全 文 ：通过表 3，表 4 可知，方差分析结果显示，因素乙醇浓度不同
水平值对实验结果有显著性的影响，其各因素对实验结果影响的
重要程度依次为乙醇浓度(A)、料液比(B)、提取次数(D)和提取
时间(C)，即得 A ＞ B ＞ D ＞ C。通过直观分析表可知，各因素的
最佳水平值为 A2B3C1D3，所以最佳工艺为:85%乙醇，回流提取 3
次，每次加醇量为 10 倍量，每次提取 1h。
3 讨论
制附子中所含的主要成分为二萜类生物碱，主要分为单脂型
生物碱，双酯型生物碱和醇胺型生物碱三类，经过查阅相关资料
可知，制附子抗肿瘤的主要活性物质为生物碱，故本论文在考察
提取工艺的过程中，主要针对其生物碱类成分。
在药材提取方法选择实验中，进行渗漉提取时要用碘化铋钾
测定其是否渗漉完全，配置好的碘化铋钾需装在棕色的容量瓶
中。
因为购买生附子为个子，为了提取方便进行，在提取前进行
了一定的破碎，因为破碎所得粒子较小，所以提取时间较短即可
达到较好的提取效果。
本实验在进行高效液相色谱法测定各化学物质组的含量时，
曾摸索过多种流动相系统，但结果却均不理想，因其靠近末端吸
收，分离的效果较差，没有达到基线分离，最后选定了现在所用的
系统，但其分离效果也不是十分理想，更适合其分离的系统有待
于更进一步的研究。
在利用反滴定法滴定总生物碱的时候，必须要调节溶液的
pH值在 10 ～ 11 之后，利用氯仿萃取 5 次，然后水浴蒸干氯仿，再
用 5ml乙醇溶解后，才能够进行滴定。
在采用高效液相色谱时，所选用的色谱条件为:流动相:A 乙
腈，水(5mM醋酸铵)，梯度洗脱，A相随时间的变化:15% ～ 26%
(0 ～ 10min)，26% ～ 30%(10 ～ 20min) ，30%(20 ～ 25min) ;流速
0． 5ml /min;检测波长 235nm;柱温 25℃;进样量 10μl。
通过正交试验的工艺验证，可得出制附子抗肿瘤化学物质组
的最佳制备工艺为:85%乙醇，回流提取 3 次，每次加醇量为 10
倍量，每次提取 1h。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2015:191．
［2］ 李鸿儒，赵 贝，杜钢军，等．附子药酒抗肿瘤初步研究［J］．河南大
学学报，2013，32(2):84，121．
［3］ 陈玉春．人参、附子与参附汤的免疫调节作用机理初探［J］． 中成
药，1994，16(8):30．
［4］ 陈道群，陈 松．用乌附须配生姜［J］．浙江中医杂志，1993，28(2):
89．
［5］ 刘 敏，张 海，蔡亚梅，等．附子总生物碱提取物中 3 个双酯型和
3 个单酯型乌头碱成分的含量测定［J］． 药学实践杂志，2013，31
(3):181．
收稿日期:2016-01-12; 修订日期:2016-05-20
基金项目:国家自然科学基金(No． 81260606);
江西省教育厅青年科学基金项目(No． GJJ11242);
江西省卫生厅科技计划资助项目(No． 20113138)
作者简介:龚 帧(1977-)，女(汉族)，江西九江人，九江学院讲师，硕士学
位，主要从事心血管药理研究工作．
粟米草三萜皂苷抗实验性心律失常作用的研究
龚 帧1，彭素文2，李兴暖1，熊建军1，李雪芹1，程洪华1
(1．九江学院基础医学院，江西 九江 332000; 2．江西省九江市第一人民医院 332000)
摘要:目的 研究粟米草三萜皂苷抗实验性心律失常的作用。方法 分别采用氯化钙、乌头碱、氯仿 －肾上腺素三种药物
诱发实验性心律失常的动物模型，通过 BL － 420 生物机能实验系统记录动物心电图，并对心电图进行分析，观察粟米草
三萜皂苷对各种实验性心律失常的影响。结果 粟米草三萜皂苷能明显降低氯化钙所致大鼠心律失常的发生率和死亡
率，不同程度地延长实验性心律失常的潜伏期和缩短持续期，并对氯仿 －肾上腺素致家兔心律失常具有有效保护作用。
结论 粟米草三萜皂苷具有抗实验性心律失常作用。
关键词:粟米草三萜皂苷; 心律失常; 氯化钙; 乌头碱; 氯仿 －肾上腺素
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 09． 017
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)09-2095-03
粟米草 Mollugo pentaphylla L．为番杏科植物，以全草入药，具
有清热解毒、利湿等功效，主治腹痛泄泻、感冒咳嗽、疮疖肿毒等
症［1］。我院课题组成员长期从事粟米草相关课题的研究，并发
现粟米草在心血管方面具有抗自发性高血压［2］、抑制血管平滑
肌细胞增殖［3，4］、增加冠脉血流量等多重药理作用。在心血管系
统疾病中，心律失常是最为严重的疾病之一，其危害在于它不仅
可加重某些原有心脏疾病，如心力衰竭，且可导致患者突然死亡，
严重威胁人类健康［5］。前期实验研究，作者初步发现粟米草乙
醇提取物———粟米草总皂苷(MP876)具有抗乌头碱注射液诱发
大鼠心律失常作用［6］，而粟米草三萜皂苷为星毛粟米草中所含
有效成分之一。因此，本课题组应用现代工艺对粟米草总皂苷进
一步提取分离获得三萜皂苷［7］，从多种心律失常动物模型研究
入手，通过动物实验探讨粟米草三萜皂苷抗实验性心律失常的药
理作用。
1 仪器与材料
1． 1 仪器设备 BL － 420 生物机能实验系统(成都泰盟科技有限
公司);超级恒温水浴(重庆实验设备厂);静脉插管等。
1． 2 动物 Wistar大鼠，体重 200 ～ 300 g;家兔，体重 1． 5 ～ 2． 0
kg，均雌雄兼用，由江西南昌大学实验动物中心提供。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 9 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 9 期
1． 3 药物与试剂 粟米草三萜皂苷(我院药学课题组提供);2 %
利多卡因(徐州莱恩药业有限公司，批号:1111021);氯化钙(分
析纯);乌头碱(分析纯);氯仿(分析纯);0． 01 %肾上腺素(天津
金耀氨基酸有限公司，批号:1103181)。
2 方法
2． 1 动物分组 参考文献［8］，采用不同药物诱发实验性心律失
常的动物模型，并将动物随机分成三组:空白对照组为给予等体
积生理盐水;阳性对照组为利多卡因;药物组为粟米草三萜皂苷，
使用前用蒸馏水配制。
2． 2 氯化钙诱发大鼠心律失常 取大鼠 30 只，随机分成三组。
用乌拉坦 1． 2 g·kg －1腹腔注射麻醉后，仰位固定，启动 BL － 420
生物机能实验系统，将针形电极插入大鼠四肢皮下，连接Ⅱ导联
心电图，描记一段正常心电图以弃去心电异常大鼠。注射氯化钙
前 30 min采用腹腔注射粟米草三萜皂苷 100 mg·kg －1以预防性
给药。然后用 3． 5 %氯化钙 140 mg·kg －1于 10 s内快速自鼠尾
静脉推注完毕，并立即观察并记录Ⅱ导联心电图。各组在出现心
律失常稳定数分钟后，分别给予相应药物或生理盐水，记录心律
失常的变化及各组动物死亡率。
2． 3 乌头碱诱发大鼠心律失常 采用一次静注乌头碱诱发心律
失常法。取大鼠 30 只，随机分成三组。用乌拉坦 1． 2 g·kg －1腹
腔注射麻醉后，连接心电图导联线，记录给药前的Ⅱ导联心电图。
待动物心电稳定后，自鼠尾静脉快速(5 s左右)注入 0． 001 %乌
头碱 30 μg·kg －1，分别观察心律失常的潜伏期及持续期。当心
律失常形成数分钟稳定后，各组分别静注药物或生理盐水，观察
并记录心律失常的变化。
2． 4 氯仿 －肾上腺素致家兔心律失常 取家兔 24 只，随机分成
三组。将注入 2 ml氯仿的纱布放入动物麻醉口罩中，给家兔吸
入致其麻醉后，去除麻醉口罩并仰位固定，连接心电图Ⅱ导联线。
待心电图稳定后，由兔耳缘静脉快速注入 0． 01 %肾上腺素 0． 5
ml·kg －1并及时记录心电图，观察心律失常的潜伏期、持续期及
心率变化。各组在心律失常出现稳定数分钟后，分别静注药物或
生理盐水，观察并记录心律失常的变化。
2． 5 统计学处理 实验数据采用 SPSS 13． 0 软件处理，结果采用
珋x ± s表示，组间显著性检验采用 t 检验，P ＜ 0． 05 为差异有统计
学意义。
3 结果
3． 1 粟米草三萜皂苷对氯化钙诱发大鼠心律失常的影响 实验
结果显示，在静脉注射氯化钙后可诱发大鼠心律失常发生率
100%，死亡率 90%，说明复制大鼠心律失常模型成功;与空白对
照组比较，粟米草三萜皂苷可明显降低心律失常的发生率及死亡
率，分别为 50%和 30%(P 均 ＜ 0． 05)，其疗效与利多卡因接近
(见表 1)。
表 1 粟米草三萜皂苷对氯化钙诱发大鼠心律失常的影响
组别
剂量
/mg·kg － 1
发生率
/%
死亡率
/%
空白对照组(生理盐水) － 100 90
药物组(粟米草三萜皂苷) 50 50* 30*
阳性对照组(利多卡因) 5 30* 20*
与空白对照组比较，* P ＜0． 05;n =10
3． 2 粟米草三萜皂苷对乌头碱诱发大鼠心律失常的影响 结果
表明，一次静注乌头碱后大鼠均可出现室性心律失常，与空白对
照组相比，药物组出现心律失常的潜伏期明显延长，并有效缩短
心律失常的持续期，潜伏期和持续期分别为(34． 1 ± 3． 34)s 和
(220． 87 ± 16． 12)s(P均 ＜ 0． 05)，具有显著性差异(见表 2)。进
一步证实粟米草三萜皂苷对乌头碱诱发大鼠心律失常有较好的
拮抗作用。
表 2 粟米草三萜皂苷对乌头碱诱发大鼠心律失常的影响
组别
剂量
/mg·kg － 1
潜伏期 / s 持续期 / s
空白对照组(生理盐水) － 20． 2 ± 2． 69 257． 25 ± 10． 24
药物组(粟米草三萜皂苷) 50 34． 1 ± 3． 34* 220． 87 ± 16． 12*
阳性对照组(利多卡因) 5 45． 53 ± 3． 79* 217． 3 ± 6． 15*
与空白对照组比较，* P ＜0． 05;n =10
3． 3 粟米草三萜皂苷对氯仿 －肾上腺素致家兔心律失常的影响
注射肾上腺素后，空白对照组家兔均出现一源性或多源性室性心
律失常，一般持续约 4 ～ 7 min 左右。药物组可明显降低氯仿 －
肾上腺素诱发家兔快速型心律失常的心率 22． 36 %(P ＜ 0． 05)，
推迟心律失常发生的时间并缩短持续时间(见图 1 ～ 3)，其作用
效果接近阳性对照组利多卡因(见表 3)。
表 3 粟米草三萜皂苷对氯仿 －肾上腺素致家兔心律失常的影响(珋x ± s)
组 别
剂量
/mg·kg － 1
潜伏期
/ s
持续期
/ s
心率
/次·min － 1
空白对照组
(生理盐水)
－ 19． 4 ± 4． 0 258． 5 ± 54． 3 331 ± 15
药物组
(粟米草三萜皂苷) 50 35． 7 ± 3． 0
* 227． 3 ± 33． 2* 257 ± 18*
阳性对照组
(利多卡因) 10 39． 7 ± 5． 0
* 212． 3 ± 41． 4* 237 ± 16*
与空白对照组比较，* P ＜0． 05;n =8
图 1 正常家兔的心电图
图 2 氯仿 －肾上腺素诱发家兔心律失常的心电图
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图 3 粟米草三萜皂苷对抗氯仿 －肾上腺素
诱发家兔心律失常的心电图
4 讨论
本课题组前期研究结果表明，粟米草提取物在心血管方面具
有抗心律失常作用［9］，但其化学成分与作用机制尚不明确。此
次实验结果证实，粟米草中的有效成分三萜皂苷能够对抗氯化
钙、乌头碱、氯仿 －肾上腺素三种药物诱发的实验性心律失常，不
同程度地推迟心律失常的潜伏时间和缩短持续时间，并显著降低
氯化钙所致大鼠心律失常的死亡率。
氯化钙诱发心律失常的机理与钙离子对心脏的直接作用有
关。实验结果显示，粟米草三萜皂苷对氯化钙诱发的大鼠室颤具
有显著预防作用，可明显降低大鼠心律失常的发生率和死亡率，
其机制可能是通过影响心肌细胞内钙离子的转运，降低心脏快反
应细胞的自律性。乌头碱通过使心肌细胞钠通道的开放，加速钠
内流，导致胞内钠离子积聚和胞内钙离子超载，促使细胞膜去极
化，诱发异位节律点，缩短心肌有效不应期，从而形成多源性异位
节律而致心律失常［10］。本研究结果表明，粟米草三萜皂苷可有
效对抗乌头碱所致大鼠室性心律失常，提示粟米草三萜皂苷对心
肌细胞膜钠内流可能亦有明显的抑制作用，其机制可能与其阻断
钠通道有关。大剂量的肾上腺素可提高心肌的自律性而致心律
失常，而氯仿与肾上腺素合用更增加对心脏毒性。实验结果表
明，粟米草三萜皂苷能明显降低氯仿 －肾上腺素诱发家兔心律失
常的心率，延长潜伏期和缩短持续期，提示其机制可能与阻断 β
受体有关。
综上所述，粟米草三萜皂苷对由不同药物诱发的不同种类的
实验动物、不同类型的实验性心律失常均显示出一定的拮抗作
用，提示其抗心律失常作用机制可能与阻断钙通道、钠通道，从而
降低心肌细胞的自律性、延长有效不应期等因素有关，并为评价
粟米草用于临床治疗心律失常提供实验基础。本研究虽证实了
粟米草三萜皂苷对多种药物诱发的实验性心律失常具有对抗作
用，然而其确切机制还有待于建立心肌细胞模型，采用膜片钳等
电生理技术以观察细胞离子通道电流的变化进行更深入的研究。
参考文献:
［1］ 《全国中草药汇编》编写组．全国中草药汇编，第 2 版［M］．北京:人
民卫生出版社，2000:588．
［2］ 李雪芹，高春华，刘建云，等． 粟米草提取物对自发性高血压大鼠
的降压作用［J］．山东医药，2005，45(17):8．
［3］ 熊建军，龚 帧，吴周环，等． 粟米草皂甙对血管平滑肌细胞增殖
的影响及机制探讨［J］．山东医药，2010，50(18):27．
［4］ 干丽君，龚 帧，熊建军，等． 粟米草三贴皂苷对 PDGF诱导的血管
平滑肌细胞增殖的影响［J］．中国现代医学杂志，2011，21(8):947．
［5］ 杨宝峰，蔡本志． 心律失常发病机制研究进展［J］． 国际药学研究
杂志，2010，37(2):81．
［6］ 姚果原，卢琦华．粟米草提取物(MP867)抗乌头碱作用及其对大
鼠血浆和心肌 cAMP的影响［J］．中药药理与临床，1991，7(特刊):
19．
［7］ 刘可越，刘海军，高春华，等．粟米草中化学成分的研究［J］．时珍国
医国药，2009，20(8):1916．
［8］ 徐叔云，卞如濂，陈 修．药理实验方法学［M］．北京:人民卫生出
版社，2002:1171．
［9］ 刘可越．粟米草属植物资源、成分及药理作用研究进展［J］．时珍国
医国药，2009，20(2):397．
［10］ 陈 奇．中药药效研究思路与方法［M］． 北京:人民卫生出版社，
2005:125．
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