全 文 ：收稿日期:2008-12-26;　修订日期:2009-06-03
基金项目:贵州省中药现代化课题(No.[ 2007] 5021);
北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室开放基金
作者简介:黄小容(1983-),女(汉族),贵州赤水人 ,现任贵州大学生命科
学学院在读硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然药物化学工作.
＊通讯作者简介:周　英(1971-), 女(汉族),贵州贵阳人 , 现任贵州大学
生命科学学院教授 ,硕士生导师 ,博士学位 ,主要从事天然药物化学研究
工作.
初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响
黄小容 1 , 王慧娟1 ,贺定祥 3 ,周　英1, 2＊
(1.贵州大学生命科学学院 ,贵州 贵阳　550025;
2.北京大学天然药物及仿生药物国家重点实验室 ,北京　100191;
3.贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司 ,贵州 贵阳　556000)
摘要:目的 初探山慈姑及其伪品对酪氨酸酶活性的影响。方法 采用多巴色素法 , 底物为 L-多巴 ,测定山慈姑及其伪
品提取物对酪氨酸酶的激活作用;薄层色谱法对药材中的酪氨酸进行定性鉴别。结果 山慈姑的激活作用最高 , 丽江山
慈姑和金果榄作用不明显 ,白及呈抑制作用;薄层检测显示山慈姑 、丽江山慈姑和金果榄中含有酪氨酸。结论 初步认为
酪氨酸为山慈姑等激活酪氨酸酶活性作用的主要成分之一。
关键词:山慈姑;　伪品;　酪氨酸酶;　酪氨酸;　激活作用
中图分类号:R　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)11-2769-01
EffectsofCremastraappendiculata(D.Don)MakinoandSpuriousBreedonActivityof
Tyrosinase
HUANGXiao-rong1 , WANGHui-juan1 , HEDing-xiang3 , ZHOUYing1, 2＊
(1.ColegeofLifeSciences, GuizhouUniversity, Guiyang550025, China;2.StateKeyLaboratoryofNatural
andBiomimeticDrugs, BeijingUniversity, Beijing100191, P.R.China;3.XinbangTraditionalChineseMedicine
LimitedCompany, Guiyang556000, China)
Abstract:ObjectiveTheefectsofCremastraappendiculata(D.Don)Makinoandspuriousbreedontheactivityoftyrosinase
werestudied.MethodsTyrosinaseactivitywasdeterminedbythedopachromemethodusingL-DOPAasthesubstrateandthea-
mountofdopachromeinthereactiommixturewasmeasuredbyspectrophotometer.TyrosinewasidentifiedbyTLC.ResultsThe
resultsshowedthattheCremastraappendiculata(D.Don)Makinosignificantlyincreasedtheactivityoftyrosinase, buttheRhizo-
maBletillaeinhibited.TheCremastraappendiculata(D.Don)Makino, IphigeniaindicaKunthetBenthandTinosporacapilipes
Gagnephadtyrosine.ConclusionTyrosineisoneofthemajorcomponentsoftheCremastraappendiculata(D.Don)Makino,
IphigeniaindicaKunthetBenthandTinosporacapilipesGagneptostimulatetheactivityoftyrosinase.
Keywords:CremastraappendiculataMakino;　Spuriousbreed;　Tyrosinase;　Tyrosine;　Effect
　　酪氨酸酶又称多酚氧化酶 ,是哺乳动物体内黑素代谢的关键
酶。对酪氨酸酶活性调节可直接影响黑色素的合成 , 其中酪氨
酸 、多巴 、铜等可影响酪氨酸酶的活性 [ 1] , 其活性改变可引起色
素障碍性皮肤病如白癜风。因此 , 能够激活酪氨酸酶活性并加速
黑色素生成的药物 , 均可提高因缺乏黑色素所致疾病的疗效 [ 2] 。
根据闫军等 [ 3]报道 , 山慈姑具有激活酪氨酸酶活性的作用。
作者对山慈姑进行化学成分研究中 ,分离得到了影响酪氨酸酶活
性的物质———酪氨酸。同时 , 由于市场上山慈姑的品种比较混
乱 , 很多地方常以白及 、金果榄 、丽江山慈姑等的球茎或块根代替
正品使用 [ 4] 。本实验选用山慈姑及伪品进行研究 , 采用多巴色
素法和薄层色谱法 , 初探对酪氨酸酶活性的影响。
1　材料
1.1　药材 山慈姑药材购自贵州省黔东南州信邦中药饮片有限
责任公司;白及 、金果榄 、丽江山慈姑药材购自贵州省药材公司。
由贵州省黔东南州信邦中药饮片有限责任公司贺定祥鉴定。
1.2　试剂和仪器 L-多巴 , 蘑菇酪氨酸酶(Sigma公司产品), 酪
氨酸(从山慈姑中分离得到),其它试剂均为市售分析纯。 T6新
世纪紫外可见分光光度计(北京谱析通用仪器有限责任公司),
FA2004电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)。
2　方法
2.1　样品的制备 山慈姑 、白及 、金果榄和丽江山慈姑生药粉碎
(100目), 各称取 4 g, 分别用 50%乙醇 40 ml浸泡 14 d。过滤 ,
取续滤液 1 ml, 用 pH6.8磷酸缓冲液定容至 25ml, 备用。
2.2　酪氨酸酶活性测定 参照 Matsuda等 [ 5]报道方法。 分别取
上述样品液 2 ml, 依次加入 0.004 mol/L的 L-多巴反应液 2 ml
与蘑菇酪氨酸酶 2 ml(200 U),混合 , 立即置分光光度计上于 475
nm处测吸收值 ,每分钟记录一次 , 连续记录 20 min。同时 ,以 pH
6.8磷酸缓冲液作为空白对照。酪氨酸酶激活率按下列公式计
算。
激活率(%)=[(C-D)/t-(A-B)/t] /(A-B)/t×100%。
其中 , A=A475-药 +酶;B=A475-药 -酶;C=A475+药 +酶;D=A475+药 -酶 , t为相对应的时间。
2.3　数据处理和统计方法 采用配对计量资料 t检验 , 实验重复
3次。
2.4　薄层层析 分别取白及 、金果榄 、山慈姑 、丽江山慈姑 、酪氨
酸溶液点样于同一块硅胶薄层板上 , 编号为 1、 2、3、4、5。以正丁
醇 -水 -乙酸(4∶1∶1)为展开剂 , 展开 , 晾干。喷以 1%茚三酮
乙醇溶液 ,吹干 , 显色。
3　结果
3.1　 山慈姑和丽江山慈姑均有激活酪氨酸酶活性的作用 ,金果
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11 时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期
榄的作用不明显 , 白及则显示抑制酪氨酸酶活性的作用见表 1。
表 1　山慈姑及伪品提取物对酪氨酸酶活性的激活率( x±s)
样品 酪氨酸酶激活率(%)
白及 -20.32±4.17
金果榄 4.11±0.67
山慈姑 41.08±1.41
丽江山慈姑 10.69±0.35
3.2　 经显色后 , 在相同位置处 , 酪氨酸 、金果榄 、山慈姑和丽江
山慈姑有一紫色斑点 , 白及则没有。表明金果榄 、山慈姑和丽江
山慈姑中有酪氨酸存在见图 1。
1.白及　2.金果榄　3.山慈姑　 4.丽江山慈姑　5.酪氨酸
图 1　4种中药与酪氨酸薄层图谱
4　讨论
通过山慈姑及其伪品对酪氨酸酶激活率的比较 ,山慈姑的活
性最强 , 丽江山慈姑次之 ,金果榄几乎无活性 ,白及则显示抑制作
用。这对临床上治疗色素障碍性皮肤病药物选用时 ,具有一定的
指导作用。
由薄层鉴定可知 ,酪氨酸是山慈姑 、丽江山慈姑激活酪氨酸
酶活性作用的主要成分之一;白及中不含酪氨酸 , 且由于其它成
分的存在呈现抑制作用。
作者对呈现抑制作用的白及组中加入一定量的酪氨酸(其它
条件相同),在 475 nm处测量 ,抑制率为 -11.88%。加入酪氨酸
后虽然降低了抑制率 , 但并没有达到预期使其激活的效果。 因
此 , 酪氨酸含量的高低与激活作用是否呈正比关系 ,还有待进一
步深入的研究。
中药成分十分复杂 ,酪氨酸也并非为激活酪氨酸酶活性的唯
一化合物。据文献报道 , 咖啡酸也具有激活酪氨酸酶的作用 [ 6] ,
黄芪中的山柰素 [ 7] 、女贞子中的酪醇和齐墩果酸 [ 8]是它们显示
激活作用的主要成分。中药治疗白癜风等皮肤病的作用原理 , 至
今仍不清楚。每个具有激活作用的化合物之间是否存在共同点 ,
作用机理如何 ,都值得进行探讨。
参考文献:
[ 1 ] 　查日煌.中医药治疗白癜风的新进展 [ J] .甘肃中医 , 2008, 21(3):
57.
[ 2 ] 　王　倩 ,蔡念宁.中西药对白癜风发病机制中酪氨酸酶调控的研究
现状 [ J] .北京中医 , 2007, 26(5):317.
[ 3 ] 　闫　军 ,李昌生.21味中药对酪氨酸酶活性影响的研究 [ J] .中药
材 , 2002, 25(10):724.
[ 4 ] 　刘邦强 ,王业发 ,余淑芳 ,等.同名异科慈菇真伪品鉴别比较 [ J] .中
国民族民间医药杂志 , 2005, 2:111.
[ 5 ] 　MatsudaH, HigashinoM, NakaiY, etal.Studiesofcuticledrugsfrom
naturalsources, IV.InhibitoryefectsofsomeArctostaphylosplantson
melaninbiosynthesis[J] .BiolPharmBull, 1996, 19:153.
[ 6 ] 　邓湘庆 ,龚盛昭.咖啡酸激活酪氨酸酶催化反应的动力学研究 [ J] .
食品科学 , 2008, 29(04):98.
[ 7 ] 　谭　城 ,朱文元 ,鲁　严.山柰素等 7种中药单体对酪氨酸酶的激
活作用 [ J] .临床皮肤科杂志 , 2006, 35(5):275.
[ 8 ] 　张迪敏 ,李永伟.女贞子对培养的黑素细胞酪氨酸酶活性和黑素合
成的影响 [ J] .中华皮肤科杂志 , 2006, 39(4):197.
收稿日期:2009-01-19;　修订日期:2009-04-29
基金项目:江西省卫生厅科技项目(No.20081110)
作者简介:张生枝(1987-),女(汉族),江西婺源人 ,现为赣南医学院基础医学院临床医学本科生 ,主要从事心血管药理研究工作.
＊通讯作者简介:曾　靖(1958-),男(汉族),江西赣州人 ,现任赣南医学院药学院药理学教授 ,硕士研究生导师 ,学士学位 ,主要从事心血管药理 、中草
药药理的研究工作.
大豆苷元对离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用
张生枝1 ,钟星明 2 , 黄虎龙1 , 陈洁玲 1 , 冒　宸1 , 叶丽娟 1 , 曾　靖3＊
(1.赣南医学院基础医学院 ,江西 赣州　341000;　2.赣南医学院第一附属医院 ,江西 赣州　341000;
3.赣南医学院药学院 ,江西 赣州　341000)
摘要:目的 研究大豆苷元(DD)对离体心脏缺血再灌注损伤的保护作用。方法 应用大鼠离体心肌缺血再灌注损伤模
型 , 在灌流液中加入高 、低剂量的大豆苷元 。测定冠脉流量 、心率 、左心室收缩压 、左心室内压最大变化速率及心肌组织
乳酸脱氢酶(LDH)和心肌肌酸激酶(CK)活性的变化。结果 与溶剂组比较 , 大豆苷元能使左心室收缩压升高 、左心室内
压最大变化速率增大;能使心肌 LDH及 CK的活性升高;冠脉流量 、心率未见明显变化。结论 大豆苷元可通过增大左心
室内压最大变化速率 、增强心肌收缩力及减少心肌酶的释放对离体心脏缺血再灌注损伤起保护作用。
关键词:大豆苷元;　缺血再灌注损伤
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)11-2770-03
TheTherapeuticEffectsofDDonIsolatedHeartIschemia/ReperfusionInjury
ZHANGSheng-zhi1 , ZHONGXing-ming2 , HUANGHu-long1 , CHENJie-ling1 , MAOChen1 , YELi-juan1 , ZENG
Jing3＊
(1.BasicMedicalSchool, GannanMedicalColege, Ganzhou, 341000, China;2.TheFirstAfiliatedHospitalof
GannanMedicalUniversity, Ganzhou, 341000, China;3.PharmacologicalColegeofGannanMedicalUniversi-
ty, Ganzhou, 341000, China)
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.11