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石柑子不同溶剂提取物及其总蒽醌的抗氧化活性研究



全 文 : 7 《食品工业》2009 年第 3 期
石柑子不同溶剂提取物及其总蒽醌的抗氧化活性研究
尹文清,张岩,曾立,宋鑫明,段少卿
广西师范大学 化学化工学院 药用资源化学与药物分子工程教育部重点试验室 (桂林 541004)
摘 要 采用流动注射化学发光法,对石柑子石油醚提取物(PE)、氯仿提取物(CE)、乙酸乙酯提取物(AE)
和乙醇提取物(EE),及石柑子总蒽醌的抗氧化活性进行了测定,并与VC的抗氧化性进行了比较。结果表
明,四种提取物及总蒽醌都具有较强的抗氧化活性,但IC50值皆大于VC,抗氧化活性强弱顺序依次为:
VC>总蒽醌>EE>AE>CE>PE。
关键词 石柑子;流动注射化学发光法;抗氧化
Study on Antioxidant Activity of Different Solvents Extracts and Anthraquinones
Component of Pothos Chinensis (Raf.) Merr.
Yin Wen-qing,Zhang Yan,Zeng Li,Song Xin-ming,Duan Shao-qing
Key Laboratory for the Chemistry and Molecular Engineering of Medicinal Resources, Ministry of Education of
China, College of Chemistry and Chemical Engineering, Guangxi Normal University (Guilin 541004)
Abstract The antioxidant activity of petroleum ether extract (PE), chloroform extract (CE), ethyl acetate extract
(AE), ethanolic extract (EE), and anthraquinones component of Pothos Chinensis (Raf.)Merr. were determined
with flow-injection chemiluminescence and compared to VC. The results indicated that all extracts exhibit
excellent antioxidant activity. The antioxidant activity of were VC> anthraquinones component >EE>AE>CE>PE.
Keywords Pothos chinensis(Raf.) Merr.;fl ow-injection chemiluminescence;antioxidant activity
基金项目:药用资源化学与药物分子工程教育部
重点试验室科研项目(桂科能07109001-03);广西
研究生教育创新计划项目(2008106020703M243)
石柑子(Pothos chinensis (Raf.)Merr.)为天南星科
石柑子属植物,又名葫芦钻,全草入药。传统中医理
论认为石柑子苦、辛、微温、无毒,能清热、解毒、
袪风湿,具有治疗风湿、骨折、蛇伤、小儿积疳病及
抗肿瘤的功效,是传统瑶药“十八钻”之一[1-2]。试验
用流动注射化学发光法,通过luminol-H2O2-碳酸盐缓
冲体系,对石柑子抗活性氧的能力进行评价,为石柑
子的进一步综合开发利用提供试验依据。
1 试验部分
1.1 仪器与材料
IFFM-E型流动注射化学发光仪:西安瑞迈电子
科技有限公司;EYELA-N-1001型真空旋转蒸发仪:
日本东京理化公司;pHS-3C型精密pH计:上海康仪
仪器有限公司;SK5200LH型超声仪:上海科导超声
仪器有限公司;精密天平:Sartorius BT-124S,赛多
利斯科学仪器有限公司。
鲁米诺(GR, ACROS试剂);30% H2O2溶液、碳
酸钠、碳酸氢钠、维生素C、石油醚、氯仿、乙酸乙
酯、乙醇均为国产分析纯;所用水为二次蒸馏水;石
柑子购于桂林市药材市场,经桂林三金药业集团钟小
清工程师鉴定为天南星科石柑子属植物石柑子。药材
粉碎后,60℃下干燥至恒重,备用。
1.2 石柑子不同溶剂提取物的制备
称取石柑子粉末5 g,用石油醚回流提取3 h,抽
滤,反复操作两次后,合并滤液,减压回收石油醚,
得浸膏,用乙醇超声溶解(若有微量不溶物,则滤
去),定容到100 mL容量瓶中,备用。再称取三份石
柑子粉末,同法分别用氯仿、乙酸乙酯、乙醇回流提
取、定容,得到不同溶剂提取物。石油醚提取物、氯
仿提取物、乙酸乙酯提取物和乙醇提取物分别表示为
PE、CE、AE和EE,以上提取物质量浓度均为50 mg/
mL。
1.3 石柑子总蒽醌的制备
称取5 g石柑子粉末,用氯仿和20%硫酸(体积比
5:1)回流提取3 h,过滤,滤液静置分层,氯仿层用
5% NaOH萃取,NaOH萃取液用浓盐酸酸化到pH=5,
再用氯仿萃取,挥干氯仿,得总蒽醌的粗品。最后用
乙醇把总蒽醌粗品溶解,定容到100 mL容量瓶中,备
用。
1.4 石柑子提取物抗氧化能力的测定
准确量取一定量的石柑子提取物PE、CE、AE
和EE供试品溶液,配制成0.050、0.10、0.30、0.50、
1.0、2.0、3.0 mg/mL系列浓度的溶液,总蒽醌、VC分
别稀释配制成0.010、0.020、0.030、0.050、0.070、
0.10、0.15、0.20 mg/mL系列浓度的溶液。连接好仪
器,将管路清洗干净,插入相应的溶液,将各流路输
入分析系统,以乙醇为空白,测定不同浓度提取物
对HO·的清除能力,每个浓度样品平行做4次,取平
基础研究
8 《食品工业》2009 年第 3 期
均值,记录化学发光信号,计算各浓度样品发光抑
制率,绘制量效关系曲线,得出抑制率IC50时所需的
浓度,IC50越小,说明清除作用越强,抗氧化活性越
强。整个分析过程中采样、注样、试验数据采集及处
理,均在windowsXP操作系统下Remax软件完成。
发光抑制率(%)=[(I0-I)/I0]×100 (I0为空白发光峰
值,I为加抑制剂后的发光峰值)
2 结果与分析
2.1 H2O2浓度对抑制率的影响
H2O2作为HO·的来源,它的浓度对发光强度有
很大影响。因此,在固定pH值、Luminol浓度及石柑
子提取液浓度的条件下,考察(0.001~0.27) mol/L浓度
的H2O2对化学发光强度的影响,结果显示H2O2的浓度
为0.10 mol/L时相对发光强度最大,抑制率也最大。
H2O2浓度大于0.10 mol/L发光强度有下降趋势,且发
光稳定性降低。故试验选择H2O2浓度为0.10 mol/L。
因H2O2溶液不稳定,需现配现用。
2.2 缓冲溶液的pH值对抑制率的影响
鲁米诺的氧化发光反应在碱性介质中进行,介
质的pH值会影响氧化剂的氧化能力,从而影响化学
发光强度。固定其它条件不变,通过改变Na2CO3溶液
和NaHCO3溶液的不同比例达到改变pH值目的,试验
考察了pH为8.77~12.16内对发光强度及抑制率的影
响。结果显示,当pH为10.28时,抑制率最大,而且
发光强度适宜,灵敏度也比较好。故试验选pH=10.28
为适宜的测定条件。
2.3 鲁米诺溶液浓度对抑制率的影响
根据上述试验结果,在固定H2O2浓度0.10 mol/
L,pH10.28时,考查鲁米诺溶液浓度在(1×10 -5
~1×10-3) mol/L范围内对相对化学发光强度及抑制率
的影响。结果可看出鲁米诺溶液浓度在1×10- 4 mol/L
时,抑制率最大,相对发光强度也最大,灵敏度也比
较好。故本试验选鲁米诺溶液浓度为1×10- 4 mol/L为
最佳条件。
2.4 抗氧化活性的测定结果
图1 抑制率与不同溶剂提取物浓度的关系
在选定的最佳条件下,将配制成的系列浓度溶液
进行试验。结果如图1和图2。
由图1看出,随着石柑子提取物质量浓度的逐渐
增加,化学发光强度呈现逐渐降低的趋势,抑制率则
呈现逐渐增强的趋势,说明石柑子具有较强的抗氧
化性能,且呈现量效关系。其不同溶剂提取物PE,
CE,AE,EE的IC50值(抑制率为50%时的溶液的质量
浓度)分别为:2.0、1.1、0.34、0.091 mg/mL。
图2 抑制率与总蒽醌、VC浓度的关系
由图2可见,石柑子总蒽醌同VC皆具有较强的抗
氧化活性,当浓度为0.20 mg/mL时其抑制率都达80%
以上,其IC50值分别为0.052、0.024 mg/mL。
3 结论
3.1 主副泵的泵速及负高压的大小对发光强度和灵
敏性有很大影响,本试验选择主副泵泵速分别为30 r/
min和25 r/min,测量时间20 s,负高压480 V,此时具
有较高的发光强度和稳定性。在其他条件不变的情况
下,负高压增大,发光强度增大,同时灵敏度也随之
增大,使得发光不稳定,因此,应当根据溶液的配制
情况来选择合适的负高压,使得发光强度较大而且稳
定。
3.2 随着石柑子提取物浓度的逐渐增加,化学发光
强度呈现逐渐降低的趋势,抑制率呈现逐渐增强的趋
势,说明石柑子提取物具有较强的抗氧化性能,且呈
现量效关系,随着提取溶剂极性的增大抑制活性增
强。石柑子总蒽醌的抗氧化活性虽弱于VC,但是强
于各种溶剂的提取物,对石柑子总蒽醌进行进一步分
离纯化,有望从中筛选出具有更好抗氧化活性的单体
化合物。
参考文献
[1] 戴斌,李钊东,邱翠嫦,等.“虎牛钻风”类传统瑶药的调
查研究[J]. 中国民族民间医药杂志, 1998, 31(2):28-31.
[2] 黄琳芸,余胜民,钟 鸣,等.瑶药葫芦钻提取物抗肿瘤作
用的试验研究[J].时珍国医国药,2007,l8(7):1590-1591.
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