全 文 ：大理学院学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第14卷 第8期 2015年8月
Vol.14 No.8 Aug. 2015
［DOI］10. 3969 / j. issn. 1672-2345. 2015. 08. 005
漾濞泡核桃（Juglans sigillata）别名漾濞核桃、
茶核桃、铁核桃，主要分布于云南、贵州、四川西部、
西藏及雅鲁藏布江下游等地〔1〕。《中药大辞典》中记
载核桃楸皮和核桃楸果具有清热、解毒、明目和止
痛等功效〔2〕。药理活性研究表明胡桃楸的不同部
位，包括茎枝、皮、根、叶和核桃青皮的提取物均具
有抗肿瘤作用〔3-6〕。而对于核桃成熟果实内皮（核桃
壳）的抗肿瘤作用研究较少。云南省大理州漾濞县
为核桃之乡，大量种植泡核桃。在核桃仁的深加工
中，被废弃的核桃壳大部分被用作农户燃料，造成
了资源的极大浪费。本研究观察了泡核桃壳提取
组分对 3株肿瘤细胞的抑制作用，从而为今后泡核
桃壳药用价值的开发提供理论依据。
1 实验材料
1.1 材料
1.1.1 药品与试剂 RPMI-1640、新生牛血清、
MTT、PBS购于 Beijing solarbio science & technology
co. ltd；顺铂（Cisplatin，DDP）购自云南生物谷灯盏
花药业有限公司；青霉素、链霉素购自河南新乡华
星药厂；二甲基噻唑二苯基四唑溴盐为Amresco公
司生产。
1.1.2 细胞株 人卵巢癌细胞 SKOV-3、人肝癌细
胞HepG-2、人胃癌细胞MGC-803均由中国科学院
昆明动物研究所提供。
1.2 仪器 BB16UV/BB5060UV型CO2培养箱为德
国Heraeus公司生产；IX-7型倒置相差显微镜为日
本Olympus公司生产；IX-31型光学生物显微镜为
日本 Olympus公司生产；连续波长酶标仪为 BIO-
Tek公司生产；METFLERAE240型电子分析天平为
梅特勒—托利多仪器（上海）有限公司生产；1.0R型
低温高速离心机为德国Heraeus公司生产。
2 方法
2.1 抗肿瘤活性成分的分离提取 泡核桃壳经
10%NaOH浸泡24 h后，用冰醋酸调pH为中性，加2、
4、6倍乙醇沉淀得到HTKD（D）、HTKE（E）、HTKF（F）
提取物，所占生药百分率分别为7.55%、3.34%和1.32%，
精密称取D、E、F组分，用无血清培养基RPMI-1640
配制成浓度为 300 µg/mL的原液，0.2 µm微孔滤膜过
滤除菌，再倍比稀释成150、75、37.5、18.75 µg/mL药
液待用。
2.2 阳性对照药物的配制 阳性药选用DDP，取
1 mg/mL的DDP溶于无血清的RPMI-1640中，5倍
稀释，终浓度分别为 50、10、2、0.4 µg/mL。
2.3 体外细胞的培养 SKOV-3、HepG-2和MGC-
803均用含 10%灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基
泡核桃壳提取物体外抗肿瘤作用研究
刘成娇，夏盟恺，李 杨，王 莹*
（大理学院药学与化学学院，云南大理 671000）
［摘要］目的：研究泡核桃壳提取物对3株人癌细胞SKOV-3、HepG-2和MGC-803的体外抑制作用。方法：用碱提醇沉法分离
提取核桃壳中抗肿瘤活性有效部位，得到3个组分HTKD（D）、HTKE（E）和HTKF（F），应用改良MTT法测定对人癌细胞的抑制
作用。结果：在高浓度组分E对3株癌细胞的抑制作用均最明显且呈剂量依赖关系，对3株癌细胞半数抑制浓度（IC50）值也最
小。结论：泡核桃壳提取物对体外培养的肿瘤细胞有抑制作用，药效物质主要存在于组分E中。
［关键词］泡核桃壳；抗肿瘤作用；MTT法
［中图分类号］R285.5 ［文献标志码］A ［文章编号］1672-2345（2015）08-0015-03
［收稿日期］2014-09-03 ［修回日期］2014-11-20
［作者简介］刘成娇，2011级药物制剂专业本科生 .
*通信作者：王莹，讲师.
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大理学院学报总第140期 医学
在 37 ℃、5%CO2条件下培养，取对数生长期细胞用
于实验。
2.4 改良MTT法测3种不同提取物对癌细胞的影响
取对数生长期的肿瘤细胞（SKOV- 3、HepG- 2、
MGC-803），将贴壁细胞浓度调整为6×104个/mL，以
90 µL /孔种入96孔培养板中。同时设立空白组、阴
性对照组及阳性对照组（DDP），每组至少设 5个复
孔。置于 37 ℃、5%CO2培养箱中培养 24 h，受试组
分别加入10 µL不同浓度的样品。加药后将96孔板
置 37 ℃、5%CO2培养箱中培养 24 h后，弃培养液，
PBS洗板 3次，再加 90 µL含 5%血清RPMI-1640培
养液，同时每孔加 10 µL浓度为5 mg /mL的MTT，继
续培养4 h后，弃去培养液，每孔加100 µL DMSO溶
解，570 nm波长下测定吸光度值（OD）。
2.5 数据处理 计算核桃壳 3个组分在不同测试
浓度下OD值的均数及标准差，并用下述公式计算
细胞的抑制率。细胞抑制率 =（对照组OD值－给
药组OD值）/对照组OD值×100%，细胞的半数抑制
浓度（IC50）值由GWBASIC软件计算得到。SPSS分
析量效相关系数。
3 结果
3.1 核桃壳提取物对 3株肿瘤细胞作用 24 h时的
半数抑制浓度 与阳性对照药顺铂相比较，核桃壳
提取物 D、E、F对肿瘤细胞 SKOV-3、HepG-2 和
MGC-803均有一定的抑制作用，但作用较弱，IC50值
均远远大于阳性药，差异有统计学意义（P＜0.01），
其中提取物D对HepG-2的作用呈双向性，因而未
能求得 IC50值。在 3个组分中核桃壳提取物 E对 3
株肿瘤细胞的 IC50值均最小。见表1。
表1 核桃壳提取物D、E、F对3株肿瘤细胞作用
24 h时的 IC50（ xˉ ± s）
提取物
DDP
HTKD
HTKE
HTKF
4.727 ± 0.675
219.712 ± 32.342**
147.520 ± 20.336**
427.881 ± 60.465**
SKOV-3
IC50
HepG-2
1.972 ± 0.295
—
227.163 ± 32.691**
342.622 ± 59.747**
MGC-803
1.611± 0.207
203.119 ± 42.308**
125.175 ± 35.200**
175.247 ± 23.196**
注：与对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
3.2 核桃壳提取物对 3株人癌细胞作用的量效关
系分析 图 1~3显示了各组分抑瘤作用的量效关
系。作用24 h后，各组分对肿瘤细胞的抑制作用均
呈现出良好的剂量依赖性（除了组分D对HepG-2
的作用），量效相关系数见表 2；随着组分D、E、F浓
度的增加，抑制率亦增加。在高浓度（300 µg / mL）
下，组分E对 3株癌细胞的抑制作用优于D和F，对
癌细胞的抑制率超过 60%。见图 1～3。组分D在
较低浓度对肝癌细胞HepG-2不仅没有抑制作用，
反而表现出促进细胞生长的作用，浓度在75 µg / mL
时其促生长作用最明显。
表2 核桃壳提取物对3株人癌细胞作用的
量效相关系数
提取物
DDP
HTKD
HTKE
HTKF
SKOV-3
0.970
0.878
0.923
0.956
r
HepG-2
0.978
—
0.997
0.982
MGC-803
0.993
0.997
0.991
0.988
抑
制
率
/%
浓度/（µg/mL）
图1 核桃壳提取物D、E和F对
SKOV-3细胞增殖的抑制作用
抑
制
率
/%
浓度/（µg/mL）
图2 核桃壳提取物D、E和F对
HepG-2细胞增殖的抑制作用
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总第140期 第14卷刘成娇，夏盟恺，李 杨，等 泡核桃壳提取物体外抗肿瘤作用研究
抑
制
率
/%
浓度/（µg/mL）
图3 核桃壳提取物D、E和F对
MGC-803细胞增殖的抑制作用
4 结论
实验结果表明，从泡核桃壳中提取得到的 3个
组分对于不同癌细胞体外增殖均有一定抑制作用，
但作用明显弱于阳性对照药顺铂，这可能是由于供
试药品均是天然植物药的粗提物，有效成分含量较
少所致，另外从组分D对HepG-2的双向作用来看，
也可能因为供试药品中抑制和促进肿瘤生长的物
质混合存在，因而影响了作用效果。其中组分E对
3种癌细胞体外抑制作用较D和F强。E在高浓度
（300 µg/mL）时，对3株人卵巢癌细胞SKOV-3、肝癌
细胞HepG-2和人胃癌细胞MGC-803的抑制率分
别达到了 61.83%、62.83%和 81.47%，组分 E的 IC50
值也均小于D和F，提示主要药效物质可能存在于
组分E中。
提取物D对HepG-2的作用呈双向性，高浓度
（300 µg/mL）具有抑制作用，当浓度小于 150 µg/mL
时又表现出促进肿瘤生长的作用，周孟清等〔6〕也发
现，核桃壳提取物小剂量对小鼠免疫功能有促进
作用，大剂量作用反而不明显。这可能是因为天
然植物药药效物质复杂、存在某些药效作用相反
的成分所致。天然植物药的研究与开发，在资源、
能源危机已日益突出的今天，具有广阔的前景和
深远的意义。本实验对泡核桃壳的抗癌作用进行
初步研究，为其在药效价值的开发利用上奠定实
验基础。
［参考文献］
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1527-1528.
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辅助提取及初步小鼠试验〔J〕.饲料工业，2013，34（21）:
20-23.
（责任编辑 毛本勇）
In Vitro Anti-tumor Effects of Extracts from Juglans sigillata Shell
Liu Chengjiao, Xia Mengkai, Li Yang, Wang Ying*
（College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China）
〔Abstract〕Objective: To study the anti- tumor effect of Juglans sigillata shell extracts on three human tumor cell lines including
SKOV- 3, HepG- 2 and MGC- 803 in vitro. Methods: Alkali extraction and alcohol precipitation were employed to extract the
antitumor activity of effective components HTKD（D）, HTKE（E）and HTKF（F）from Juglans sigillata shell and observe the inhibitory
effects with MTT assays. Results: At highest concentration component E could obviously inhibit the growth of three human tumor cells
with dose-dependence. In addition, component E inhibited the three tumor cell lines with minimal the median inhibitory concentration
（IC50）. Conclusion: The extract of Juglans sigillata shell showed anti-tumor effects and pharmacodynamic material mainly exist in the
component E.
〔Key words〕Juglans sigillata shell; anti-tumor effect; method of MTT
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