，2002，
32（7）：1 958.
[ 9 ] 傅颖珺，谢 勇，石俊强，等.严重烧伤早期大鼠脾脏Toll
样受体4的表达及意义[J].第二军医大学学报，2007，28
（4）：412.
[10] 王明青，孙元华，李学川，等.深Ⅱ度烧伤创面早期磨痂
后大鼠血中LPS、TNF-α及 IL-6的变化[J].山东大学学报
（医学版），2003，41（4）：427.
（收稿日期：2011-01-06 修回日期：2011-05-25）
粗毛牛膝带腋芽茎段的植株再生研究
刘叶蔓＊，谢果珍（湖南中医药大学，长沙市 410208）
中图分类号 R284.1；R283 文献标识码 A 文章编号 1001-0408（2011）35-3286-02
摘 要 目的：研究粗毛牛膝带腋芽茎段植株的再生。方法：以粗毛牛膝带腋芽茎段为外植体诱导腋芽生长，继代诱导生根成完
整小植株，考察基本培养基、萘乙酸（NAA）和6-苄基嘌呤（6-BA）浓度3个因素对茎段和腋芽生长的影响。结果：基本培养基MS、
6-BA浓度对腋芽的生长有显著影响，最佳的培养基组合为MS+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA；而在1/2MS+0.5 mg·L-1NAA培
养基上100％生根。结论：该培养基组合可使粗毛牛膝腋芽诱导生根能力强，且幼根生长健壮，值得推广。
关键词 粗毛牛膝；腋芽；植株再生；培养基
Plant Regeneration of Achyranthis bidentata Stem Section with Axillary Bud
LIU Ye-man，XIE Guo-zhen（Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha 410208，China）
ABSTRACT OBJECTIVE：To study the plant regeneration of Achyranthes bidentata stem section with axillary bud. METHODS：
Coarse A. bidentata stem section was used as explant to induce the growth of axillary bud，and complete small plant was obtained
in subculture. The effects of three factors basic culture medium，naphthylacetic acid（NAA）and 6-olumes benzalhydantoin（6-BA）
purine on the growth of stem section and axillary bud were investigated. RESULTS：Basic culture medium MS，6-BA influenced
the growth of axillary bud significantly. The best culture medium combination were MS+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1 6-BA. 100％
root grew in 1/2MS + 0.5 mg·L-1 NAA culture medium. CONCLUSION：Culture medium combination can induce the growth of
vigorous root of coarse A. bidentata stem section with axillary bud，it is worthy of spreading.
KEY WORDS Achyranthes bidentata；Axillary bud；Plant regeneration；Culture medium
＊讲师，硕士。研究方向：药用植物生物技术。电话：0731-
8458233。E-mail：liuyeman@163.com
􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐􀤐
粗毛牛膝Achyranthes bindentata BL.是苋科多年生草本
植物。其根、种子、茎和叶中含有蜕皮甾酮、土牛膝皂苷、生物
碱等。药理研究表明，其不同溶剂提取物在强心、抗生育、抗
菌和癌细胞凋亡等方面有明显的影响[1]。植物组织和细胞培
养技术的发展为药用植物有效成分的工厂化生产提供了一条
有效的途径。近年来，关于怀牛膝、川牛膝组织培养方面的研
究已有报道 [2～4]，但至今仍无粗毛牛膝在组织培养方面的报
道。因此，笔者对粗毛牛膝的组织培养进行了初步研究，并获
得了再生植株。
1 仪器与材料
··3286
中国药房 2011年第22卷第35期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 35
1.1 仪器
AF1004型电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；
DNP-9052型电热恒温培养箱（中新医疗仪器有限公司）；
KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公
司）；超净工作台（苏州三兴净化科技有限公司）。
1.2 试药
基本培养基、萘乙酸（NAA）、6-苄基嘌呤（6-BA）均由上海
艾研生物科技有限公司提供。
1.3 外植体
以粗毛牛膝带腋芽的嫩茎为外植体。
2 方法
2.1 外植体及处理
外植体经流水冲洗30 min、洗衣粉液浸洗5 min、清水清洗
后，在超净工作台用 75％的酒精振荡浸润 2 min，用无菌水清
洗 4次，再用 0.1％氯化汞消毒 15 min，最后用无菌水清洗 5次
后接种在培养基上。
2.2 培养基及激素配比
选用L9（34）正交设计，根据试验号分别考察基本培养基
（A）、NAA浓度（B）和6-BA浓度（C）3个因素对茎段和腋芽生
长的影响。每个试验号重复20次，每瓶接种4块，40 d后统计
分析结果。计算公式：腋芽生长系数＝腋芽长度（cm）总和/
（接种块数－感菌块数）。因素水平见表1。
表1 因素水平
Tab 1 Factors and levels
水平
1
2
3
因素
A
MS
B5
H
B/mg·L-1
0.1
0.3
0.5
C/mg·L-1
0.1
0.5
1.0
2.3 根的诱导
切取生长的腋芽尖端 1.5 cm左右接种在 1/2MS+0.5 mg·
L-1NAA培养基上。
2.4 培养条件
以上培养温度均为（25±1）℃，1 500 lx光照 12 h·d-1，12
h·d-1黑暗。培养基中均含3％蔗糖、0.65％琼脂。pH 5.5～5.8。
3 结果
3.1 基本培养基及激素配比对茎段和腋芽生长的影响
正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。
表 2、表 3结果表明，影响因素顺序是A＞C＞B。A因素
（基本培养基）和C因素（6-BA浓度）对腋芽生长各水平之间具
有显著意义，B因素（NAA浓度）没有显著性意义。结合实际，
最佳培养基组合是A1B1C2，即以MS为基本培养基，添加 0.1
mg·L-1NAA和 0.5 mg-1L-16-BA，有利于腋芽的萌发和生长。
因A1B1C2在正交表找不到，故应作验证试验。
3.2 验证试验
根据A1B1C2配比配制培养基，其他条件同“2.4”项下，接种
20瓶，每瓶接种块数4块，40 d统计结果，可得腋芽生长系数达
10.210，比表2中最高者（字列号1）还高，表明A1B1C2为最佳培
养基组合。
3.3 生根情况
以1/2MS+0.5 mg·L-1NAA培养基能有效诱导已萌发腋芽
的生根，根的数量均在10条以上，生长健壮。
4 讨论
笔者考察基本培养基、NAA浓度和6-BA浓度不同配比对
粗毛牛膝带腋芽茎段生长的影响。结果表明，基本培养基
MS、6-BA浓度对腋芽的生长有显著影响，最佳的培养基组合
为MS+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA，这与文献[5]对川牛膝
的研究结果一致。通过验证试验可知，在NAA浓度为0.1 mg·
L-1时，适当增加6-BA的浓度，有利于腋芽的生长。在7号试验
中，当6-BA达到1.0 mg·L-1时，腋芽生长系数明显降低。说明
在一定浓度范围内，较高的6-BA/NAA比值有利于芽的分化和
生长，这与文献[6]研究结果一致：在其他因子不变的情况下，细
胞分裂素所含浓度越高，丛生芽启动越快，数量也较多，由此看
来细胞分裂素对诱导粗毛牛膝外植体脱分化有关键作用。本
研究中，不定芽在1/2MS+0.5 mg·L-1NAA培养基上100％生根，
且幼根生长健壮，说明粗毛牛膝不定芽诱导生根能力强。本研
究结果可为粗毛牛膝的生物技术利用提供理论依据。
参考文献
[ 1 ] 蔡光先.湖南药物志[M].长沙：湖南科学技术出版社，
2004：79.
[ 2 ] 李明军，于相丽，陈明霞，等.怀牛膝愈伤组织的诱导和植
株再生[J].植物生理学通讯，2004，40（3）：343.
[ 3 ] 张丽萍，董诚明，金盖宇.怀牛膝组织培养及齐墩果酸定
量分析的研究[J].河南中医学院学报，2003，7（4）：32.
[ 4 ] 李明军，李 萍，洪森荣，等.怀牛膝愈伤组织诱导及分化
的研究[J].河南师范大学学报（自然科学版），2005，33
（4）：118.
[ 5 ] 刘 坚，张 挺，陈德茜，等.川牛膝组织培养快繁技术研
究[J].中药材，2006，29（5）：425.
[ 6 ] 蒋泽平，梁珍海，李 劲，等.杂交鹅掌楸的离体培养和植
株再生研究[J].江苏林业科技，2004，31（6）：5.
（收稿日期：2010-08-02 修回日期：2010-09-29）
表2 正交试验结果
Tab 2 Results of orthogonal test
序列号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
K1
K2
K3
R
因素
A
1
1
1
2
2
2
3
3
3
21.936
17.073
12.484
9.452
B/mg·L-1
1
2
3
1
2
3
1
2
3
19.006
16.696
15.791
3.215
C/mg·L-1
1
2
3
2
3
1
3
1
2
20.093
15.957
15.443
4.650
D（误差）
1
2
3
3
1
2
2
3
1
17.464
17.538
16.491
1.047
腋芽生长系数
9.002
6.878
6.056
5.678
5.061
6.334
4.326
4.757
3.401
表3 方差分析结果
Tab 3 Results of variance analysis
方差来源
A
B
C
D（误差）
离差平方和
14.894 2
1.832 3
4.332 6
0.227 6
自由度
2
2
2
2
均方
7.447 1
0.916 2
2.166 3
0.113 8
F
65.439 9
8.050 8
19.035 8
P
＜0.05
＜0.05
注：F0.05（2，2）＝19.00；F0.01（2，2）＝99.00
note：F0.05（2，2）＝19.00；F0.01（2，2）＝99.00
··3287