全 文 ：• 2420 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年10月第26卷第10期 CJTCMP , October 2011, Vol . 26, No. 10
[13] 刘立,马宏跃,段金廒,等.凝血酶时间法的改进及对四物汤类
方筛选研究.中国实验方剂学杂志,2009,15(4):69-71
LIU Li,MA Hong-yue,DUAN Jin-ao,et al.The Development of a
bioassay called thrombin time and application of the bioassay in
study on Siwu Decoction and its serial decoctions.Chinese Journal
of Experimental Traditional Medical Formulae,2009,15(4):69-71
[14] 王爱云,陆茵,陈文星,等.活血化瘀类方乙醇洗脱部位对兔血
小板聚集的影响.中华中医药杂志,2010,25(10):1586-1588
WANG Ai-yun,LU Yin,CHEN Wen-xing,et al.Effect of alcohol
elution component from analogous compound prescription of
removing stasis on platelet aggregation on platelet aggregation.
China Journal of TCM and Pharmacy,2010, 25(10):1586-1588
[15] 刘青春,赵军宁,鄢良春,等.31种黄酮、酚酸类化合物和10种中
药清除DPPH能力考察.中国中药杂志,2009, 29(4):1695-1699
LIU Qing-chun,ZHAO Jun-ning,YAN Liang-chun,et al.DPPH
radical scavenging activities of 31 flavonoids and phenolic acids
and 10 extracts of Chinese material medica.China Journal of
Chinese Materia Medica,2009,29(4):1695-1699
[16] 胡益勇,徐晓玉.阿魏酸的化学和药理研究进展.中成药,
2009,2(28):253-255
HU Yi-yong,XU Xiao-yu.Research on chemical constituents of
Ferulic acid and its pharmacological effects.Chinese Traditional
Patent Medicine,2009,2(28):253-255
[17] 邢国秀,李楠,杨美燕,等.天然苦杏仁苷的研究进展.中成药,
2003,25(12):1007-1009
XING Guo-xiu,LI Nan,YANG Mei-yan,et al.Research on nature
Amygdlin.Chinese Traditional Patent Medicine,2003,25(12):
1007-1009
[18] 董捷,尹策,张红城,等.杏花花粉中苦杏仁苷的抗氧化性研
究.食品科学,2007,28(8):65-68
DONG Jie,YIN Ce,ZHANG Hong-cheng,et al.Research on
Antioxidative activities of Amygdlin from Almond Pollen.Food
Science,2007,28(8):65-68
（收稿日期：2010年12月27日）
通讯作者：张尊敬，浙江省丽水市中山街800号丽水市中医医院呼吸内科，邮编：323000，电话：0578-2123393，传真： 0578-2132496
E-mail：zunjing123@163.com
·研究报告·
柳叶蜡梅提取物对人胃癌SGC-7901细胞的
作用机制研究
刘忠达，袁宙新，张尊敬，李权
（浙江省丽水市中医医院，丽水 323000）
摘要：目的：探讨柳叶蜡梅提取物在体外对人胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用及其可能的机制。方
法：应用细胞培养、噻唑蓝（MTT）比色法、光镜观察、扫描和透射电镜观察、Hoechst33258/PI染色等技术研究
柳叶蜡梅提取物对SGC-7901细胞的抑制作用。结果：柳叶蜡梅提取物可明显抑制SGC-7901细胞生长，随着药物浓
度的增加，呈现剂量依赖性效应；光镜及扫描透射电镜观察显示，药物处理组细胞表面微绒毛减少并发泡、细胞
核固缩、染色质凝聚等形态学特征；细胞核经Hoechst33258染色出现颗粒状荧光，而PI染色无红色荧光出现。结
论：柳叶蜡梅提取物对人胃癌SGC-7901细胞具有明显的抑制作用，其机制可能与细胞凋亡相关。
关键词：柳叶蜡梅提取物；胃癌；细胞增殖
基金资助：浙江省丽水市市级重点项目（No.20064011）
Inhibitory effect of extract of Chimonanthus salicifolius on SGC-7901 cell and
the possible mechanism
LIU Zhong-da, YUAN Zhou-xin, ZHANG Zun-jing, LI Quan
( Lishui TCM Hospital of Zhejiang Province, Lishui 323000, China )
Abstract: Objective: To investigate the inhibitory effect of extract of Chimonanthus salicifolius on human gastric
cancer cell line SGC-7901 and the related mechanism. Methods: The effects of extract of Chimonanthus salicifolius on the
cell proliferation of SGC-7901 cells were determined with MTT, light microscopy, electron microscopy, Hoechst 33258/PI
• 2421 •中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年10月第26 卷第10期 CJTCMP , October 2011, Vol . 26, No. 10
柳叶蜡梅[1]（Chimonanthus salicifolius S.Y.Hu）为蜡梅科
蜡梅属植物，又名石凉茶、山蜡梅、香风茶、黄金茶等，是中国
特有属、种[2]，主要分布在皖、浙、赣三省部分地区，是畲乡民间
应用最广泛的草药之一。有研究表明柳叶蜡梅具有有抑菌、抗
炎、解热、镇痛、镇咳、祛痰等作用[3-6]。但目前关于柳叶蜡梅提
取物对肿瘤细胞的作用研究几乎是空白。为了进一步探讨柳叶
蜡梅的药理作用，本实验以人胃癌SGC-7901为实验对象，研究
柳叶蜡梅提取物对肿瘤细胞的生长抑制作用，为临床肿瘤治疗
提供理论基础。
材料和方法
1. 试剂 人胃癌SGC-7901细胞由浙江大学细胞生物学研
究所提供。RPMI-1640培养基为Gibco公司产品，小牛血清为
杭州四季青生物工程材料有限公司产品，Hoechst33258、PI及
DMSO为Sigma产品。柳叶蜡梅提取物由浙江省丽水市中医院提供。
2. 细胞培养及处理 SGC-7901细胞培养于含10%热灭活
小牛血清、10万U/L青霉素和10万U/L链霉素的RPMI-1640培养
基（pH7.2），于37℃培养。细胞培养24h后进行柳叶蜡梅提取物
处理。
3. MTT检测生长抑制率 将对数生长期细胞以5 000个/孔
接种于96孔板，接种24h后，加入含不同浓度的柳叶蜡梅提取
物培养液，终浓度分别为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、
1.0μg/mL，对照组加新鲜培养液，每个浓度及对照组均设6个
复孔。于实验结束前4h分别加入20μL 5g/L MTT溶液，继续培
养4h后，弃去上清，加入150μL DMSO，震荡10min后酶联免疫
测定仪测定各孔于492nm下的A值，计算细胞生长抑制率。细胞
生长抑制率（%）=（对照组A492值-实验组A492值）/对照组A492
值×100%。根据各组药物对SGC-7901细胞的生长抑制率，用
LOGIT法计算得出药物半数抑制浓度（IC50）。
4. 光学显微镜观察SGC-7901细胞形态 取对数生长期
细胞，接种于50mL培养瓶中，24h后分别加入新鲜培养液和
0.5μg/mL的柳叶蜡梅提取物，24h后在显微镜（Leica）下观察
拍照。
5. 扫描电镜观察SGC-7901细胞表面超微结构 取灭菌的
盖玻片，铺1层1%多聚赖氨酸后放入24孔板，接种SGC-7901细
胞，处理培养24h后，取出盖玻片，2.5%戊二醛固定2h，1%锇酸
固定1h，梯度乙醇后加100%丙醇，乙酸异戊酯依次脱水，每次
15min，CO2临界点干燥，样本粘台，喷金，Stereoscan 260型扫描电
镜观察。
6. 透射电镜观察观察SGC-7901细胞超微结构 取对数生
长期SGC-7901细胞，处理24h，收集细胞，2.5%戊二醛固定，锇
酸后固定，梯度脱水，EPON 812包埋，超薄切片，枸橼酸铅和醋
酸双氧铀染色，Philips Tecnai 10透射电镜观察。
7. Hoechst33258/PI双染观察细胞核形态 取对数生长期
细胞，接种于铺有1%多聚赖氨酸的玻片，柳叶蜡梅提取物处理
24h后，PBS漂洗2次，加入终浓度10μg/mL Hoechst33258室温
避光染色10min，PBS漂洗，然后用终浓度为10μg/mL PI 4℃反
应20min，PBS漂洗，4%多聚甲醛（pH7.2）固定10min，PBS漂
洗，最后荧光显微镜（Leica）进行检测。
8. 统计学方法 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，实验数
据用x-±s表示。
结果
1. MTT检测生长抑制率 柳叶蜡梅提取物对SGC-7901细
胞的生长具有明显的抑制作用，见图1。在同一作用时间内，随
着药物浓度增加，细胞抑制率越高，呈现显著的浓度依赖性。
药物作用24h，当浓度增加到0.8μg/mL时，SGC-7901细胞生长
抑制率达到（89.39±0.9）%，且随着药物浓度的增加而变化不
显著，即达到最佳抑制率。柳叶蜡梅提取物作用24h的IC50是
0.5μg/mL。






    
in
hi
bi
to
ry
ra
te
(%
)
6*&
图1 柳叶腊梅提取物浓度对SGC-7901细胞的抑制关系
柳叶腊梅
提取物浓度（μg/mL）
抑
制
率（
％）
staining. Results: The results showed that extract of Chimonanthus salicifolius treatment could signifi cantly inhibit the growth
of SGC-7901 cells in a dose-dependent manner. Light microscopy and electron microscopy showed that the morphology of the
treated cells appeared less microvilli, blebbing, karyopyknosis, chromatin condensation. Cell nucleus concentrated and appeared
granular fl uorescence by Hoechst 33258 staining. Conclusion：This study suggested that Chimonanthus salicifolius has signifi cant
inhibitory effects on SGC-7901 cells proliferation, the possible mechanism might be related to cell apoptosis.
Key words: Extract of Chimonanthus salicifolius; Gastric cancer; Cell proliferation
Fund assistance: Municipal Key Project of Lishui in Zhejiang Province(No.20064011)
2. 光学显微镜观察SGC-7901细胞形态 柳叶蜡梅提取物
处理后细胞变圆、体积缩小、细胞间连接减少甚至无、细胞僵
化、细胞脱落。
3. 扫描电镜观察SGC-7901细胞表面超微结构 柳叶蜡梅
提取物处理后，细胞变圆，细胞间连接减少甚至无连接，细胞
膜上微绒毛显著减少甚至消失，并可见胞膜发泡及凋亡小体。
4. 透射电镜观察观察SGC-7901细胞超微结构 柳叶蜡梅
提取物处理后，与对照组细胞相比出现了一系列变化，如：细胞
质出现很多空泡状结构，细胞核形状变得很不规则，核边集，
染色质凝集、边缘化，内质网扩张，其边上线粒体肿胀。
5. Hoechst33258/PI双染观察细胞核形态 柳叶蜡梅提取
物处理组细胞染色质凝聚，呈亮蓝色，细胞核裂解，产生凋亡
• 2422 • 中华中医药杂志(原中国医药学报)2011年10月第26卷第10期 CJTCMP , October 2011, Vol . 26, No. 10
小体PI能使死细胞DNA着染后荧光下呈现红色，处理组未出现
红色荧光。
讨论
胃癌是我国常见的恶性肿瘤，其病死率居各类恶性肿瘤之
首，对于进展期胃癌联合化疗是重要治疗手段，但疗效差，这
主要与化疗方案有密切关系[7]。中草药在肿瘤治疗中的作用日
益受到重视，植物中提取的成分越来越多用于肿瘤治疗实验研
究中[8]。
柳叶蜡梅是畲乡民间应用最广泛的草药之一，被应用于肠
胃不适等消化道疾病。但柳叶蜡梅是否对消化道肿瘤有药理作
用尚不明确，因此笔者进行了柳叶蜡梅提取物对肿瘤细胞体外
抑制实验的研究。研究结果显示，柳叶蜡梅提取物对SGC-7901
细胞具有明显的增殖抑制作用，在一定的浓度范围内呈现浓
度依赖性。柳叶蜡梅提取物作用于SGC-7901细胞24h的IC50为
0.5μg/mL，而40μg/mL白藜芦醇[9]作用于SGC-7901细胞24h
的抑制率为47.34%，50mg/mL的酸果蔓果实提取物[10]作用于
SGC-7901细胞48h的抑制率为41.65%。结果显示柳叶蜡梅提取
物在较低的浓度即可达到IC50，对SGC-7901细胞抑制作用显著。
目前研究认为细胞死亡方式主要有坏死、凋亡、胀亡和自
噬性死亡4种[11]，根据细胞药物处理前后细胞形态和超微结构特
征性改变是鉴别判断细胞死亡方式的一个重要指标。本实验光
镜、扫描电镜、透射电镜观察显示，SGC-7901细胞具有典型的肿
瘤细胞形态和超微结构特征，经柳叶蜡梅提取物处理后，细胞
间连接减少或消失、细胞表面微绒毛减少并出现发泡现象、出
现核边集和染色质凝集边缘化。Hoechst33258/PI双染色显示
细胞染色质凝聚，呈亮蓝色，细胞核裂解，有凋亡小体出现。提
示柳叶蜡梅提取物抑制SGC-7901细胞增殖可能与其诱导细胞
凋亡的作用相关。诱导肿瘤细胞凋亡是治疗肿瘤的一条有效途
径，通过进一步研究柳叶蜡梅提取物抑制细胞增殖的机制，为柳
叶蜡梅在肿瘤防治中的应用提供重要理论基础和实验依据。
参 考 文 献
[1] 张若蕙,沈湘林.蜡梅科的分类及地理分布与演化.北京林业
大学学报,1999,21(2):7
ZHANG Ruo-hui,SHEN Xiang-lin.Taxonomy Geographical
Distribution and Evolution of Calycanthaceae.Journal of Beijing
Forestry University,1999,21(2):7
[2] 中国植物志编辑委员会.中国植物志.北京:科学出版社,1979:1-10
Flora of China Editoral Board.Flora of China.Beijing:Science
Press,1979:1-10
[3] 刁军成,伍学洲,丁舸.山蜡梅叶消毒抑菌的实验研究.江西中
医药,2002,33(6):35
DIAO Jun-cheng,WU Xue-zhou,DING Ke.The study about
disinfection bacteriostasis of Chimonanthus.Jiangxi Journal of
TCM, 2002,33(6):35
[4] 李萍,何明.山腊梅感冒茶抑菌抗炎解热作用的实验研究.中
国中医药科技,1996,3(1):19
LI Ping,HE Ming.Effect of Chimonanthus on anti-inflammatory
ingredients.Chinese Journal of Traditional Medical Science and
Technology,1996,3(1):19
[5] 李晓宇,何明.山腊梅叶镇痛、镇咳、祛痰作用的实验研究.
中国中医药科技,1997,4(6):366
Li Xiao-yu,HE Ming.Effect of Chimonanthus on analgesia,antitussive
and eliminating phlegm.Chinese Journal of Traditional Medical
Science and Technology,1997,4(6):366
[6] 陈鹭颖,刘锡钧.山蜡梅对小鼠的减肥作用.海峡药学,
2002,14(5):30
CHEN Lu-ying,LIU Xi-jun.Effect of Chimonanthus Nitens
Oliv on reducing weight in mice.Strait Pharmaceutical Journal,
2002,14(5):30
[7] 潘洪明,费洪新,黄小义.紫杉醇与白藜芦醇联合应用对人胃
癌MGC803.中华中医药杂志,2008,23(9):815-817
PAN Hong-ming,FEI Hong-xin,HUANG Xiao-yi.Effect of
combination of paclitaxel and resveratrol on human gastric
carcinoma cell strain MGC803 in vitro. China Journal of TCM and
Pharmacy,2008,23(9):815-817
[8] Lee K H.Novel antitumor agents from higher plants.Med Res
Rev,1999,19(6):569-596
[9] 金松,辛国荣,孟繁石,等.白藜芦醇诱导人胃癌SGC-7901细胞
凋亡的研究.黑龙江医药科学,2009,32(4):4-5
JIN Song,XIN Guo-rong,MENG Fan-shi,et al.Resveratrol induction
of apoptosis in human cancer SGC-7901 research.Heilongjiang
Medicine and Pharmacy,2009,32(4):4-5
[10] Ming Liu,Luo-Qiang Lin,Bing-Bing Song,et al.Cranberry
Phytochemical Extract Inhibits SGC-7901 Cell Growth and
Human Tumor Xenografts in Balb/c nu/nu Mice.J Agric Food
Chem,2009,57:762-768
[11] 张秀娟,李秋实,季宇彬.细胞死亡方式研究进展.哈尔滨医药,
2007,27(6):48-50
ZHANG Xiu-juan,LI Qiu-shi,JI Yu-bin.The Development
of the concept of cell death and its enlightenment.Haerbin
Pharmaceutical Journal,2007,27(6):48-50
（收稿日期：2010年12月3日）