全 文 ：1 湖北省中医院(武汉 , 430074)
2 中南民族大学
■通讯作者　E-mail:sipp r1976@163.com
·实验研究·
江南牡丹草总生物碱对大白鼠佐剂关节炎继发肿胀
及血沉升高治疗作用的实验研究
卢振华1 　廖矛川2 　王丽君2■
[ 摘要] 　目的:研究江南牡丹草总生物碱对大白鼠佐剂关节炎的继发性病变的治疗效果。 方法:本实验采用建造大白鼠
佐剂关节炎模型的方法 ,观察不同浓度的药物对大白鼠佐剂关节炎继发病变的治疗作用 , 36 只大白鼠按性别随机分为高
剂量组(200mg/ kg)、低剂量组(100mg/ kg)和正常对照组(每组雌雄各半),测量大白鼠局部肢体的体积 , 并观察其一般情
况 ,观察各给药组对大白鼠佐剂关节炎的治疗效果;另取 108 只大白鼠分为正常对照组 、致炎组和高剂量组(200mg/ kg)用
于血沉测定 ,通过测定不同时期血沉的变化 , 间接反映药物的治疗效果。结果:江南牡丹草总生物碱对大白鼠佐剂关节炎
引起的继发性局部肢体肿胀有一定的消肿作用。江南牡丹草总生物碱高剂量组第 18 天 、第 24 天 、第 32 天对大白鼠的佐
剂关节炎继发性病变引起的肿胀有一定的治疗效果(与正常对照组相比 , P<0.05),并且其对大白鼠的一般情况没有明显
的异常影响 ,而江南牡丹草总生物碱低剂量组对于大白鼠佐剂关节炎的继发性病变未见明显作用(与正常对照组相比 , P
>0.05);致炎后血沉数值显著升高 ,而用药后血沉数值逐渐降低(与致炎组相比差异有统计学意义 P<0.05)。结论:江
南牡丹草总生物碱高剂量给予患佐剂关节炎的大白鼠 , 能够显著降低血沉及其肢体的继发性肿胀 , 对其继发性病变有一
定的治疗效果。
[ 关键词] 　江南牡丹草总生物碱;佐剂关节炎;继发肿胀;血沉检测
[ 中图分类号] 　R285.5　　[ 文献标识码] 　A　　[ 文章编号] 　1005-0205(2010)11-0004-03
Effect of Leontice Kiangnanensis Total Alkaloids on Swelling and
Erythrocyte Sedimentation Rate in Rats with Adjuvant Arthritis
LU Zhenhua1 　LIAO Maochuan2 　WANG Lijun2
1Hubei Hospital of T raditional Chine se Medicine , Wuhan 430074 , China
2South-central Univer sity fo r Nationalitie s , Wuhan 430074 , China
Abstract　Objective:To explo re the effect of Leontice kiangnanensis to tal alkaloids(LKTA)on adjuvant arthritis in ra ts.
Methods:After adjuvant arthritis mode ls w ere established , thirty-six rats are div ided into high dose g roup (200mg/ kg),
low dose g roup(100mg/kg), and no rmal contr ol g roup.Befo re obser ving gener al conditions and the trea tment effec t on ad-
juv ant a rthritis in each treatment g roup , we measured the vo lume of the local limb in rats.Ano ther 108 rats we re divided
into normal contr ol g roup , inf lammation-causing gr oup and high do se gr oup (200mg/ kg)fo r obser ving ery thro cy te sedi-
mentation rate(ESR)which can show the treatment effect of LKTA indirectly.Results:LKTA had cer tain detumescence
effect s on secondar y local limb swelling caused by adjuvant ar thritis in rats.High dose g roup o f LKTA presented cer tain
treatment effec t on sw elling caused by adjuvant a rthritis on the 18th , 24th , and 32th(compared w ith control g r oup , P<0.
05).Neve rtheless , there w as little to xicity on rat in general condition.H owever , low do se g roup o f LKTA showed little
treatment effect on swelling(compared with contro l g roup , P>0.05).The values of ES R incr ea sed obv iously after causing
inflammation , while decreased g radually af te r administr ation(compared w ith inflamma tion-causing g roup , P<0.05).Con-
clusion:High dose of LKTA is able to significantly reduce the va lue o f ES R and the secondary limb swelling.It has cer tain
treatment effect on secondary lesion in r ats w ith adjuvant ar thritis.
Key words　Leontice kiangnanensis to tal alkalo ids;Adjuvant ar thritis;Secondary sw elling;Erythro cyte sedimentation r ate
　　江南牡丹草(Leontice kiangnanensis),别名江南玄胡 , 主要
分布在浙江西北部和安徽皖南山区。民间草药 , 药用块茎 , 有
清热解毒 、活血化瘀功效;用于治疗跌打损伤 、骨折疼痛 、头痛 、
吐血 、外伤出血等症 , 疗效显著。我们从江南牡丹草块茎水溶
性生物碱中分离得到 15 个生物碱成分[ 1] 。本文研究江南牡丹
草乙醇提取物水溶部分的正丁醇萃取物总生物碱进行抗佐剂
关节炎及血沉升高治疗作用动物试验 , 结果表明江南牡丹草总
生物碱有明显的治疗作用 , 急性毒性试验表明小鼠腹腔注射江
南牡丹草总生物碱 LD50 为 1257±56 mg/kg , 毒性很小 , 现报
告如下。
4 Chines e J T rad Med T raum &Orthop , Nov 2010 , Vol 18 , No 11
1　材料与方法
1.1　实验材料
1.1.1　动物:健康成年Wister 大白鼠 144 只 , 雌雄各半 , (180
±30g),湖北省医学实验动物中心提供。
1.1.2　受试药物:江南牡丹草总生物碱(自制), 生物碱含量:
58%,配制方法:用时加水研磨 、摇匀成混悬液。
1.1.3　试剂:完全福氏佐剂 GIBCO Lot No.1012064。
1.2　肿胀率测定方法与过程
1.2.1　分组:选用体重在(180±30)g 的健康大白鼠 36 只 , 按
照每组雌雄各半的原则 ,随机地分为高剂量组 、低剂量组 、正常
对照组 ,每组 12 只大白鼠。
1.2.2　鼠足容积测定器以及测量鼠足的容积
(1)直径均为 14mm 的甲乙两测定管 ,在管口下 5mm 处的
同一平面各划 1 道线 L ,两管右侧同时接 1 个容积为 0.1ml的
细玻管。
(2)依次打开活塞 1 、活塞 3 , 再拧开活塞 2 , 使灌流瓶水上
升到甲乙两管刻度 L处 ,关闭活塞 2 和活塞3 ,打开活塞 4 ,调节
侧管液面为刻度 0 处。
(3)用记号笔在大白鼠的左右后肢踝关节周围做一标记 ,
测量每鼠的左右后肢正常足跖的容积 , 将大白鼠后肢浸入容器
甲 ,使标记与液面重叠 , 使得甲乙两管的液面都升高相同的高
度 ,关闭活塞 1 并取出鼠足 , 这时乙管液面升高的容量实际为
鼠足容积的一半 ,缓慢打开活塞 3 使乙管降低到刻度 L 处。此
时右侧的细玻管的液面刻度乘以 2 就是鼠足的容积 , 该天记录
作为实验的第 0d 的鼠足容积。
1.2.3　大白鼠佐剂关节炎模型的建立[ 2]
测量完正常鼠足容积后 , 用 0.25ml 的注射器准确吸取 0.
05ml的 F reund s 完全佐剂对每鼠右后足跖皮内注射以致炎 ,
可先自足跖中部皮下注射一部分 , 然后掉转针头向下注射完 ,
以建立起大白鼠佐剂关节炎的模型。
1.2.4　测量过程
致炎后第 19 天开始用药 ig 连续 2 周 , 其中高剂量组
100mg/ ml(200mg/kg), 低剂量组 100mg/ml (100mg/ kg), 正常
对照组为空白对照 ,给药途径为经口灌胃。观察江南牡丹草总
生物碱不同的剂量组对大白鼠佐剂关节炎继发性病变的影响 ,
记录各组第 0、2、4 、6 、9、12 、15、18、21 、24、32 天的鼠足容积 , 标
准饮食饮水 ,常规喂养 , 并观察测量大白鼠的体重 、进食情况等
一般情况。
1.2.5　实验指标和分析
1.2.5.1　肿胀度:
肿胀度=致炎后足跖容积-致炎前足跖容积。
1.2.5.2　肿胀率:
肿胀率=致炎后足跖容积-致炎前足跖容积致炎前足跖容积 ×100%。
1.2.5.3　肿胀抑制率:
肿胀抑制率=正常对照组平均肿胀率-给药组平均抑制率正常对照组平均肿胀率
　　　　　　　×100%。
1.3　血沉测定方法与过程
1.3.1　分组
选用体重在(180±30)g 的健康大白鼠 108 只 , 按照每组雌
雄各半的原则 , 随机的分为正常对照组 , 致炎模型组和给药组 ,
每组 36 只。
1.3.2　大白鼠佐剂关节炎模型的建立
用 0.25ml的注射器准确吸取 0.05ml的 Freund s 完全佐
剂对致炎模型组和给药组每鼠右后足跖皮内注射以致炎 ,建立
大白鼠佐剂关节炎动物模型 , 正常对照组用生理盐水同期注
射。
1.3.3　测定方法
诱导注射试剂前用魏氏法对大白鼠进行血沉检测 , 致炎后
第 19 天开始 ig 用药 100mg/ml(200mg/ kg)连续2 周 , 并在致炎
后第 24 天 ,第 32天 , 分别对正常对照组 , 致炎模型组和给药组
大白鼠进行血沉检测。测定方法为 , 经心脏取血后处死(每一
时间取大白鼠 36 只), 所获得血样用于做炎性反应指标红细胞
沉降率(ery throcy te sedimentation r ate , ESR ,血沉)测定。
1.4　统计学方法
数据以均数±标准差( x±SD)表示 ,统计分析用成组数值
资料的 t检验 ,显著性水平取α=0.05。
2　结果
2.1　正常对照组大白鼠佐剂关节炎的原发性病变引起的肿胀
在致炎后 48h 左右达到高峰 ,肿胀持续 3d 后逐渐下降 , 第 9 天
又再度肿胀;继发性病变在第 10 天左右出现 , 表现为对称性的
(包括左右后肢)和前足的肿胀 , 耳和尾部出现一些“关节炎”性
的小结节 , 实验各组均未见体重下降 , 并且摄食习惯未见明显
改变。
2.2　江南牡丹草总生物碱高剂量组对大白鼠佐剂关节炎急性
期病变未见有治疗作用 , 但是江南牡丹草的高剂量组对大白鼠
佐剂关节炎继发性病变有明显的治疗效果 ,如下表 1、图 1 和表
2 、图 2 所示 , 在致炎后的第 18 天 、第 32 天其右足的肿胀率为
37.50%和 48.93%,相应的其对肿胀的抑制率分别为 18.60%
和 15.05%,与正常对照组相比较差异有统计学意义(P <0.
05);在致炎后的第 24 天其左足的肿胀率为 20.33%, 并且其对
肿胀的抑制率为 18.60%, 与正常对照组相比较差异有统计学
意义(P<0.05);江南牡丹草总生物碱低剂量组对大白鼠佐剂
关节炎继发性病变有一定的治疗效果 , 但其与正常对照组相比
较差异无统计学意义(P>0.05)。
表 1　大白鼠佐剂关节炎右足肿胀率
剂量组 动物数 致炎后不同时间肿胀率(%)
2d 6d 9d 12d 18d 21d 24d 32d
高剂量组 12 1.58±7.23 34.28±7.68 39.25±10.20 37.63±6.48 37.57±10.83＊ 45.24±12.44 48.90±11.53 9.10±9.71＊
低剂量组 12 44.02±8.24 35.98±7.42 36.13±8.51 39.04±9.12 1.38±11.28 46.44±9.05 53.46±8.78 58.59±9.04
正常对照组 12 39.03±8.04 33.87±8.64 39.11±11.42 7.82±8.03 46.12±10.71 50.27±12.30 52.80±9.61 57.68±12.13
　　＊与正常对照组相比差异有统计学意义 , P<0.05。
5中国中医骨伤科杂志 2010年 11月第 18卷第 11期
表 2　大白鼠佐剂关节炎左足肿胀率
剂量组 动物数 致炎后不同时间肿胀率(%)
2d 6d 9d 12d 18d 21d 24d 32d
高剂量组 12 11.29±13.42 16.42±9.65 7.29±10.59 13.04±9.44 20.68±10.44 16.71±10.03 20.17±12.88＊ 22.80±13.37
低剂量组 12 8.50±7.06 8.83±7.94 4.29±9.78 13.65±10.77 11.15±14.24 18.82±14.70 24.61±11.10 28.06±15.81
正常对照组 12 2.36±4.79 11.23±6.88 16.25±6.08 18.54±9.61 18.91±6.26 22.05±13.13 32.18±10.62 31.37±11.38
　　＊与正常对照组相比差异有统计学意义 , P<0.05。
表 3　大白鼠血沉(ESR)水平变化(mm/第 1h末)
血沉(ESR) 动物数 致炎前 致炎后 15天 给药后 32天
正常对照组
致炎组
高剂量组
12
12
12
0.82±0.49
0.89±0.52
0.86±0.47
0.85±0.17
13.74±0.33#
9.13±0.23＊
0.92±0.19
11.73±0.38#
5.63±0.35＊
　　#与正常对照组相比差异有统计学意义 P<0.001 , ＊与致炎组相比差异有统计学意义 , P<0.05。
图 1　大白鼠佐剂关节炎右足肿胀度
图 2　大白鼠佐剂关节炎左足肿胀度
2.3　大白鼠血沉变化:血沉是一个观察滑膜炎性反应活动性
和严重性的指标。不同时期大白鼠血沉变化情况见表三。在
诱导注射后 ,大白鼠处于急性免疫反应期 ,血沉数值增大 , 与正
常对照组比较 , P<0.001 , 差异有统计学意义;ig 江南牡丹草
总生物碱后 ,实验测定的血沉数值明显下降 , P<0.05 ,但仍高
于正常组 ,说明江南牡丹草总生物碱对降低血沉有治疗作用。
3　讨论
类风湿性关节炎(Rheumatoid A r thritis , RA)[ 3]是一种常见
的以关节疼痛 、肿胀 、僵直 、变形为主要表现的慢性全身性自身
免疫性疾病。其基本病变是滑膜的慢性炎症和破坏软骨﹑骨
与周围组织的侵袭性血管翳的形成。我国人口的患病率为
0.32%～ 0.34%,该病是造成我国人群丧失劳动力和致残的主
要原因之一。该病的病因不明 , 目前临床上尚未有根本治疗本
病的方案和预防本病的措施 , 本病的治疗方法多以药物治疗为
主 , 抗类风湿药物分为改善症状的抗风湿药和控制疾病的抗风
湿药 , 但后一种药物目前尚在研究阶段。
大白鼠佐剂关节炎是一种免疫性炎症模型 , 其组织学特点
包括滑膜增生 、单核细胞浸润 、关节软骨和骨组织破坏 , 与人类
RA 十分相似 , 常用来作为筛选抗风湿药物的动物模型。大白
鼠佐剂关节炎足肿胀分为原发性和继发性两种 , 前者主要为炎
性反应 , 而后者由免疫功能紊乱所致[4] 。血沉是一个观察滑膜
炎性反应活动性和严重性的指标。 本实验旨在利用大白鼠佐
剂关节炎模型进行筛选抗风湿的治疗药物 ,以寻求一种能够对
人类类风湿关节炎有治疗效果的药物。 结果表明江南牡丹草
总生物碱低剂量对大白鼠佐剂关节炎引起的继发性病变具有
一定的治疗效果 , 而江南牡丹草总生物碱高剂量对于大白鼠佐
剂关节炎继发性病变有较好的治疗效果 , 能够降低佐剂关节炎
大白鼠的血沉 , 并且其对大白鼠的体重等一般情况未见异常影
响 , 有可能成为治疗人类类风湿关节炎的一种药物 , 其对人类
的类风湿性关节炎的治疗作用以及其可能所致毒理作用有待
进一步深入研究。
参考文献
[ 1] 　廖矛川 ,王有为.肖培根.江南牡丹草的化学成分研究[ J] .武汉植
物学研究 , 2001 , 19(6):513-516.
[ 2] 　徐叔云 ,卞如濂 ,陈修.药理使用方法学[ M] .3 版.北京:人民卫生
出版社 , 2002:905-934.
[ 3] 　柴可夫.类风湿性关节炎[M ] .北京:科学技术文献出版社, 2000:
9-89.
[ 4] 　金涌 ,李俊 ,张运芳 ,等.阿克他利对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用
及部分机制研究[ J] .中国药理学通报 , 2000;16(6):678-681.
(收稿日期:2010-06-17)
6 Chines e J T rad Med T raum &Orthop , Nov 2010 , Vol 18 , No 11