全 文 ：黑龙江医药 He i lon 幻i n ag Me die i ne Ju on r a lV o l.2 7N o· 42 01 4 731
·药品检验 ·
虎眼万年青总黄酮的提取及含量测定
林淋 , , 邹翔 , , 2 , 曲中原 “ ’ , 刘影 , , 王超 , , 邹晓祺 , , 张逸乔 “
1
.哈 尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心 药物研究所博士后科研工作站 (哈尔滨 1 5 0 0 7 6 ) ;
2
.国 家教育部 杭肿瘤天然 药物工程研究中心 (哈尔滨 , 150 07 6 ) ;
3
.哈 尔滨商业大学药学院 (哈尔滨 , 150 07 6 )
摘 要 目的 : 比较虎眼万年青总黄酮的提取方法 , 测定虎眼万年青叶和鳞茎总黄酮的含量 。 方法 : 以总黄酮的含量为
指标 , 采用超声法和热 回流法分别提取虎眼万年青总黄酮 ,紫外 一可见分光光度法测定虎眼万年青叶和鳞茎中总黄酮的含
量 。 结果 : 热回流法提取虎眼万年青总黄酮的含量高于超声提取法 , 且虎眼万年青叶中总黄酮的含量高于鳞茎 。 结论 : 通过
对虎眼万年青总黄酮的提取方法进行 筛选 ,为其开发应 用莫定基础 。
关键词 :虎眼万年青 ;总黄酮 ;提取方法 ;含量测定
中图分类号 : R 2 84 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 6一 2 88 2 (2 0 1 4 ) 04 一 7 3 1一 0 3
E x t r a e t i o n a n d D e t e r m i n a t i o n o f T o t a l F l a v o n o id s F r o m
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虎眼万年青 (O 。 倪九og a玩。 ca 、 d a 扭。 A认 )俗名珍珠
草 , 又名鸟语花 ,为百合科多年生草本植物虎眼万年青的干
燥全草 ,原产于非洲南部 , 上个世纪八十年代 , 由朝鲜传人
我国 ,成为东北地区流传甚广的家庭观赏植物 ,我国历代本
草未见收载 [] ’ 。 虎眼万年青具有极高的药用价值 , 民间全草
人药用于抗炎 、臃肿疮毒 、 肝炎 、 肝硬化等的治疗 口3] 。 虎眼
万年青味甘 、 性微寒 , 归肝 、 脾经 ,具有清热解毒 、 消坚散结
的功效 45[] 。 研究发现 , 虎眼万年青对胃癌 、 肝癌 、 乳腺癌等
多种癌症具有显著抑制作用 ,作用明显 ,毒副作用小 6[] ” 。 虎
眼万年青中含有大量的黄酮及化学成分 [] 2 ,。 迄今为止 , 国内
对虎眼万年青多糖和皂普的提取及活性研究较多 L, 31 6] ,对虎
眼万年青总黄酮提取的报到较少 。 本文以虎眼万年青总黄
酮含量为指标 ,对虎眼万年青总黄酮提取方法进行了比较 ,
并比较虎眼万年青叶和鳞茎中总黄酮的含量 。
·
73 2黑龙江医药 H e il o n幻 ia ng M e d ie i neJ our nal V ol . 2 7N o· 40 21 4
1实验仪器和材料
1
.
1实验材料
虎眼万年青 ( O。 乞 h tg ol a ~c a、 dat、 。 A认 )购 自吉林
省长白朝鲜族自治县长 白山中药研究所 ;芦丁 (纯度 )
98 %
。 天津一方科技有限公司 ) 。
1
.
2实验仪器
T 6新世纪型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器
有限责任公司 ) ; F场 1 0型高速万能粉碎机 (天津市泰斯特仪
器有限公司 ) ; H H一 2型数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华
仪器制造有限公司 ) ; B A s1 2 4 s电子天平 (赛多利斯科学仪器
有限公司) ; K Q5 200D B型超声清洗仪 (工作频率 4 o K H z, 昆
山市超声仪器有限公司 ) 。
2 实验方法
2
.
1 不同提取方法提取虎眼万年青总黄酮
2
.
1
.
1 超声提取法
精密称取虎眼万年青干燥叶和干燥鳞茎粉末各 5 . 0 09 ,
置锥形瓶中 ,精密加 60 % 乙醇溶液 10 1l l L ,称定重量 ,超声
提取 (40 K H )Z 30 m in ,放冷 ,再称定重量 , 用 60 % 乙醇溶液补
足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 , 即得 。
2
.
1
.
2 热回流提取法
精密称取虎眼万年青干燥叶和鳞茎的粉末各 5 . 0 09 于
圆底烧瓶中 ,分别加人 10 1l l L 60% 乙醇溶液 ,精密称定 , 回流
提取 h3 。 放冷 ,再称定重量 , 用 60 % 乙醇溶液补足减失的重
量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 , 即得。
2
.
2 虎眼万年青总黄酮含量测定
2
.
2
.
1 对照品溶液的制备
精密称取 5 . om g 芦丁标准品置于 50 m L 容量瓶中 , 用
60 % 乙醇溶解并定容 ,配成 0 . lm g/ 1l l L 的标准溶液 ,摇匀 ,备
用 。
2
.
2 2 供试品溶液的制备
见 ,’2 . 1. 1” , “ 2 . 1 . 2’ 项下 。
2
.
2
.
3 标准曲线的制备
精密量取芦丁对照 品溶液 0 . 0 1l l L 、 2 . 0 m L 、 3 . 0 1l l L 、
4
.
0 0
1l l L
、
5
.
00
1l l L
、
6刀0 1l l L ,分别置于 10 1l l L具塞试管中 , 各加
人 60 % 乙 醇稀释至 5 1l l L 。 分别加人 5% 亚硝酸钠溶液
0
.
3
1l l L
, 摇匀 ,静置 6 m in 。 再加 10 % 硝酸铝溶液 0 . 3 1l l L , 摇
匀 ,静置 6m in 。 加 4% 氢氧化钠溶液 4 . 0 1l l L ,并加 60 % 乙醇
0 4
1l l L
,摇匀 ,静置 12 m in 。 采用分光光度法在 s lo n m 波长处
测定吸光度 , 以芦丁浓度(m g/ 1l l L )为横坐标 , 吸光度 (A )为纵
坐标 ,绘制标准曲线 。 得一元回归方程为 y = 12 . 10 6 x 一0 刀073
(r = 0 , 9 9)
,芦丁在 0 . 02 一 0 . 06 m gm/ L 范围内呈良好的线性关
系 。
2
.
3 方法学考察
2
.
3
.
1 精密度实验
精密吸取芦丁对照品溶液 (0 . lm g力1 1 L ) 1 . 0 1l l L 置 10 1l l L
具塞试管中 ,经 “ 2 . 2 . 3 ” 显色处理后 , 在 s lo n m 处测标准品吸
光度 , 连续测量 6 次。 R s D = 0 4 4% ( n = 6 ) 。
2
.
3
.
2 稳定性实验
取热回流提取方法所得提取液 , 经显色处理后 , 于 0 ,
10
,
2 0
,
30
,
4 0
,
50
,
6 om i n 测定吸光度。 R s D = 0 2 3% ( n = 6 ) 。
2
.
3
.
3 重现性实验
取 10 9 虎眼万年青药材粉末 6 份 , 60 % 乙醇回流提取
h3
,其余步骤同 “ 2念 3 ” 。 显色处理后 , 在 5 10 n m 下测定吸光
度 。 R S D = 1 . 5 8% ( n = 6 ) 。
2
.
3
.
4 回收率实验
取 6份虎眼万年青粉末 (总黄酮含量为 0 . 19 % ) ,按 :1 1加
人的芦丁对照品 , 60 %乙醇提取 h3 。 显色处理后在 5 10 n m处
测吸光度 。 回收率为 9 8 . 34% 士 1 . 1 2% , R s D 为 2刀3% ( n = 6 ) 。
2 4 样品溶液的测定
精密 吸取叶供试品溶液 1 . 0 1l l L 及鳞茎供试品溶液
2刀0 1l l L , 置于 1 0 1l l L 容量瓶中 ,分别加人 60 % 乙醇溶液稀释
至 s m L , 同 “ 2 . 2 . 3 ”方法显色处理后 , 于 s lo n m波长处测定吸
光度 。 计算虎眼万年青总黄酮的含量 。
3 结果
3
.
1 超声提取法对虎眼万年青总黄酮含量的影响
超声提取法对虎眼万年青总黄酮含量的影响结果见表 1 。
表 1 超声提取法对虎眼万年青总黄酮含量的影响
工山 le l . E f比 e t o f u l tar s o n ie o n th e e o n t e n t o f t o t a l fl va o n o id s
for m O nr it h
o g a ut m e an d
a ut m
}
吸光度 }、 黄酮量m/
g
} 含量 /%
叶 0 2 4 2 0 7 7 0 4 2
鳞茎 0 2 34 5 . 1 7 0 . 1 0
3
.
2 热回流提取法对虎眼万年青总黄酮提取率的影响
热回流提取法对虎眼万年青总黄酮含量的影响结果见
表 2 。
表 2 热回流提取法对虎眼万年青总黄酮含量的影响
工山 le 2 . E f f e e t o f r e fl l x o n ht e e o n t e n t o f t o t a l fl a v o n o id s f r 0 m
O nr i th
o g al u m e an d
a ut m
吸光度 总黄酮量m/ g
叶
鳞茎
0
.
4 7 4
0
.
2 4 6
38 5 6
9
.
5 6
0
.
7 7
0
.
1 9
结果表明 ,虎眼万年青叶中总黄酮的含量高于鳞茎中
基金项目 : 国家自然科学基金项 目 (8 1 102 8 5 8) , 中国博士后科学基金资助项 目 ( 20 13M 53 106 1 ) , 国家教育部重点科研项 目 (21 0 5 9 ) , 黑龙江省
青年基金项 目 ( Q c 20 l l c 05 。 ) , 黑龙江省博士后资助项 目 ( BL H 一 21 11 02 ) ,黑龙江省教育厅科技研究项 目 ( 12 5 3 1 1 55 )
通讯作者 : 曲 中原 (1 9 8。一 ) ,女 , 副教授 ,硕士生导师 ,从事抗肿瘤药物研究 。 E 一 m ial : ql qu lqu u @ 16胶。 m
作者简介 : 邹翔 (19 7 8一 ) , 男 , 副教授 ,硕士生导师 ,从事抗肿瘤药物研究 。 E 一 m a l l : z o u 8 6 63 2 0 2@ z 6 3 c o m
黑龙江医药 H e il o n幻 ia ng Me die i ne Jour nal Vol. 2 7 No· 420 1 4· 73 3
H P L C测定结核丸中大黄的 5种有效成分含量
曹文静 ’ , 郭珊珊 ’ , 笔雪艳 “ , 张清波 “
黑龙江 中医药大学 (哈 尔滨 1 50 40 ) : 2 .黑龙江省食品药品检验检测所 (哈 尔滨 1 50 01
摘 要 目的 : 建立结核丸中芦荟大黄素 、 大黄酸 、 大黄素 、 大黄酚及大黄素甲醚的含量测定方法 。 方法 : 采用 H P L C法 ,
色谱柱 : A g i le n t 一 e l s (4 石m m x 2 5 o m m , 5抖m ) ; 甲醇一 0 . 1%磷酸 ( 80 : 2 0 )为流动相 ;检钡lJ波长为 2 54 n m , 流速 : l . o l l l L力11 i n ,柱温 : 室
温 。 结果 : 含量测定方法学考察表明 , 五组分均达到基线分离 ,芦荟大黄素 、 大黄酸 、 大黄素 、 大黄酚及大黄素甲醚的平均回收
率分别为 98 . 6 % 、 106 . 3 % 、 10 7 . 58 % 、 10 0 . 7 % 、 97 . 2 % ( n = 6 ) 。 结论 :本方法专属性强 、 重现性好 , 可用于结核丸的质量控制 。
关键词 : 结核丸 ;芦荟大黄素 ; 大黄酸 ;大黄素 ; 大黄酚 ;大黄素甲醚 ; H P L C
中图分类号 : R 28 4 . 2 文献标识码 : A 文章编号 : 1 00 6一 2 88 2 (2 0 1 4 ) 04一 7 3 3一 0 3
(内文见下页 )
总黄酮的量 , 不同提取方法对虎眼万年青总黄酮的含量有
显著地影响 。 热 回流法提取虎眼万年青总黄酮的含量高于
超声提取法 , 可能是超声波清洗仪的功率太小 , 达不到提取
药材所需功率 ,超声波的作用微弱 ,难以达到理想的提取效
果。
4 讨论
据文献报道 ,虎眼万年青中黄酮类化合物主要含有榭
皮素 ( q u e r e e t i n ) 、 山奈酚 (ka e哪 fe or l ) 、 芦丁 ( ur t in ) 、 异 鼠李素
i(s
o
hr aln ne int )
、 黄答普等 L2] 。 研究发现 ,榭皮素 、 黄答普及
异鼠李素对多种恶性肿瘤细胞如人卵巢癌 、乳腺癌 、 胃肠肿
瘤细胞 、 白血病等均具有抑制其生长的作用 ,并对恶性肿瘤
细胞凋亡产生影 响 L, 8 20] 。 山奈酚能通过抑制人 胃癌细胞
M G c
一
80 3及大鼠肝癌细胞 c B R H 一 7 9 1 9 的增殖并诱导其凋
亡 , 而产生抗肿瘤作用 口 , 翔 ,表明虎眼万年青总黄酮在抗肿
瘤方面具有较高的研究价值 。 本实验通过比较确定热回流
法更适宜提取虎眼万年青总黄酮成分 。 虎眼万年青总黄酮
含量测定结果表明总黄酮主要存在于叶中 ,含量为 0 7 7% ,鳞
茎中仅为 0 . 19 % 。 如果以黄酮类化合物作为目标成分进行开
发利用 , 叶是较为合适的有效部位 。 此外 , 叶较鳞茎有 良好
的可再生性 ,从资源可持续利用的角度考虑也较为合理 。
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收稿 日期 : 2 0 14 一 0 3 一 2 4