全 文 ：本实验建立了测定三越麻黄颗粒中甘草酸含量的高效液相
色谱方法。经方法学考察 , 该方法符合 《中国药典》中有关质量
标准建立的要求 [ 5] , 具有快速灵敏 、准确可靠 、简便易行 、重复性
好等优点 , 可用于控制三越麻黄颗粒的质量。
参考文献:
[ 1] 　杨江丰 ,陈　理 ,孙靖霞.RP-HPLC测定强肝胶囊中芍药苷及甘草
酸的含量 [ J].中成药 , 2001, 23(2):90.
[ 2] 　杜海燕 , 何跃华 ,徐晓阳 , 等.HpLC法测定牛黄清心丸中甘草酸含
量 [ J] .中草药 , 1999, 30(7):507.
[ 3 ] 　程晓霞 ,向　瑛.甘草及其制剂中甘草酸的定量方法研究概况 [ J] .
时珍国医国药 , 2000, 11(4):380.
[ 4 ] 　谷会岩 ,郭兴顺 ,杨逢建.国内甘草酸测定方法研究进展 [ J] .东北
林业大学学报 , 2002, 30(4):79.
[ 5 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录 Ⅵ D,附录 33.
收稿日期:2008-06-19;　修订日期:2008-12-10
基金项目:黑龙江省自然科学基金资助项目(No.D200669)
作者简介:张洪娟(1962-),女(汉族),黑龙江哈尔滨人 ,现任黑龙江省中
医研究院中药所研究员 , 硕士生导师 ,学士学位 ,主要从事中药新药和新
剂型开发研究工作.
不同产地独角莲药材中肉桂酸的含量测定
张洪娟1 ,张妍妍 1 ,隋　军 2 ,徐　鹏1
(1.黑龙江省中医研究院 ,黑龙江 哈尔滨　150036;　2.黑龙江大学 ,黑龙江 哈尔滨　150080)
摘要:目的 建立独角莲中肉桂酸的高效液相含量测定方法;比较不同产地独角莲中肉桂酸的含量。方法 采用高效液相
色谱法。色谱柱为迪马 -DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm, 5 μm);以甲醇∶0.1%磷酸 =49∶51为流动相;流速为 1ml/min;检测波长为 280nm。结果 肉桂酸在 0.2 ～ 1 μg范围内线性关系良好 , r=0.999 5, 平均回收率为 99.58%, RSD为
0.95%。结论 不同产地独角莲肉桂酸的含量范围为 5.247 0 ～ 43.677 6 μg/g,差异较大。该方法测定准确 ,重复性好 , 可
作为独角莲药材的质量控制方法。
关键词:独角莲;　肉桂酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)05-1143-02
　　独角莲为天南星科梨头尖属植物独角莲 Typhoniumgigante-
umEngl.的块茎 ,具有祛风痰 、定惊搐 、解毒散结止痛的功能。临
床应用于治疗脑血管病 、面神经麻木 、颈淋巴结核 、慢性支气管炎
等 [ 1] , 此外还用于美容祛斑方面。 近年来有报道独角莲对瘤细
胞具有细胞毒作用。本文以肉桂酸为考察指标 ,采用高效液相色
谱法测定独角莲中肉桂酸含量 ,可有效控制独角莲药材质量。
1　仪器和试药
1.1　仪器 岛津 LC-10AS泵 ,岛津 SPD-10A检测器 , 岛津 UV
-160A紫外分光光度仪 , 昆山 KQ-250B型超声仪 , Sartorius
BP211D型电子天平。
1.2　 药品 肉桂酸对照品 , 购于中国药品生物制品检定所;独角
莲药材(均为鲜品 ,切片后自然干燥至水分符合规定),购于各产
区 , 经黑龙江省药品检验所初东君主任药师鉴定符合 《中国药
典》 2005版规定标准 [ 2] 。
1.3　试剂 甲醇为色谱纯(迪马公司);磷酸为色谱纯 ,天津市科
密欧化学试剂开发中心;水为超纯水 , 其余试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件 [ 3] 色谱柱为迪马 -DiamonsilC18(250 mm×4.6mm, 5 μm);流动相为甲醇∶0.1%磷酸 =49∶51;流速 1ml/min;
检测波长 280 nm;柱温为室温。按上述色谱条件 , 理论塔板数按
肉桂酸峰计算应不低于 2 500。
2.2　对照品溶液的配制 精密称取肉桂酸对照品适量 , 加甲醇
溶解并稀释制成浓度为 0.03mg/ml的肉桂酸对照品溶液。
2.3　供试品溶液的配制与测定 取独角莲药材粉末(过 3号筛)
2 g,精密称定 , 加 5%盐酸溶液 1 ml搅拌均匀 , 置具塞锥形瓶中 ,
精密加入三氯甲烷 -甲醇(2∶1)溶液 20ml, 室温下浸泡 30 min,
滤过 , 精密吸取续滤液 10 ml, 挥干 , 残渣用甲醇溶解并定容至 5
ml, 即得供试品溶液。
2.4 　检测波长的测定 取肉桂酸对照品溶液 , 在 200 ～ 400 nm
波长进行光谱扫描 , 结果表明 , 肉桂酸在 280 nm处有最大吸收。
确立肉桂酸检测波长为 280 nm。
2.5 　供试品提取条件的确定
2.5.1　溶剂的选择 根据肉桂酸溶解度拟选择甲醇 、50%甲醇 、
三氯甲烷 、乙醇 、丙酮 、乙醚以及三氯甲烷 -甲醇不同比例混合溶
剂为提取溶剂。实验方法:取独角莲药材粉末(过 3号筛)2 g, 9
份 , 精密称定 ,置于具塞锥形瓶中 ,加 5%盐酸溶液 1 ml, 搅拌均
匀。分别加入不同溶剂 20 ml, 于室温下浸泡 30 min,滤过 ,精密
吸取续滤液 10 ml, 挥干 ,残渣用甲醇溶解并定容至 5 ml, 作为供
试品溶液。分别注入色谱仪 , 记录峰面积 , 计算含量(见表 1)。
结果显示 ,以三氯甲烷 -甲醇(2∶1)为提取溶剂时 , 提取率最
高 , 且无杂质干扰 , 故选择氯仿 -甲醇(2∶1)作为提取溶剂。
图 1　肉桂酸对照品 HPLC图
图 2　独角莲药材 HPLC图
2.5.2　提取方法筛选 取独角莲药材粉末(过 3号筛)2 g, 3份 ,
精密称定 , 置于具塞锥形瓶中 , 加 5%盐酸溶液 1 ml, 搅拌均匀 ,
加入氯仿 -甲醇(2∶1)20 ml。分别采取超声处理 30 min、室温
浸泡 30min和加热回流 30 min3种方法 ,滤过 ,精密吸取续滤液
10ml, 挥干 ,残渣用甲醇溶解并定容至 5 ml,作为供试品溶液 。分
别注入色谱仪 , 记录峰面积(见表 2)。结果显示 , 室温浸泡 30
min,得肉桂酸含量最高 , 重复性较好 ,且方法简单易操作。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期
表 1　溶剂的选择结果
编号 取样量 m/g 提取溶剂 积分值 /μV· s含量 C/μg· g-1
1 2.061 0 甲醇 41 901 0.409 1
2 2.003 0 50%甲醇 308 939 2.831 2
3 1.990 8 三氯甲烷 未检出 -
4 1.987 7 三氯甲烷-甲醇(1∶1) 93 210 0.9101
5 2.000 0 三氯甲烷-甲醇(1∶2) 未检出 -
6 2.012 6 三氯甲烷-甲醇(2∶1) 596 500 5.404 0
7 1.897 2 乙醚 122 737 1.301 8
8 2.079 0 丙酮 98 779 0.956 1
9 1.881 9 乙醇 20 720 0.221 6
表 2　提取方法筛选结果
编号 提取方法 取样量 m/g 含量 C/μg· g-1
1 室温浸泡 30min 2.003 7 5.732 1
2 超声处理 30min 2.002 4 4.023 5
3 加热回流 30min 2.067 8 3.264 2
2.5.3　提取时间的考察 取独角莲药材粉末(过 3号筛)2 g, 5
份 , 精密称定 ,置于具塞锥形瓶中 , 加 5%盐酸溶液 1 ml, 搅拌均
匀 , 精密加入三氯甲烷 -甲醇(2∶1)溶剂 20 ml, 室温下分别浸
泡 10, 20, 30, 45, 60 min, 滤过 ,精密吸取续滤液 10 ml,挥干 ,残渣
用甲醇溶解并定容至 5 ml, 作为供试品溶液。分别注入色谱仪 ,
记录峰面积 , 计算含量(见表 3)。结果显示 , 提取时间为 30, 45,
60 min时 , 肉桂酸含量最高 ,且无明显差异 , 故选择提取时间为
30 min最佳。
表 3　提取时间的考察结果
编号 取样量 m/g 提取时间 t/min 含量 C/μg· g-1
1 1.999 3 10 4.261 4
2 2.003 6 20 4.892 3
3 2.001 7 30 5.423 5
4 1.997 4 45 5.364 6
5 2.014 6 60 5.285 1
2.6 　线性关系考察 精密量取肉桂酸对照品适量 , 加甲醇制成
浓度为 1mg/ml的对照品溶液 ,摇匀 , 再精密吸取 1ml置于 50ml
容量瓶中 , 加甲醇稀释至刻度 , 摇匀。 分别精密吸取 1, 2, 3, 4, 5
ml, 加甲醇稀释至 10 ml,再分别注入高效液相色谱仪各 10μl,按
上述色谱条件测定其峰面积积分值 , 以峰面积为纵坐标 , 进样量
为横坐标绘制标准曲线 , 回归方程为 Y=4 860.9X+ 31 936, r=
0.999 5,线性范围 0.2 ～ 1μg,峰面积 RSD=1.20%。
2.7　精密度实验 精密吸取同一份供试品溶液 10 μl, 重复进样
6次 ,测定供试品中肉桂酸峰面积积分值。结果见表 4。
表 4　精密度实验结果
编号 进样量 V/μl 积分值 /μV· s 平均值 /μV· s RSD(%)
1 10 564 282
2 10 567 567
3 10 564 254 566 907 0.49
4 10 571 431
5 10 568 373
6 10 565 536
2.8 　重复性实验 精密称取同一批独角莲药材粉末(过 3号筛)
2 g, 6份 ,分别制备供试品溶液 。测定肉桂酸含量 ,结果见表 5。
表 5　重复性实验结果
编号 取样量 m/g 积分值 /μV· s 含量 C/μg· g-1 RSD(%)
1 1.9901 541 899 4.998
2 2.056 6 561 337 5.010
3 2.036 0 557 767 5.029 0.95
4 2.011 9 555 656 5.069
5 2.003 0 548 391 5.026
6 2.014 7 545 728 4.926
2.9　回收率实验 取已知肉桂酸含量的独角莲药材粉末(过 3
号筛)1 g, 6份 , 精密称定 ,分别加入 6 μg/ml肉桂酸对照品 1ml,
按照 “ 2.3”项供试品溶液的制备方法操作。分别精密吸取对照
品溶液和供试品溶液各 10 μl注入色谱仪。测得其峰面积 ,并计
算回收率(见表 6)。结果表明 , 平均回收率为 99.58%, RSD为
0.95%。
表 6　回收率实验结果
编号 供试品量 m/g
制剂中肉桂
酸量 m/μg
加入肉桂
酸 V/ml
测出总肉
桂酸 m/μg
回收率
(%)
x
(%)
RSD
(%)
1 1.001 1 5.526 1 1 11.407 9 98.03
2 1.000 3 5.521 7 1 11.563 1 100.69
3 0.999 3 5.516 1 1 11.475 9 99.33 99.58 0.95
4 1.002 1 5.531 6 1 11.558 6 100.45
5 1.011 8 5.585 1 1 11.549 7 99.41
6 1.007 6 5.562 0 1 11.535 6 99.56
2.10 　样品的含量测定(7个不同产地)取各产地独角莲药材
粉末(过 3号筛)2g,精密称定 , 置于具塞瓶中 ,加 5%盐酸溶液 1
ml搅拌均匀 ,加三氯甲烷 -甲醇(2∶1)溶剂 20 ml,室温下浸泡
30 min, 滤过 ,精密吸取续滤液 10 ml,挥干 , 残渣用甲醇溶解并定
容至 5 ml,作为供试品溶液。测定 , 计算肉桂酸含量。 结果见表
7。
表 7　样品含量测定结果
编号 产 地 取样量m/g
积分值
/μV· s
肉桂酸含量
C/μg· g-1
1 河南惠供 2.087 7 11 939 5.247 0
2 安 徽 2.088 1 23 083 11.410 0
3 亚 沟 2.190 0 - -
4 吉林公主岭 2.375 3 16 110 5.404 6
5 四 川 2.213 7 121 336 43.677 6
6 广西 2.189 6 - -
7 河南新乡 2.164 5 30 325 11.164 4
　　“ -”:未检出
3　讨论
在选用三氯甲烷 -甲醇(2∶1)为提取溶剂时 , 未经过酸化
处理时 , 峰面积较小。经过酸化处理后 , 提取液直接进样 ,虽然峰
面积增大 ,但峰形呈 “馒头峰”, 保留时间提前 , 且有杂质峰。 而
以甲醇为提取溶剂时 ,虽然峰面积相对较小 , 但峰形较好 ,分离度
高 , 且杂质峰少。所以在选择方法时 , 考虑应先酸化处理药粉 , 用
三氯甲烷 -甲醇(2∶1)溶剂提取 , 将提取液挥干 , 用甲醇溶解后
进行测定。根据肉桂酸受热时脱羧分解的性质 ,研究中考察了浸
泡 、超声 、加热回流 3种处理方法。结果显示 , 浸泡处理得到的供
试品溶液中肉桂酸含量较高 , 经过如此处理发现 , 不仅提取率提
高 , 而且分离度很好 , 杂质峰较少。
实验中选择全国具有地域代表性的 7个产地独角莲药材 , 测
得肉桂酸的含量范围在 5.247 0 ～ 43.677 6 μg/g之间。由此可
知 , 肉桂酸在不同产地独角莲中含量差异极大 , 甚至个别产地药
材中未检出 , 可能由于地域 、采收季节 、种植 、加工过程等原因 , 导
致了肉桂酸含量差异。本实验通过对独角莲中肉桂酸含量测定
方法的研究 ,建立了测定准确 、重复性好的方法。本法可作为独
角莲及其制剂质量评价和质量控制方法。
参考文献:
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5