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古钩藤水提液对小鼠实验性高血糖影响的实验研究



全 文 :古钩藤水提液对小鼠实验性高血糖影响的实验研究
陆翠林1 梁欣娜2 陈 颖2
(1 广西中医药大学附属瑞康医院药剂科,南宁市 530011,E-mail:cuilin. 3058@ 163. com;
2 广西中医药大学药理教研室,南宁市 530001)
【摘要】 目的 探讨古钩藤水提液对小鼠实验性高血糖的影响。方法 建立链脲佐菌素和四氧嘧啶诱
导小鼠高血糖模型,按高、中、低剂量的古钩藤水提液灌胃给药,空白对照组和模型对照组给予等体积的生理盐
水,阳性对照组给予盐酸二甲双胍、格列本脲,观察给药后小鼠血糖的变化。结果 给药前模型对照组、格列本
脲组、古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组 5 组之间血糖值比较,差异无统计学意义(P > 0. 05) ;给药后古钩
藤高剂量组、中剂量组、低剂量组血糖值均明显低于链脲佐菌素模型对照组(P < 0. 05)。给药前模型对照组、
二甲双胍组,以及古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组 5 组之间血糖值比较,差异无统计学意义(P > 0. 05) ;
给药后古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组血糖值均明显低于四氧嘧啶模型对照组(P < 0. 05)。结论 古钩
藤水提液对链脲佐菌素致高血糖小鼠和四氧嘧啶致高血糖小鼠都有显著降血糖作用。
【关键词】 古钩藤;血糖;小鼠;降血糖;中草药
【中图分类号】 R 587. 1;R 730. 52 【文献标识码】 A 【文章编号】 0253-4304(2013)06-0702-03
DOI:10. 11675 / j. issn. 0253-4304. 2013. 06. 12
Effect of Aqueous Extracts from Cryptolepis buchananii Roem. et Schult.
on Blood Glucose in Mice with Experimental Hyperglycemia
LU Cui-lin1,LIANG Xin-na2,CHEN Ying2
(1 Department of Pharmacy,Ruikang Hospital,Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530011,China;
2 Department of Pharmacology,Guangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanning 530001,China)
【Abstract】 Objective To investigate the effect of aqueous extracts from Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. on
blood glucose in mice with experimental hyperglycemia.Methods The mouse models of hyperglycaemia,induced by
streptozotocin and alloxan respectively,were established. The model mice were treated with a high-,medium- and
low-dosage of aqueous extracts from Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. by gavage(high-dosage group,medium-dosage
group and low-dosage Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. group). The mice in the blank control group and model control
group were given the same volume of normal saline while the mice in the positive control group were given metformin
HCL and glibenclamide. The changes of mice blood glucose were observed among all groups after administration.
Results There was no significant difference in the blood glucose level among model control group,glibenclamide group,
and high-,medium-and low-dosage Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. groups before administration(P >0. 05);After
administration,the blood glucose levels in the high-,medium-and low-dosage Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. groups
were significantly lower than that in the streptozotocin-induced model control group(P < 0. 05). There was no significant
difference in the blood glucose level among model control group,metformin HCL group,and high-,medium- and low-dosage
Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. groups before administration(P >0. 05);After administration,the blood glucose levels
in the high-,medium-and low-dosage Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. groups were significantly lower than that in the
alloxan-induced model control group(P <0. 05).Conclusion Aqueous extracts of Cryptolepis buchananii Roem. et Schult. has
significantly hypoglycemic effect on the mice with experimental hyperglycemia induced by alloxan or srteptozotonic.
【Key words】 Cryptolepis buchananii Roem. et Schult.;Blood glucose;Mouse;Hypoglycemic effect;Chinese
herbal medicine
207 Guangxi Medical Journal,Jun. 2013,Vol. 35,No. 6
随着人民生活水平的提高,人口老龄化及生活方
式的改变,糖尿病发病率在逐年增加[1]。人们对降糖
药物的研究越来越关注,特别是从天然药物中筛选有
效、安全、方便的降糖药物[2]。古钩藤又名海上霸王、
白叶藤、牛角藤等,为萝摩科植物古钩藤(Cryptolepis
buchananii Roem. et Schult.)的地上部分。多生于阳
坡,攀援于其他树上,分布于广东、广西、云南、贵州等
地。具有舒筋活络、消肿止痛、解毒等功效,用于治疗
腰痛、腹痛、跌打损伤、骨折、痈疮、癣等疾病,还具有
明显的抗炎镇痛的作用[3]。目前,治疗糖尿病的口
服药物多为西药,但其副作用较多。因此,研究中草
药治疗糖尿病的优势有重要意义。目前,古钩藤对血
糖影响的报告较少。本文主要研究古钩藤水提液对
四氧嘧啶和链脲佐菌素诱导小鼠高血糖模型的降血
糖作用,为其进一步开发和临床应用提供理论参考。
1 材料与方法
1. 1 实验动物 昆明种普通级小鼠,雌雄兼用,体重
(20. 0 ± 2. 0)g,由广西中医药大学实验动物中心提
供,合格证号:桂医动字 11004 号。
1. 2 试剂 四氧嘧啶(美国 Sigma 公司生产,批号
BCBB7829) ,链脲佐菌素(美国 Sigma公司生产,批号
031M1287V) ,盐酸二甲双胍片(北京四环制药有限
公司生产,批号 20080114) ,格列本脲(山西汾河制药
有限公司生产,批号 20081209) ,葡萄糖氧化酶法
(GOD-PAP)测定试剂盒(四川省迈克科技有限责任
公司生产,批号 0608111)。
1. 3 仪器 TU-1901 型双光束紫外可见光分光光度
计(北京普析通用仪器有限责任公司生产) ,16K 型
台式离心机(珠海黑马医学仪器有限公司生产) ,
EL204 型电子天平(梅特勒 -托利多仪器有限公司生
产) ,HH-8 型恒温水浴锅(国华电器有限公司生产)。
1. 4 方法
1. 4. 1 药物和水提液的制备:古钩藤全草采于广西中
医药大学植物园,全草晒干。取古钩藤 400 g 加 10 倍
水浸泡 2 h,第 1次煎煮 2 h,过滤,取滤液;第 2 次加水
至水没过药面,再煎煮 1 h,过滤,取滤液。两次滤液合
并,静置过夜,过滤,滤液加热浓缩至 400 g /400 ml,按
需要配制所需给药浓度。
1. 4. 2 链脲佐菌素所致小鼠高血糖造模:取健康昆
明种小鼠 90 只(雌雄兼用) ,适应性喂养 3 d后,按随
机数字表法取 8 只作为空白对照组,其余小鼠腹腔注
射新鲜配制的链脲佐菌素(150 mg /kg) ,置于温度
(22 ± 2)℃、湿度(55 ± 5)%的环境,在小鼠笼中喂
养,每笼 9 只(其中一笼 10 只) ,自由摄食和饮水,
72 h后(最后禁食不禁水 12 h)。小鼠眼眶后静脉丛
采血,待血液凝固析出血清后,3 000 r /min 离心
10 min,取血清 10 μl,按 GOD-PAP 试剂盒说明书测
定血糖值,选取血糖 > 11. 1 mmol /L 的小鼠用于实
验。
1. 4. 3 四氧嘧啶所致小鼠高血糖造模:取健康小鼠 90
只(雌雄兼用) ,适应性喂养 3 d后,按随机数字表法取
10只作为空白对照组,其余小鼠尾静脉注射新鲜配制
的四氧嘧啶(85 mg /kg) ,置于温度(22 ± 2)℃、湿度
(55 ±5)%的环境,在小鼠笼中喂养,每笼 10 只,自由
摄食和饮水,72 h后(最后禁食不禁水 12 h)。小鼠眼
眶后静脉丛采血,待血液凝固析出血清后,3 000 r /min
离心 10 min,取血清 10 μl,按 GOD-PAP法试剂盒说明
书测定血糖值,选取血糖 >11. 1 mmol /L的小鼠用于实
验。
1. 4. 4 古钩藤水提液对链脲佐菌素所致高血糖小鼠
血糖的影响:按“1. 4. 2”造模合格小鼠 40 只,按随机
数字表法分为 5 组:模型对照组、格列本脲组
(40. 0 mg /kg)、古钩藤水提物高剂量组(30. 0 g /kg)、
中剂量组(15. 0 g /kg)和低剂量组(7. 5 g /kg) ,每组 8
只。给药前测定各组空腹血糖值。格列本脲组和古
钩藤各给药组每日灌胃 1 次,空白对照组和模型对照
组给予等体积生理盐水灌胃,各给药容量均为
20 ml /kg体重,连续 10 d。末次给药前小鼠禁食不禁水
12 h,末次给药 1 h 后摘眼球取血,血凝后,3 000 r /min
离心 10 min,分离血清,按 GOD-PAP法试剂盒说明书测
定血糖含量,严格按照试剂盒说明书测定血糖。
1. 4. 5 古钩藤水提物对四氧嘧啶所致高血糖小鼠血糖
的影响:按“1. 4. 3”造模合格小鼠 50只,按随机数字表法
分为 5 组:模型对照组,二甲双胍组(750 mg /kg)、古钩
藤水提物高剂量组(30. 0 g /kg)、中剂量组(15. 0 g /kg)
和低剂量组(7. 5 g /kg) ,每组 10 只。给药前测定各
组空腹血糖值。二甲双胍组和古钩藤水提物各给药
组每日灌胃 1 次,空白对照组和模型对照组给予等体
积生理盐水灌胃,各给药容量均为 20 ml /kg,连续
10 d。末次给药前小鼠禁食不禁水 12 h,末次给药
1 h后摘眼球取血,血凝后,3 000 r /min 离心 10 min,
分离血清。GOD-PAP 法测定血糖含量,严格按照试
剂盒说明书测定血糖。
1. 5 统计学分析 采用 SPSS 17. 0 软件进行统计分
析,计量资料以(x ± s)表示,组内比较采用 t 检验,多
组间均数比较用方差分析,两两比较采用 SNK-q 法,
以 P < 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结 果
2. 1 造模结果 链脲佐菌素所致小鼠高血糖成功造
模 55 只小鼠,四氧嘧啶所致小鼠高血糖成功造模 70
只小鼠。
2. 2 古钩藤水提液对链脲佐菌素所致高血糖小鼠血
糖的影响 给药前 6 组血糖值比较,差异有统计学意
义(P < 0. 05) ;与空白对照组比较,其他 5 组血糖值
均高于空白对照组(P < 0. 05) ;但模型对照组、格列本
307广西医学 2013 年 6 月第 35 卷第 6 期
脲组、古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组 5 组之间
血糖值两两比较,差异无统计学意义(P >0. 05)。给药
后 6组血糖值比较,差异有统计学意义(P < 0. 05) ;给
药后古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组血糖值均明
显低于模型对照组(P < 0. 05) ,且古钩藤高剂量组、中
剂量组、低剂量组血糖值依次升高(P <0. 05)。除空白
对照组、模型对照组外,其余 4 组给药后血糖值均明显
低于给药前(P <0. 05)。见表 1。
表 1 古钩藤水提液对链脲佐菌素
所致高血糖小鼠血糖的影响(x ± s,mmol /L)
组别 n 给药前血糖值 给药后血糖值 t值 P值
空白对照组 8 7. 30 ±1. 31 7. 64 ±1. 89* 0. 561 0. 592
模型对照组 8 25. 87 ±1. 51△ 23. 50 ±10. 21 0. 596 0. 570
格列本脲组 8 25. 96 ±1. 27△ 10. 03 ±5. 14* 8. 653 0. 000
古钩藤高剂量组 8 25. 78 ±1. 37△ 7. 79 ±2. 28* 21. 173 0. 000
古钩藤中剂量组 8 25. 56 ±1. 27△ 8. 48 ±3. 72* 12. 014 0. 000
古钩藤低剂量组 8 26. 21 ±1. 32△ 12. 36 ±10. 09* 4. 031 0. 005
F值 255. 292 6. 940
P值 0. 000 0. 000
注:与空白对照组比较,△P <0. 01;与模型对照组比较,* P <0. 05。
2. 3 古钩藤水提物对四氧嘧啶所致高血糖小鼠血糖
的影响 给药前 6 组血糖值比较,差异有统计学意义
(P < 0. 05) ;与空白对照组比较,其他 5 组血糖值均
高于空白对照组(P < 0. 05) ;但模型对照组、二甲双
胍组、古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组 5 组之间
血糖值两两比较,差异无统计学意义(P > 0. 05)。给
药后古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组血糖值均
明显低于模型对照组(P < 0. 05) ,且古钩藤高剂量
组、中剂量组、低剂量组血糖值依次升高(P < 0. 05)。
除空白对照组、模型对照组外,其余 4 组给药后血糖
值均明显低于给药前(P < 0. 05)。见表 2。
表 2 古钩藤水提液对四氧嘧啶
所致高血糖小鼠血糖的影响(x ± s,mmol /L)
组别 n 给药前血糖 给药后血糖 t值 P值
空白对照组 10 6. 99 ±0. 40 6. 60 ±0. 65# 1. 551 0. 155
模型对照组 10 26. 30 ±1. 47△ 27. 86 ±6. 55 0. 743 0. 476
二甲双胍组 10 26. 21 ±0. 99△ 14. 42 ±3. 10# 12. 125 0. 000
古钩藤高剂量组 10 26. 37 ±1. 56△ 16. 74 ±5. 07# 5. 156 0. 001
古钩藤中剂量组 10 26. 07 ±1. 09△ 17. 24 ±12. 04* 2. 320 0. 045
古钩藤低剂量组 10 26. 30 ±0. 87△ 21. 79 ±5. 51* 2. 725 0. 023
F值 484. 013 12. 029
P值 0. 000 0. 000
注:与空白对照组比较,△P < 0. 01;与模型对照组比较,* P > 0. 05,
#P <0. 05。
3 讨 论
糖尿病是一种常见病,严重危害人类健康,其所
致的各种并发症已成为患者致残、致死的主要原因之
一。我国传统医学认为糖尿病归属于消渴范畴,其发
病机制是由于阴虚燥热、淤血阻滞、脾气虚弱、肝郁气
滞、气阴两虚等引起的内分泌代谢紊乱[4]。目前的
糖尿病动物模型多为药物或手术导致的胰脏功能的
受损,缺少与临床中相近的糖尿病模型,有必要建立
病因性糖尿病动物模型,复制与人发病病因接近糖尿
病动物模型是探索糖尿病发病机制和筛选防治糖尿
病及其并发症药物的关键环节[5]。临床上降血糖药
多数是西药[9],但西药在治疗中存在副作用多的缺
点,例如低血糖症、胃肠道反应、肝肾毒性等[6]。因
此从中草药中寻找降血糖的有效成分日益受到重视。
链脲佐菌素对实验动物的胰岛 B 细胞有高度选
择性的毒性损害作用,从而使动物产生糖尿病[7 - 8]。
四氧嘧啶是一种特异性的胰岛 B 细胞毒剂,可以选
择性地损坏小鼠的胰岛 B 细胞,使机体内胰岛素分
泌不足,从而使血糖持续稳定升高而导致糖尿病[9]。
本文结果显示,古钩藤高剂量组、中剂量组、低剂量组
对链脲佐菌素及四氧嘧啶致小鼠高血糖均有显著降
血糖作用(P < 0. 05)。这提示古钩藤水提液可能对
胰岛素 B细胞有保护作用,能改善胰岛素分泌缺陷,
能促进胰岛素 B细胞分泌胰岛素而降血糖。
本实验只是对古钩藤水提液降血糖作用进行初步
研究,有助于明确中药古钩藤水提液的降血糖作用,并
对相关的中药开发和临床应用提供线索。但有关古钩
藤降血糖作用机理和有效成分有待进一步研究。
参 考 文 献
[1] 孙兆峰,王 利,夏作理,等. 2 型糖尿病动物模型研究
概要[J].中国微循环,2008,12(3) :187 - 189.
[2] 李 兰,袁 强.中药多糖降血糖作用机制的研究[J].
内蒙古中医药,2009,28(10) :98 - 99.
[3] 张兴燊,文丽艳,秦红玲,等.古钩藤醇提液镇痛抗炎药
理作用的实验研究[J]. 时珍国医国药,2009,20(11) :
1 603 - 1 604.
[4] 李娟好,李明亚,张德志,等.紫茉莉根水提物降血糖作
用的研究[J].广东药学院学报,2006,22(3) :299,305.
[5] 苗明三,苗艳艳,宰炎冰,等.玉米须总皂苷对病因性糖
尿病模型小鼠的降糖效应[J].中国临床康复,2006,10
(39) :123 - 125.
[6] 康立丽.糖尿病合理用药选择及治疗进展[J]. 现代诊
断与治疗,2010,21(2) :104 - 106.
[7] 刘长青,宋立江,蒋东升,等.链脲佐菌素稳定性对小鼠
糖尿病模型的影响[J]. 实用预防医学,2008,15(6) :
896 - 897.
[8] 黄桂红,贺 敏,黄仁彬.链脲佐菌素致糖尿病小鼠模型
的建立及抗氧化能力的影响[J]. 中国药事,2009,23
(8) :755 - 757.
[9] 崔明明,王三艳,周美娥,等.建立四氧嘧啶糖尿病小鼠
模型的研究[J]. 现代中西医结合杂志,2007,30(16) :
4 431 - 4 432.
(收稿日期:2013 - 02 - 19 修回日期:2013 - 04 - 23)
407 Guangxi Medical Journal,Jun. 2013,Vol. 35,No. 6