全 文 ：HPLC法测定云南红药中
人参皂苷 Rg1 的含量
云南省药品检验所　昆明　650011
郭永利　孟 芹
　　云南红药片及胶囊 2 种剂型 , 均由三七 、 重
楼 、西南黄芩 、 制黄草乌等 10味中药组成 , 具有
止血镇痛 , 活血散瘀 , 祛风除湿等功效 。其中云南
红药胶囊已收载入部颁标准[ 1] , 但无含量测定项 。
由于本方药味较多 , 相互干扰严重 , 现有文献报道
的方法难以直接采用[ 2 , 3] 。本实验选择了主药三
七 , 采用高效液相色谱法测定了云南红药中人参皂
苷 Rg1 的含量 , 为该制剂的质量控制提供了快速准
确的测定方法。
1　仪器和试药
HP 1100 系列色谱仪;人参皂苷 Rg1 对照品
(供含量测定用)由中国药品生物制品检定所提供 ,
批号 0703-9812;乙腈为色谱纯 , 其它试剂均为分
析纯;云南红药片 (每片 0.3 g)和胶囊 (每粒
0.25 g)由云南植物药业有限公司提供 。
2　色谱条件与系统适用性实验
Spherisorb C8 色谱柱 (4.6 mm ×200 mm , 5
μm), 流动相:乙腈-水 (22∶88);流速:1.00 mL
·min-1;柱温:40 ℃;检测波长:203 nm。在此条
件下样品中的人参皂苷 Rg1与其它杂质峰均能达到
基线分离 。对照品及片剂和阴性实验的色谱图见图
1。
图 1　样品 (A)、 对照品(B)与阴性样品 (C)色谱图
Fig 1　HPLC chromatograms of Yunnan Hongyao tablets (A),
chemical reference substance (B)and Blank (C)
1.人参皂苷 Rg1 (ginsenoside Rg1)
3　供试品溶液和对照品溶液的制备
3.1　对照品溶液的制备　精密称取人参皂苷 Rg1
对照品适量 , 用甲醇制成每 1 mL 含人参皂苷 Rg1
0.25 mg的溶液 , 即得 。
3.2　供试品溶液的制备 　取本品 20片 , 精密称
定 , 研细 , 精密取细粉 2 g , 加乙醚 50 mL , 浸泡 1
h , 超声处理 5 min , 过滤 , 弃去乙醚液 , 药渣挥干
溶剂 。精密加入正丁醇 50 mL , 称重 , 放置过夜 ,
超声处理 20 min , 放冷 , 补足重量 , 混匀 , 滤过 ,
精密量取续滤液 25 mL 于 250 mL分液漏斗中 , 用
氨试液洗 2次 , 每次 20 mL , 放置分层 , 分取正丁
醇液置水浴上蒸干 , 残渣用甲醇溶解并转移至 5
mL量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 微孔滤膜 (0.5
μm)过滤 , 取滤液即为供试品溶液。
4　线性关系考察
精密称取人参皂苷 Rg1 对照品适量 , 加甲醇制
成 0.25 mg·mL-1的溶液 , 依法进样 5 , 10 , 15 ,
20 , 25 , 30 , 35 , 40 , 45 , 50μL , 测定其峰面积积
分值 , 以对照品进样量 (μg)为横坐标 , 以其峰面
积积分值为纵坐标 , 线性回归方程为:
Y =446.19+185.49X 　r=0.999 7
线性范围为 2.5 ～ 9.5μg 。
5　精密度试验
取同一批供试品溶液重复进样 5次 , 测定峰面
积积分值 , 结果 RSD为 0.74%(n=5)。
6　重现性和稳定性试验
取同一批样品 , 平行操作 6次 , 结果每片平均
含量为 0.276 mg , RSD=1.6%(n =6)。取上述供
试品溶液在室温下放置 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 24 h后测
定 , 峰面积积分值的 RSD=1.7%(n=6), 说明供
试品溶液在配制好后 24 h内测定 , 结果稳定 。
7　回收率试验
精密称取已测知含量的云南红药片细粉 1.2 g ,
分别精密加入人参皂苷 Rg1 对照品 4.04 mg , 同法
操作 , 制备供试溶液并测定。平均回收率为
98.79%, RSD为 2.0%, n=5。
8　样品测定
按本法测定了 10 批片剂 , 含量 (n=2)分别
为每 片 0.23 , 0.28 , 0.27 , 0.76 , 0.28 , 0.61 ,
0.53 , 0.38 , 0.33 , 0.35 mg 。
9　讨论
9.1　本实验样品处理采用了多种提取方法:(1)
用正丁醇提取 , 然后通过 D101大孔树脂吸附 , 用
70%乙醇洗脱;(2)用乙醚除脂溶性杂质后 , 再用
正丁醇提取 , 然后通过 D101大孔树脂吸附 , 用 70%
乙醇洗脱;(3)用乙醚提取后 , 再用正丁醇提取 ,
然后用碱或氨试液洗。经比较最后确定采用第 3种
·58· 药物分析杂志
DOI :10.16155/j.0254-1793.2001.01.025
方法提取。杂质峰干扰最小 , 人参皂苷 Rg1峰达到
基线分离 。
9.2　按样品含量测定项下对云南红药片 1批样品
分别超声提取 10 , 15 , 20 , 25 , 30 min后测定 , 结
果表明样品可在 20 min后提取完全 。
9.3　本法应用于云南红药胶囊中人参皂苷 Rg1 的
含量测定 , 结果 3批样品含量 (n =2)分别为每
粒1.22 , 1.06 , 0.95 mg 。
参考文献
1 　Drug Specifications Promulgated by the Ministry of Public Health , P R
China (卫生部药品标准).WS3-B-2844-98.26
2 　Drug Specifications Promulgated by the Ministry of Public Health , Chi-
na (卫生部药品标准).WS3-B-3369-98.31
3 　ZHANG Xiao-qian (张小茜), ZHOU Fu-rong (周富荣).De-
termination of Ginsenoside Rg1 in Ru Pi-xiao capsules by TLC scaning
(双波长薄层扫描法测定乳癖消胶囊中人参皂甙 Rg1 的含量).
China J Chin Mater Med (中国中药杂志), 1999 , 24 (5):282
(in Chinese)
(本文于 2000年 8月 4日修改回)
对 1996部标准输血(液)用塑料容器
细菌内毒素检查法的商榷
山东省滨州地区药品检验所　256618
张玉武　陈桂新　郭宇鹏　孙秀英
　　关于输血(液)用塑料容器的细菌内毒素检查 ,
1996年卫生部药品标准已收载[ 1] , 具体检验方法
为将供试液经 110 ℃高压灭菌 30min处理后 , 进行
细菌内毒素检查 。笔者对此提出不同的看法 , 与读
者共同讨论。
细菌内毒素检查法是利用鲎试剂与细菌内毒素
产生凝集反应的结果 , 来判定供试品是否符合规定
的体外检测试验 , 是一种限量检查方法[ 2] 。细菌内
毒素的化学成分是脂多糖 (LPS), 脂多糖是由 O
-特异性链-核心多糖-类脂 A 3部分组成 , 其中
类脂 A 是由氨基葡萄糖 、 磷酸和长链的脂肪酸
(10 ℃～ 18 ℃)组成 , 所以 , 对高温极不稳定 , 高
温除热原就是利用该原理[ 3] 。在进行细菌内毒素检
查时 , 若将供试液高温处理 , 势必导致细菌内毒素
不同程度的被破坏 。笔者针对该问题做过如下试
验 , 将细菌内毒素工作标准品加细菌内毒素检查用
水 (BET)使溶解 , 置旋涡混合器上混合 15 min
后 , 按一定比例用 BET水稀释至 10 , 5 , 2 , 1 EU·
mL-1等不同浓度 (每稀释一步 , 置旋涡混合器上
混合30 s), 将各稀释液分为甲乙 2组。取甲组各
稀释液 110 ℃高压灭菌 30 min , 放冷至室温后 , 与
乙组各稀释液用同批号鲎试剂 (λ=0.25 EU·mL-1)
进行细菌内毒素检查对比试验 , 其结果见表 1。同
时取输血 (液)用塑料容器 , 用 BET 水按照 1996
年卫生部药品标准规定的方法[ 1]制备供试液分为 2
份 , 其中1份不经高压灭菌处理进行对照试验 , 结
果见表 2。
表 1　细菌内毒素回收对比试验结果
Tab 1　The comparative experimental results
of bacterial endotoxin
供试液
(test solution)
内毒素浓度 (concentration of endotoxin)/ EU·mL-1
10 5.0 2.0 1.0 NC
甲组(group A) ++++ ---- ---- ---- -
乙组(group B) ++++ ++++ ++++ ++++ -
注:TALλ=0.25 EU·mL-1 , 湛江市海洋生物制品厂 , 批号:990405
Note:TALλ=0.25 EU·mL-1 , Marine Fauna Food Factory of Zhan-
jiang , No:990405
表 2　供试品细菌内毒素检查对比试验
Tab 2　The comparative experimental results
of concentration of samples bacterial endotoxin
供试液
(test solution)
供试液稀释倍数 (dilution ratir of samples)
原液
(original)
2倍
(2 time)
4倍
(4 time) NC PC PPC
经高压灭菌
(autoclaved group) -- -- -- - + +
未高压灭菌
(unautoclaved group) ++ -- -- - + +
注:TAL同表 1;供试品:输血袋 , 威海市医用高分子有限公司 ,
批号:9911091
Note:TAL equate to Tab 1 , test sample:transfusing bag , medical macro-
molecule LTD co of Weihai , No:9911091
　　由表 1可以看出 , 经110 ℃高压灭菌 30min处
理的甲组各稀释液 , 除 10 EU·mL-1这一浓度的几
管呈阳性反应外 , 其它各稀释液管均呈阴性反应;
而未经高压灭菌处理的乙组各稀释液管均呈阳性反
应 。由此可以看出细菌内毒素工作标准品在 110 ℃
条件下高压灭菌 30 min后效价明显降低。同时由
表 2可以看出 , 在相同的条件下进行试验 , 经高压
灭菌处理的供试液原液及各稀释液均呈阴性反应 ,
而未经高压灭菌处理的供试液的原液呈阳性反应 ,
由此认为高温高压对于自然界存在的细菌内毒素即
使是不能完全被破坏 , 至少也会影响其活性 , 降低
·59·21 (1), 2001