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虎眼万年青多糖的分离纯化和抗肿瘤活性研究



全 文 :基金项目:吉林省自然科学基金项目( 2010105) ;吉林省教育厅“十一五”科学技术研究项目( 吉教科合字[2010]第 373 号) ;吉林省教育厅“十
二五”科学技术研究重点项目( 吉教科合字[2011]第 185 号)
作者简介:陈瑞战,男,博士,教授 研究方向:天然活性成分研究 * 通讯作者:刘志强,男,博士生导师,研究员 研究方向: 中药质谱
分析研究 Tel /Fax: ( 0431) 85262236 E-mail: liuzq@ ciac. jl. cn
虎眼万年青多糖的分离纯化和抗肿瘤活性研究
陈瑞战1,李世哲1,刘志强2* ,董航1,李元1,杨思敏1 ( 1. 长春师范学院化学学院,长春 130032; 2. 中科院长春应用化学研究所,
长春 130022)
摘要:目的 从虎眼万年青中提取、分离水溶性多糖,初步研究其特征和抗肿瘤活性。方法 采用热水提取,乙醇沉淀,Sevag
法脱蛋白,DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换柱色谱和 Sephadex G - 75 凝胶过滤柱色谱分离纯化,得到虎眼万年青均一多糖
OCAP-2-2。毛细管区带电泳法( CZE) 分析单糖组成;采用高效凝胶渗透色谱法( HPGPC) 测定多糖纯度和相对分子质量;动物
移植性实体瘤的瘤重实验法研究对小鼠 S180 肉瘤的抑瘤作用,采用细胞体外培养技术,MTT法检测对人白血病细胞株 K562
细胞的增殖抑制作用。结果 经过分离纯化得到的均一多糖组分 OCAP-2-2 主要由葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖等 4 种单糖
组成,其相对分子质量之比为 2. 16 ∶ 1. 26: 0. 88 ∶ 1. 00,平均相对分子质量 9. 84 × 104,总糖含量为 92. 3%,总糖醛酸含量为
6. 21%,蛋白质含量为 3. 68% ; 在 0. 1 ~ 100 μg·mL -1内与荷瘤对照组相比,OCAP-2-2 对小鼠 S180 肉瘤有显著的抑制活性,
其中多糖浓度为 100 μg·mL -1时抑瘤率达( 53. 16 ± 4. 23) % ( P < 0. 001) ; OCAP-2-2 对 K562 细胞有明显的增殖抑制作用
( P < 0. 01) ,在多糖浓度为 0. 10 μg·mL -1时,增殖抑制率最高为( 39. 83 ± 7. 31) % ( P < 0. 01) 。结论 OCAP-2-2 具有很高的
抗肿瘤活性,可以探索作为一种潜在的天然抗肿瘤药物。
关键词:虎眼万年青;多糖;纯化; 抗肿瘤活性
中图分类号: R931. 6 文献标志码: A 文章编号: 1001 - 2494( 2011) 21 - 1630 - 05
Purification and Antitumor Activities of Polysaccharide from Ornithogalum caudatum Ait
CHEN Rui-zhan1,LI Shi-zhe1,LIU Zhi-qiang2* ,DONG Hang1,LI Yuan1,YANG Si-min1 ( 1. College of Chemistry,
Changchun Normal University,Changchun 130032,China; 2. Changchun Institute of Applied Chemistry,Chinese Academy of Sciences,
Changchun 130022,China)
ABSTRACT: OBJECTIVE To investigate the extraction,purification,preliminary characterization and antitumor activities of a wa-
ter-soluble polysaccharide from Ornithogalum caudatum Ait ( OCA) . METHODS A homogenization polysaccharide ( OCAP-2-2 )
was obtained by hot water extraction,ethanol precipitation and deproteination with Sevag method,then fractionated by DEAE-Sepharose
fast-flow column chromatography,and purified by Sephadex G - 75 gel-permeation column chromatography. The sugar concentrations in
OCAP-2-2 were characterized by capillary zone electrophoresis ( CZE) . The homogeneity and molecular weight of OCAP-2-2 were de-
termined by high performance size-exclusion chromatography ( HPGPC) . The antitumor activity of OCAP-2-2 was evaluated in vivo,by
the growth of transplantable S180 sarcoma in mice. The effects of OCAP-2-2 on the proliferation of K562 cells were determined by MTT
method in vitro. RESULTS The purified fraction OCAP-2-2 was a homogenization polysaccharide containing 92. 3% carbohydrate,
6. 21% uronic acid and 3. 68% protein,with a molecular weight of 9. 84 × 104. It contained primarily of xylose ( Xyl ) ,glucose
( Glc) ,mannose ( Man) and galactose ( Gal) in the molar ratio of 1. 26∶ 2. 16∶ 0. 88∶ 1. 00. OCAP-2-2 presented significantly higher
antitumor activity against solid tumor Sarcoma 180 in vivo than the blank control at the concentrations from 0. 1 μg·mL -1 to 100 μg·
mL -1. The inhibition rate in S180 mice was ( 53. 16 ± 4. 23) % ( P < 0. 001) at the concentration of 100 μg·mL -1. OCAP-2-2 could
significantly inhibit the proliferation of K562 cells at all tested concentrations. At the concentration of 0. 10 μg·mL -1,the inhibition
ratio of OCAP-2-2 was the highest with an inhibition ratio beyond ( 39. 83 ± 7. 31) % ( P < 0. 01) . CONCLUSION OCAP-2-2 has
pronounced anti-tumor activity,and has the potential to be used as a natural antitumor drug.
KEY WORDS: Ornithogalum caudatum Ait; polysaccharides; purification; antitumor activity
自 20 世纪 80 年代以来,多糖在结构上不同寻 常的复杂性及多样性使其成为当今最有魅力的信息
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载体。在生命体系中,多糖不仅仅作为一种结构材
料或能量贮源,亦具有可与核酸或蛋白质相比拟的
信息功能,参与细胞间的识别、机体免疫功能的调
节、细胞间物质的运输、细胞的转化和凋亡等过程,
不仅可以激活 T 淋巴细胞、B 淋巴细胞、巨噬细胞、
自然杀伤( NK) 细胞等多种免疫细胞,而且可以活化
补体系统,有效促进 IL-1、IL-2、IL-6、TNF 等细胞因
子的分泌和表达。大量研究表明,多糖具有多种生
理活性,如抗肿瘤[1]、抗氧化[2]、抗疲劳[3]等功能,
这些活性都和其结构相关。因此,提高多糖检测水
平,应用新的研究手段和方法,努力建立起多糖类药
物有效的质量控制标准; 揭示多糖结构与效能的关
系,阐明其药理作用机制,是当前多糖研究中的重点
和难点,也是迫切需要解决的关键问题。
虎眼万年青 ( Ornithogalum caudatum Ait. ,别
名:珍珠草) ,属百合科、虎眼万年青属,原产于非洲
南部,作为常绿的宿根草本花卉,己在我国各地广泛
栽培,特别是在吉林长白山地区栽种十分普遍。虎
眼万年青作为一种未被开发的药物资源,虽然未见
历代本草收载,在药典和地方药材标准中也无其他
记载,但在民间广泛应用于治疗肝炎、腮腺炎、肝硬
化、肝癌等,而且疗效确切,毒副作用小[4-5]。虎眼万
年青水溶性多糖组分约占虎眼万年青鳞茎干重的
20%以上,具有很高的抗肿瘤活性[6]。但是由于虎
眼万年青主要作为观赏花卉,国内外有关虎眼万年
青多糖的研究报道较少,影响了虎眼万年青大面积
推广栽种、植物资源的有效利用和多糖的开发。本
实验以虎眼万年青为原料,分离纯化水溶性多糖组
分,研究纯化多糖的结构特征,并通过体内、体外两
种方法考察其抗肿瘤活性。以期为虎眼万年青加多
糖药品或功能性食品的开发利用提供理论依据。
1 材料和方法
1. 1 材料、试剂
虎眼万年青全草( 中科院长春应用化学研究
所) 。Sephadex G - 75 和 DEAE fast flow Sepharose
( Pharmacia Biosciences 公司) ; 葡萄糖、木糖、半乳
糖、甘露糖、三氟乙酸( Trifluoroacetic acid,TFA) 、噻唑
蓝[3-( 4,5- dimethylthi azol- 2-yl) -2,5-diphenyl-2H-
tetrazolium bromide ( MTT,Sigma 公司) ]; RPMI1640
培养基( Gibco 公司) ; Dextra T-10、Dextran T-40、Dex-
tran T-70、Dextran T-500、Dextran T-2000 ( Amersharm
Pharmacia公司) ;甲醇、三羟甲基氨基甲烷、1-苯基-3-
甲基-5-吡唑啉酮、硼氢化钠、苯酚、硫酸、氢氧化钠、碳
酸氢铵、乙醇、乙醚等试剂均为色谱纯或分析纯试剂。
1. 2 仪器
HP5890 气相色谱-质谱联用仪 ( 美国安捷伦公
司) ; Beckman CounterP /ACETM MDQ Capillary Elec-
trophoresis System高效毛细管电泳仪 ( Beckman 公
司) ,UV检测器中性空心石英毛细管 ( 70 cm × 50
μm) ( 河北永年光纤厂) ; UV - 2401 型紫外可见分
光光度计( 日本岛津公司) ; LC - 10Avp 高效液相色
谱仪( 日本岛津公司) ,Dhpak SB - 802. 5 HQ ( 8. 0
mm × 300 mm) 色谱柱,LC - 10A 岛津示差检测器;
BSZ - 100 自动部分收集器( 上海沪西分析仪器厂) ;
Alpha 2 - 4 冷冻干燥机( 德国 CHRIST 公司) ; Basic-
plus型电子天平( 德国 Sartorius 公司) ; DZC - 403 型
真空干燥箱( 天津天宇机电仪器有限公司) ; GSY -11
型恒温水浴箱( 北京市医疗设备厂) ; SHB - B88 循环
水式多用真空泵( 菏泽市生化仪器厂) ; TDL -40B离
心机( 上海安亭科学仪器厂) ; LF - 300B 型全自动馏
分收集器( 上海闪谱生物科技公司) 。
2 实验方法
2. 1 虎眼万年青粗多糖的提取和分离
虎眼万年青干全草于 80 ℃温度下真空干燥箱
中烘干至质量恒定,用高速中药粉碎机粉碎成粉末;
取一定质量的样品粉末,加入乙醇-乙醚混合液 ( 1∶
1) ,65 ℃水浴回流 3 h,过滤除去滤液; 残渣挥干溶
剂,按照 30∶ 1 ( mL·g -1 ) 溶剂原料比加入一定体积
的蒸馏水,在 90 ℃水浴提取 3 h,重复提取 3 次,在
3 000 r·min -1条件下离心 10 min,合并上清液,过
滤,减压浓缩得多糖提取液; 提取液加入体积分数
95%的乙醇至乙醇最终体积分数 40%,在 4 ℃温度
下沉化 24 h,离心分离沉淀,用 Sevag 法除蛋白质,
然后装入截留相对分子质量 3 500 的透析袋用蒸馏
水透析 72 h,除去小分子成分,袋内部分浓缩、冻干,
得 40%乙醇沉淀粗多糖( OCAP) 。
2. 2 虎眼万年青粗多糖的分离和纯化
称取 2 g OCAP样品,加入 20 mL 0. 2 mol·L -1
三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液溶解,过 0. 45 μm 的滤
膜后上 DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱,先
用三羟甲基氨基甲烷缓冲溶液平衡,然后用 0. 1 ~
0. 5 mol·L -1NH4HCO3、以 1. 0 mL·min
-1的速率洗
脱,用自动馏分收集仪收集洗脱液,每管 5 mL,用苯
酚-硫酸法测定洗脱液在 486 nm 处的 A 值,得到洗
脱管数与 A的关系曲线。合并单一峰收集液,浓缩
并冷冻干燥,得到 3 个不同粗多糖组分 OCAP-1、
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OCAP-2 和 OCAP-3。
取 OCAP-2 20 mg 溶于 20 mL 蒸馏水中,过
0. 45 μm的滤膜后上 Sephadex G - 75 ( 16 mm ×500
mm) 凝胶过滤柱,以 0. 1 mol·L -1 NaCl溶液洗脱,
流速为 1. 0 mL·min -1,用自动收集器分部收集洗
脱液,每 4 mL收集 1 管,硫酸-苯酚法检测糖含量,
收集合并主多糖峰,透析脱盐、浓缩、冻干、洗涤、干
燥,即得均一多糖组分 OCAP-2-2。
2. 3 OCAP-2-2 的化学特征分析
准确称取 OCAP-2-2 样品及葡聚糖标准品 5
mg,分别溶于 1 mL 蒸馏水,过 0. 45 μm 的滤膜。
采用 HPGPC分析 OCAP-2-2 的均一性,测定其相对
分子质量[7]。色谱条件: 将浓度为 5. 0 mg·mL -1的
样品及葡聚糖标准品( Dextran标准品按相对分子质
量由小到大的顺序 5 200、11 600、25 000、48 600、80
000) 依次进样,进样量 20 μL,流动相为 0. 05 mol·
L -1的 Na2SO4溶液,流速为 0. 5 mL·min
-1,柱温 35
℃,记录各自的保留时间 tR,绘制 Log Mr-TR标准曲
线。根据样品的 tR,通过标准曲线的回归方程计算
其相对分子质量。
总糖含量以葡萄糖为标准样品,苯酚-硫酸法测
定[8];糖醛酸含量以半乳糖醛酸为标准样品,咔唑-
硫酸法[9]; 总蛋白含量以 BSA 为标准样品,采用
Lowry法测定[10]。
2. 4 高效毛细管电泳分析
2. 4. 1 多糖的水解 称取虎眼万年青多糖 20 mg,
加 2 mol·L -1的三氟乙酸溶液,封管,于 100 ℃水解
5 h,蒸干后加入甲醇溶解,再蒸干,重复 4 ~ 5 次,除
尽三氟乙酸,待衍生化。
2. 4. 2 PMP衍生化 取浓度为 0. 5 mg·mL -1的单
糖标准品水溶液 5 mL 或 OCAP-2-2 水解液 10 mL,
置于具塞离心试管中。分别加入 0. 3 mol·L -1的
NaOH溶液 5 mL 和 0. 5 mol·L -1的 PMP 甲醇溶液
6 mL,混匀后置于 70 ℃水浴中反应 30 min,取出,冷
却至室温后,加入 0. 3 mol·L -1的盐酸溶液 5 mL 中
和至 pH值等于 7。然后加入等体积氯仿,离心分层,
弃去下层有机层,上层为水相,水相再重复萃取 2 次。
吸取水相衍生物 2 mL,超声脱气,用于 CZE分析。
2. 4. 3 电泳条件 中性空心石英毛细管柱 ( 70
cm ×50 μm) 。运行缓冲液为 50 mmol· L -1,pH
9. 38 的硼砂水溶液,分离电压 15 kV,进样压力
3. 448 kPa,进样时间 5 s,检测波长为 254 nm,柱温
25 ℃。所有溶液使用前均用 0. 45 μm 微孔滤膜过
滤,且临用前超声脱气处理。实验前,依次用无水甲
醇、1 mol·L -1盐酸溶液、水、0. 1 mol·L -1 NaOH溶
液、水、硼砂缓冲液分别冲洗毛细管,直至电流平稳。
2 次进样间用缓冲液冲洗 2 min。
2. 4. 4 标准曲线的绘制 分别取 4 种标准单糖各
50 mg置于 100 mL量瓶中配制混合标准品储备液,
将混合标准品储备液按一定比例稀释,得到一系列
不同浓度混合标准品操作溶液。按“2. 4. 2”制备衍
生物,并进行 CZE分析。以质量浓度 ρ( mg·mL -1 )
为横坐标,以峰面积 Y 为纵坐标作葡萄糖、木糖、甘
露糖、半乳糖在不同浓度下的标准曲线,见表 1。
2. 5 抗肿瘤活性测定
2. 5. 1 对小鼠 S180 肉瘤抑制影响 选择 8 周龄雌
性小鼠,实验组及对照组各 10 只,腹腔接种小鼠肉
瘤 180 细胞 ( 每只 2 × 105个细胞) ,接入 24 h后,以
0. 01、0. 1、1、10 和 100 μg·mL -1 5 个剂量给药
OCAP-2-2,对照组用生理盐水,每天腹膜内注射 1
次,每次每只注射用液用量为 0. 4 mL,共注射 10 d,
24 h 后颈椎脱臼处死小鼠,剥取瘤体称重,按下式
计算抑瘤率。抑瘤率( % ) = ( 1 - t / c) × 100%,t 为
实验组小鼠平均肿瘤重量( g) ,c为对照组小鼠平均
肿瘤重量( g) 。
2. 5. 2 对 K562 细胞增殖影响 实验在 96 孔板中
进行,K562 细胞终浓度为 1 × 105个·mL -1,每孔体
系 100 μL,实验组分别加入不同终质量浓度的
OCAP-2-2 ( 0. 01、0. 10、1. 0、10. 0、100. 0 μg ·
mL -1 ) ,设置对照组( 不加药) ,每组 4 个复孔,分别
培养 24、48、72 及 96 h 后,在各孔中加入 MTT 10
μL,继续培养 4 h,每孔再加入 10%二甲基亚砜 100
μL终止反应,37 ℃过夜,用酶标仪测定各孔在 570
nm的吸光度( A570 ) 值,观察不同药物浓度作用不同
时间对细胞增殖的影响,按下式计算细胞增殖抑制
率: A% = ( 1 - A实验 /A对照 ) × 100%。
3 结果与讨论
3. 1 虎眼万年青粗多糖 OCAP的制备
虎眼万年青全草粉末经乙醇-乙醚混合液
表 1 4 种标准单糖的标准曲线
Tab. 1 Calibration curves of glucose,xylose,mannose and ga-
lactose
Standard monosaccharides Standard curve r2
Glucose Y = 1 ×106ρ -19 207 0. 998 4
Xylose Y =2 ×106ρ -17 956 0. 999 7
Mannose Y =2 ×106ρ -55 780 0. 994 4
Galactose Y =2 ×106ρ -59 088 0. 996 4
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( 1∶ 1) 回流 3 h,除去脂质以及小分子成分,残渣在
90 ℃温度下,用蒸馏水提取 3 次,每次 3 h,提取液
浓缩后,用体积分数 40% 的乙醇沉淀,得率为
21. 15%,然后对 40%乙醇沉淀采用 Sevag 法脱蛋
白,半透膜透析脱盐及小分子糖,冷冻干燥,得到棕
红色粉末状粗多糖 OCAP,得率为 9. 2%。
3. 2 虎眼万年青粗多糖 OCAP分离纯化
3. 2. 1 DEAE-Sepharose Fast Flow 阴离子交换柱层
析 将 OCAP溶于 0. 2 mol·L -1三羟甲基氨基甲烷
缓冲溶液,过 0. 45 μm 滤膜后,上 DEAE-Sepharose
Fast Flow阴离子交换柱分离纯化,得到 3 个多糖组
分( OCAP-1,OCAP-2,OCAP-3 ) ,洗脱分离曲线见图
1,其中 OCAP-2 为主要多糖组分,得率为 0. 93%。
3. 2. 2 Sephadex G - 75 分子筛凝胶层析 取离子
交换纯化后的主要组分 OCAP-2 进一步用 Sephadex
G - 75 ( 16 mm ×500 mm) 凝胶柱分离纯化,结果见
图 2。从图 2 可以看出,OCAP-2 含有 3 个组分,其
中组分 OCAP-2-1 和组分 OCAP-2-3 含量较少,组分
OCAP-2-2 为主要组分。取主要组分 OCAP-2-2 进行
二次纯化,并采用苯酚-硫酸法 ( 以葡萄糖计) 测得
OCAP-2-2 总糖含量为 92. 3%。
3. 3 化学特征分析纯
OCAP-2-2 的 HPGPC色谱,用示差检测器检测,
结果为单一对称峰( 图 3) ,表明纯度较高。OCAP-2-
2 的保留时间为 6. 72 min,根据标准曲线 Log
( Mw ) = 8. 992 - 0. 398 2tR ( Mw 为重均分子量,tR为
保留时间,相关系数 r = 0. 998 3) ,得出平均分子量
为9. 84 × 104,说明粗多糖经过提取纯化后,组分较
为一致,不含有小相对分子质量的单糖和寡糖。总
糖含量以葡萄糖为标准样品,苯酚-硫酸法测定,回
归方程为: A = 9. 841 4ρ - 0. 048 8 ( A: 486 nm 吸光
值,ρ: 糖质量浓度 μg·mL -1,r2 = 0. 999 8,线性范
围: 10 ~ 50 μg·mL -1 ) ,测定结果见表 2; 糖醛酸含
图 1 OCAP的 DEAE--fast flow Sepharose阴离子交换柱色谱
分离
Fig. 1 Elution pattern of OCAP on DEAE-fast flow Sepharose
量以半乳糖醛酸为标准样品,咔唑-硫酸法测定,回
归方程为: A = 0. 001 7ρ - 0. 015 3 ( A: 523 nm 处吸
光值,ρ:葡萄糖醛酸浓度 μg·mL -1,r2 = 0. 997 1,线
性范围 10. 0 ~ 50. 0 μg·mL -1 ) ,结果见表 2; 总蛋
白含量以 BSA 为标准样品,采用 Lowry 法测定,回
归方程为: ρ = 1. 128 123A - 0. 608 3( A: 635 nm处吸
光值,ρ:蛋白质浓度 mg·mL -1,r2 = 0. 998 5,线性
范围 1. 0 ~ 20. 0 mg·mL -1 ) ,结果见表 2。
3. 4 高效毛细管电泳分析
3. 4. 1 混合标准单糖 CZE 分析 将衍生化的 4 个
单糖对照品分别进行高效毛细管电泳分析,得各个
单糖的出峰时间。精确量取已知浓度单糖混合液稀
释不同倍数,分别得到不同质量浓度的标准单糖混
合溶液,进行单糖混合标样的高效毛细管电泳分析,
得出各个单糖的混合标样出峰时间和峰面积,以质
表 2 OCAP-2-2 的化学特征
Tab. 2 Preliminary characterization of OCAP-2-2
Sample OCAP-2-2
Carbohydrate /% 92. 3
Uronic acid /% 6. 21
Protein /% 3. 68
Molar ratio of sugar component /% Xyl 1. 26
Glc 2. 16
Man 0. 88
Gal 1. 00
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量浓度 ρ( g·L -1 ) 对峰面积进行回归,测得各单糖
的标准曲线。混合标样与单糖样品谱图对照,得出
每个标准单糖的电泳迁移时间。混合单糖样品出现
4 个明显的峰( 图 4 ) ,说明各单糖混合标样得到了
有效分离。
3. 4. 2 样品的 CZE分析 多糖水解样品的 PMP衍
生物 CZE分离谱图见图 5。通过谱图分析和单糖摩
尔比的计算可知,虎眼万年青多糖由木糖、葡萄糖、
甘露糖、半乳糖 4 种单糖组成,其相对分子质量之比
为 1. 26∶ 2. 16 ∶ 0. 88 ∶ 1. 00。其中,葡萄糖与木糖含
量较高,结果见表 2。
3. 5 抗肿瘤活性分析
3. 5. 1 OCAP-2-2 对荷瘤小鼠肿瘤质量的影响 虎
眼万年青多糖 OCAP-2-2 在质量浓度为 0. 01、0. 1、
1、10 和 100 μg·mL -1时对移植性小鼠肉瘤 S180 的
平均抑制率分别为 ( 21. 65 ± 1. 75 ) % ( P < 0. 05 ) 、
( 28. 96 ± 3. 89 ) % ( P < 0. 01 ) 、( 33. 21 ± 3. 26 ) %
( P < 0. 01 ) 、( 38. 93 ± 5. 12 ) % ( P < 0. 001 ) 和
( 53. 16 ± 4. 23% ) ( P < 0. 001 ) 。实验结果表明,与
荷瘤对照组小鼠相比较,在所实验的浓度范围内,
OCAP-2-2对肉瘤 S180均有显著的抑制作用,且随着
多糖浓度的增加,抑制率明显增强,具有明显的量效
依赖关系。表明分离得到的虎眼万年青多糖 OCAP-
2-2组分对小鼠肉瘤 S180生长有明显抑制作用。
3. 5. 2 OCAP-2-2 对人白血病细胞 K562 增殖抑制
影响 与对照组相比较,不同浓度的 OCAP-2-2 对
人白血病细胞 K562 的增殖均有显著的抑制影响
( P < 0. 01) 。但在较低的浓度范围内呈现了较高的
增殖抑制率。在质量浓度 0. 1 μg·mL -1时,OCAP-
2-2 对 K562 细胞的增殖抑制作用最强,抑制率高达
( 39. 83 ± 7. 31) % ( P < 0. 01 ) 。当 浓 度 超 过
0. 1 μg·mL -1后,其增殖抑制率随浓度的增加,显
示出逐渐降低的趋势。
4 结 论
4. 1 经过系列分离纯化得到了水溶性均一多糖组
分 OCAP-2-2。该多糖主要由葡萄糖、木糖、甘露糖、
半乳糖等 4 种单糖组成,其相对分子质量之比为
2. 16∶ 1. 26 ∶ 0. 88 ∶ 1. 00,平均相对分子质量 9. 84 ×
104,总糖含量为 92. 3%,总糖醛酸含量为 6. 21%,
蛋白质含量为 3. 68%。
4. 2 在体内、体外抗肿瘤活性评价模型中,分离得到
的多糖组分 OCAP-2-2都呈现出了较高的抗肿瘤活性。
4. 3 该多糖可以探索作开发为天然抗肿瘤药物或
功能食品。
REFERENCES
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·4361· Chin Pharm J,2011 November,Vol. 46 No. 21 中国药学杂志 2011 年 11 月第 46 卷第 21 期