全 文 ：增刊 河北林业科技 珍 年 月
盐桦种子无菌萌发及快速繁殖研究
朱建峰 , 管稚义 , 衷惠贞 , 黄军生 , 刘朝华
河北农业大学林学院 , 河北 保定 河北省林木种苗管理站 ,河北 石家庄 洲拍
河北省林业示范场 , 河北 易县 加
摘要 以盐桦 山 肠娜 ` 坛 种子为外植体 , 探讨不同植物激素以 、 一 、 和 对种子萌发 、试管苗增殖
以及植株再生的影响 ,建立了一套盐桦离体培养技术体系。 试验结果表明 启动最适培养方法为 腼泌 溶液浸泡盐
桦种子 再转至 岛培养基培养 增殖最适培养基为 一 创 口 生根最适培养基
岁 在此体系中分化率可达 加 ,增殖系数达 , 生根率 。
关键词 二盐桦 种子 组织培养 快速繁殖
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 以拍 印闷 幻 魂
盐桦 `山 石` 叩人如 系桦木科植物川 , 为新疆特有
种 , 现已很难见到冈 , 被列为 级保护种 , 可以定性描述为
珍贵濒危植物日 , 系落叶小乔木或直立大灌木 ,高 礴 , 属
于中性树种 ,喜光 、喜土壤潮湿 、耐盐碱 、耐寒 ,是盐碱地造
林的好树种 , 同时也是生物工程上提取耐盐碱基因的好材
料 。但该树一般用种子繁殖 , 为湿地的指示灌木 , 由于种源
稀少 ,扦插成活率低 ,不能大量育苗 , 因川比孟用组培技术进
行快繁育苗 , 对于保护 、扩繁和进一步研究盐桦这一濒危物
种具有重要意义。 目前盐桦组织培养方面的研究主要以茎
段为外植体阅 , 但盐桦当年生枝条上密布许多短而密的白
色柔毛及黄色的树脂腺体 , 常规消毒灭菌方法视准获得无
菌材料均 。 因此 , 试验通过对盐桦种子进行消毒并培养获得
无菌苗 ,并针对种子苗的增殖和生根进行了系统的研究 。
材料和方法
材料
无病虫害饱满均一的盐桦种子。
方法
盐桦种子的预处理 用以 溶液 设 组浓度 , 。、
和 , 浸泡处理
外植体的表面灭菌及培养条件 用 的乙醇浸
泡 一 ,无菌水冲洗 次 , 口荡的 消毒液浸泡 肠吐
后用无菌水冲洗 一 次 , 无菌建纸吸干 , 接种在 岛培养
基上 ,先暗培养 , 再在光下培养 , 于接种后 统计萌
发率及污染率 。
种子苗茎段增殖培养 以 为基本培养基 , 添加
不同浓度的 、 和 从 组成 种培养基 , 每种培
养基接种 瓶 , 每瓶接 个外植体 , 后统计分化率及
增殖系数 , 观察材料生长状况 。
生根培养 切取高 门 的盐桦组培苗茎段作为
试材 , 以 伦 为基本培养基 , 添加不同浓度的 和
组成 种培养基 , 每种培养基接种 瓶 , 每瓶接
个外植体 , 后统计生根情况 , 观察材料状态 。
培养条件 试验以 和 左 为基本培养基 ,
培养基含 蔗糖 , 琼脂 几 培养含 蔗
糖 , 琼脂 , 为 , 培养室温度 一 ℃ , 光照度
粼 以 , 光照周期 。
结果和分析
启动培养
在培养过程中可以发现 , 以盐桦种子为外植体进行消
毒处理 , 培养过程中污染得到了很好的控制 , 但种子的萌
芽率极低 。 由表 可知 ,未进行 处理的种子 ,未见萌发
现象 ,经过以 预处理的盐桦种子萌发率也很低 ,分别为
和 , 这说明以处理对种子萌发率有一定的影响 ,
萌发出的种子苗长势很好 , 苗粗壮叶色翠绿 , 但不同的
衰 预处理对萌发的影晌
处理号 接种 污染率 萌发 苗高了口 少 种子数 率 长 势一
粗壮 、叶色翠绿
粗壮、 叶色翠绿
佗︸`
收稿日期 以为刁 一
注 刘朝华为通讯作者
DOI :10.16449/j.cnki .issn1002-3356.2009.s1.030
增刊 河北林业科技 年 月
处理浓度对萌发苗的长势影响无明显差异 。
增殖培养
在 凡培养基中培养数代后 , 获得一定量的不定芽 ,
切取生长一致 、高度约 的茎段分别接人培养基 一
中进行继代增殖培养 , 后统计分化率及增殖系数 , 观
察材料生长状况 ,结果见表 。 由 一 、 一 号培养基相
比可知 , 不同浓度的 一 与 和 一 与 的组
合均能诱导盐桦茎段的分化 且诱导率均较高 ,但 一
与 的组合增殖系数较高, 分化出的芽长势粗壮翠绿 ,
很少发生玻璃化和顶部叶片枯死的现象 企 与 的
组合增值系数明显降低 , 茎段愈伤化严重 ,新分化出的芽节
间缩短 ,玻璃化和顶部叶片枯死的现象较为普遍 。因此 ,盐
桦种子苗茎段增殖的最适培养基为 号培养基
动比 睡 ,分化率 以踢 ,增殖系数可达
表 培养基中添加不同浓度的激素组合对丛生芽诱导的影响
朴一”培养基编号
“ 州七吨 · 吨 ·口 率肠
增殖系
如倍 材 料 状 态
的
肠
叻
砧
印
出现轻徽玻璃化现象 , 部分顶部叶片呈现红揭色并有枯死现象发生
分化现象明显 , 新分化出的芽粗壮, 少数顶部发生枯死现象
分化现象明显 , 节间伸长受到明显抑制 , 顶部叶片红揭色现象严重
出现轻徽玻璃化现象 , 部分顶部叶片呈现红褐色并有枯死现象发生
分化现象明显 ,少数顶部叶片呈现红揭色
分化现象明显 , 节间伸长受到明显抑制 , 顶部叶片红褐色现象严重
茎基部出现大量愈伤 , 分化现象明显 , 节间伸长受到明显抑制 ,有玻璃化现象发生
茎基部长出大盘愈伤 ,分化受到明显抑制 部分上部叶片呈红褐色, 并伴有枯死现象发生
分化现象受到明显抑制 ,玻璃化现象严重 ,节间伸长受到明显抑制
基部出现愈伤量较大 分化出的芽点细弱 ,有轻微玻璃化现象
基部长出大量愈伤,分化现象受到明显抑制 , 部分上部叶片呈红揭色, 并伴有枯死现象发生
分化现象受到明显抑制 ,新分化出的小芽细弱 ,整个外植体愈伤化严重
相比可知 , 在加有 和 的 口 培养基中培养均
可诱导不定芽生根 ,且生根率均较高 。 从与 诱导生
根的方式有所不同 ,在加有 的培养基中 , 茎基部稍显
膨大后便可出现根的分化 , 且一条主根长出后 , 在主根上多
发须根 在加有 的培养基中 , 茎基部先长出一定量的
愈伤 , 再在愈伤上长出根 , 且根有愈伤化现象 ,易于脱落 。
”幼户眨站肠吐
舫
爵一。知
,几,`且﹃几口
圈 盐桦在增殖培养基中的生长情况
生才民涪养
切取高 一 、 生长一致的继代无菌芽作为试材 ,接
种于生根培养基 巧 中进行生根培养 , 后统计生根情
况 ,观察材料状态 ,结果见表 。 由 一 号 、 巧号培养基 圈 盐桦在生根培养基中生根情况
衰 不同激素配比对盐桦无菌苗生根的影响
培养荃
编号
压 根长
· 吨 ·
生根率
肠
根条
如条 口 生根及组培苗生长情况
苗高 。左右 , 根色发白, 须根少
苗高 左右 根色发白, 在主根上出现少盆须根 ,并伴有腋芽菌发现象
苗高 二左右 , 根部略显黄色粗壮 ,并于主根上多发须根
苗高 左右 , 根基部长出少最愈伤或不长愈伤便可有根的分化 少数主根上长出须根
苗高 左右服基部长出封蚀枷怀长愈洲断隋捌尔讹 主根上多有须根长出,有澎瀚却形眯性
苗高 ,腋芽萌发现象普遍 ,根墓部发根数多且短 , 无明显主很
…目压由盆`二几
犯”乃咖阴明丝似舫,几臼
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· ·
增刊 河北林业科技 仪 年 月
小五台山褐马鸡人工授精的研究
庞新博 , 刘文新 , 马建昭
河北省林业示范场 , 河北 易县 河北小五台国家级自然保护区管理局 , 河北 张家 口
河北神鹿园林有限公司 , 河北 石家庄
摘要 不同年龄褐马鸡的平均产精全差异显著 , 同一年龄在不同繁殖时期的射精量亦存在较大变化 。 褐马鸡的最佳
采精频率为 加日。 成体褐马鸡的产精持续时间为 土
关键词 小五台山 揭马鸡 人工授精
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 刁 幻 刁
, 材料和方法
研究对象
小五台山杨家坪饲养场饲养的所有成体褐马鸡。
研究方法
采精方法为改进后的腹背按摩法 将雄鸟固定在特制
人工授精操作台上 ,按摩 、采精 再将雌鸟固定在操作台
上 , 按摩使泄殖腔周围肌肉放松并张开 ,进行阴道输精。 人
工授精的工具有 塑料注射器 、 塑料细管和套
管 、 不锈钢输精枪 、 褐马鸡人工授精操作台。
结果与分析
人工采精
收稿日期 一 一
射精量 加 一 以拓 年 , 每周 次对褐马鸡进行人
工采精 , 平均成功率为 , 褐马鸡的平均射精盈为
。 对平均射精童的研究表明 ,不同年龄的褐马鸡的平
均射精量存在差异 图 。 岁 褐马鸡尚未性成熟 ,
射精量为 岁 拼 个体的平均射精量偏低 , 与
, , , 和 岁个体的每次射精量差异显著 ,这
与其性腺尚未充分发育有关 行为学研究也发现 , 岁雄
性个体繁殖期求偶炫扭行为发生频率较低。 岁和 岁
雄性褐马鸡可能与年龄偏大 、 繁殖机能退化有关 ,射精最
亦偏低。 一 岁的雄性褐马鸡产精量高 ,繁殖行为明显 。 根
据射精量可估计雄性揭马鸡在 岁时基本性成熟 , 岁时
完全性成熟 , 岁以后生殖能力下降 , 一 岁为雄性褐马
鸡的繁殖高峰期 。
因此 , 盐桦最适宜的生根培养基为 瓜 叭 , 生
根率可达 , 生根条数可达 条 。
讨论与结论
建立了适宜盐桦种子无菌培养与快速繁殖体系 , 即启
动培养为种子 泌 溶液浸泡预处理 , 常规消
毒后接种于 培养基上 , 增殖培养基为 一
。动诀 泌 , 生根培养基为 几 泌 , 此体
系的建立 , 为这一品种的规模化育苗莫定了技术基础 。
试验过程中发现 , 盐桦种子的发芽率极低 , 这与王颖
等对白桦种子的研究所得结果一致 ,盐桦种子在经过
溶液浸泡预处理后 , 萌发率最高也仅达到了 , 这可能
与盐桦的濒危机理有一定的关系 , 种子的低发芽率在一定
程度上造成了盐桦的濒危。
在盐桦的增殖培养中 , 茎基部会产生一定量的愈伤 ,
盐桦是以愈伤分化形成丛生芽的方式进行增殖的 , 这与梅
新娣等网的研究有所不同 ,其研究结果为盐桦主要以腋芽萌
发形式进行增殖 ,造成结果不同的原因可有留是, 由种子萌发获
得的无菌苗茎段幼化程度较高 , 因此具有较强的分化再生能
力 。这一增殖途径增值系数可达 , 对于加快盐桦的快繁
·
较为有利 ,同时在组培苗培养过程中有可能发现变异植株。
在盐桦的组培过程中可以发现 ,盐桦无菌苗的上部容
易发生叶片呈红褐色的现象 ,进而枯死 ,此现象其它盐桦
组培文献未见报道 , 原因和解决办法有待进一步研究。
参 考 文 献
【冯续 , 严成 , 尹林克新疆植物特有种及其分布 〔 西北植物学
报 , 仪抖 , 一
〔 张立运 , 潘伯荣新扭植物资源评价及其利用 【 干早区地理 ,
,
【 陶玲 , 李新荣 , 刘新民 , 等 中国珍稀濒危荒淇植物保护等级的
定量研究 林业科学 , , 一
【 梅新娣 , 张富春 , 曾幼龄 濒危植物盐择的组织培养及快速萦
殖【 植物生理学通讯 以抖 ,
〔 梅新娣 , 张富春盐桦无菌材料的成功获得及其试管苗移栽定
植成活的方法〔 生物技术 , 以场 , 一
【 王颖 , 李运海 , 杨敏生 , 等 翻系元素对白桦种子萌发效应的形
响 东北林业大学学报 , , 一 刁
【 梅新娣 , 张富春 , 王波濒危植物盐桦离体组织培养特性的研
究 〕生物技术 , 巧 , 一