全 文 ：作者简介:李伟妮，女，研究方向:中药学，E － mail:liweini@ 163． com
通讯作者:王平，女，副研究员，研究方向:中药药理，Tel:0531 － 82949812，E － mail:wangpingjinan@ 163． com
紫丹银屑颗粒对银屑病模型小鼠的 HaCaT细胞周期
和血清 IL －2、TNF － α的影响
李伟妮1，李忠原1，崔 文2，王 平3，孙 虎3，李百开1
(1．烟台东诚大洋制药有限公司，山东 烟台 265500;2．青岛大学附属医院，山东 青岛 266003;
3．山东省中医药研究院，山东 济南 250014)
摘要:目的 探讨紫丹银屑颗粒对银屑病样小鼠模型的治疗作用和作用机制，为临床应用提供参考。方法
将试验动物随机分为正常对照组、模型对照组、紫丹银屑高、中、低剂量组及阳性对照组，每组 10 只，灌胃给药。采
用流式细胞分析仪分析紫丹银屑颗粒对 HaCaT细胞周期的影响(在 96 孔板上依次设定紫丹银屑颗粒 2、4、8、16、32
g·L －1组，维 A酸片 8 g·L －1组，空白细胞组);采用动物体内实验，观察紫丹银屑颗粒对银屑病小鼠模型血清中白
介素 － 2、肿瘤坏死因子含量的影响。结果 体外试验显示，与模型组比较，紫丹银屑颗粒高、中剂量组细胞增殖数
量显著减少，有显著性差异(P ＜ 0． 05);体内试验显示，与模型组比较，紫丹银屑颗粒高、中剂量组 S 期细胞数量显
著减少，有显著性差异(P ＜ 0． 05)。结论 紫丹银屑颗粒能够显著抑制人永生化表皮细胞增殖，并显著降低模型动
物血清白介素 － 2、肿瘤坏死因子的含量，这可能是紫丹银屑颗粒治疗银屑病的作用机制之一。
关键词:紫丹银屑颗粒;HaCaT细胞;白介素 － 2;肿瘤坏死因子;小鼠
中图分类号:Ｒ965 文献标识码:A 文章编号:2095 －5375(2015)03 －0141 －003
Effect on the HaCaT cell generation cycle and serum IL －2，TNF －α of
psoriasis sample model mice treating by Zidanyinxie Particle
LI Wei-ni1，LI Zhong-yuan1，CUI Wen2，WANG Ping3，SUN Hu3，LI Bai-kai1
(1． Yantai Dongcheng Dayang Pharmaceutical Co．，Ltd．，Yantai 265500，China;2． The Affiliated
Hospital of Qingdao University，Qingdao 266003，China;3． Department of Pharmacology，
Shandong Academy of Chinese Medicine，Jinan 250014，China)
Abstract:Objective To investigate the effect and mechanism of Zidanyinxie Particle for mice psoriasis sample．
Methods All the mice were randomly divided into normal control group，model group，Zidanyinxie Particle high dosage
group，Zidanyinxie Particle middle dosage group，Zidanyinxie Particle small dosage group，and positive control group，each
group had 10 mice，gavaged． Prepared serum containing drug，concentration was Zidanyinxei Particle 2，4，8，16，32 g·L －1，
Tretinoin Tablets 8 g·L －1 ． In vitro test，to detect the effect of Zidanyinxie Particle in HaCaT cell generation cycle;In vivo
test，after giving relevant drugs，to observe serum IL － 2 and TNF － α of vaginal epithelial pathological model mice． Ｒesults
In vitro experiments，compared with model control group，cell proliferation was significantly reduce in the Zidanyinxie Par-
ticle high dosage group，Zidanyinxie Particle middle dosage group，P ＜ 0． 05． In vivo studies，compared with normal control
group，the number of mitotic vaginal epithelial cells were significantly increased in model group，P ＜ 0． 05，and compared
with model control group，the number of mitotic vaginal epithelial cells were significantly decreased in Zidanyinxie Particle
high dosage group，Zidanyinxie Particle middle dosage group，P ＜ 0． 05． Conclusion Zidanyinxie Particle could inhibited
the proliferation of HaCaT cell and reduced the Serum IL － 2，TNF － α content of mice model significantly，this may be one
of the mechanisms of Zidanyinxie Particle in treating psoriasis．
Key words:Zidanyinxie Particle;HaCaT cell;IL － 2;TNF － α;Mice
·141·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 3
DOI:10.13506/j.cnki.jpr.2015.03.004
银屑病是一种皮肤科常见的易反复发作的疾
病，被世界卫生组织定为十大顽疾之一。临床表现
为周身或者局部皮肤白色鳞屑，病理学表现为表皮
细胞过度增殖及异常分化，炎症细胞浸润，真皮血管
增生［1，2］。银屑病根治困难，容易复发，病程迁延日
久，肌肤失养，摧残身体，给患者带来极大的心理和
生理负担，临床迫切需要开发相应的治疗药物。紫
丹银屑颗粒，是根据临床经验方开发的新药，用于治
疗血虚风燥所致的银屑病。通过体外细胞试验和体
内动物试验对其作用机理进行了探讨，分析紫丹银
屑颗粒对人永生化表皮细胞(HaCaT 细胞)周期的
影响，观察紫丹银屑颗粒对银屑病小鼠模型血清中
白介素 － 2(IL － 2)、肿瘤坏死因子(TNF － α)含量
的影响。
1 试验材料
1． 1 试验动物 ICＲ小鼠，SPF级，110 只，雌性，体
重 18 ～ 22 g，购自中国医学科学院动物研究所，动物
许可证号:SCXK(京)2009 － 0007。
1． 2 试验药物 紫丹银屑颗粒(生产批号:110602，
烟台东诚大洋制药公司);维 A 酸片(生产批号:
H10970054，山东良福制药有限公司);秋水仙碱(生
产批号:111103，西双版纳药业有限责任公司);己
烯雌酚(生产批号:100318，天津金耀氨基酸有限公
司)。
1． 3 试验试剂 HaCaT 细胞(北京协和医学院细
胞资源中心);IL － 2 试剂盒(上海邦奕生物科技有
限公司);TNF － α试剂盒(上海富众生物科技发展
有限公司);胎牛血清(美国 GLBCO 公司);细胞周
期及凋亡检测试剂盒(ＲNase + PI，南京凯基生物科
技公司);ＲPM1640 培养基(美国 GLBCO公司)。
1． 4 试验仪器 超净工作台(苏州净化设备仪器
厂);HF151UVCO2 培养箱(上海力新实业有限公
司);BIO － ＲAD680 酶标仪(美国 BIO － ＲAO 公
司);TDL －5 台式离心机(上海安亭科学仪器厂);
DNP －9052 型电热恒温培养箱(上海惊宏实验设备
有限公司);FAC scalibur 流式细胞分析仪及软件
(美国 B＆D公司)。
2 试验方法
2． 1 体外试验
2． 1． 1 HaCaT 细胞培养 HaCaT 细胞用含有 10%
胎牛血清的 ＲPMI1640 培养基 37 ℃、5% CO2、饱和
湿度条件下传代培养，选对数生长期细胞进行试验。
2． 1． 2 紫丹银屑颗粒含药血清的制备 取 50 只雌
性小鼠，随机分为 5 组，每组 10 只，分别为正常对照
组、紫丹银屑颗粒低、中、高剂量组、维 A 酸片组。
参考《药理实验方法学》［3］中人与小鼠之间的剂量
换算方式，折算小鼠的给药量，分别设置紫丹银屑颗
粒高剂量组(2． 16 g·kg －1)、紫丹银屑颗粒中剂量
组(1． 08 g·kg －1)、紫丹银屑颗粒低剂量组(0． 54 g
·kg －1)，维 A酸片组(2． 70 g·kg －1)，正常对照组
给予等体积的蒸馏水。连续灌胃给药 5 d，每日 1
次。末次给药 0． 5 h 后，摘眼球取血，弃去第 1 滴血
液。血液静置 1 h，3 000 rpm，离心 5 ～ 10 min，取血
清，56 ℃、30 min 灭活，0． 22 μm 微孔滤膜除菌分
装，稀释成 10%浓度的含药血清。
2． 1． 3 紫丹银屑颗粒对 HaCaT 细胞周期的影响
将对数生长期的 HaCaT细胞按照每毫升 2 ×105 的浓
度接种于 96孔板上，依次设定为紫丹银屑颗粒 2、4、
8、16、32 g·L －1组，空白细胞组，维 A 酸片 8 g·L －1
组，每组 3 个复孔。药物干预 48 h 后，消化贴壁生
长的 HaCaT细胞收集于 EP 管中，用预冷的 PBS 吹
匀，再以 2 000 rpm，离心 15 min，弃去上清液，加入 4
℃预冷 75%乙醇 3 mL，固定 30 min 后再次离心，重
悬，用流式细胞仪测定细胞周期。试验结果进行组
间统计分析。
2． 2 体内试验
2． 2． 1 建立银屑病动物模型 将 60 只雌性小鼠，
随机分为 6 组，分别为正常对照组、模型对照组、紫
丹银屑颗粒高剂量组(2． 16 g·kg －1)、紫丹银屑颗
粒中剂量组(1． 08 g·kg －1)、紫丹银屑颗粒低剂量
组(0． 54 g·kg －1)，维 A酸片组(2． 70 g·kg －1)，每
组 10 只。除正常对照组以外小鼠均腹腔注射己烯
雌酚，每次 0． 2 mg，每天 1 次，连续 3 d。
2． 2． 2 紫丹银屑颗粒对银屑病动物模型血清 IL －2、
TNF － α的影响 从造模第 4 天开始，各给药组分别
给予相对应的药液，正常对照组与模型对照组给予等
体积的蒸馏水，连续给药5 d。于试验第9天灌胃后2
h后各组小鼠腹腔注射秋水仙碱 2 mg·kg －1，使有丝
分裂停止于中期。4 h后各组小鼠摘眼球取血，离心
后，取血清，分别检测血清 IL － 2、TNF － α 的数值，
试验结果进行组间统计分析。
2． 3 统计学处理 采用 SPSS 18． 0 统计学软件进
行数据处理。计量资料以(x ± s)表示，组间比较采
用单因素方差分析。P ＜ 0． 05 为有显著性差异。
3 试验结果
3． 1 体外试验中各组 HaCaT细胞周期比较 试验
结果发现细胞的各个周期发生了改变。与模型组比
较，紫丹银屑颗粒高、中剂量组 S期细胞数量显著减
·241· 药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 3
少，有显著性差异(P ＜ 0． 05);与维 A酸组的细胞数
量接近，P ＞ 0． 05，结果见表 1。
表 1 各组小鼠 HaCaT细胞周期比较(x ± s ，n = 3)
组别 孔数(n) G0 /G1 G2 /M S
空白对照组 3 53． 21 ± 6． 98 15． 66 ± 2． 15 47． 33 ± 3． 45
模型对照组 3 55． 70 ± 6． 54＊ 11． 28 ± 1． 87＊ 52． 08 ± 3． 64＊
紫丹银屑颗粒高剂量组 3 62． 44 ± 7． 12 10． 88 ± 1． 90 38． 19 ± 3． 09▲
紫丹银屑颗粒中剂量组 3 59． 63 ± 7． 05 12． 26 ± 1． 95 40． 45 ± 3． 12▲
紫丹银屑颗粒低剂量组 3 57． 85 ± 6． 39 14． 17 ± 2． 06 46． 36 ± 3． 26
维 A酸片组 3 61． 70 ± 6． 24 14． 89 ± 2． 11 38． 99 ± 2． 83▲
注:与正常对照组比较，＊P ＜ 0． 05;与模型组比较，▲P ＜ 0． 05
3． 2 各组血清中 IL － 2、TNF － α 含量结果 试验
结果显示，与模型对照组相比，紫丹银屑颗粒高、中、
低剂量组均能够显著降低造模大鼠血液中 IL － 2、
TNF － α的含量，其中高剂量试验结果有非常显著
性差异(P ＜ 0． 01)，中剂量试验结果有显著性差异
(P ＜ 0． 05) ，结果见表 2。
表 2 紫丹银屑颗粒对小鼠血清 IL － 2、TNF － α的含量
的影响(x ± s，n = 10)
组别
动物数
(n)
给药剂量
(g·kg － 1)
IL － 2
(pg·mL －1)
TNF － α
(ng·mL －1)
正常对照组 10 － 15． 56 ± 1． 33 35． 48 ± 6． 95
模型对照组 10 － 96． 41 ± 8． 12＊ 56． 46 ± 8． 92＊
紫丹银屑颗粒高剂量组 10 2． 16 29． 14 ± 2． 19▲▲ 41． 22 ± 8． 05▲▲
紫丹银屑颗粒中剂量组 10 1． 08 35． 45 ± 4． 03▲ 44． 34 ± 8． 26▲
紫丹银屑颗粒低剂量组 10 0． 54 71． 81 ± 5． 87 52． 39 ± 9． 01
维 A酸片组 10 2． 70 31． 44 ± 2． 94▲▲ 43． 73 ± 8． 55▲
注:与正常对照组比较，＊P ＜ 0． 05;与模型对照组比较，▲P ＜ 0． 05，▲▲P ＜ 0． 01
4 讨论
银屑病是一种由于多种因素参与的慢性免疫性
皮肤病，其致病机理复杂，发病率高。主要的病理改
变为角质增厚，角化不全，表现为皮肤银白色鳞屑，
属于中医“白疕”范畴［4，5］。中医学认为银屑病的病
因病机为血热内蕴、阴血耗伤，生风致燥，肌肤失养，
则起白屑。即本病病因在血，病位在肌表。在长期
的治疗过程中，发现银屑病患者大都畏寒喜热，同时
伴有口干舌燥，心烦易怒等，故认为银屑病久病出现
阳虚寒凝，阴血耗伤，气滞血瘀，使皮肤失于濡养而
发病［6，7］。紫丹银屑颗粒，由紫硇砂、决明子、附子
(制)、干姜、桂枝、白术、白芍、黄芪、丹参、降香等 10
味中药组成，具有温养活血、养血祛风、润燥止痒的
功效［8］，临床治疗银屑病疗效确切。体外试验结果
显示，紫丹银屑颗粒具有显著抑制 HaCaT 细胞过度
增殖，促使细胞的自然生长平衡，最终维持表皮层
的稳定。同时，紫丹银屑颗粒能够降低小鼠血清 IL
－ 2、TNF － α 含量的含量，从而减轻银屑病发病后
的炎症反应。本研究为临床合理用药提供了参考。
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·341·药学研究·Journal of Pharmaceutical Ｒesearch 2015 Vol． 34，No． 3