全 文 ：的过程中，药理效应逐渐增强，药物逐渐消除，药理
效应指标有下降趋势。
5 讨论
本实验利用微透析技术进行类风湿性关节炎模
型家兔关节腔内的青藤碱局部药动学及局部药效学
的同步研究，运用 Sheiner 提出的效应室的理论，尝
试建立了关节腔内的 PK-PD结合模型，并得到主要
的 PK-PD结合模型参数。
药理效应若滞后于血药浓度是容易理解的，因
为一般情况下，药物从中央室分布到各个效应室需
要一定的时间。但关节腔是关节炎的病变部位，药
动学及药效学指标是在同一部位采集的，实验结果
仍然出现了滞后现象，说明药物进入关节腔后不能
立即作用于受体，与受体结合需要一个过程，这一过
程的快慢由结合模型参数中的 Ke0来体现。Ke0不仅
反映药物从效应室消除的速率，且能精确地表征药
物浓度与效应之间的时间过程，在 PK-PD 结合模型
中具有非常重要的意义。经皮给药组精氨酸、瓜氨
酸的 Ke0值均比灌胃给药组的小，表明经皮给药后青
藤碱在效应室与受体结合较缓慢，同时也说明经皮
给药后药物从效应室消除的速度要慢于口服给药，
效应维持的时间较长。这一实验结果也提示，经皮
给药是治疗关节炎较为合理的给药途径。
参考文献:
［1］ Sheiner LB，Stanaki DR． Voceh S，et al． Stimultaneous modeling of
pharmacokinetics and pharmacodynamic application to D-tubocura-
rine［J］． Clin Pharmacol Ther，1979，25:358．
［2］ Holford NHG，Sheiner LB． Kinetics of pharmacological response
［J］． Pharmacol Ther，1982，16:143．
［3］ 田瑶．青藤碱关节腔局部 PK-PD 结合模型研究［D］． 广州:广
州中医药大学，2012:40-56．
［4］ 汤立新，陈安民． 抗原诱导关节炎兔关节内注射 153 钐-柠檬
酸-羟基磷灰石的生物学分布及病理学变化［J］． 郑州大学学
报(医学版) ，2004，39(1) :74-77．
［5］ 邵继征，周莉玲，黄浩然，等． 液-质联用测定家兔血液及关节
微透析液中青藤碱［J］．中国医院药学杂志，2009，29(7) :519-
522．
［6］ 田瑶，邵继征，王利胜，等．柱前衍生反相高效液相色谱法同时
测定家兔关节微透析液中的精氨酸和瓜氨酸［J］．中药新药与
临床药理，2012，23(2) :180-183．
［收稿日期］2013-02-04
［基金项目］江西省科技厅青年科学基金资助项目(编号:20132BAB215033) ;江西省卫生厅中医药科研基金项目(编号:2012A132) ［作者简
介］刘海，男，中级工程师，硕士，研究方向:药物制剂，电话:15216172263，E-mail:liuhaiuser@ 163． com ［通讯作者］杨建琼，女，硕士，研究方
向:活性天然产物，E-mail:yangjianqiong2010@ 163． com
吉祥草乙醇提取物诱导人肺癌 A549 细胞凋亡机制的初步探讨
刘海1，杨建琼1，2，熊亮1，马华谋2，徐小军2 (1．赣南医学院，江西 赣州 341000;2．赣南医学院第一附属医院，江西 赣州
341000)
［摘要］ 目的:对吉祥草乙醇提取物( Reineckia carnea ethanol extracts，RCEE) 诱导人肺癌 A549 细胞凋亡及其机制做初步研
究。方法:采用 cell counting kit-8 试剂盒测定细胞存活率，Annexin Ⅴ-FITC / PI双标后流式细胞仪检测细胞凋亡率;分别采用
FLUO-8 AM、JC-1 染色标记后流式细胞仪测定细胞内钙离子浓度和细胞线粒体膜电位，化学发光法检测 Casapse-3 /7 活性。结
果:RCEE对 A549 细胞增值的抑制作用较强且呈量效关系，作用8 h时 IC50值为48． 14 mg·L
－1 ; RCEE能诱导 A549 细胞凋亡并
呈剂量依赖关系; RCEE 作用后 A549 细胞内游离钙离子水平升高、线粒体膜电位下降、Caspase-3 /7 活性升高; 细胞内钙离子
螯合剂 BAPTA-AM和 Caspase广谱抑制剂 Z-VAD-FMK可以明显抑制 RCEE诱导的 A549 细胞凋亡。结论:RCEE能抑制 A549
细胞增殖并诱导细胞凋亡，其机制可能与细胞内钙超载、线粒体膜电位下降、Caspase级联酶激活有关。
［关键词］ 吉祥草; 抗肿瘤活性; 细胞凋亡; A549 细胞
［中图分类号］R285． 5 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2013)19-1580-05
Preliminary study on the apoptosis mechanisms of lung cancer A549 cell induced by Reineckia
carnea ethanol extracts
LIU Hai1，YANG Jian-qiong1，2，XIONG Liang1，MA Hua-mou2，XU Xiao-jun2(1． Gannan Medical University，Jiangxi
Ganzhou 341000，China;2． The first affiliated hospital of Gannan Medical University，Jiangxi Ganzhou 341000，China)
ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate Reineckia carnea ethanol extracts (RCEE)inducing A549 cell apoptosis and its mecha-
nism．METHODS Cell counting kit-8 was used to determine cell survival rate． The rate of apoptosis，intracellular free Ca2 + concen-
tration and mitochondrial membrane potential were quantitated using annexin-V FITC /PI staining，FLUO-8 AM staining and JC-1 stai-
·0851· 中国医院药学杂志 2013 年第 33 卷第 19 期 Chin Hosp Pharm J，2013 Oct，Vol 33，No． 19
DOI:10.13286/j.cnki.chinhosppharmacyj.2013.19.006
ning，respectively． Caspase-3 /7 activity was determined by luminescence assay． RESULTS RCEE could suppress the proliferation of
A549 cell in a dose-dependent manner ，its IC50was 48． 14 mg·L
－1 at 8 h． The apoptosis could be induced by RCEE and its level in-
creased following the augmentation of the drug concentration． RCEE induced intracellular free Ca2 + concentration increased，mitochon-
drial membrane potential decreased and caspase-3 /7 activated． Furthermore，pretreatment with eitherZ-VAD-FMK or BAPTA-AM ef-
fectively attenuated apoptosis induced by RCEE． CONCLUSION RCEE can inhibit the proliferation and induce apoptosis of A549
cell lines in vitro． The mechanism of inducing apoptosis may be mediated by the overloading of intracellular calcium ion，the decreased
mitochondrial membrane potential and the caspase activated．
KEY WORDS:Reineckia carnea;anti-tumor activity;apoptosis;A549 cell
肺癌为当今最常见的恶性肿瘤之一，其治疗方
法主要有手术切除、放射治疗、化学治疗，传统的放
化疗因毒副作用大而使临床应用得到限制。近年
来，从中草药和天然药物中筛选和提取防治肿瘤的
有效成分成为医学界的研究方向之一。吉祥草 Rei-
neckia carnea (Andr．)kunth． 为百合科吉祥草属植
物吉祥草的全草，又名观音草、小叶万年青［1］，其植
株含有甾体皂苷类等化学成分［2-6］。药理研究表明
吉祥草具有抗炎、止咳、化痰等作用［7］，目前成功开
发的以吉祥草为主药的苗药品种在止咳化痰方面疗
效确切、市场反应良好［1，8］，其对肺癌的抗肿瘤生物
活性研究尚未见报道。为吉祥草的开发应用提供科
学依据，本文通过制备吉祥草乙醇提取物，考察其对
人肺腺癌 A549 细胞的增殖抑制作用并对其诱导细
胞凋亡的机制进行初步探讨。
1 材料
1． 1 仪器 连续光谱多功能酶标仪(Varioskan
Flash，美国 Thermo Fisher) ;倒置相差显微镜(CKX
41，日本 Olympus) ;流式细胞仪(FACS Calibur，美国
BD) ;Fluoroskan Ascent 化学 /荧光发光检测仪(美
国赛默飞世尔公司)。
1． 2 药品与试剂 吉祥草［采集于贵州清镇，经贵
阳中医学院陈德媛教授鉴定为百合科吉祥草 Rei-
neckea carnea (And．)Kunth．］;DMEM 培养基和胎
牛血清(美国 Gibco 公司) ;细胞增殖测定试剂盒
cell counting kit-8 (CCK-8，日本同仁化学公司) ;An-
nexin V-FITC Apoptosis Detection kit(美国 BD 公
司) ;Fluorescent calcium indicator Quest Fluo-8TM AM
和 Cell MeterTM JC-1 mitochondria membrane potential
assay kit(美国 AAT Bioquest) ;Caspase 活性检测试
剂盒(美国 promege 公司) ;细胞内钙离子螯合剂
BAPTA-AM和 Casapse 广谱抑制剂 Z-VAD-FMK(美
国 sigma 公司) ;人肺腺癌 A549 细胞(购于美国
ATCC细胞库) ;其他试剂均为分析纯。
2 方法
2． 1 吉祥草乙醇提取液(RCEE)的制备 吉祥草
干燥全草10 kg，粉碎，用 95%的药用乙醇加热回流
提取 3 次，每次3 h，滤过，合并滤液，减压浓缩，得乙
醇浸膏。称取已干燥至恒重的乙醇浸膏0． 5 g，精密
称定，用适量二甲基亚砜(DMSO)溶解，加入培养液
定容于10 mL量瓶中，配制成质量浓度为50 g·L －1的
吉祥草乙醇提取溶液(RCEE) ，临用前用培养液稀
释配制成不同浓度:25，50，100，200，400 mg·L － 1，
其中 DMSO最高浓度不超过0． 1%。
2． 2 细胞培养 在 5%二氧化碳、37 ℃条件下，
DMEM培养基添加 100 U·mL －1青霉素、100 μg·
mL －1链霉素及 10%胎牛血清后传代培养 A549 细
胞，实验用细胞均处于对数生长期。
2． 3 CCK-8 法测定 RCEE 对 A549 细胞的增殖抑
制作用 将对数生长期的 A549 细胞以 1 × 105个 /
孔接种于 96 孔板中，每孔 200 μL，培养24 h后以不
同剂量 RCEE(0，25，50，100，200，400 mg·L － 1)
对细胞染毒作用8 h，每孔加入 10 μL CCK-8 试剂，
培养箱中孵育2 h后以酶标仪 450 nm 测定吸光度。
细胞存活率(%)= ［(As － Ab)/(Ac － Ab) ］×
100%;As:实验孔(含有细胞的培养基、CCK-8、吉祥
草提取物) ;Ac:对照孔(含有细胞的培养基、CCK-
8) ;Ab:空白孔(不含细胞和吉祥草提取物的培养
基、CCK-8) ;另设溶剂对照组(含有细胞的培养基、
CCK-8、0． 1%的 DMSO溶液)。
2． 4 Annexin Ⅴ-FITC / PI 双标记法检测细胞凋
亡［9］ 将 A549 细胞按 2 × 105个 /mL、每孔2 mL接
种于 6 孔板中培养，24 h后以不同剂量 RCEE(0，
25，50，100，200，400 mg·L － 1)对细胞染毒作用
4 h，收集细胞，预冷 D-Hanks 洗涤，重悬于 binding
buffer(10 mmol·L －1 HEPES，pH7． 4，140 mmol·L －1
氯化钠，2． 5 mmol·L －1氯化钙) ，细胞浓度 1 × 106个
·mL －1。取 100 μL 细胞悬液，加 5 μL Annexin Ⅴ-
FITC和 5 μL PI(50 μg·mL －1) ，于室温黑暗中孵育
15 min，加入 400 μL binding buffer，轻轻混匀，1 h内
上流式细胞仪检测。计算凋亡占总细胞数的百分
比。凋亡细胞为 Annexin V 阳性细胞(AV + /PI-象
限)。
2． 5 细胞内钙离子浓度测定 细胞接种于 6 孔板
·1851·中国医院药学杂志 2013 年第 33 卷第 19 期 Chin Hosp Pharm J，2013 Oct，Vol 33，No． 19
中，进行染毒，染毒结束后，收集细胞，以 D-Hanks洗
涤细胞 2 次，离心管细胞团加入终浓度为 5 μmol·
L －1的 FLUO-8 AM，37 ℃ 环境中孵育 30 min，D-
Hanks洗涤 1 次，以流式细胞仪检测细胞平均荧光
强度。细胞内游离钙离子水平以处理组细胞平均荧
光强度与对照组细胞平均荧光强度的比值表示。
2． 6 细胞内钙离子螯合剂试验 为进一步验证细胞
内钙离子信号是否参与了 RCEE诱导的 A549细胞凋
亡，本实验采用 5 μmol·L －1的细胞内钙离子螯合剂
BAPTA-AM预先孵育2 h后进行 100 和 200 mg·L － 1
RCEE染毒4 h，然后按上述“2． 4”方法测定凋亡率。
2． 7 线粒体膜电位测定 细胞接种于 6 孔板中，
同时设药物组和空白对照组(等体积 PBS) ，细胞进
行染毒，染毒结束后，收集细胞，以 D-Hanks 洗涤细
胞 2 次，离心管细胞团加入终浓度为 5 μg·mL －1的
JC-1，37 ℃环境中孵育20 min，D-Hanks 洗涤 1 次，
以流式细胞仪检测细胞平均红色荧光强度和平均绿
色荧光强度。红色荧光强度与绿色荧光强度的比值
代表细胞线粒体膜电位。
2． 8 Caspase活性检测 依据 Promega 试剂盒说明
书测定 Caspase-3 /7 活性。细胞接种于白色 96 孔细
胞培养板，密度为10 000个 /孔，24 h后进行染毒。
染毒4 h后，加入 100 μL /孔 Caspase-Glo 试剂，轻轻
振摇2 min，室温下孵育30 min。通过化学 /荧光发
光检测仪检测生物发光强度。Caspase-9，Caspase-3 /
7 活性强，则化学发光强度大。Caspase-9，-3 /7 活
性大小以处理组与对照组比值表示。
2． 9 Caspase 光谱抑制剂试验 使用 Caspase 光谱
抑制剂 Z-VAD-FMK 检验 Caspase 在 RCEE 诱导
A549 细胞凋亡中的作用。细胞进行 RCEE 染毒前，
使用 10 μmol·L －1的的 Z-VAD-FMK 预先孵育2 h
后，PBS洗涤后进行 100 和 200 mg·L － 1 RCEE 染毒
4 h，然后按上述“2． 4”方法测定凋亡率。
2． 10 统计学方法 实验数据以 珋x ± s表示，组间差
异采用单因素方差分析，两两比较采用 t 检验，取 P
＜ 0． 05为差异有显著性，使用 SPSS v 16． 0软件进行
数据统计分析。
3 结果
3． 1 RCEE对 A549 细胞的抑制作用 不同浓度的
RCEE药物作用8 h后，RCEE对 A549 细胞的抑制活
性随着浓度增加而增加，表现为剂量依赖性，见表
1，其 IC50为48． 14 mg·L
－ 1;溶剂对照组与正常对照
组相比，无显著性差异，可以认为实验中溶剂对细胞
无抑制作用。
表 1 RCEE对 A549 细胞的抑制作用(珋x ± s，n =3)
Tab 1 Inhibitory effects of RCEE on A549 cells(珋x ± s，n = 3)
组别 OD值 抑制率 /%
正常对照组 0 mg·L －1 0． 607 ± 0． 040 —
药物组 25 mg·L －1 0． 445 ± 0． 036a 26． 63 ± 2． 12
50 mg·L －1 0． 285 ± 0． 041a 53． 03 ± 4． 01
100 mg·L －1 0． 128 ± 0． 025a 78． 89 ± 7． 84
200 mg·L －1 0． 117 ± 0． 030a 80． 66 ± 6． 09
400 mg·L －1 0． 090 ± 0． 010a 85． 26 ± 4． 96
溶剂对照组(0． 1%DMSO) 0． 601 ± 0． 037b 0． 99 ± 0． 79
注:与正常对照组相比，aP ＜ 0． 05;bP ＞ 0． 05
3． 2 流式细胞仪检测 RCEE 诱导 A549 细胞凋亡
率 对照组细胞自发性凋亡率较低，药物处理组各
浓度对 A549 细胞凋亡均有诱导作用，且随 RCEE
浓度加大，细胞凋亡发生率逐渐增加，与对照组相比
有统计学意义(aP ＜ 0． 05) (见图 1、图 2)。
图 1 不同浓度 RCEE作用后 A549 细胞凋亡率的流式细胞分析图
A．阴性对照组;B． RCEE(25 mg·L －1) ;C． RCEE(50 mg·L －1) ;D． RCEE(100 mg·L －1) ;E． RCEE(200 mg·L －1) ;F． RCEE(400 mg·L －1)
Fig 1 Flow cytometry assay of apoptosis rate of A549 cells with RCEE interventions at different concentrations
A． negative group;B． RCEE(25 mg·L －1) ;C． RCEE(50 mg·L －1) ;D． RCEE(100 mg·L －1) ;E． RCEE(200 mg·L －1) ;F． RCEE(400 mg·L －1)
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图 2 RCEE诱导 A549 细胞凋亡率统计图
Fig 2 The rate of apoptosis of A549 cell lines induced by RCEE
3． 3 细胞内钙离子浓度测定 钙离子是细胞生命
活动的一个重要调节因子，在细胞对外界刺激产生
反应以及细胞死亡过程中，钙离子均起重要作用。
细胞胞浆中的钙离子浓度必须处于严格的调控之
中，钙稳态失调必将导致细胞严重损伤或死亡(凋
亡或坏死)。为了探索细胞内钙离子信号是否参与
调控了 RCEE 诱导 A549 细胞凋亡，本实验进行了
细胞内钙离子浓度测定。药物作用4 h后，各 RCEE
药物处理组细胞内游离钙离子水平(处理组细胞平
均荧光强度与对照组细胞平均荧光强度的比值)随
着药物浓度的增加而增加，呈量-效关系，见表 2，结
果表明细胞内钙离子信号可能参与调控了 RCEE 诱
导的 A549 细胞凋亡。
表 2 不同浓度 RCEE作用后 A549 细胞内钙离子荧光强度
(珋x ± s，n =3)
Tab 2 Intracellular calcium fluorescent intensity of A549 cells
with RCEE interventions at different concentrations(珋x ± s，n = 3)
RCEE /mg·L － 1 处理组荧光强度 /对照组荧光强度
对照组 1． 00 ± 0． 09
25 1． 20 ± 0． 15
50 1． 50 ± 0． 18
100 1． 76 ± 0． 41
200 4． 55 ± 0． 58
400 24． 54 ± 3． 25
3．4 细胞内钙离子螯合剂阻断 RCEE 诱导的 A549
细胞凋亡 如图 3所示，细胞内钙离子螯合剂预先孵
育后，RCEE 诱导的 A549 细胞凋亡明显降低。当
RCEE浓度为 100和 200 mg·L －1时，细胞内钙离子螯
合剂 BAPTA-AM 预处理组凋亡率分别为对照组的
40%和 52%。本实验进一步证实细胞内钙离子信号
参与调控了 RCEE诱导的 A549细胞凋亡。
3． 5 RCEE对 A549 线粒体膜电位的影响 线粒体
膜通透转运孔道开放是线粒体内细胞色素 c转运至
胞浆的前提，是通过线粒体途径启动凋亡的必要事
件。为了探讨 RCEE诱导的 A549 细胞凋亡是否影
响线粒体膜电位，本实验采用 JC-1 标记后测定
RCEE对 A549 细胞线粒体膜电位的影响。不同浓
度的 RCEE作用于 A549 细胞 4 h后，红色荧光向绿
色荧光转变，红色荧光与绿色荧光比值下降，见表
3。
图 3 细胞内钙离子螯合剂 BAPTA-AM 阻断 RCEE 诱导的 A549 细
胞凋亡
Fig 3 Inhibition of RCEE-induced apoptosis by BAPTA-AM
表 3 不同剂量 RCEE 作用 A549 细胞4 h后线粒体膜电位
的改变(珋x ± s，n =3)
Tab 3 Effect of RCEE on the mitochondrial membrane potential
of A549 cells(珋x ± s，n = 3)
RCEE /mg·L －1 平均红色荧光强度 /平均绿色荧光强度
对照组 2． 169 ± 0． 19
25 2． 027 ± 0． 17a
50 1． 696 ± 0． 13a
100 1． 434 ± 0． 14a
200 1． 263 ± 0． 11a
400 0． 942 ± 0． 07a
注:与对照组相比，aP ＜ 0． 05
3． 6 RCEE 激活 Caspase3 /7 酶 如图 4 所示，100
mg·L －1的 RCEE作用4 h后，Caspase3 /7 活性显著升
高，而 Caspase光谱抑制剂 Z-VAD-FMK可以显著抑
制 RCEE诱导的 Caspase-3 /7 活性升高(与对照组相
比，aP ＜ 0． 05，bP ＜ 0． 01)。Caspase酶在细胞凋亡中
发挥着重要作用，Caspase-3 /7 在线粒体凋亡通路上
扮演“执行者”角色。结果表明 RCEE 诱导的 A549
细胞凋亡与 Caspase活性升高有关。
图 4 RCEE激活 Caspase-3 /7 活性
Fig 4 Induction of caspase-3 /7 by RCEE
3． 7 Caspase 广谱抑制剂阻断 RCEE 诱导的 A549
细胞凋亡 如图 5 所示，Caspase 抑制剂 Z-VAD-
FMK预先孵育后，RCEE 诱导的 A549 细胞凋亡明
显降低。当 RCEE 浓度为 100 和 200 mg·L －1时，
Caspase抑制剂 Z-VAD-FMK 预处理组凋亡率分别
为对照组的 51% 和 57%。本实验进一步证实
RCEE诱导的 A549 细胞 Caspase依赖型凋亡。
4 讨论
本实验以人肺腺癌A549细胞作为体外抗肿瘤
·3851·中国医院药学杂志 2013 年第 33 卷第 19 期 Chin Hosp Pharm J，2013 Oct，Vol 33，No． 19
图 5 Caspase广谱抑制剂阻断 RCEE诱导的 A549 细胞凋亡
Fig 5 Inhibition of RCEE-induced apoptosis by general caspase inhibitor
实验模型，采用 CCK-8 法测定 RCEE 对 A549 细胞
的增殖抑制作用，结果发现 RCEE 的抑制作用较强
且呈量效关系，作用8 h时 IC50值为 IC50为48． 14 mg·
L －1。细胞凋亡是细胞死亡的一种主要形式，与许多
生理和病理过程的发生和发展有密切的关系，是一
种重要的生命现象，本文采用流式细胞术 Annexin
Ⅴ-FITC / PI双标记法检测发现 RCEE 能诱导 A549
细胞凋亡，且随 RCEE浓度加大，细胞凋亡发生率逐
渐增加，进一步实验发现 RCEE 可以通过增加细胞
内钙离子浓度、降低线粒体膜电位、激活 Caspase -3 /
7 活性而诱导人肺癌 A549 细胞凋亡，而细胞内钙离
子螯合剂 BAPTA-AM 和 Caspase 广谱抑制剂 Z-
VAD-FMK可以明显抑制 RCEE 诱导的 A549 细胞
凋亡。
肺癌目前位于全世界癌症死因的第一位。化疗
仍是肺癌治疗的主要手段，但化疗会抑制骨髓造血
系统，使白细胞及血小板下降，近年来联合中医药治
疗减少化疗不良反应成为研究焦点，目前有研究报
道吉祥草中的一些甾体皂苷类化合物对宫颈癌细胞
的增殖具有较强的抑制作用［10］。因此，吉祥草乙醇
提取物中抑制人肺腺癌 A549 细胞增殖的物质基础
及其抗癌机制有待于进一步研究。
参考文献:
［1］ 徐宏，杜江． 苗药观音草在民间的使用及开发应用情况［J］．
中国民族医药杂志，2006，5:43-44．
［2］ 杨建琼，汪冶，晏晨，等． 吉祥草化学成分的研究［J］． 天然产
物研究与开发，2010，22 (2) :245-247．
［3］ 刘海，杨建琼，熊亮，等． 吉祥草化学成分和药理活性研究
［J］． 中成药，2012，34 (9) :157．
［4］ Xing PP，Wu Q，Wu ZW，et al． A new pregnane-type glycoside
from reineckia carnea［J］． J Chin Pharm Sci，2011，20:347-351．
［5］ 陈苓丽，韩娜，王艺纯，等． 吉祥草化学成分的分离与鉴定
［J］． 沈阳药科大学学报，2011，28(11) :875-878．
［6］ Zhang ZQ，Chen JC，Yan J，et al． Three steroids with unique
structural feature of 5β-spirotan-1β，3β，17α-trihydroxyl from Rei-
neckia carnea［J］． Chem Pharm Bull，2011，59 (1 ) :53-56．
［7］ Han N，Chang CL，Wang YC，et al． The in vivo expectorant and
antitussive activity of extract and fractions from Reineckia carnea
［J］． J Ethnopharmacol，2010，131:220-223．
［8］ 高莉，张永萍，周兰． 复方吉祥草含片质量标准研究［J］． 中成
药，2004，26 (2) :110-113．
［9］ 张广智，胡长敏，陈颖钰，等． 细胞凋亡的主要检测方法研究进
展［J］． 动物医学进展，2011，32(8) :89-92．
［10］ Wang G，Huang W，He H，et al． Growth inhibition and apopto-
sis-inducing effect on human cancer cells by RCE-4，a spirostanol
saponin derivative from natural medicines［J］． Int J Mol Med，
2013，31(1) :219-224．
［收稿日期］2012-11-22
［基金项目］广东省科技计划项目(编号:2009B030801277) ;广州市科技计划项目(编号:2010GN-E00221) ;广东医院制剂研究开发技术平台建
设(编号:2011A080300004) ［作者简介］刘伟，男，在读硕士，研究方向:降尿酸药物，电话:020-88654670，E-mail:xinlinglingdong@ gmail． com
［通讯作者］吴新荣，女，主任药师，博士生导师，研究方向:药物筛选及机制，电话:020-88653476，E-mail:gzwxrong@ yahoo． com
ZTC1 +1-Ⅱ用于复方土茯苓颗粒提取液的澄清工艺
刘伟1，2，刘志刚1，罗明琍1，3，孙维峰1，吴新荣1 (1．广州军区广州总医院，广东 广州 510010;2．南方医科大学，广东 广
州 510515;3．广州中医药大学，广东 广州 510405)
［摘要］ 目的:确定 ZTC1 + 1-Ⅱ天然澄清剂用于复方土茯苓颗粒提取液澄清的最佳工艺。方法:以落新妇苷保留率、总黄酮
保留率为评价指标，分别考察药液浓度、澄清剂用量、加入澄清剂 A组分或者 B组分时药液温度、搅拌速率、保温时间及静置
时间对澄清效果的影响。在单因素分析的基础上，应用正交实验设计优化澄清工艺条件。结果:在药液浓度为 1∶ 5，ZTC1 + 1-
Ⅱ2 组分( 浓度为 1% ) 用量分别为 6% ( A) ，3% ( B) 的药液体积，搅拌速率为 100 r·min －1，静置时间为24 h的工艺下，落新妇苷
保留率为88． 06%，总黄酮保留率为83． 27%，综合评分为86． 62。结论:ZTC1 + 1-Ⅱ天然澄清剂可用于复方土茯苓颗粒提取液
的澄清工艺研究。
［关键词］ 总黄酮;落新妇苷; ZTC1 + 1-Ⅱ;澄清剂
［中图分类号］R943 ［文献标识码］A ［文章编号］1001-5213(2013)19-1584-05
Optimum clarification process of compound Tufuling granules with ZTC1 + 1-Ⅱ
·4851· 中国医院药学杂志 2013 年第 33 卷第 19 期 Chin Hosp Pharm J，2013 Oct，Vol 33，No． 19