全 文 ：　　另外 ,按干燥品计算 ,用 10批不同批号制马钱
子分别制得的 10批马钱子粉中马钱子碱的平均含
量为 0.63%,而用批号为 080815的同一批制马钱
子所制得的 10份马钱子粉样品中马钱子碱的平均
含量为 0.69%, 3批药典会所提供的马钱子粉中马
钱子碱平均含量为 0.53%,三者平均为 0.62%。现
以总平均含量的 80%,即 0.50%作为马钱子粉中马
钱子碱的最低限量列入本品质量标准(草案)正文
含量测定项下 ,这与 2005年版 《中国药典 》的规定
是一致的。
3　小结和讨论
对制马钱子及马钱子粉而言 ,由于两个氮氧化
物专属性不强 ,且在制马钱子和马钱子粉中 ,两个氮
氧化物含量极低 ,故仍以士的宁和马钱子碱两个指
标成分作为质控指标拟订本品质量标准 ,未纳入两
个氮氧化物的含量测定项 。
经优化后的色谱条件为:以十八烷基硅烷键合
硅胶为填充剂;以乙腈 -水(38∶62),每 1 000 mL中
含磷酸二氢钾 3.4g和十二烷基硫酸钠 1.7 g为流
动相;检测波长为 260 nm;理论板数按士的宁峰计
算应不低于 5 000。
根据马钱子粉制备和测定两个环节的累积总误
差 ,建议将马钱子粉中士的宁的限度范围修订为:按
干燥品计算 ,含士的宁(C21H22N2O2)应为 0.64% ～
0.96%;而马钱子碱(C23H26 N2O4)仍定为不得少于
0.50%。显然 ,经过此次修订后 ,马钱子粉制备过程
中的可操作性大大提高了 ,而参照 2005年版 《中国
药典 》中生马钱子 、制马钱子和马钱子粉的服用剂
量 ,其安全性和有效性并未降低。
REFERENCES
[ 1] 　Ch.P(2005)VolⅠ (中国药典 2005年版.一部)[ S].2005:
34-35.
[ 2] 　CAIBC, WUH.Analysisofspectraldatafor13C-NMRofsixteen
StrychnosAlkaloids[J] .ActaPharmSin(药学学报), 1994, 29
(1):44-45.
[ 3] 　WUH, CAIBC, ZHENGPX.etal.Efectofprocessingonthe
alkaloidsinStrychnosnux-vomicaL[ J] .ChinaJChinMaterMed
(中国中药杂志), 1994, 19(5):277-279.
(收稿日期:2009-08-28)
基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项项目[黔科合中药专字(2006)5007号 ] ;贵州省科技计划项目 [黔科合带帽字(2008)5005号 ]
作者简介:周婵媛 ,女 ,硕士研究生　　研究方向:中药质量控制　　＊通讯作者:周欣 ,女 ,博士 ,教授 ,博士生导师　　研究方向:中药质量控
制 、指纹图谱 、中药新药研发　　Tel:(0851)6690018　　E-mail:alice9800@sina.com
HPLC-ELSD测定不同产地吉祥草中凯提皂苷元的含量
周婵媛a,陈华国a, b,周欣a, b＊ ,刘海a(贵州师范大学 , a.天然药物质量控制研究中心;b.贵州省山地环境信息系统与生态环境保护重
点实验室 ,贵阳 550001)
摘要:目的　建立吉祥草中凯提皂苷元的含测定方法。方法　采用高效液相色谱(HPLC)-蒸发光散射检测器(ELSD), Agi-
lentEcpliseXDB-C18(4.6 mm×150 mm, 5 μm)柱 ,甲醇-水(50∶50)为流动相 , 流速为 1.0 mL· min-1 ,柱温 25 ℃, 载气压力
0.33 MPa,漂移管温度 65℃。结果　凯提皂苷元质量浓度在 0.1 ～ 1.5mg· mL-1之间线性关系良好 , r=0.999 5,平均回收率
98.4%, RSD=1.5% (n=3)。结论　该方法分离效果好 ,操作简便 , 稳定性好 ,重复性好 ,可用于吉祥草中凯提皂苷元的含测
定 , 为吉祥草药材的开发利用奠定基础。
关键词:吉祥草;凯提皂苷元;高效液相色谱-蒸发光散射检测法
中图分类号:R284.1　　　文献标志码:A　　　文章编号:1001-2494(2010)13-1029-03
DeterminationofKitigenininReineckeacarnea(Andr.)KunthfromDifferentRegionsbyHPLC-ELSD
ZHOUChan-yuana, CHENHua-guoa, b , ZHOUXina, b＊ , LIUHaia(a.TheResearchCenterforQualityControlofNatural
Medicine, GuizhouNormalUniversity;b.KeyLaboratoryforInformationSystemofMountainousAreasandProtectionofEcological
GuizhouNormalUniversity, Guiyang550001, China)
·1029·中国药学杂志 2010年 7月第 45卷第 13期　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010July, Vol.45No.13
ABSTRACT:OBJECTIVE　TodeterminethecontentofkitigenininReineckeacarnea(Andr.)Kunth.METHODS　AHPLC-ELSD
methodwasestablishedwiththechromatographiccolumnofAgilentEcpliseXDB-C18(4.6mm×150 mm, 5μm).Themobilephasecon-
sistedofmethanol-water(50∶50).Theflowratewas1.0mL· min-1.Thetemperatuerofthedrifttubewassetat65 ℃.Thepressure
ofthegaswas0.33 MPa.Thecolumntemperaturewas25 ℃.RESULTS　Forthekitigenin, thecalibrationcurvewaslinear
(r=0.999 5)intherangeof0.1-1.5mg· mL-1 , theaveragerecoveryofquercetinwas98.4%(RSD=1.5%).CONCLUSION　
Themethodisefective, simpleandaccurate, andcanbeusedtodeterminethecontentofkitigenininReineckeacarnea(Andr.)Kunth.
KEYWORDS:Reineckeacarnea(Andr.)Kunth.;kitigenin;HPLC-ELSD
　　吉祥草又名观音草 、松寿兰等 ,为百合科植物吉
祥草 [ Reineckiacarnea(Andr.)kunth]的全草 ,主要
分布于华东 、中南 、西南各省区 ,本品亦为贵州省少
数民族用药 。以全草入药 ,全年可采 ,用于肺结核 ,
咳嗽咯血 ,慢性支气管炎 ,哮喘 ,风湿性关节炎;外用
治跌打损伤 ,骨折等。作为贵州的常用苗药 ,吉祥草
的各种制剂在临床上已取得较好疗效 ,并收载于
《贵州省中药材 、民族药材质量标准 》(2003年版)。
目前国内外对吉祥草的研究主要是其化学成分研
究 [ 1-3] ,有关其质量控制的研究仅有关于吉祥草的对
照药材薄层鉴别的报道。可见 ,吉祥草药材质量标
准的研究相当薄弱 。研究表明 ,吉祥草主要含有甾
体皂苷类 , 皂苷元等活性成分 ,其中凯提皂苷元对
环腺苷酸磷酸二酯酶的活性有抑制作用 [ 4] ,因此 ,
将凯提皂苷元作为指标成分 ,对吉祥草的质量控制
具有重要意义。本实验首次采用高效液相色谱
(HPLC)-蒸发光散射检测器(ELSD)为检测手段对
吉祥草中有效成分凯提皂苷元进行含量测定 ,为建
立吉祥草药材科学合理的质量控制方法和实现其规
范化种植提供理论依据。
1　仪器和试药
LC-20AT高效液相色谱仪 (日本岛津), Softa
300型 ELSD检测器(美国 Softa公司), HW-2000
色谱工作站 ,十万分之一天平(梅特勒-托利多);水
为超纯水;色谱甲醇 ,其他试剂均为分析纯 。
剀提皂苷元对照品(自制),经各种理化常数和
波谱数据进行了结构鉴定 ,与文献值[ 4]一致 ,通过
ELSD检测器检测其纯度 ,经 HPLC峰面积归一化法
测定其纯度为 98.11%,吉祥草药材(产地:贵州扎佐 、
贵阳 、平镇 、六枝 、孟关 、牛郎关;广西玉林;云南沼通;
云南昆明)经贵阳中医学院何顺志研究员鉴定为吉祥
草 [ Reineckiacarnea(Andr.)kunth]的全草。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色谱柱:AgilentEcpliseXDB-C18柱 (4.6mm×
150mm, 5μm);流动相:甲醇(A)和水 (B)等度
洗脱:50∶50;流速:1.0 mL·min-1;柱温:25 ℃;
进样量:20 μL。在上述色谱条件下凯提皂苷元与
其他组分分离度良好 ,见图 1。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备　精密称取凯提皂苷元
对照品适量 ,精密称定 ,用甲醇 -三氯甲烷 (1∶1)溶
解 ,制成浓度为 1.5mg·mL-1溶液 ,即得 。
2.2.2　供试品溶液的制备　取本品粉末 0.5 g,精
密称定 ,置 250 mL具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇溶
液 80 mL,密塞 ,称重 ,加热回流提取 2 h,冷却 ,再
次称重 ,并用甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,滤过 ,弃去
初滤液 ,精密量取续滤液 40 mL,浓缩回收甲醇 ,挥
干后残渣加入甲醇 -三氯甲烷(1∶1)溶解 ,定量转移
至 25 mL量瓶中 , 并定容至刻度 , 滤过 , 滤液过
0.45 μm微孔滤膜 ,即得 。
2.3　线性关系考察
取凯提皂苷元适量 ,置 105 ℃干燥箱内干燥 2
h后 ,冷至室温 ,精密称取凯提皂苷元对照品适量 ,
用甲醇-三氯甲烷(1∶1)溶解 ,分别制成质量浓度为
　　
图 1　凯提皂苷元的 HPLC色谱图
A-对照品;B-样品
Fig.1　HPLCChromatogramofthestandardandthesample
A-standard;B-sample
·1030· ChinPharmJ, 2010July, Vol.45No.13　　　　　　　　　　　　　 中国药学杂志 2010年 7月第 45卷第 13期
0.1, 0.3, 0.5, 0.75, 1.0, 1.5 mg· mL-1的系列对
照品溶液。分别精密吸取 20 μL,注入高效色谱仪 。
以对照品质量的自然对数为横坐标 、峰面积的积分
值的自然对数为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,回归方程为
Y=0.842 1X+6.003 4, r=0.999 5。该标准曲线表
明凯提皂苷元在 0.1 ～ 1.5 mg· mL-1内线性关系
良好。
2.4　精密度实验
精密吸取凯提皂苷元对照品溶液 20 μL,在
“2.1”色谱条件下连续进样 6次 , 记录色谱峰面
积 ,测定值分别为 1 929 464, 1 947 890, 1 947 890, 1
921 083, 1 941 040, 1 947 417, 6次测定结果平均值
为 1 939 131, 计算平均相对标准偏差 , 结果 RSD
为 0.3%。
2.5　稳定性实验
取同一批号样品(贵州修文县),分别于 0, 2,
4, 6, 10 , 12 , 18 , 24 h精密吸取 20 μL进样 ,按
“2.1”色谱条件测定 ,记录峰面积 ,测得凯提皂苷元
峰面积值分别 444 099, 444 287, 446 809, 444 192,
443 273, 443 343, 441 221, 434 240, 8次测定结果
平均值为 442 683, RSD为 1.0% 。结果表明 ,样品
在 24h内稳定 。
2.6　重复性实验
取同一批号样品 (贵州修文县 )6 份 , 按
“ 2.2.2”项下方法操作 , 平行制备供试品溶液 6
份 , 在 “ 2.1” 色谱条件下进样 , 记录色谱峰面积 。
结果凯提皂苷元平均含量 4.2%, RSD为 2.4%。
2.7　回收率实验
采用加样回收法 ,取已知含量的样品(贵州修文
县)9份 , 每份约 0.25g, 精密称定 , 置于 250 mL具
塞锥形瓶中 , 分别精密加入对照品溶液适量 , 按
“2.2.2”项下制备低 、中 、高浓度供试品溶液 , 同一浓
度 3份 , 在 “2.1”色谱条件下进样 , 记录色谱峰面
积 , 计算回收率 , 平均回收率为 98.4%, RSD为
1.5%。
2.8　样品含量测定
取 13批药材样品 ,按照 “2.3”项下的方法制备供
试品溶液 ,吸取供试品溶液 20 μL分别按 “2.1”色谱
条件及方法 ,测定其中凯提皂苷元的含量测定 ,结果
见表 1。
3　讨　论
3.1　分别采用甲醇 ,体积分数 50%甲醇 ,无水乙
　　
表 1　13批样品中凯提皂苷元的测定结果 .n=3, x±s
Tab.1　Contentsofkitigeninin13 batchesofReineckeacarnea
(Andr.)Kunth.n=3, x±s
Sample Sources KitigeninContent/% RSD/%
1 Kaiyang, Guizhou 2.54±0.05 2.13
2 Liuzi, Guizhou 2.87±0.09 3.02
3 Guiyang, Guizhou 0.84±0.02 2.96
4 Guiyang, Guizhou 1.37±0.05 3.42
5 Guiyang, Guizhou 1.55±0.03 2.10
6 Xiuwen, Guizhou 4.20±0.05 2.40
7 Duyun, Guizhou 0.59±0.01 1.94
8 Kunming, Yunnan 0.57±0.02 2.97
9 Zhaotong, Yunnan 0.64±0.02 3.05
10 Sichuan 1.76±0.02 1.25
11 Sichuan 1.02±0.02 2.08
12 Sichuan 0.97±0.01 1.16
13 Yuling, Guangxi 1.76±0.02 1.36
醇 ,体积分数 50%乙醇 ,体积分数 75%乙醇 ,三氯甲
烷-甲醇(不同比例的混合溶剂)为提取溶剂 ,结果表
明 ,甲醇的提取率最高 ,考察了超声提取和回流提
取 ,结果回流提取的效果明显优于超声提取 ,并通过
正交实验优化提取条件 。
3.2　吉祥草主要含有甾体皂苷 ,皂苷元等成分。由
于皂苷元类成分无特征紫外吸收 ,组分复杂 ,难以测
定 ,目前多采用重量法 、比色法等方法对其测定。本
实验首次建立了用高效液相色谱法(HPLC)-蒸发光
散射检测器(ELSD)对吉祥草中凯提皂苷元进行含
量测定。
3.3　实验结果表明 ,不同产地吉祥草药材中凯提皂
苷元的含量差异较大 ,这可能与吉祥草的生长环境
及采收时间有关。
3.4　本方法分离效果好 ,操作简便 ,稳定性好 ,重复
性好 ,可用于吉祥草中凯提皂苷元的含量测定 ,为吉
祥草药材的开发利用奠定基础。
REFERENCES
[ 1] 　ZHOUX, LIUH, ZHAOC, etal.Studiesonchemicalconstitu-
entsofherbsofReineckiacarnea[ J].JChinMaterMed(中国中药
杂志), 2008, 33(23):2793-2796.
[ 2] 　LIUH, ZHOUX, ZHAOC, etal.Studiesonchemicalconstituents
ofherbsofReineckiacarnea[ J] .JChinPharm(中国药房),
2009, 20(12):914-915.
[ 3] 　IWAGOEK, KONISHIT, KIYOSAWAS.Studiesontheconstitu-
entsoftheaerialpartsofReineckiacarneaKunth[ J] .Yakugaku
Zashi, 1987, 107(2):140-149.
[ 4] 　KANMOTOT, MIMAKIY, SASHIDAY, etal.Steroidalconstitu-
entsfromtheundergroundpartsofReineckeacarneaandtheirin-
hibitoryactivityoncAMPphosphodiesterase[ J] .Chem Pharm
Bul, 1994, 42(4):926-931.
(收稿日期:2009-12-30)
·1031·中国药学杂志 2010年 7月第 45卷第 13期　　　　　　　　　　　　　　 ChinPharmJ, 2010July, Vol.45No.13