全 文 ：直立百部质量标准研究
*
宗镇1，班永生2，张亚中1，2＊＊，袁杰2，黄丽丹2，谢晓梅1，金斌2
(1．安徽中医药大学，合肥 230031;2．安徽省食品药品检验所，合肥 230051)
摘要 目的:为控制直立百部药材的质量，建立直立百部药材的显微鉴别、薄层鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物和
含量测定标准。方法:采用横切面及粉末进行显微鉴别;采用 TLC法对生物碱类成分进行薄层鉴别;采用中国药典附录方法，
对水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定;采用 HPLC法测定直立百部中原百部碱含量，色谱条件:色谱柱为 Phenome-
nex Gemini C6 － phenyl(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，流动相为乙腈 － 0. 1%三乙胺(34 ∶ 66) ，柱温为 30 ℃，流速为 1. 0 mL·
min －1，检测波长 306 nm。结果:横切面及粉末的显微特征与中国药典及文献记载基本一致，唯中柱中韧皮部束与木质部束的
个数不同于药典规定。薄层鉴别色谱斑点清晰，分离度较好。含量测定中原百部碱在 6. 257 ～ 156. 42 mg·L －1浓度范围内线
性关系良好(r = 0. 9998) ，平均回收率为 100. 2%(ＲSD为 1. 6%，n = 6)。结论:本文采用的方法操作简便，准确，重复性好，可
用于控制直立百部药材的质量。
关键词:百部;直立百部;原百部碱;中药材质量标准;薄层法定性鉴别;高效液相色谱;定量分析
中图分类号:Ｒ917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2013)12 － 2188 － 06
Ｒesearch on quality standards of roots of
Stemona sessilifolia(Miq．)Miq． *
ZONG Zhen1，BAN Yong － sheng2，ZHANG Ya － zhong1，2＊＊，
YUAN Jie2，HUANG Li － dan2，XIE Xiao － mei1，JIN Bin2
(1． Anhui University of Chinese Medicine，Hefei 230031，China;
2． Anhui Institute for Food and Drug Control，Hefei 230051，China)
Abstract Objective:To control the quality of root tuber of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq by establishing stand-
ards of transverse section，powder，TLC，water，total ash，acid － insoluble ash，extractives and assay． Methods:The
quality standards were established according to 10 batches of Stemona sessilifolia (Miq．)Miq samples from nation-
wide． Microscopical characteristics were studied for transverse section and powder． TLC was adopted to analyze the
alkaloids components． Water，total ash，acid － insoluble ash and extractives were determined by methods described
in appendices of Chinese Pharmacopoeia． The content of protostemonine was determined by HPLC． The Phenomenex
Gemini C6 － phenyl(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)column was used，the mobile phase was acetonitrile － 0. 1% trieth-
ylamine(34∶ 66) ，the column temperature was 30 ℃，the flow rate was 1. 0 mL·min －1，and the detection wave-
length was at 306 nm． Ｒesults:Microscopical characteristics of transverse section and powder were in good accord-
ance with Chinese Pharmacopoeia(2010 version，volume I)and literatures，except the number of phloem bundles
and xylem bundles in stele． The TLC showed the spots developed clearly and the separation was good． The concen-
tration of protostemonine showed a good linear relationship in the range of 6. 2569 － 156. 42 mg· L －1(r =
0． 9998) ，and the average recovery was 100. 2%(ＲSD was 1. 6%，n = 6)． Conclusion:The method is simple，ac-
curate with good reproducibility and can be used for the quality control of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．
Key words:Stemonae Ｒadix;Stemona sessilifolia (Miq．)Miq．;protostemonine;traditional Chinese meterials quali-
ty standard;TLC qualitative identification;HPLC;quantitative analysis
—8812— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(12)
＊
＊＊
香港中药材标准专项(SHK 2012 － 20)
通讯作者 Tel:(0551)63368775;E － mail:yazhongzhang@ hotmail． com
直立百部 Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．为百部
科百部属植物［1］，主产于安徽、河南等地。最早记
载于《图经本草》“春生苗……根下作撮如芋子，一
撮乃十五、六枚，黄白色。”并附图滁州百部、衡州百
部和峡州百部［2］。对照标本及《中国植物志》认为
其中的滁州百部应为直立百部。直立百部作为传统
中药百部的三大来源之一，药性味苦、微甘、性微温。
归肺经;具有润肺止咳、杀虫灭虱之功效。国内外对
直立百部药材的研究多集中在化学成分的分离和结
构鉴定以及其药理作用方面，化学成分的研究又集
中在生物碱方面，目前已从直立百部中分离出对叶
百部碱、百部次碱、原百部碱、百部定碱、百部碱、异
原百部碱、脱氢原百部碱、百部新碱、二氢百部新碱、
双去氢百部新碱、直立百部碱、狭叶百部碱等 40 多
种生物碱［3 － 15］。目前对药材质量控制报道甚少，有
文献对直立百部中 2 种生物碱进行含量测定［16］，但
所用的药材为市场购买的 3 批药材，因此所选的指
标性成分二脱氢对叶百部碱和氧化对叶百部碱是否
为直立百部药材的共有成分还需进一步验证，姜明
辉等［17］曾对傣百部的质量标准进行研究，但缺少含
量测定;另有报道通过酸碱滴定或比色法［18 － 19］对百
部总生物碱进行含量测定，没有可靠的含量测定方
法。2010 年版中国药典［1］中仅有性状鉴别、显微鉴
别、理化鉴别和浸出物含量限定 4 项，缺乏 TLC 定
性鉴别和含量测定，其质量标准亟待提高与完善。
本研究以直立百部药材为研究对象，通过对其进行
显微鉴别、检查研究，并首次以原百部碱为对照品建
立直立百部的 TLC鉴别及含量测定方法，拟为其建
立科学合理的质量标准。
1 仪器与试药
光学显微镜(BH － 2，OLYMPUS) ，石蜡切片机
(ＲM2265，LEICA) ，烘片机(HI1220 型，LEICA) ，数
显鼓风干燥箱(GZX －9240，MBE) ;恒温水浴锅(HH
型，江苏金坛国胜实验仪器厂) ，薄层色谱半自动点
样器(Linomat － 5，瑞士 GAMAG 公司) ，薄层色谱摄
像仪(Ｒepros － tar3，瑞士 GAMAG 公司) ;电子分析
天平(BS210S，德国 Sartorius) ，数控超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司) ，高效液相色谱仪(LC
－20AD型，日本岛津)。
原百部碱自制(HPLC 测定纯度大于 98. 0%)，10
批直立百部药材采自安徽、河南，经安徽省食品药品检
验所张亚中博士鉴定为直立百部 Stemona sessilifolia
(Miq．)Miq． 的干燥根，样品信息见表 1。薄层板为
Merck SG60 F254预制板。所用试剂为分析纯和色谱纯。
表 1 直立百部药材样品来源
Tab 1 The source of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq． samples
样品编号(No．) 采收时间(collecting date) 生产地 /采收地(producing area)
BB －01 － 001
BB －01 － 002
BB －01 － 003
BB －01 － 004
BB －01 － 005
BB －01 － 006
BB －01 － 007
BB －01 － 008
BB －01 － 009
BB －01 － 010
2012 － 05 － 10
2012 － 12 － 10
2012 － 08 － 02
2012 － 08 － 31
2012 － 10 － 29
2012 － 08 － 23
2012 － 09 － 17
2012 － 11 － 08
2012 － 11 － 08
2012 － 11 － 23
河南省信阳新县(采收) (Xin County，Xinyang，Henan) (collected)
安徽省滁州市凤阳县(采收) (Fengyang County，Chuzhou，Anhui) (collected)
安徽省滁州市琅琊山(采收) (Langyashan Chuzhou，Anhui) (collected)
安徽省滁州市全椒县马厂镇(采收) (Machang Town，Quanjiao County，Chuzhou，Anhui ) (collected)
安徽省滁州市明光市(收购) (Mingguang，Chuzhou，Anhui) (bought)
安徽省滁州市来安县(采收) (Laian County，Chuzhou，Anhui) (collected)
安徽省滁州市全椒县大墅镇(采收) (Dashu Town，Quanjiao County，Chuzhou，Anhui ) (collected)
河南省信阳市浉河区浉河岗乡(采收) (Shihegang，Shihe District，Xinyang，Henan ) (collected)
河南省信阳市浉河区谭家河乡(采收) (Tanjahe，Shihe District，Xinyang，Henan) (collected)
安徽省滁州市明光市(采收) (Mingguang，Chuzhou，Anhui) (collected)
2 方法与结果
2. 1 显微鉴别
2. 1. 1 横切面 取新鲜直立百部根切成厚约 5 mm
圆柱体，经过固定(FAA)→脱水→透明→浸蜡→包
埋→切片→脱蜡→二重染色→封藏→贴标签，得到
直立百部药材根的横切面，观察结果显示直立百部
根被为 3 ～ 4 列细胞，壁木栓化及木化。皮层较宽。
中柱韧皮部束与木质部束各 13 ～ 27 个，间隔排列，
韧皮部束内侧有少数非木化纤维;木质部束导管
2 ～ 5个，并有木纤维和管胞，导管类多角形，径向直
径约 16 ～ 70 μm，偶有导管深入至髓部。髓部散有
少数细小纤维，如图 1 所示。
2. 1. 2 粉末显微鉴别 取百部药材，粉碎后过四号
筛，得黄棕色粉末，取粉末以水合氯醛制片观察。结
果显示根被细胞为淡黄棕色，呈长方形或长多角形，
壁木栓化或木化，细胞壁表面有致密的细条纹。具
缘纹孔导管多见。内皮层细胞长方形，纵向壁细波
弯曲，横向壁平直。木纤维较长，直径 10 ～ 25 μm，
壁稍厚，木化，具单斜纹孔。见图 2。
—9812—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(12)
图 1 直立百部的横切面显微特征图
Fig 1 Microscopic features of transverse section of roots of Stemona ses-
silifolia(Miq．)Miq．
a．简图(sketch) b． 横切面图(section illustration) c． 根被(vela-
men) d． 韧皮部与木质部 (phloem bundles and xylem bundles)e．
髓中的纤维(fibers)
1．根被(velamen) 2．皮层(cortex) 3．内皮层(endodermis) 4．木质部
(xylem) 5．韧皮部(phloem) 6．髓(pith) 7．髓中的纤维(fiber)
图 2 直立百部粉末显微特征图
Fig 2 Microscopic features of powder of roots of Stemona sessilifolia
(Miq．)Miq．
1．根被细胞(velamen cells) 2．导管(vessels) 3．木纤维(xylem fi-
ber)
2. 2 薄层鉴别
2. 2. 1 供试品溶液及对照品溶液制备 取样品粉
末 1 g，加氨水 2 mL，振摇均匀;然后加入乙醚 50
mL，超声处理(功率 200 W，频率 40 kHz)30 min。
滤过，滤液挥干，残渣加乙醇 1 mL 溶解作为供试品
溶液。另称取原百部碱对照品，加乙醇制成 1 mg·
mL －1的溶液作为对照品溶液。
2. 2. 2 点样、展开 精密吸取对照品溶液和供试品
溶液各 5 μL，分别点于同一硅胶薄层板上，以环己
烷 －乙酸乙酯 －丙酮 －氨水(6∶ 4∶ 4∶ 1)上层液为展
开剂，展开，取出，吹干，喷以稀碘化铋钾试液，再喷
以 5%亚硝酸钠溶液(溶剂为 70%乙醇)去底色，置
可见光下检识。供试品色谱中，在与对照品色谱相
应的位置上显相同颜色的斑点，实验结果见图 3。
图 3 直立百部 TLC图
Fig 3 TLC of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．
1，7，13．原百部碱(protostemonine) 2 ～ 6，8 ～ 12． 直立百部样品
(samples of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq) (BB － 01 － 001 ～
BB － 01 － 10)
2. 3 检查
2. 3. 1 水分 按中国药典 2010 版第一部附录Ⅸ H
进行，结果见表 2。
2. 3. 2 灰分(总灰分和酸不溶性灰分) 按中国药
典 2010 版第一部附录Ⅸ K进行，结果见表 2。
2. 3. 3 浸出物 按中国药典 2010 版第一部附录Ⅹ
A水溶性浸出物测定法项下热浸法进行，结果见表 2。
2. 4 含量测定
2. 4. 1 对照品溶液的配制 取原百部碱对照品适
量，精密称定，加甲醇制成每 1 mL含 1. 7 mg原百部
碱的溶液，作为储备液。
2. 4. 2 供试品溶液的制备 取本品，粉碎成粗粉，取
1. 0 g，精密称定，置索氏提取器中，加入氨水 4 mL，充
分润湿，加入乙醚 100 mL，连接冷凝管，45 ℃加热回
流提取 4 h，取出乙醚液，用 30 mL乙醚分 3次洗涤烧
瓶，合并乙醚液，回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解至25
mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用 0. 45 μm微孔
滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。
—0912— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(12)
表 2 直立百部水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物以及原百部碱质量分数(n =2)
Tab 2 Ｒesults of moisture，ash，acid insoluble ash，extract and mass fraction of
protostemonine of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．
样品编号
(No．)
水分
(moisture)/%
总灰分
(ash)/%
酸不溶性灰分
(acid insoluble ash)/%
浸出物
(extract)/%
原百部碱
(protostemonine)/%
BB －01 － 001
BB －01 － 002
BB －01 － 003
BB －01 － 004
BB －01 － 005
BB －01 － 006
BB －01 － 007
BB －01 － 008
BB －01 － 009
BB －01 － 010
平均值(average)
7. 81
10. 84
11. 31
12. 16
9. 81
8. 84
8. 11
9. 89
12. 00
7. 93
9. 87
7. 00
3. 41
3. 27
5. 71
4. 92
4. 18
4. 02
4. 35
5. 47
3. 67
4. 60
3. 34
0. 37
0. 47
0. 80
0. 79
0. 84
0. 99
1. 07
1. 06
0. 40
1. 01
67. 78
75. 78
78. 41
61. 13
57. 94
75. 62
77. 36
73. 04
70. 40
78. 05
71. 55
0. 28
0. 31
0. 25
0. 33
0. 25
0. 27
0. 28
0. 36
0. 32
0. 29
0. 29
2. 4. 3 色谱条件 以 Phenomenex Gemini C6 － phenyl
(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)为色谱柱;以乙腈 －
0. 1%三乙胺(34 ∶ 66)为流动相;检测波长为 306
nm;柱温为 30 ℃;流速为 1. 0 mL·min －1，进样量为
10 μL。对照品及供试品溶液的 HPLC 色谱图见
图 4。
图 4 原百部碱对照品(A)和直立百部(BB － 01 － 001)供试品(B)高效液相色谱图
Fig 4 HPLC of protostemonine reference substance(A)and samples of roots of Stemona sessilifolia(Miq．)Miq．(B)
1．原百部碱(protostemonine)
2. 4. 4 标准曲线的制备及线性范围 精密吸取原
百部碱对照品储备溶液适量，依次用甲醇稀释成浓
度为 6. 2569、31. 284、62. 569、93. 853、125. 138、
156. 422 mg·L －1的系列对照品溶液，用 0. 45 μm微
孔滤膜滤过，取续滤液 10 μL注入色谱仪进行测定，
以对照品溶液浓度为横坐标(X) ，峰面积积分值为
—1912—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(12)
纵坐标(Y) ，进行线性回归得标准曲线方程为:
Y = 3. 513 × 104X + 1. 124 × 104 r = 0. 9998
表明原百部碱在 6. 257 ～ 156. 42 mg·L －1浓度范围
内线性关系良好。
2. 4. 5 精密度试验 取同一份原百部碱对照品溶
液，在相同色谱条件下连续进样 6 次，测得峰面积的
ＲSD为 0. 87%，结果表明仪器的精密度良好。
2. 4. 6 稳定性试验 取新制备的供试品溶液，分
别在 0、1、2、4、6、8、12、24、48 h 进样测定，结果原
百部碱峰面积的 ＲSD 为 1. 1%，表明样品在 48 h
内稳定。
2. 4. 7 重复性试验 取编号为 BB － 01 － 001 的直
立百部药材粉末，按“2. 4. 2”项下方法平行制备 6
份供试品溶液，测定，样品中原百部碱含量的平均值
为 0. 28%，ＲSD为 1. 3%。
2. 4. 8 加样回收试验 取原百部碱对照品适量，精
密称定，加甲醇溶解，制成浓度为 1. 1172 mg·mL －1
的溶液，取已准确进行含量测定的本品(BB － 01 －
001)粉末约 0. 5 g，精密称定，置索氏提取器中，分别
加入相同体积的原百部碱对照品溶液，按“2. 4. 2”
项下操作，进样测定，计算加样回收率，原百部碱平
均回收率为 100. 2%，ＲSD为 1. 6%，结果见表 3。
2. 4. 9 样品测定结果 取本品粉末约 1. 0 g，精密
称定，按“2. 4. 2”项下操作，制成供试品溶液，进样
测定。按外标一点法计算原百部碱的质量分数，10
批直立百部药材中原百部碱(按干燥品计)的质量
分数测定结果见表 2，按干燥品计算平均质量分数
为 0. 29%，按下浮 20%计算为 0. 23%，暂定原百部
碱的质量分数不得低于 0. 20%。
表 3 原百部碱加样回收率(n =6)
Tab 3 The results of recovery for protostemonine
样品编号
(No．)
原有量
(original)/mg
加入量
(added)/mg
测得量(found)/mg
回收率
(recovery)/%
平均回收
(average recovery)/%
ＲSD /%
BB －01 －001 1. 41
1. 41
1. 41
1. 41
1. 41
1. 41
1. 40
1. 40
1. 40
1. 40
1. 40
1. 40
2. 82
2. 84
2. 78
2. 79
2. 83
2. 82
100. 7
102. 1
97. 9
98. 6
101. 4
100. 7
100. 2 1. 6
3 讨论
3. 1 原百部碱最早由近藤平三郎从直立百部中分
离得到，我国学者朱任宏、叶阳、吕丽华、杨新洲等都
从国产直立百部中分离出原百部碱。原百部碱为直
立百部中主要的生物碱类，具有较强的镇咳活性，因
此选择原百部碱作为指标性成分［20 － 22］。原百部碱
的分子式为 C23 H31 NO6，相对分子质量为 417. 50，
CAS 号为 27495 － 40 － 5，化学结构式见图 5。
图 5 原百部碱化学结构式
Fing 5 Structure of protostemomine
3. 2 在原百部碱的含量测定过程中，考察了不同品
牌不同型号的色谱柱(Phenomenex Gemini C6 － phe-
nyl，Agilent XDB C18，Agilent ZoＲbAx SB － Aq C18，规
格均为 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ，结果表明 Phe-
nomenex Gemini C6 － phenyl柱在分离度及柱效上均
明显优于其他 2 根色谱柱，因此选择其为直立百部
药材中原百部碱含量测定用色谱柱。考察了不同浓
度的三乙胺溶液(0. 1%三乙胺溶液、0. 2%三乙胺
溶液、0. 5%三乙胺溶液)作为流动相，实验证明，乙
腈 － 0. 1%三乙胺溶液分离效果最好。对不同比例
乙腈 － 0. 1%三乙胺溶液(25 ∶ 75，35 ∶ 65，30 ∶ 70)进
行考察，结果以乙腈 － 0. 1%三乙胺溶液(35∶ 65)分
离度较好，对两者比例进一步进行微调，最终确定的
流动相为乙腈 － 0. 1%三乙胺溶液(34∶ 66)。
3. 3 含量测定实验中对索氏提取、超声和酸提碱化
萃取 3 种提取方法进行考察，结果显示索氏提取的
效率明显高于其他 2 种方法，故选择索氏提取法为
本实验的提取方法;对提取时间进行考察，结果显示
索氏提取 4 h样品中原百部碱的含量明显高于提取
1 h和 2 h，而提取 8 h与提取 4 h差异不大，因此，选
择 4 h为样品提取时间;对不同粉碎程度的药材进
行考察，实验中发现样品加入氨水润湿后，粉末越细
结块现象越严重，不能充分的润湿，测定结果也显示
以粗粉提取的样品中原百部碱含量最高，为细粉的
—2912— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(12)
近 2 倍，中粉次之，细粉最低，可能与百部药材块根
中含有大量的糖类成分有关，因此药材不易粉碎过
细，以粗粉较为合适。
3. 4 与原药典标准［1］相比，在横切面显微鉴别中
发现中柱木质部束与韧皮部束的个数为 13 ～ 27 个，
扩大了原标准的范围。增加了薄层色谱鉴别、检查、
含量测定等项目。由于直立百部属于临床常用药
材，因此上述研究内容的完成，填补了直立百部质量
标准研究的空白，为其国家标准和行业标准的制定
提供了实验依据，对于保证其临床的安全有效具有
重要意义。
3. 5 在对百部药材质量标准进行研究的过程中，发
现药典收载的其来源的 3 种百部无论从原植物形
态、横切面或粉末显微特征，还是所含生物碱种类及
含量均有较大差异。因此，很难以同一个质量标准
来控制 3 种百部药材的质量，建议将 3 种基原的百
部按一物一名的原则分列，分别建立各自的质量标
准，以便更好地对药材质量进行控制。
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(本文于 2013 年 7 月 9 日收到)
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