全 文 ：书收稿日期:2013 － 04 － 26
作者简介:王慧(1988 －) ，女(汉族) ，山东枣庄人，硕士研究生，E-mail wanghui891330@ 163． com;* 通讯作者:赵春
杰(1960 －) ，男(汉族) ，吉林农安人，教授，博士，博士生导师，主要从事中西药质量控制技术研究，Tel． 024 －
23986300，E-mail zcjjljj@ sina． com。
文章编号:1006 － 2858(2014)01 － 0017 － 04
吉祥草总黄酮提取物的抗氧化活性评价
王 慧1，林奇泗1，2，王 淼1，石宛平1，赵春杰1*
(1．沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 110016;2．徐州医学院 药学院，江苏 徐州 221004)
摘要:目的 对吉祥草中总黄酮的体外抗氧化活性进行研究。方法 采用盐酸 －镁粉法测定黄酮含
量，通过 1，1 － 二苯基 － 2 － 三硝基苯肼(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)法和铁离子还原
(ferric ion antioxidant power，FＲAP)法评价吉祥草总黄酮提取物的抗氧化活性。结果 总黄酮提取
物和脂溶性成分的 EC50为(0. 253 ± 0. 009)g·L
－1，FＲAP 值为(0. 964 ± 0. 028)mmol·g －1。结论
吉祥草中总黄酮具有较强的抗氧化活性。
关键词:吉祥草;抗氧化活性;总黄酮
中图分类号:Ｒ 917;Ｒ 284. 2 文献标志码:A
吉祥草为百合科吉祥草属植物吉祥草(Ｒei-
neckina carnea(Andr. )Kunth)的全草，别名解晕
草、广东万年青、观音草，分布于我国西南及陕西、
江苏、安徽、浙江、江西、河南、湖北、湖南、广东、广
西等地，是我国西南苗族地区常用的传统草药之
一。吉祥草味甘，性平，能润肺止咳、祛风、接骨，
用于治疗肺结核、咳嗽咯血、慢性支气管炎、哮喘、
风湿性关节炎;外用治跌打损伤、骨折［1］。经研
究发现吉祥草的皂苷成分还具有杀螺［2］、止咳、
化痰和抗炎的作用［3］。吉祥草的挥发性组分研
究处于初始阶段［4］。吉祥草的总黄酮含量及抗
氧化活性研究也未见报道。
吉祥草化学成分较为复杂，其药理作用部位
的确定较为困难，这在一定程度上限制了吉祥草
的广泛应用。由于天然抗氧化物成分复杂，抗氧
化作用机制无法用单一机制解释，因此常常需要
用两种或者两种以上抗氧化活性的评价方
法［5 － 6］。本文作者采用 1，1 －二苯基 － 2 －三硝
基苯肼(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)法
和铁离子还原 (ferric ion antioxidant power，
FＲAP)法对吉祥草总黄酮进行体外抗氧化活性
检测，以期为吉祥草抗氧化活性物的筛选及综合
开发提供一定参考。
1 仪器与材料
HH －2 数显恒温水浴锅(浙江嘉兴俊思仪器
设备厂) ，SC － 97 自动三重纯水蒸馏器(上海亚
荣生化仪器厂) ，BS110 电子天平(德国 Sartorius
公司) ，UV － 1700 可见 － 紫外分光光度计、
QP5050A 气质联用仪(日本 Shimadzu公司)。
镁粉、浓盐酸、硫酸亚铁、FeCl3·6H2O、甲醇
(分析纯)、乙醇(分析纯) (山东禹王实业有限公
司) ，1 1 －二苯基 － 2 －三硝基苯肼(DPPH)、2，
4，6 － 反式 － 2 － 吡啶基三嗪(2，4，6-(trans)-2-
pyridinyl triazine，TPTZ)、2，6 －二叔丁基对甲酚
(butylated hydroxytoluene，BHT) (上海阿拉丁试
剂有限公司) ，芦丁对照品(含量质量分数 ＞
99%，中国药品生物制品检定所，批号 100080 －
201107) ，水(实验室自制三重蒸馏水)。
吉祥草药材购自鹏翔药业，批号 90021，经沈
阳药科大学中药学院贾景明教授鉴定，为百合科
吉祥草属植物吉祥草(Ｒeineckia carnea (Andr. )
Kunth)全草。将吉祥草药材粉碎，过 8 mm 筛，贮
于干燥器中备用。
2 方法与结果
2. 1 吉祥草总黄酮提取物的制备
精密称取吉祥草粗粉(过 8 mm 筛)20 g，置于
干燥的索氏提取器中。加入石油醚 300 mL，加热
回流至提取液无色，放冷至室温，弃去石油醚提取
液。再加甲醇 300 mL，加热回流至提取液无色。
滤过，将滤液旋转蒸发回收甲醇，浓缩烘干即得总
第 31 卷 第 1 期
2 0 1 4 年 1 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 31 No. 1
Jan． 2014 p. 17
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2014.01.010
黄酮提取物［7］，称定质量，密封，冰箱内储存备用。
2. 2 吉祥草总黄酮的含量测定
2. 2. 1 标准曲线的建立
根据文献方法测定总黄酮含量［8］。精密称
取干燥至恒质量的芦丁对照品 3. 4 mg，置 25 mL
量瓶中，以体积分数 75%乙醇溶液溶解并稀释至
刻度，作为芦丁对照溶液。
吸取芦丁对照溶液 0. 5、1. 0、1. 2、1. 5、2. 0、
2. 3、2. 5、2. 8 和 3. 0 mL，置于加有 200 mg 镁粉的
具塞试管中，各加体积分数 70% 乙醇溶液至
3 mL，摇匀。将试管置于 10 ～ 15 ℃冷水中，缓慢
加入浓盐酸 2 mL，并不时振摇，盖塞摇匀。沸水
浴中加热 1 h，迅速冷却至室温，补加体积分数
70%乙醇溶液至 5 mL，摇匀，静置 20 min，以相应
试剂为空白，在波长 524 nm 处测定吸光度。以芦
丁对照品质量(m，μg)为横坐标，吸光度(A)为纵
坐标绘制标准曲线，得芦丁回归方程为 A =
1. 80 × 10 －3 m － 2. 18 × 10 －2(r = 0. 999 1)。
2. 2. 2 稳定性试验
精密称取“2. 1”条总黄酮提取物适量，以体
积分数 75%乙醇溶液配制总黄酮提取物质量浓
度约为 6 g·L －1。取上述溶液 2 mL，按“2. 2. 1”
条方法，自“置于加有 200 mg 镁粉的具塞试管
中”起依法操作，分别于 0、10、20、30、60、90 min
测定其吸光度。测得 ＲSD 为 0. 98%，表明样品
溶液在 90 min内稳定。
2. 2. 3 精密度试验
精密称取“2. 1”条总黄酮提取物适量，以体
积分数 75%乙醇溶液配制总黄酮提取物质量浓
度约为 6 g·L －1。取上述溶液 2 mL，共 6 份，按
“2. 2. 1”条方法，自“置于加有 200 mg 镁粉的具
塞试管中”起依法操作，分别测定其吸光度值。
测得 ＲSD 为 0. 38%，表明仪器精密度符合规定。
2. 2. 4 重复性试验
精密称取吉祥草粗粉(过 8 mm 筛)20 g，共
5 份，按“2. 1”条方法操作。所得总黄酮提取物按
“2. 2. 1”条方法，自“置于加有 200 mg 镁粉的具
塞试管中”起依法操作，分别测定其吸光度值。
测得 ＲSD 为 0. 87%，表明方法重复性符合规定。
2. 2. 5 加样回收率试验
精密称取芦丁对照品约 25 mg，配制成质量
浓度为 1 g·L －1的对照溶液。准确称取总黄酮提
取物约 10 mg，共 9 份，分为高、中、低 3 组，每组
3 份。高浓度组加芦丁对照溶液 1. 5 mL，中浓度
组加芦丁对照溶液 1. 0 mL，低浓度组加芦丁对照
溶液 0. 5 mL。加入体积分数 75%乙醇溶液定容
至 2 mL，然后将 9 份样品按“2. 2. 1”条方法，自
“置于加有 200 mg 镁粉的具塞试管中”起依法操
作，分别测定其吸光度值并计算含量，结果平均加
样回收率为 99. 3%，ＲSD 为 1. 7%。
2. 2. 6 总黄酮提取物的含量测定
精密称取“2. 1”条总黄酮提取物适量，加入
体积分数 75%乙醇溶液配制总黄酮提取物质量
浓度约为 6 kg·L －1。取样品溶液 2 mL，按“2. 2. 1”
条方法，自“置于加有 200 mg 镁粉的具塞试管中”
起依法操作，分别测定其吸光度值，代入回归方程
计算含量。结果平均含量为 104. 641 mg·g －1。
2. 3 抗氧化活性研究
2. 3. 1 对 DPPH自由基的清除作用
采用文献方法测定总黄酮提取物的 DPPH自
由基清除率［9］。将吉祥草总黄酮提取物用体积
分数 95%乙醇溶液溶解并配制成一系列不同质
量浓度受试样品乙醇液。分别取待测液2. 0 mL
与 0. 2 mmol·L －1的 DPPH·乙醇溶液2. 0 mL混
合，振摇均匀后放于暗处静置30 min，于波长518 nm
处测定吸光度(A i)。同时测定 0. 2 mmol·L
－1
DPPH·溶液与体积分数 95%乙醇溶液混合液的
吸光度(A j) ，以及待测液与体积分数 95%乙醇溶
液混合液的吸光度(Ac)，加样结果见表 1。按公式:
DPPH自由基清除率(%)=［1 －(A i － A j)/Ac］×
100%计算清除率，每样测定 3 次并取平均值。以
BHT 标准溶液为阳性对照，所得清除率结果见
图 1。再根据不同浓度样品的清除率作曲线求出
半清除率(EC50)。当清除率达到 50%时的供试
品浓度即为 EC50，它是评价供试品 DPPH·清除
能力的重要指标，所需浓度越低，表明其 DPPH·
清除能力越强。
2. 3. 2 FＲAP法测定抗氧化能力
根据文献［10］测定总黄酮提取物的 FＲAP值。
TPTZ 工作液的配制:将 20 mmol·L －1 FeCl3·
6H2O 2. 5 mL、10 mmol·L
－1TPTZ(以 40 mmol·L －1
盐酸溶解)2. 5 mL、0. 3 mmol·L －1的醋酸缓冲液
(pH值为 3. 6)25 mL，临用前混合，即得。
FeSO4 标准曲线的制作:分别取不同质量浓
度的 FeSO4 溶液 50 μL，各加入 TPTZ 工作液
3. 0 mL，37 ℃水浴 30 min，于波长 597 nm 处测定
吸光度。以吸光度为纵坐标，FeSO4 质量浓度为
横坐标绘制标准曲线。
81 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷
Table 1 Compositions and volumes of DPPH assay
表 1 DPPH试验反应液试剂组成与体积
Absorbance Amount of sample
A i Test solution 2. 0 mL with 0. 2 mmol·L －1 DPPH· ethanol solution 2. 0 mL were mixed for 30 min
A j Test solution 2. 0 mL was mixed with 95% ethanol solution 2. 0 mL
A c 0. 2 mmol·L －1 DPPH· ethanol solution 2. 0 mL with 95% ethanol solution 2. 0 mL were mixed for 30 min
●—Total flavonoid;◆—BHT
Fig． 1 DPPH· radical scavenging activities of the extracts
图 1 提取物 DPPH·清除率测定结果
FＲAP值的测定:准确吸取“2. 1”条吉祥草总
黄酮提取物适量，以体积分数 95%乙醇溶液溶
解;精密吸取总黄酮提取物溶液 50 μL，加入
TPTZ 工作液 3. 0 mL，37 ℃水浴 30 min，测定波
长 597 nm 处的吸光度，并计算其 FＲAP值，FＲAP
值表示为每克供试品消耗的 Fe2 + 毫摩尔数
(mmol·g －1)。
2. 3. 3 统计分析
抗氧化实验平行测定 3 次，用 SPSS18. 0 统
计软件进行 Duncan s Multiple Ｒange 分析，验证
其显著性差异。
以 BHT 为对照，分别测出吉祥草总黄酮提取
物的 EC50和 FＲAP值，结果见表 2。
Table 2 Contents and antioxidant activities of total flavonoids from Ｒeineckia carnea
表 2 吉祥草总黄酮提取物的含量及其抗氧化活性
Sample Content (flavonoids)/(mg·g －1) FＲAP /(mmol·g －1) EC50 /(g·L
－1)
Flavonoids extract 104. 641 ± 2. 167 0. 964 ± 0. 028 0. 253 ± 0. 009
BHT — 6. 952 ± 0. 084 0. 064 ± 0. 002
3 讨论
目前研究一般以 EC50和 FＲAP 值来表示物
质的抗氧化能力。从结果可知，FＲAP 值与抗氧
化能力成正比;而 EC50与抗氧化能力成反比。
4 结论
通过吉祥草总黄酮的抗氧化活性测定，证实
了吉祥草总黄酮有较强的抗氧化活性。研究中所
使用的 DPPH法和 FＲAP法对吉祥草体外抗氧化
活性的评价快速、稳定、准确，可作为吉祥草抗氧
化活性评价方法。
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91第 1 期 王 慧等:吉祥草总黄酮提取物的抗氧化活性评价
In vitro antioxidant activities evaluation of total
flavonoids from Ｒeineckia carnea(Andr．)Kunth
WANG Hui1，LIN Qi-si1，2，WANG Miao1，SHI Wan-ping1，ZHAO Chun-jie1*
(1． School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China;2． School of Phar-
macy，Xuzhou Medical College，Xuzhou 221004，China )
Abstract:Objective To test total flavonoids extracted from Ｒeineckina carnea (Andr．)Kunth for its in
vitro antioxidant activities．Methods Total flavonoids contents were determined by hydrochloric acid-magne-
sium powder method． Meanwhile，their antioxidant activities were tested by in vitro DPPH and FＲAP assays．
Ｒesults EC50 of total flavonoids was (0. 253 ±0. 009)g·L
－1;FＲAP value was (0. 964 ±0. 028)mmol·g －1．Con-
clusions Total flavonoids from Ｒ． carnea (Andr．)Kunth show remarkable antioxidant activities．
Key words:Ｒeineckina carnea (Andr．)Kunth;antioxidant activity;

total flavonoids
(上接第 16 页)
Simultaneous determination of four flavonoids in Al-
pinia officinarum Hance by ＲP-HPLC
LIU Yuan-zuo，WANG Xin，LIU You-ping，DI Xin*
(School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
Abstract:Objective To develop an ＲP-HPLC method for simultaneous determination of quercetin，
kaempferide，pinocembrin and galangin in Alpinia officinarum Hance．Methods Separation was carried out on
an Agilent ZOＲBAX SB-C18 column (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)with an isocratic mobile phase consisting
of methanol，acetonotrile，water and formic acid (V ∶ V ∶ V ∶ V = 24 ∶ 26 ∶ 50 ∶ 0. 5) at a flow rate of
1. 0 mL·min －1 ． The detection wavelength was set at 280 nm and the column temperature was 30 ℃ ． Ｒesults
The linear ranges of quercetin，kaempferide，pinocembrin and galangin were 0. 50 － 4. 95 mg·L －1，0. 53 －
5. 28 mg·L －1，2. 08 － 20. 8 mg·L －1 and 10. 29 － 102. 9 mg·L －1，respectively． The average recoveries of
quercetin，kaempferide，pinocembrin and galangin were 98. 3%，99. 4%，98. 6% and 99. 8%，the relative
standard deviations (ＲSDs)were 1. 6%，1. 8%，1. 6% and 0. 9% (n = 9)． Conclusions The method is ac-
curate and reliable，and can be used for the quality control of Alpinia officinarum Hance．
Key words:Alpinia officinarum Hance;flavonoid;ＲP-HPLC;content determination
02 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 31 卷