全 文 ：2.4　正交实验 选取微波功率(A)、料液比(B)、 萃取时间(C)
为考察因素 , 每个因素分别取 3个水平值 , 见表 1。正交实验采
用 L9(34)正交表 ,见表 2,重复 3次。
表 1　单因素水平表
水平 A微波功率P/W
B
料液比 /g:ml
C
萃取时间 t/min
1 119 1:40 5
2 231 1:50 10
3 385 1:60 15
表 2　正交实验结果
试验号 A B C 吸光度
1 1 1 1 0.516
2 1 2 2 0.528
3 1 3 3 0.473
4 2 1 2 0.574
5 2 2 3 0.543
6 2 3 1 0.519
7 3 1 3 0.477
8 3 2 1 0.475
9 3 3 2 0.493
K1 1.517 1.567 1.51
K2 1.636 1.546 1.595
K3 1.445 1.485 1.522
k1 0.506 0.522 0.500
k2 0.545 0.515 0.532
k3 0.482 0.495 0.507
R 0.063 0.027 0.032
由表 2可知 , 在微波萃取川芎多糖过程中 , 影响因素由大到
小依次是 A>C>B,即微波功率对提取影响最大 , 其次是萃取时
间和料液比。根据表 2所得最佳工艺条件为 A2B1C2 , 即微波功
率为 231 W,料液比为 1∶40,萃取时间为 10min。
将在最佳提取条件下所得溶液浓缩 , 脱脂 , 除蛋白 , 脱色 ,
80%乙醇沉淀多糖 , 离心并干燥至衡重 ,即为川芎粗多糖 ,用蒽酮
-硫酸法测定多糖含量 ,计算得提取率为 3.06 %。
3　讨论
采用单因素与正交实验相结合的方法对微波辅助提取川芎
多糖的影响因素进行了研究 , 确定最佳工艺条件为微波功率为
231 W,料液比为 1∶40, 萃取时间为 10 min。
多糖具有调节免疫 、抗心肌缺血 、降血脂 、抗炎 、抗病毒 、抗肿
瘤 、抗衰老等重要的药理作用 , 且无毒副作用 ,现在被作为临床用
药或疫苗 ,是广泛研究的焦点 [ 3] 。 提取多糖的方法有多种 , 除了
微波法外 ,还包括超声波法 、酶法 、超临界萃取法 、双水相萃取法
和大孔吸附树脂法等 ,因此研究选用合适的方法提取川芎多糖非
常有必要。我们首次采用微波技术从川芎中提取多糖 ,与其他方
法相比 ,具有时间短 、提取率较高的特点 [ 4 ～ 6] 。
参考文献:
[ 1 ] 　范智超 ,张志琪.川芎多糖的提取 、纯化及抗氧化活性的研究 [ J] .
天然产物研究与开发 , 2005, 11:561.
[ 2 ] 　易剑平 ,毕雅静 ,宋秀荣 ,等.蒽酮 -硫酸法测定枸杞多糖质量分数
的研究 [ J] .北京工业大学学报 , 2005, 31(6):643.
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2003, 5(4):18.
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2008, 30(11):61.
[ 5 ] 　李　玲 ,王维香 ,王晓君.果胶酶法提取川芎多糖工艺的研究 [ J] .
中药材 , 2008, 31(4):600.
[ 6 ] 　唐　崎 ,王维香 ,王晓君.碱法提取川芎多糖的研究 [ J] .时珍国医
国药 , 2008, 19(9):81.
收稿日期:2008-12-12;　修订日期:2008-06-03
基金项目:广西中医学院课题(No.BYL07006)
作者简介:张兴燊(1963-),男(汉族),广西南宁人 ,现任广西中医学院副
教授 ,学士学位 ,主要从事中药药效学研究工作.
古钩藤醇提液镇痛抗炎药理作用的实验研究
张兴燊 ,文丽艳 ,秦红玲 ,陈红岚 ,雷宗焕 ,李　丽 ,周　芳
(广西中医学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 研究古钩藤醇提液的镇痛抗炎药理作用。方法 采用小鼠热板法和扭体法镇痛实验 , 观察古钩藤醇提液的镇
痛作用 , 观察小鼠腹腔毛细血管通透性和二甲苯至小鼠耳廓肿胀的影响 , 观察其抗炎作用。结果 古钩藤醇提液具明显
的镇痛作用 , 大剂量能降低毛细血管通透性 , 抑制由二甲苯所致的炎症反应 , 可减轻小鼠耳廓肿胀的作用。结论 古钩藤
醇提液有明显的镇痛和一定的抗炎作用。
关键词:古钩藤;　镇痛抗炎;　药理作用
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)11-2735-02
　　古钩藤又名海上霸王 、白叶藤 、牛角藤 、大暗消等等 , 为萝藦
科植物古钩藤 CryptolepisbuchananiiRoem.etSchult的地上部分。
多生于阳坡 , 攀援于其他树上 , 分布于广东 、广西 、云南 、贵州等
地 , 具有舒筋活络 、消肿止痛 、解毒等功效 , 用于治疗腰痛 、腹痛 、
跌打损伤 、骨折 、痈疮 、癣等疾病 [ 1] 。 目前 , 镇痛抗炎作用的药物
多为西药 , 且副作用多 ,而中草药古钩藤民间使用也有这方面的
作用 , 是值得研究 、开发的镇痛抗炎药。前期我们已经做过古钩
藤根 、茎水煎液大 、小剂量组镇痛抗炎药理作用的研究 ,证明水煎
液具备一定的镇痛抗炎作用 , 或有这种作用的趋势 , 其镇痛抗炎
作用不稳定 [ 2] 。本科研小组现在对古钩藤醇提液镇痛抗炎作用
进行实验研究 , 旨在对其进一步开发和临床应用提供一定的理
论依据 。
1 　材料
1.1　动物 小鼠 , 雌雄兼用 ,体质量(20±2)g, 均由广西中医学
院实验动物中心提供 ,动物证号 1104, 根据实验性质和性别分笼
喂养 , 自由采食饮水。
1.2 　仪器 台式离心机;XZB-2B型自控温度热板仪 , 山东省医
学科学院设备供应维修站制造 ,设备号为:3-109-1-7 -6;722
型光栅分光光度计 ,上海第三分析仪器厂 ,设备号为:3-109-4
-4-93。
1.3　药品与试剂 干燥古钩藤全草 ,采自广西中医学院药用植
物园;硫酸罗通定注射液 , 广东省博罗先锋药业集团有限公司生
产 , 批号 020902;醋酸地塞米松 , 天津药业集团新郑股份有限公
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11 时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期
司生产 , 批号 070823;醋酸 , 上海试一化学试剂有限公司。伊文
思蓝 , 上海化学试剂公司进口分装 , 批号 F-9800。 二甲苯 , 齐
鲁石化公司研究院试剂公司;生理盐水 , 济南永宁制药厂。
1.4　制备古钩藤水煎剂 古钩藤全草 300 g,加 8倍水浸泡 1h,
煎煮 40min, 煎煮 2次 , 合并药液过滤浓缩至 200 ml(1.00 g/m
l), 后再加同等剂量的浓度为 95%的酒精放置 24 h后醇提 ,按所
需要的剂量配成溶液大剂量为 30 g/kg, 小剂量为 15 g/kg, 以备
用。
2　方法和结果
2.1　小鼠热板法镇痛实验 [ 3] 取雌性小鼠 , 放入(55±0.5)℃热
板测痛仪中 , 以舔后足作为疼痛反应指标 , 预测小鼠药前痛阈值。
以痛阈值小于 30 s视为合格小鼠 ,将痛阈值合格的 40只小鼠随
机分为 4组 , 每组 10只。分别是古钩藤大剂量组 ,剂量为 30 g/
kg;古钩藤小剂量组 ,剂量为 15 g/kg;阳性对照药罗通定组 ,剂量
30 mg/kg;生理盐水对照组 , 剂量为 20 ml/kg。灌胃给药两次 , 时
间间隔为 4 h。末次给药后 30, 60, 90, 120min分别测定痛阈值。
在测定中 ,如 60 s内无痛反应 , 应立即取出 ,并以 60 s计算。 各
给药组与对照组比较 ,统计数据以 x±s表示 ,统计方法用 t检验
法。结果见表 1。
表 1　古钩藤醇提液对热板法致痛小鼠的镇痛作用( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 给药前痛阈t/s 给药后痛阈值t/s
30min 60min 90min 120min
生理盐水 - 21.08±6.10 16.396±7.88 19.779±14.159 13.344±9.037 17.707±11.125
罗通定 0.03 19.51±28.00 55.678±9.154△ 55.227±15.090△ 50.640±16.131△ 41.830±16.828△
古钩藤(大) 30 20.67±7.76 21.604±4.967 32.098±6.242＊ 29.568±8.728△ 31.527±6.573△
古钩藤(小) 15 23.56±8.38 28.570±10.939＊ 33.074±7.783＊ 27.555±9.360△ 29.417±6.064△
　　与生理盐水组比较 , ＊P< 0.05, △P< 0.01;n= 10
痛阈值提高百分率(%)=[ (药后痛阈值 -药前痛阈值)/药前痛阈
值 ] ×100%。
表 1结果表明 , 古钩藤醇提液大剂量组在药后 60, 90, 120
min能明显提高小鼠痛阈值 , 而古钩藤醇提液小剂量组在药后
30, 60, 90, 120 min也能明显提高小鼠痛阈值 ,从本实验结果中可
以看出古钩藤醇提液有镇痛作用。
2.2　小鼠扭体法镇痛实验 [ 3] 取体质量 18 ～ 22 g健康小鼠 40
只 , 雌雄各半 ,随机分为 4组 , 分组及给药方法同 “ 2.1”项。末次
给药后 30min腹腔注射 0.6%冰醋酸 0.2 ml/只 , 同时用秒表
计时 , 记录小鼠 15 min内出现的扭体次数。 各给药组与对照组
比较 , 统计数据以 x±s表示 , 统计方法用 t检验法。结果见表 2。
药物镇痛百分率(%)=[ (对照组扭体次数 -给药组扭体次数)/
对照组扭体次数 ] ×100%。
表 2　古钩藤醇提液对冰醋酸致痛小鼠的镇痛作用( x±s)
组别 剂量C/g· kg-1
15min内
扭体次数
镇痛率
(%)
生理盐水 - 33.80±14.574 -
罗通定 0.03 9.40±8.592△ 72.19
古钩藤(大) 30 19.00±5.249△ 43.79
古钩藤(小) 15 20.30±10.771＊ 39.95
　　与生理盐水组比较 , ＊P< 0.05, △P< 0.01;n= 10
表 2结果表明 , 古钩藤醇提液大 、小剂量组对冰醋酸致痛小
鼠能显著减少小鼠的扭体次数 ,具有明显的镇痛作用。但从各剂
量组的镇痛百分率来看 ,镇痛百分率提高不明显。
2.3 　小鼠二甲苯耳肿胀实验 [ 3] 取体质量 18 ～ 22 g健康雄性小
鼠 48只 ,阳性对照组药物改地塞米松 , 剂量为 4.5mg/kg,其他分
组与给药均同 “ 2.1”项。第 8天每只小鼠右耳廓前后均匀涂擦当
日配制的二甲苯 0.1 ml/只 , 致炎 15 min后将小鼠脱颈椎处死 ,
剪下小鼠左右耳 ,用打孔器(直径 6mm)分别在左 、右耳同一部位
打下等大的圆形耳片 , 分别在电子天平上称重后 , 计算耳肿胀度。
各给药组与对照组比较 ,统计数据以 x±s表示 , 统计方法用 t检
验法。
耳肿胀度 =右耳重量 -左耳重量;肿胀抑制率(%)=[ (对照组肿胀
度 -给药组肿胀度)/对照组肿胀度 ] ×100%。
结果见表 3。
表 3　古钩藤醇提液对小鼠耳廓肿胀的影响( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 耳廓肿胀度 m/mg 抑制率(%)
生理盐水 - 5.72±1.97 -
地塞米松 0.0045 2.89±1.35＊ 49.47
古钩藤(大) 30 3.29±2.27＊ 42.66
古钩藤(小) 15 5.33±2.58＊＊ 6.82
　　与生理盐水组比较 , ＊P< 0.05, ＊＊P﹥ 0.05;n= 12
表 3结果表明 , 古钩藤醇提液大剂量组能明显抑制由二甲
苯引起的小鼠耳廓肿胀 , 而小剂量组对此作用则无明显抑制作
用。从抑制率看 ,大剂量组具有一定抑制耳廓肿胀的趋势 , 而古
钩藤根小剂量组的抑制率为最差。
2.4　对小鼠毛细血管通透性影响的实验 [ 3] 取体质量 18 ～ 22 g
健康小鼠 48只 , 雌雄各半 ,分组及给药方法同 “ 2.3”项。第 8天 ,
每只小鼠尾静脉注射 2.5%伊文思蓝 0.1 ml/10g(体重), 并同
时腹腔注射 0.6%冰醋酸 0.2ml/只 , 15 min后用 6 ml生理盐
水腹腔注射 , 轻柔小鼠腹部 , 然后断头处死小鼠 , 剪开腹腔 , 用吸
管吸取腹腔洗出液约 5 ～ 6 ml, 3 000 r/min离心 5 min, 取上清液
3ml在 722分光光度计 590nm处测定吸收度(OD值)。各给药
组与对照组比较 , 统计数据以 x±s表示 , 统计方法用 t检验法。
结果见表 4。
表 4　古钩藤醇提液对小鼠毛细血管通透性的影响( x±s)
组别 剂量 C/g· kg-1 吸收度(OD值)
生理盐水 - 0.27±0.15
地塞米松 0.0045 0.50±0.25＊
古钩藤(大) 30 0.51±0.22＊
古钩藤(小) 15 0.44±0.28＊＊
　　与生理盐水组比较 , ＊P< 0.05, ＊＊P﹥ 0.05;n= 12
表 4结果表明 ,古钩藤醇提液大剂量组能降低小鼠毛细血管
通透性 ,减少腹腔液体的渗出 ,具有明显的抗炎作用。而古钩藤
小剂量组效果不明显。
3　讨论
上述实验结果显示 , 古钩藤醇提液大 、小剂量组都具有一定
的镇痛作用 , 并从中也看到其镇痛作用较好;而抗炎作用只在大
剂量组存在 , 小剂量组抗炎作用不明显 , 但至少可以看出古钩藤
醇提液或有这种作用的趋势 , 这点以后再做进一步的深入研究 ,
其镇痛和抗炎作用机制有待进一步研究 , 以后在研究中应该对其
进行药物提纯再做研究。
古钩藤是瑶族人民民间长期使用的药材 , 有舒筋活络 、消肿
止痛等功效 , 主要用于治疗腰腿痛 、风湿痛 、痛经 、软组织扭伤等 ,
疗效显著 ,本实验结果与民间临床使用基本一致。本实验为古钩
藤的进一步开发及临床应用提供了一定的理论依据。
参考文献:
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11