全 文 ：收稿日期:2007-12-28;　修订日期:2008-12-10
基金项目:广西壮族自治区科技厅科技攻关项目(No.053701736)
作者简介:王　建(1959-),女(汉族),湖北浠水人 ,现任广西中医学院副
教授 ,学士学位 ,主要从事药用植物种质资源与生物技术工作.
＊通讯作者简介:覃洁萍(1962-), 女(汉族),广西南宁人 , 现任广西中医
学院教授 ,硕士学位 ,主要从事天然产物研究与开发 、药品质量控制工作.
广西不同产地莪术中吉马酮的含量比较
王　建 ,刘　雯 ,张　炜 ,姚　蓉 ,李　伟 ,覃洁萍＊
(广西中医学院·药学院 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 建立以高效液相色谱法测定桂莪术中吉马酮含量的方法 , 并检测广西不同产地桂莪术中吉马酮的含量。方
法 采用 Shim-packCLC-ODS柱(6.0 mmID×15 cm, 5 μm), 流动相为乙腈 -水(60∶ 40), 流速:lml/min, 检测波长
215nm。结果 吉马酮在 5.825 ～ 582.5μg/ml范围内样品浓度与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 92), 平均回收率为
101.41%, RSD=2.82%(n=6)。结论 福绵 、港江 、兴业 3个产地吉马酮含量最高;不同产地桂莪术中吉马酮的含量存在
较大差异。
关键词:莪术;　吉马酮;　高效液相色谱法
中图分类号:R283;R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)05-1091-01
　　中药莪术是姜科植物蓬莪术 CurcumaphaeocaulisValeton,广
西莪术 CurcumakwangsiensisS.G.LeeC.F.Liang和温郁金
CurcumawenyujinY.H.ChenetC.Ling的根状茎 , 具抗肿瘤 、抗
菌 、行气破血 、消积止痛等功效 , 主治积滞胀痛 、血腹痛 、肝脾肿
大 、血滞经闭 、早期宫颈癌 [ 1] 。首载于《雷公炮炙论》。主要产于
四川 、福建 、浙江 、广西等地。其中广西莪术 Curcumakwangsien-
sisS.G.LeeC.F.Liang又名桂莪术 ,主要分布于广西桂中南地
区。莪术中含挥发油 、姜黄素等成分 , 挥发油为其抗肿瘤有效成
分 , 姜黄素为其降血脂 、抗氧化 、抗炎的主要有效成分。研究中发
现 , 莪术油中的吉马酮含量较高 , 且对癌细胞具有一定的抑制作
用 [ 2] 。为了能更好地控制广西莪术的质量 , 现用 HPLC法对广西
境内不同产地的广西莪术进行含量测定 ,研究比较其含量差异。
1　仪器与试药
美国 Agilent1100Series型高效液相色谱仪:四元泵 , 在线脱
气机 , 自动进样器(G1313A), 柱温箱 ,可变波长检测器。 Simplici-
ty185型超纯水系统(MILLIPORE)。 KQ-200VDB型双频数控超
声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。 LG-16W型离心机(北
京医用离心机厂)。甲醇 、乙腈为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯 ,
水为高纯水。吉马酮对照品(中国药品生物制品检定所 , 供含量
测定用 , 批号 111665 -200401)。药材采自各个产地 , 经本校药
用植物教研室王建老师鉴定为姜科植物广西莪术 Curcumakw
angsiensisS.G.LeeC.F.Liang。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 日本岛津公司 Shim-packCLC-ODS柱(6.0
mmID×15 cm, 5 μm);流动相为乙腈 -水(60∶ 40), 流速:1 ml/
min,柱温:35℃, 检测波长 215 nm。进样量 5 μl。理论塔板数以
吉马酮峰计应不低于 6 000。在此色谱条件下 , 吉马酮对照品和
桂莪术样品的 HPLC色谱图分别见图 1～ 2。
2.2　对照品溶液的配制 精密称取吉马酮对照品 11.65 mg, 置
10 ml量瓶中 , 加 60%乙腈溶解并定容至刻度 ,即得吉马酮对照
品储备液。分别精密量取 5 , 25, 50, 250, 500 μl对照品储备液 ,
置 1 ml量瓶中 , 用 60%乙腈定容至刻度 ,即得不同浓度的吉马酮
对照品溶液。
2.3　供试样品溶液的制备 取切碎的广西莪术鲜根茎 5 g, 精密
称定 , 精密加入甲醇 25 ml, 称定重量 ,回流提取 1 h, 放冷至室温 ,
用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 , 0.45 μm滤膜滤过 ,即得。
2.4　线性关系的考察 将 “ 2.2”项下 5个浓度的对照品溶液注
入高效液相色谱仪 , 进样量 5 μl, 按上述色谱条件测定峰面积。
以峰面积 A对样品浓度 C(μg/ml)进行回归 , 得标准曲线:A=
15.93C-20.92, r=0.999 92, 其线性范围为 5.825 ～ 582.5 μg/
ml。
a-吉马酮峰
图 1　吉马酮对照品 HPLC色谱图
a-吉马酮峰
图 2　桂莪术样品(桂平金田)HPLC色谱图
2.5　精密度实验 取对照品溶液 , 连续进样 6次 ,进样 5 μl/次 ,
对峰面积进行考察 ,峰面积的 RSD为 0.12%, 说明仪器精密度很
好。
2.6　稳定性实验 取同一份供试品溶液 , 分别于 0, 2, 4, 6, 8, 12,
24 h不同时间间隔点进样分析 , 对峰面积进行考察 , 峰面积的
RSD为 1.17%, 结果表明样品溶液在 24 h稳定。
2.7　重复性实验 取同一莪术样品 6份 ,切碎 , 混匀 , 精密称定 ,
分别按 “ 2.3”项下供试品溶液的制备方法制备供试品溶液 ,在上
述色谱条件下分别测定其色谱图 , 并计算其吉马酮的含量 , 结果
吉马酮的平均含量为 4.23%, RSD为 1.7%(n=6),表明该法重
复性较好。
2.8　加样回收率实验 精密称取吉马酮对照品 10.9 mg, 置 50 ml
容量瓶中 ,加甲醇溶解并稀释至刻度。精密称取已知吉马酮含量
的切碎的广西莪术鲜根茎 6份各 2.5 g,各分别精密加入甲醇 20
ml及上述对照品溶液 5 ml, 其余操作同 “ 2.3”项中的方法 , 结果
表明吉马酮平均回收率为 101.41%, RSD=2.82%(n=6),说明
本方法准确度较好。数据见表 1。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期
表 1　加样回收率实验
序号 取样量/g
样品原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
加样回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
1 2.575 1 1.09 1.09 2.20 101.67
2 2.425 2 1.03 1.09 2.17 104.74
3 2.741 8 1.16 1.09 2.23 97.93 101.41 2.82
4 2.605 8 1.10 1.09 2.20 100.47
5 2.450 3 1.04 1.09 2.18 104.69
6 2.715 0 1.15 1.09 2.23 98.98
2.9　样品测定 取不同产地的莪术鲜根茎样品 , 按 “ 2.3”项下方
法制备各供试品溶液。取供试液 5 μl, 注入高效液相色谱仪 ,按
所设定的 HPLC条件进行测定 , 按标准曲线法计算各样品中吉马
酮的含量 , 每个产地取 3份样品求平均值。结果见表 2。
表 2　不同产地吉马酮含量测定结果比较 %
编号 产地 吉马酮平均含量
1 福绵 0.060
2 正成 0.024
3 富藏 0.022
4 桂平 0.024
5 贵南 0.022
6 港江 0.068
7 三隆 0.011
8 广江 0.033
9 陆屋 0.043
10 青塘 0.021
11 邕宁 0.024
12 成均 0.041
13 兴业 0.061
14 金田 0.053
15 黄屋屯 0.018
n=3
3　讨论
广西自古以来就是桂莪术的道地产地 ,自 20世纪 60年代野
生变家种以来 , 栽培历史较久 , 栽培经验丰富。在国家大力推广
“三农”政策的今天 , 发展当地优势产业 ,开辟大量的桂莪术种植
基地 , 成了农民发家致富的一条捷径。钦州市桂莪术种植面积约
2 300 ha,占全广西莪术种植面积的 50%以上 , 其中主要分布在
钦北区 、灵山陆屋和青塘镇。灵山陆屋镇已自发形成莪术集散
地 , 每年收获季节有大量全国各地客商前来联系业务。有 3 325
户种植农户 ,种植面积达 483.5 ha。在玉林 、兴业 、南宁 、贵港也
有广泛种植。
本实验考察了不同提取溶剂及不同提取方法 、提取时间 、溶
剂量等影响因素对提取率的影响 ,确定了本实验所采用的 5倍量
甲醇为溶剂 ,回流提取 30 min的最佳提取方法。
从实验数据上看 ,不同产地的桂莪术中吉马酮的含量有明显
差异。其中福绵 、港江 、兴业三个产地吉马酮含量最高 , 金田 、陆
屋和成均吉马酮含量较高 , 三隆含量最低。由此得知 , 玉林市内
种植的桂莪术吉马酮含量普遍高 , 建议应当大力推广种植 , 增加
种植面积。钦州市种植面积最大 ,但吉马酮含量较玉林市低。
本实验建立了 RP-HPLC法直接测定桂莪术中吉马酮含量
的方法 , 通过方法学考察表明 , 该定量检测方法结果可靠 ,为桂莪
术中吉马酮的分析研究提供了可信的检测手段。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:人民卫生出版社 ,
2005:194.
[ 2 ] 　王　炎 ,王慕邹.莪术的质量研究 [ J] .药学学报 , 2001, 36(11):
849.
收稿日期:2008-04-08;修订日期:2008-12-10
基金项目:江苏省中医药局中医药科研项目(No.H05015)
作者简介:姚　楠(1982-),女(汉族),江苏南京人 ,现任江苏省中医药研
究院助理研究员 ,硕士学位 ,主要从事中药药理研究工作.
日本医蛭不同萃取部位体外抗凝活性的实验研究
姚　楠1 , 余顺慧 2 , 相　宇 3 , 李友宾1
(1.江苏省中医药研究院 ,江苏 南京　210028;　2.重庆三峡学院 ,重庆　404000;
3.中国药科大学 ,江苏 南京　210038)
摘要:目的 研究日本医蛭不同萃取部位的抗凝活性 , 为日本医蛭的新药开发提供依据。方法 SD大鼠腹主脉取血 ,应用
血凝仪体外测定凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)和活化的部分凝血活酶时间(APTT)。结果 日本医蛭的总提物能
使大鼠 PT, TT, APTT时间显著延长;石油醚部位能使大鼠 PT, APTT延长。结论 中药日本医蛭的低极性小分子具有抗凝
活性。
关键词:日本医蛭;　抗凝血
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)05-1092-02
　　水蛭作为药用 , 历史悠久。 在中国 , 水蛭始载于《神农本草
经》 ,谓其能 “逐恶血 、瘀血” “破血瘕积聚”。临床广泛用于血栓
形成 、冠心病 、脑水肿的治疗 [ 1] 。世界上蛭类有数百种 , 中国也
有近百种。 《中国药典》 2005年版收载水蛭科动物蚂蝗 Whitma-
niapigraWhitman、日本医蛭 HirudonipponicaWhitman和柳叶蚂
蝗 WhitmaniaacranulataWhitman3种 [ 2] 。现在公认水蛭的活性
成分为水蛭素 , 它是从医蛭的唾液腺中提取出来的一种多肽 ,是
作用很强的凝血酶抑制剂 , 具有抗凝 、抗血栓等药理作用。而中
药传统应用炮制的水蛭入药 , 即水蛭要经过开水烫死晒干或砂
炒 , 水蛭素完全被破坏 [ 3 , 4] ,然而水蛭的破血 、通经的功效仍然得
以保留 ,这说明水蛭中含有除水蛭素外的其它抗凝血成分。目前
人们对水蛭中蛋白多肽类活性成分研究较多 ,如抗凝血物质水蛭
素以及肝素 、抗血栓素抗炎酶和溶血酶及组胺样物质 [ 5] , 而对小
分子研究报道较少。有人研究了蚂蝗的不同极性小分子部位的
抗凝活性 ,证明中等极性的小分子具有较强的抗凝活性 [ 6] 。 本
文报道日本医蛭不同萃取部位体外的抗凝活性 ,以期寻找其他有
效的抗凝血小分子成分。
1　材料与仪器
1.1　动物 SpragueDawley大鼠 ,雄性 , 体重 200 ～ 250 g, 购于中
国科学院上海实验动物中心 , 合格证号 SCXK(沪)2002-0010。
饲养环境为清洁级 ,合格证号 SYXK(苏)2002-0007。
1.2　药材 日本医蛭购于江苏省宿迁市保安养蛭场 , 为鲜品经
太阳直接晒干而成 , 经李友宾博士鉴定为 HirudonipponiaWhit-
man, 标本保存于江苏省中医药研究院中药化学室 , 标本号 2004
-09-08。
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5