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HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量研究



全 文 :紫地榆是牻牛儿苗科老鹳草属植物Geranium
trictipes R.Kunth的根,民间称隔山消。其药源十分丰
富,长期以来在云南的白族、彝族等少数民族地区
广泛使用,主要治疗厌食症,同时具有显著的止血、
止痢功能〔1〕。紫地榆中含有没食子酸〔2-3〕,没食子
酸具有抗菌抗病毒、抗肿瘤作用〔4〕,是紫地榆的活
性成分之一。目前有关紫地榆中没食子酸含量测定
未见报道。本文采用高效液相色谱法测定隔山消中
没食子酸的含量,为建立隔山消质量标准和进一步
研究隔山消提供科学依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 Agilent 1100高效液相色谱仪,包括
G1315A/B DAD检测器,G1313A ALS自动进样器,
Agilent 1100色谱工作站(美国安捷伦科技有限公
司);梅特勒电子天平AE240(瑞士);DZKW-4水浴
锅(上海科析实验仪器厂);FY135型中草药粉碎机
HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量研究
肖培云,蓝 海,李龙星
(大理学院药学院,云南大理 671000)
[摘要]目的:建立HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量。方法:测定没食子酸的色谱条件是Agilent ZOR-
BAX SB C18色谱柱(4.6mm×150mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(10 ∶ 90),检测波长为273nm,流速
为1.0ml/min,柱温为25℃。结果:没食子酸在0.05~0.5μg范围内线性关系良好,r值为0.999 9,平均回收率为
98.46%,RSD为2.56%。结论:本法操作简便、快速、分离效果好、稳定性高、重现性好,为建立隔山消质量标准
和进一步研究隔山消提供科学依据。
[关键词]隔山消;没食子酸;高效液相色谱
[中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1672-2345(2009)06-0009-03
[基金项目]云南省教育厅科研基金资助项目(08C0194);大理州科学技术局资助项目(08DL102)
[收稿日期]2009-03-06
[作者简介]肖培云(1970-),女,云南大理人,高级实验师,主要从事药品质量标准研究.
Determination of Gallic Acid in Geranium Strictipe R. Kunth by HPLC
Xiao Peiyun,Lan Hai,Li Longxing
(College of Pharmacy, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China)
〔Abstract〕Objective: To establish a method for determination of gallic acid in Geranium strictipe R.Kunth. Method: The
chromatographic condition for gallic acid was that the Agilent ZORBAX SB C18(4.6mm×150mm,5μm)was used; the mobile phase
consisted of CH3OH-H2O (0.4%H3PO4); the UV wavelength of gallic acid was 273nm; the flow rate was 1.0ml/min; the temperature
of column was 25℃ . Result: Gallic acid was good linearity over the range of 0.05~0.5μg, (r=0.999 9), The average recovery was
98.46%; RSD was 2.56%. Conclusion: The method is simple, sensitive, accurate, reproducible and can be used to control the quality
of Geranium strictipes R.Kunth.
〔Key words〕Geranium strictipes R. Kunth; gallic acid; HPLC
大理学院学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第8卷第6期 2009年6月
Vol.8 No.6 Jun. 2009
9
(天津市泰斯特仪器有限公司);101A-2B型电热鼓
风恒温干燥箱(上海市崇明实验仪器厂);SZ-97自
动三重纯水蒸馏器(上海亚荣生化仪器厂)。
1.2 试剂及样品 没食子酸对照品(中国药品生物
制品检定所,批号:110831-200302),紫地榆药材于
2008年4月购于大理药材市场,由大理学院药学院
马晓匡教授鉴定。甲醇(色谱纯),水(重蒸馏纯净
水),其它试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent ZORBAX SB C18
(4.6mm×150mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶
液(10 ∶ 90),流速:1.0ml/min,柱温:25℃;检测波长:
273nm〔5-6〕,进样量10μl,没食子酸在该色谱条件下
被洗脱且达到基线分离,保留时间约为4.7min,按没
食子酸计算理论塔板数不低于6 000。对照品和样品
色谱。见图1、2。
图1 对照品HPLC色谱图(1—没食子酸)
图2 供试品HPLC色谱图(1—没食子酸)
2.2 对照品储备液的制备 精密称取干燥至恒重
的龙胆苦苷对照品2.5mg,置10ml容量瓶中,加甲醇
溶解并稀释至刻度,摇匀,作为储备液。
2.3 提取方法考察 精称样品(过80目)3份,每份
0.5g,加甲醇25ml,分别用索氏提取法、回流、超声3
种方法提取1h。浓缩,转移至25ml的量瓶中定容,摇
匀,用0.45μm滤膜过滤,按上述色谱条件进样,进行
含量测定。结果见表1。
表1 提取方法考察
由表1可知,回流提取效果最佳,所以选用回流
提取法。
2.4 供试品溶液的制备 精称样品0.5g,精加25ml
70%甲醇,精密称定,加热回流3h,冷却,加70%甲醇
补重,摇匀,滤过,取续滤液10μl进样。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系 精密移取上述储备液1ml配制成
10ml,作为对照品溶液。取对照品溶液2、5、10、15、
20μl在选定色谱条件下进样,记录峰面积。以进样
量为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,并进
行线性回归分析,没食子酸的回归方程为:Y=
1 259.6X + 99.849,r=0.999 9。结果表明没食子酸在
0.05~0.5μg范围内线性关系良好。
2.5.2 精密度试验 取对照品溶液,连续进样6次,
测定峰面积,计算RSD值为0.12%。表明进样精密度
良好。
2.5.3 重复性实验 取同一批样品按供试品溶液
的制备方法制备5份供试液,按色谱条件进样,测定
没食子酸的含量,其含量平均值为1.63mg / g,RSD为
1.45%。结果表明本实验重复性良好。
2.5.4 稳定性试验 取同一供试品溶液间隔0、2、
4、6、8h进样,按上述色谱条件测定没食子酸的峰面
积,RSD为2.01%。结果表明供试品溶液在8h内稳定。
2.5.5 加样回收率试验 精密称取已知含量的样
品粉末约0.25g,分别精密加入没食子酸对照品溶
液,按供试品溶液的制备方法制备供试品溶液,依
提取方法
超声
索氏提取
回流
没食子酸含量/(mg/g)
0.504 8
0.672 6
1.109 8
大理学院学报总第 66 期 医学
10
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法测定,计算回收率。结果见表2。结果表明,本实验
确立的提取方法与处理方法回收率较好。
表2 回收率试验结果(n=5)
2.5.6 样品含量测定 采用上述供试品溶液制备
方法及色谱条件,对3批样品中的没食子酸含量进
行测定。结果见表3。
表3 样品含量测定结果(n=3)
3 讨论
有文献报道〔7〕,没食子酸在275nm处具有最大
吸收,本实验为进一步确定测量波长,对没食子酸
对照品溶液在200~400nm范围内进行扫描,结果表
明没食子酸在273nm处有最大吸收。在选择色谱条
件时,经过反复试验,最终选用0.4%H3PO4溶液:甲
醇(90 ∶ 10)条件下,能达到基线分离,无干扰,所以
选用此条件进行隔山消中没食子酸的含量测定。
[参考文献]
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族医药杂志,2007,7:51.
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〔7〕平欲晖.高效液相色谱法测定覆盆子没食子酸的含量〔J〕.
江西化工,2007(4):93-94.
(责任编辑 李 明)
RSD
/%
2.56
称样量
/g
0.250 4
0.251 2
0.250 1
0.250 2
0.251 1
样品含量
/mg
0.408 2
0.409 5
0.407 7
0.407 8
0.409 3
加入量
/mg
0.40
0.40
0.40
0.40
0.40
测得
值/mg
0.795 4
0.801 5
0.809 2
0.802 1
0.802 8
回收
率/%
96.88
98.06
100.38
98.60
98.41
平均回
收率/%
98.46
RSD/%
1.12
1.86
1.65
批号
1
2
3
没食子酸含量/(mg/g)
1.48
1.70
1.65
肖培云,蓝 海,李龙星 HPLC法测定隔山消中没食子酸的含量研究 第 8 卷总第 66 期
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