全 文 ：收稿日期:2011-10-27; 修订日期:2012-01-10
基金项目:四川省科技支撑项目(No． 2009SZ0127) ;
四川省教育厅支持项目(No． 10zB024)
作者简介:成 英(1974-) ，女(汉族) ，四川仁寿人，现任乐山师范学院天
然产物研究所副教授，博士学位，主要从事植物天然产物研究工作．
* 通讯作者简介:刘素君(1968-) ，女(汉族) ，四川资阳人，现任乐山师范
学院天然产物研究所教授，博士学位，主要从事植物天然产物研究工作．
微孔草油抗氧化活性研究
成 英，宋九华，刘素君*
(乐山师范学院化学与生命科学天然产物研究所，四川 乐山 614004)
摘要:目的 研究微孔草油的抗氧化活性。方法 采用 95%乙醇浸提工艺提取，初步分离后，经石油醚萃取，硅胶柱色谱
进一步分离纯化得到 3 种提取物，提取物通过对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基的清除能力测定进行抗氧
化活性研究。结果 微孔草油具有抗氧化活性。抗氧化性:提取物 C ＜提取物 B ＜提取物 A;提取物对自由基的清除能力
表现为:DPPH自由基 ＜超氧阴离子自由基 ＜羟基自由基。结论 实验证明提取物 A抗氧化活性最佳。
关键词:微孔草油; 抗氧化; 去除率; 羟基自由基; 超氧阴离子自由基; DPPH自由基
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 06． 045
中图分类号:R962 文献标识码:B 文章编号:1008-0805(2012)06-1418-02
微孔草 Microula sikkimensis Hemsl 别名野菠菜［1］，为紫草科
(Borinaceae)微孔草属两年生草本植物，我国特有植物种［2，3］。
微孔草油能明显降低肝及血清胆固醇、甘油三酯及血清丙二醛的
含量［3，4］，提高血清高密度脂蛋白胆固醇的比值，同时还具有良
好的抗衰老作用。而抗氧化剂能阻止氧化不良影响，帮助捕获并
中和自由基，祛除自由基对人体损害［5］。因此，从天然产物中寻
找安全可靠，且兼有营养作用的抗氧化剂的研究日益受到人们关
注［5 ～ 8］。本实验通过清除 DPPH自由基、超氧阴离子自由基及羟
基自由基 3 种方法对微孔草油进行体外抗氧化性研究，为微孔草
油脂类成分在工业生产和保健食品、化妆品和医药领域广泛应用
提供依据。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 KO318T型首饰超声波清洗器(昆山市超声仪器有限
公司) ;FZ102 微型植物粉碎机(天津市泰斯特仪器有限公司) ;
722 型可见分光光度计(上海精密科学仪器有限公司) ;AL204 电
子天平(梅特勒 －托利多仪器(上海)有限公司)。
1． 2 药品 石油醚、醋酸乙酯、无水乙醇、硫酸亚铁、磷酸二氢钠、
抗坏血酸、柠檬酸、焦性没食子酸(均为成都市科龙化工试剂厂
生产，AR) ;邻菲罗啉、磷酸氢二钠(均为成都金山化学试剂有限
公司生产，AR) ;1，1 －二苯基 － 2 －三硝基苯肼(上海如吉生物科
技有限公司，AR) ;过氧化氢(30%溶液) (成都市联合化工试剂
研究所，AR) ;95%乙醇;三蒸水;微孔草。
2 方法
2． 1 提取 将干燥的微孔草种子进行粉碎处理，采用乙醇浓度
95%浸泡微孔草种子粉末(固液比为 1∶ 9) ，提取时间 24 h(渗滤
法) ，浓缩乙醇浸提液得到浸膏。
2． 2 分离 用石油醚萃取，浓缩，得石油醚萃取物，再采用柱层析
法分离该部分萃取物。将石油醚萃取物回收浓缩，分成 3 份，分
别用石油醚溶解后上样，选用石油醚与醋酸乙酯不同比例(42∶
1;30∶ 1;15∶ 1)混合作为展开剂，分别进行过柱，每 30 ～ 40 ml
为一组流分，经 TLC检测，合并流分，浓缩，回收展开剂，静置挥
发，得到 A，B，C等 3 种较纯的油状物质。
2． 3 提取物抗氧化性质研究
2． 3． 1 待测溶液的配制 分别取提取物 A，B，C 0． 0400 g 于 20
ml比色管中，用少量无水乙醇溶解，再用三蒸水定容至刻度，备
用。
2． 3． 2 提取物对羟基自由基的清除作用 配制待测液 A，B，C浓
度为 0． 5 mg /ml，同时配制同浓度的抗坏血酸溶液和柠檬酸溶液
作为对照。该反应体系所需溶液及试剂为 PBS缓冲液(pH7． 4)、
0． 75 mol /L 邻二氮菲、三蒸水、0． 75 mmol /L FeSO4 溶液、0． 1%
H2O2。将反应体系置于 37℃恒温水浴锅中，反应 60 min 后立即
取出，并迅速测定其在 536 nm处的吸光度(并以三次水作为空白
对照，便于提高精度)。根据下列公式计算清除率:
清除率(%)=(A加药 － A损伤)/(AM未损伤 － A损伤)× 100%
A加药 －比色管中依次加入 2 ml PBS、1 ml邻二氮菲、0． 5 ml 0． 1%
H2O2、1 ml FeSO4、1 ml待测液，用三蒸水稀释至 10 ml;
A损伤 －不加待测液，其余同上;
A未损伤 －不加待测液与 0． 1%H2O2 其余同上。
2． 3． 3 提取物对超氧阴离子自由基的清除作用 配制待测液 A，
B，C浓度为 2 mg /ml，同时配制 0． 5 mg /ml 的抗坏血酸溶液作为
对照。取 10 ml比色管依次加入 3 ml PBS缓冲液(pH8． 4)、3 ml
0． 5 mmol /ml邻苯三酚溶液、0． 5 ml 待测液，加三蒸水稀释至刻
度。每隔 30 s测其在 325 nm处的吸光度 A1;将待测液以三蒸水
代替，同样条件下测其吸光度 A0。作图分别计算出邻苯三酚自
氧化速率 k1，k0。根据下列公式计算清除率:清除率(%)=(k0 －
k1)/k0 × 100%
2． 3． 4 提取物对 DPPH自由基的清楚作用 配制待测液 A，B，C
浓度为 0． 5 mg /ml，同时配制同浓度的抗坏血酸浓液作为对照，
取一 10 ml的比色管，依次加入 2 ml 0． 177 8 g /ml DPPH 溶液、2
ml待测液，加水稀释至 5 ml，摇匀，反应 30 min，测其在 517 nm处
的吸光度。根据下列公式计算清除率:
清除率(%)= 1 －(A1 － A2)/A0 × 100%
A1 － 2ml DPPH溶液 + 2 ml待测液 + 1 ml三蒸水;
A2 － 2ml 无水乙醇 + 2 ml待测液 + 1 ml三蒸水;
A0 － 2ml DPPH溶液 + 2 ml三蒸水 + 1 ml三蒸水。
3 结果
3． 1 对羟基自由基的清除作用 结果见表 1。
表 1 同浓度的提取物 A，B，C及抗坏血酸对羟基自由基的清除率
待测物 浓度 C /mg·ml －1 清除率(%)
提取物 A 0． 5 72． 93
提取物 B 0． 5 67． 13
提取物 C 0． 5 59． 94
抗坏血酸 0． 5 93． 37
从表 1 可看出，3 种不同提取物对羟基自由基的清除能力均
弱于抗坏血酸的，其中提取物 A的清除率最高，对羟基自由基的
清除能力最好，其次提取物 B，效果最差的是提取物 C。
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL． 23 NO． 6
3． 2 对超氧阴离子自由基的清除作用 结果见图 1。
图 1 同浓度的提取物 A，B，C及
抗坏血酸每隔 30 s在 325 nm处的吸光度
由图 1 通过线性关系可以知道邻苯三酚的自氧化速率 k
(表 2)。
表 2 由图 1 得出的自氧化数率 k
待测液 浓度 C /mg·ml －1 自氧化数率 k 清除率(%)
提取物 A 2 0． 004 3 29． 51
提取物 B 2 0． 005 2 14． 75
提取物 C 2 0． 005 7 6． 58
抗坏血酸 0． 5 0． 000 03 99． 51
空白 － 0． 006 1 －
从表 2 的结果得知，3 种提取物对超氧阴离子自由基的清楚
能力相较于抗坏血酸都比较差，其中提取物 A 的清楚能力相较
于提取物 B、C最强，提取物 C最差，对超氧阴离子自由基的清除
率仅达 6． 58%。
3． 3 对 DPPH自由基的清除作用 结果见表 3。
表 3 同浓度的提取物及抗坏血酸对 DPPH自由基的清除率
待测物 浓度 C /mg·ml －1 清除率(%)
提取物 A 0． 5 21． 39
提取物 B 0． 5 10． 37
提取物 C 0． 5 4． 79
抗坏血酸 0． 5 94． 20
从表 3 可以得出结论，A，B，C 3 种提取物清除 DPPH自由基
的效果都很差，尤其提取物 C的清除率仅 4． 79%。
通过 3 种提取物分别对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DP-
PH自由基的清除作用。如图 2 所示。
1．对羟基自由基的清除作用;
2．对超氧阴离子自由基的清除作用;3．对 DPPH自由基的清除作用
图 2 三种物质对不同自由基的清除能力
4 讨论
本实验对 3 种物质进行抗氧化活性分析时，做了不同浓度样
液(0． 5，0． 8，2 mg /ml)的探索实验，实验中发现清楚羟基自由基
样液浓度为 0． 5 mg /ml 时，效果比较明显，清楚 DPPH 自由基的
样液浓度为 0． 5 mg /ml比较合适，而 3 种物质对清楚超氧阴离子
自由基能力都不是很明显。实验证明，清楚羟基自由基和 DPPH
自由基样液浓度选择 0． 5 mg /ml，清楚超氧阴离子自由基样液浓
度选择 2 mg /ml。
通过 A，B，C 3 种提取物对羟基自由基、超氧阴离子自由基
及 DPPH自由基的清除作用，与抗坏血酸相比，羟基自由基的清
除能力表现为:提取物 C ＜提取物 B ＜提取物 A ＜抗坏血酸;超氧
阴离子自由基清除能力表现为:提取物 C ＜提取物 B ＜提取物 A
＜抗坏血酸;DPPH自由基清除能力表现为:提取物 C ＜提取物 B
＜提取物 A ＜抗坏血酸。而 3 种提取物对自由基的清除能力表
现为:DPPH自由基 ＜超养阴离子自由基 ＜羟基自由基，说明 3
种提取物清除羟基自由基的效果最好，对其余两种自由基的清除
效果较差;3 种提取物的抗氧化性:提取物 C ＜提取物 B ＜提取物
A，说明微孔草石油醚部分通过展开剂(石油醚 ∶ 醋酸乙酯 = 42
∶ 1)过柱分离得到的提取物 A抗氧化效果最好。
5 结论
本实验表明微孔草石油醚萃取部分通过柱层析法分离得到
3种物质都有一定的抗氧化活性，尤其提取物 A的抗氧化效果最
佳，因此为微孔草石油醚提取部分能够在工业生产和保健食品、
化妆品和医药领域的广泛应用提供了依据。
参考文献:
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