全 文 ：2 9 6 喧压皮昧利兰乡志 年 〕立第 暨 多坦些 旦旦 红止卜当 旦旦二渔七旦凶旦
论著驱虫斑鸿菊联合紫外线照射对 日 丁细胞
分泌细胞因子及其对 细胞
增殖和迁移的影响
张荣华 , 张美华 , 喻丽婷 , 于燕华
南京医科大学第一附属医院皮肤性病科 , 江苏 南京
摘 要 目的 研究驱虫斑鸿菊 , , 分别联合长波紫外线 、 中波紫外线 照射对人永生
化角质形成细胞株 细胞产生细胞因子及其对人黑素瘤细胞株 细胞增殖和迁移的影响 。 方法 及 分别照
射预先用 孵育的 细胞 , 方法测定培养上清液中内皮素 一 、碱性成纤维细胞生长因子 及干细胞生
长因子 含量 , 培养上清液作为条件化培养基培养 细胞 , 贯 法测定 细胞增殖变化 , 微孔滤膜法测定 细
胞迁移功能的变化 。 结果 联合 能明显促进 细胞分泌 一 、 及 能促进 细胞 一 及
分泌 , 这两组细胞的培养上清液明显促进 细胞的增殖及迁移 。 、 联合 及 对 细胞 种细胞
因子分泌及对 细胞增殖和迁移均无明显促进作用 。 结论 联合 及 可上调 细胞 和 的分
泌 , 前者还能提高 的分泌 两组都能促进 细胞增殖及迁移。
关键词 黑素瘤 驱虫斑鸡菊 细胞 紫外线 内皮素一 碱性成纤维细胞生长因子 干细胞生长因子
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 一 一
认 瓦 一 ,
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尸 , 群, `历 夕 以 刀厉公 以 动 笋 刀山杯鳍 口 ,
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一 脚
近年来 临床使用驱虫斑鸡菊
, 配合紫外线照射治疗白瘫风 , 取得了
显著疗效 ,但治疗机制尚不清楚回 。 白瘫风可能与神
收稿日期 一 一 修回 日期 一 一
基金项 目 江苏省卫生厅面 卜项目基金 资助项 目
通讯作者 张美华 , 一
口 , , 一
经 、精神及免疫等多种因素导致黑素细胞周围微环境
失衡 , 使黑素细胞增殖 、载附 、 迁移功能下降以及黑素
细胞破坏增加等有关阴。 人角质形成细胞可以分泌多
种细胞生长因子 , 如内皮素 一 、碱性成纤维细胞
生长因子 、干细胞生长因子 等 , 在白瘫风
复色中发挥作用 。 推测 与紫外线联合治疗白瘫
风的机制可能与细胞因子介导的黑素细胞增殖和迁
临压皮肤科杂志 年 卷第 期 」旦业 组卫 见 垫 旦
移有关 。 笔者观察 联合紫外线 中波紫外线
及长波紫外线 对 细胞分泌 一 、
及 和对黑素瘤细胞株 细胞增殖和迁移的影
响 , 以探讨是否有此作用途径 。
统计学方法
实验数据用 软件进行单因素方差分析 。
尸 为有统计学意义 。
结 果
材料和方法
主要仪器和试剂
紫外线辐照仪 上海 公司 , 培养板 丹麦 公
司 , 孔插入式细胞培养器 膜孔径 卜 德国
一 公司 , 培养基 美国 一 公司 , 胎
牛血清 杭州四季青生物工程公司 , 一 、 及 试剂盒
美国 公司 , 驱虫斑鸿菊提取液 新疆维阿堂制药有限公
司 , 每毫升相当于驱虫斑鸡菊黄酮 , 相当于原生药
, 型酶标仪 芬兰 。
方法
细胞 、细胞培养及实验分组 人永生化角质形成细胞株
细胞 及人黑素瘤细胞株 细胞 分别用含 胎
牛血清及 青霉素 、链霉素的高糖 培养基培养
用含 胎牛血清的 培养基配制 , 其终浓度稀释为
酬 。 实验共分为 组 ① 十 组 , ② 组 , ③
组 , ④ 组 , ⑤ 组 , ⑥仅加人培养基的阴性对照组 。
盯 细胞上清液收集 细胞于 ℃ 、
培养箱中培养 , 取处于对数生长期的细胞 , 以 呱 密度接种
到 孔培养板 , 当细胞生长至 融合时 , 换用无血清
继续培养 , 卜后 ①、 ②和③组换含 的无血清 ④ 、
⑤和⑥组换单纯无血清 。 各组避光孵育 , 弃去培养上
清 , 用 清洗 次 , 每孔加人 协 的 。 ①组和④组照
射 , ②组和⑤组照射 。 光源距离 细胞 巧 进
行照射 , 剂量为 , , 为 , 。 ③组和⑥组加
避光培养 , 照射后弃去 , 各组立即换无血清 培
养基培养 , 收集上清 , 离心 而 , 一 ℃保存备用 。
每组设 个复孔 。
细胞上清液细胞因子水平测定 分别用 一 、
及 试剂盒 , 严格按照说明书步骤操作 , 测
处吸光度 值 , 按照标准曲线计算细胞因子浓度 。
条件化培养基对 细胞增殖影响的测定 培养
细胞至 融合时用 胰蛋白酶消化后 , 以 讥
密度接种于 孔培养板 , 用含 胎牛血清的 培养基
培养 , 换用无血清 培养 后 , 每孔换用 林 含
胎牛血清的 和 林 各组条件化培养基培养 , 继续
培养科 , 按常规用四甲基偶氮哩蓝 法测定网。 在 。
下读取 值 。 每组设 个复孔 。
条件化培养基对 细胞迁移功能影响的测定 培养
细胞至对数生长期 , 实验前 换无血清 培养 。
孔板中每孔先加人 林 各组条件化培养基 , 再嵌人细胞培
养器 其底为 林 微孔聚碳酸醋膜 , 培养器内接种 林
用无血清 混悬的 勺 密度的 细胞 , 培养
后取出细胞培养器 , 小心弃去培养液 。 用棉拭擦去上层的
细胞 , 多聚甲醛固定 , 苏木精一伊红染色 , 迁移至滤膜下层的
细胞在 倍显微镜下随机选取 个视野计数并照相 , 实验重
复 次 , 每次设 个复孔 。
各组 细胞上清液中 一 、 及
的水平
组 细胞分泌 一 、 和
的量明显高于阴性对照组 尸 , 组
细胞分泌 一 及 的量亦明显高于阴性对照组
。 其他组与阴性对照组相比 ,差异无统计学
意义 表 。
表 各组 日 下细胞上清液中 种细胞因子水平
行士、
组 别
阴性对照组
一 林留
土
士
士
土
士
士 一
细胞因子
士 名
名 士
士 `
士
士
土
土 `
士 刀
士
士 一
士 一
土
与阴性对照组比较 ,
细胞上清液对 细胞增殖的影响
与阴性对照组比较 , 组及 组上清
液对 细胞增殖有明显促进作用 尸 。 其他
组与阴性对照组比较 , 差异无统计学意义 表 。
表 各组 盯 细胞上清液中 细胞增殖率及
迁移数 伍。
组 别 细胞增殖率 值 细胞迁移数 个 视野
石 土 , 由 士 训
士 士
士 士
土 士 ,
土 、 土
阴性对照组 土 ` 士
与阴性对照组相 比 , 住 , “ 尸
细胞上清液对 细胞迁移的影响
细胞上清液对 细胞迁移的影响见表
及图 。 组及 与阴性对照组比较 ,前两
组能显著促进 细胞迁移 分别为 尸 和 尸
,其他组与阴性对照组比较 , 差异无统计学意义 。
讨 论
驱虫斑鸿菊为复方卡力孜然配的主要成分 , 有祛
风 、燥湿 、舒经 、 活络 、 活血 、 化淤等作用 ,能改善局部微
循环障碍 ,提高皮肤 的光敏作用 , 局部补充微量元素 ,
增强酪氨酸酶活性 ,促进皮肤黑素的合成 , 因而治疗白
2 9 8 临床皮肤科杂志 年 卷第 期 运 , , ,
组 、飞 十 组 组 组 组 阴性对照组。 及
中的穿膜细胞数较阴性对照组明显增加 分别为 尸 住 和 尸 刀 , 而其他组无明显改变
图 各组对 细胞穿过微孔聚碳酸醋膜能力比较 染色
癫风有效 。 临床使用复方卡力孜然配后配合 日晒或紫
外线 或 照射治疗 , 可以提高两者单用 的
疗效 么刀。
临床治疗白瘫风过程中 , 首先是毛囊周围出现色
素岛 , 然后向周围扩散达到复色。 推测是治疗刺激了人
角质形成细胞产生的 一 、 、 及白三烯等多
种细胞因子 , 使存在于外毛根鞘中段和毛囊下部的多
巴染色阴性的无色素黑素细胞活化 、 增殖及分化 , 活化
的无色素黑素细胞向上迁移至邻近表皮处 , 形成毛囊
周围色素岛 , 向下迁移至毛乳头产生黑素 ,逐步迁移到
色素脱失部位致表皮及其毛发色素恢复
本实验结果显示 , 联合 及单用 照
射 细胞后 , 其分泌的 一 和 均增加 , 这
两组之间的 一 和 差异均无统计学意义 。 联
合组分泌的 显著增加 , 但单用 照射组 ,
无显著升高 。 用照射后含有上述细胞因子的上清液作
用于 细胞 , 与单用 照射组比较 , 联合
能明显促进其增殖和迁移 。 笔者推测 , 在临床应
用时 , 联合 照射刺激角质形成细胞分泌
、 和 增加 , 这些因子刺激无色素黑素细胞
的激活 、 增殖 、 迁移 、分化及黑素细胞的增殖和分化 ,
促进黑素小体及树突形成 。 皮肤中 通过与其配
体结合以及和 一 具有协同促进黑素细胞的磷酸
化 , 促进黑素细胞的存活 、分化 、增生移行和黑素生成 。
此外 , 还能与纤豁蛋白结合促进无色素黑素细胞移
行 。 这解释了临床上 联合 复色效果强于单
用 的原因 , 可能与其显著刺激 分泌有关 。
本实验结果显示单纯使用 作用于 细
胞后 , 其分泌的 一 、 和 均无明显增加 , 也
不能明显促进黑素细胞增殖及迁移 , 解释了临床上单
用 不能明显促进白瘫风复色 , 提示 需与
联用才能提高 疗效 。
在本实验中 , 十 照射组并没有即刻通过
细胞促进 细胞的增殖和迁移 。 这与临床
上 联合 能有效促进白瘫风皮损复色有些不
符 。 其原因可能有 ①作用的细胞不同 , 实验只采用 了
刺激角质形成细胞分泌细胞因子的途径来刺激黑素
细胞增殖及迁移 。 临床上 , 联合 除了作用于角
质形成细胞外 , 还直接作用于黑素细胞 。 ②作用的途
径不同 , 实验过程中只采用了 种细胞 , 而在临床上
除了作用于角质形成细胞外 , 还作用 于其他细
胞 ,分泌多种细胞因子 ,这些细胞因子或直接激活黑素
细胞 , 或通过刺激角质形成细胞分泌细胞因子间接激
活黑素细胞 。 ③作用时间不同 , 实验中采用单次药物及
紫外线照射 , 而临床上一般白瘫风复色前需要进行
次治疗 , 提示短疗程治疗并不能够刺激角质形
成细胞旁分泌黑素细胞生长因子 。 上述机制是否参
与改变构建黑素细胞周围微环境 , 尚需要继续探讨 。
参考文献
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无色素黑素细胞赫附与移行的调节作用 阴 临床皮肤科杂志 ,
, 礴
, 山 , 口 ,
石
诫 田 , ,
一
病例报告
额部硬化萎缩性苔鲜 例
杨 斌 , 晏洪波 , 吴 宁 ,
广州军区武汉总医院皮肤科 , 武汉
余君贤 , 任 勇
广州军区武汉总医院病理科 , 武汉
【关键词】苔鲜 , 萎缩性 , 硬化性
「中图分类号 【文献标识码 文章编号 一
患者男 , 岁 。 因右额部出现白色斑片半年 , 于 年
月来我科就诊 。 半年前无明显诱因患者右侧前额出现白色斑
疹 , 无痒痛感 , 未予诊治 。 皮损缓慢增大 , 呈钱币状 , 并于表面出
现黑色点状物 , 触摸有粗糙感 。 既往体健 , 否认有局部外伤史 ,
家族史无特殊 。
体格检查 一般情况可 , 各系统查体未见明显异常。 皮肤科
检查 右额部近发际处有一约 大瓷白色圆形斑片 ,
边界清楚 , 表面无鳞屑 , 中央略有凹陷 , 表面见多数黑头粉刺样
毛囊性角栓 , 触之粗糙 、 棘手 , 皮损周围无红晕 , 未见水疤及糜
烂 图 。 皮损处组织病理检查 表皮角化过度 , 毛囊 口扩大 ,
毛囊角栓 , 棘层萎缩变薄 , 表皮突消失 , 基底细胞液化变性 , 其
下方见明显裂隙 真皮浅层胶原纤维高度水肿 , 呈均质化 、 带状
透明 , 淡染 , 其间散在少量噬黑素细胞 , 其下方真皮中部血管周
围淋巴细胞呈带状浸润 图 。结合临床表现及皮损病理改变
诊断为 硬化萎缩性苔鲜 。 治疗 给予 卤米松乳膏外用 , 每
日 次 。 年
月复诊 , 皮损部分
消退 , 无新发皮损。
讨 论 硬化
萎缩性苔鲜是一种
病因和发病机制不
明 的炎 症性皮肤
病 , 好发于女性 , 男
女发病率之 比为
, 发病年龄呈双
峰分布 , 好发于月
经前儿童及绝经期
女性 , 后者约占所有病例的 。 本病皮损可累及躯干的任何
部位 , 但最常发生于外生殖器部位 , 且常是惟一受累部位 。 本例
患者为男性青年 , 皮损仅限于前额 , 躯干 、 四肢 、生殖器无皮损 ,
临床少见 。 但皮损及组织病理改变均典型 , 可以诊断为硬化萎
缩性苔醉 。 本病临床上需与局限性硬皮病 、萎缩性扁平苔鲜 、 白
瘫风等鉴别 , 根据典型的组织病理改变可以区分 。 治疗上主要
选用外用维 酸和糖皮质激素类制剂 , 较重者可考虑使用此类
药物进行系统性治疗
参考文献
, , , 己
团 , 仪刃, 一 一
鲍迎秋 , 傅裕 , 常建民 , 等 硬化性萎缩性苔鲜田 临床皮肤科杂
志 , 一
收稿 日期 一 一 修回 日期 一 一
额部近发际处可见瓷白色斑片 , 表面有许多黑头粉刺样毛囊性角栓 表
皮角化过度 , 毛囊角栓 , 棘层萎缩 , 基底细胞液化变性 , 其下方见明显裂隙 真
皮浅层胶原纤维水肿 、均质化 , 真皮中部淋巴细胞呈带状浸润 染色
图 硬化萎缩性苔醉患者额部皮损及皮损组织病理像