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2012,41(2):27-31.
Subtropical Plant Science


云南龙竹的快速繁殖和离体保存研究
李春芳1,2，程治英2，杨俊波2，熊 智1
（1.西南林业大学 林学院，云南 昆明 650224；2.中国科学院 昆明植物研究所，西南野生生物种质资源库，云南 昆明
650204）

摘 要：本研究以干冷保存（-20 ℃，相对湿度 15%）150 d 的云南龙竹（Dendrocalamus yunnanicus）颖果为
实验材料，通过种子萌发建成丛芽无菌无性系进行快繁和离体保存。研究表明，丛芽增殖的最佳培养基为 MS +
6-BA 2 mg/L + NAA 0.2 mg/L，蔗糖浓度以 3%为佳；生根培养的最佳培养基为 MS + IBA 1 mg/L + NAA 1 mg/L，
以单芽诱导生根为好；离体保存丛芽的最适培养基为 MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L；当培养温度由室温
(25±3)℃降低至(20±3)℃和 12 ℃时，其继代周期可由原来的 2 个月分别延长至 4 个月和 8 个月。在组织培养
过程中发现白化苗或叶色变异现象。
关键词：云南龙竹；丛芽；快速繁殖；离体保存
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2012.02.007
中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2012)02-0027-05

Rapid Propagation and In vitro Conservation of Dendrocalamus yunnanicus
LI Chun-fang1,2, CHEN Zhi-ying2, YANG Jun-bo2, XIONG Zhi1
(1.College of Forestry, Southwest Forestry University, Kunming 650224, Yunnan China; 2.Kunming Institute of Botany, Chinese
Academy of Sciences, The Germplasm Bank of Wild Species, Kunming 650204, Yunnan China)

Abstract: The caryopsis of Dendrocalamus yunnanicus, which had been stored for 150 days at
-20 and RH℃ 15%, were used as the experimental materials, and aseptic clones were induced from
them then used for propagation and in vitro conservation. The results showed that the best media for
tufted-bud proliferation were MS + 6-BA 2 mg/L + NAA 0.2 mg/L, both sucrose and glucose
contributed to the proliferation culture, and the best concentration was 3%. The most effective
medium for rooting was MS + IBA 1 mg/L + NAA 1 mg/L, a single bud rooting was better; the best
medium for buds in vitro conservation was MS + 6-BA 0.5 mg/L + NAA 0.2 mg/L. The subculture
cycle of shoots was 60 days at 25±3 , ℃ which could change to 160 days and 240 days at low
temperature preservation 20±3 ℃ and 12 , ℃ respectively. Albino seedlings or variant of leaf colors
were found during tissue culture.
Key words：Dendrocalamus yunnanicus; tufted-buds; rapid propagation; in vitro conservation

竹类是重要的木材资源，具有重要的生态和经济价值，开发前景广阔。联合国景观规划署世界环
境中心报告，全球一半的竹类可能濒临灭绝[1]。因竹子一生仅开花一次，故普遍采用传统的竹鞭和竹
秆无性繁殖方式繁衍，导致遗传多样性低。由于竹子开花难以预测，结果种子量少，种子败育多、萌
发率低，且寿命短、不易保存等原因。因此，用离体保存构建竹类无菌无性系的试验平台将成为保护
竹类资源的重要方法。
收稿日期：2011-12-28
基金项目：中国西南野生生物种质资源库项目（0802261411）
作者简介：李春芳(1982-), 女，江西南康人，硕士研究生，从事野生植物种质资源离体保存研究。E-mail: lichunfang@mail.kib.ac.cn
注：杨俊波(E-mail: jbyang@mail.kib.ac.cn)、熊智(E-mail: zhix@swfu.edu.cn)为通讯作者。
第 41 卷 ﹒28﹒
云南龙竹（Dendrocalamus yunnanicus）是云南特有的竹种，其地下茎类型为合轴丛生型，仅分布
在勐腊、保山、金平和河口等地的低山沟谷密林中，可供建筑、围篱和采笋用等[2]。云南龙竹成片开
花之后的自然死亡，其繁衍已受到严重威胁；加上人为因素对其生境的破坏，加剧了云南龙竹的濒危
程度。因此，保护云南龙竹种质资源和多样性已迫在眉睫。
国内学者对云南龙竹的研究多见于对其果实形态[3]和解剖特征[4]以及育苗技术[5]等方面，对巨龙
竹、勃氏甜龙竹、龙竹、马来西亚甜龙竹、麻竹等竹种的快繁技术和离体培养亦有诸多的报道[6-10]，
但是对云南龙竹的快繁和离体保存技术研究至今未见报道。因此，本文以云南龙竹种子为试验材料，
探讨其试管快繁条件和离体保存技术。试管苗再生体系的建立，对云南龙竹的保护和可持续利用具有
重要的科学价值和应用前景。
1 材料与方法
1.1 材料
2009 年采自西双版纳的云南龙竹颖果，保存在－20 ℃下，150 d 后取出作为试验材料。
1.2 方法
1.2.1 培养基配方 种子萌发培养基：① 1/2MS + 6-BA 0.5 mg/L（单位下同）。芽增殖培养基：② MS +
6-BA 2 + NAA 0.2；③ MS + 6-BA 3 + NAA 0.1；④ MS + 6-BA 5 + NAA 0.1；⑤ MS + TDZ 0.2；⑥ MS
+ TDZ 1。生根培养基：⑦ MS + NAA 1；⑧ MS + NAA 2；⑨ MS + IBA 1；⑩ MS + IBA 1 + NAA 1。
离体保存培养基：○11 MS + 6-BA 0.5 + NAA 0.2。以上培养基均加琼脂粉 5.5 g/L，糖浓度除生根培养基
为 20 g/L 外，其余均为 30 g/L，pH 5.8。
研究糖种类对丛芽增殖影响的培养基：基本培养基 MS + 6-BA 2 + NAA 0.2 中，加入糖种类分别为
蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、山梨醇和甘露醇。有机添加物诱导丛生芽的培养基：基本培养基 MS +
6-BA 2 + NAA 0.2，分别加入椰子汁（CM）20%、腺嘌呤（Ad）20 mg/L、蛋白胨 1 g/L、水解酪蛋白
（CH）1 g/L 和水解乳蛋白（LH）1 g/L。
1.2.2 材料处理 将颖果去掉果皮，取种子浸水约 20 h，再去掉种皮，用 75%酒精表面消毒 1 min，无
菌水冲洗，在超净工作台上用 0.1%升汞（HgCl2）消毒 10 min，无菌水洗 3 次（5 min/次），接种于灭
菌的培养基上。
1.2.3 培养条件及试验方法 培养温度（25±3）℃，光照强度 20 µmol/m2·s，光照时间 12 h/d。每组试
验材料 6 瓶（5 丛芽/瓶），芽约 5 个/丛。每组试验设 3 次重复。
生根培养：用丛芽和单芽在生根培养基进行诱导生根。
离体保存：在(20±3)℃和 12 ℃下，以 MS + 6-BA 0.5 + NAA 0.2 为离体保存培养基进行离体保存。
数据处理和分析：用 SPSS 18.0 进行 t 检验和方差分析。
2 结果与分析
2.1 种子萌发和丛生芽培养
种子去壳消毒后接种于培养基①上无污染，但种子萌发率极低，种子总数 52 粒培养 30 d 后仅 2
粒萌发，1 粒种子萌发的芽中途死亡。另 1 株萌芽长高至 2.5 cm 时，转接到培养基②上进行增殖培养，
继代周期为 30 d，幼年期芽增殖和生长均缓慢，约经过半年时间培养才形成大量丛生芽，用丛生芽做
进一步试验的材料。
2.2 培养基对丛芽增殖的影响
将丛芽按试验设计要求分别接种在培养基②、③、④、⑤和⑥上，经过 30 d 培养，培养基②上丛
芽增殖速度最快，见图 1。
培养基②上培养的丛芽增殖速度快，生长旺盛，其余 4 个处理的丛芽茎叶都出现不同程度的褐化，
培养基④的褐化高于培养基③，培养基⑥褐化高于培养基⑤，并且 TDZ 达到 1 mg/L 时丛芽茎叶全部
第 2 期 李春芳,等：云南龙竹快速繁殖与离体保存研究 ﹒29﹒
褐化。说明生长调节剂（6-BA 和 TDZ）浓度越高，褐化现象越严重。
2.3 糖种类及其含量对丛芽增殖的影响
在基本培养基 MS + 6-BA 2 + NAA 0.2 中分别加入浓度为 3%的蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、山
梨醇和甘露醇。结果表明，蔗糖和葡萄糖均适合云南龙竹的增殖培养（图 2），而且丛生芽在含葡萄糖
培养基上 2 个月再继代，培养物仍未产生褐化现象。这说明基本培养基加入葡萄糖有利于离体保存。
确定蔗糖和葡萄糖适用于云南龙竹的增殖培养后，进行了蔗糖浓度对丛芽增殖和生长的影响试验。
30 d 后观察显示，糖浓度为 7.5 g/L 时，培养物几乎无生长或增殖极慢，且丛芽褐化严重，甚至死亡；
糖浓度 15 g/L 的培养物极易生根，每丛培养物生根十几条，苗高增长快，最高达 8 cm，几乎无褐化现
象；30 g/L 蔗糖浓度较适合丛芽增殖和生长。

0
1
2
3
4
5
6
② ③ ④ ⑤ ⑥
丛
芽
增
殖
倍
数
0
1
2
3
4
5
6
蔗糖 葡萄糖 麦芽糖 乳糖 山梨糖 甘露醇
丛
芽
增
殖
倍
数

图 1 不同培养基对丛芽增殖的影响 图 2 糖类对丛芽增殖的影响
2.4 有机添加物对丛芽增殖的影响
在培养基 MS + 6-BA 2 + NAA 0.2 中分别加
入椰子汁（CM）200 ml/L、腺嘌呤（Ad）20 mg/L、
蛋白胨 1 g/L、水解酪蛋白（CH）1 g/L 和水解乳
蛋白（LH）1 g/L，培养 30 d 后观察丛生芽增殖
情况，结果见图 3。
图 3 有机添加物对丛芽增殖的影响
0
1
2
3
4
5
6
CM Ad 蛋白胨 CH LH
丛
芽
增
殖
倍
数
单因素方差分析表明，除椰子汁（CM）和蛋
白胨外，其余有机物对丛芽增殖无显著影响。
2.5 生根培养
培养物采用丛芽和单芽两种方式诱导生根
（图版 I: B-1,B-2），培养 30 d 统计生根效果。试
验结果见表 1。
表 1 植物生长素对培养物生根的影响
处理(mg/L) 接种方式 接种总数 生根数(条) 生根率(%)
丛芽 30 丛 2 6.7 MS + IBA 1 + N AA 1 单芽 60 芽条 54 90
丛芽 30 丛 0 0
MS + NAA 2 单芽 60 芽条 56 93.3
丛芽 30 丛 0 0
MS + NAA 1 单芽 60 芽条 55 91.7
丛芽 30 丛 2 6.7
MS + IBA 1 单芽 60 芽条 55 91.7

t 检验结果表明，在所有的处理中，丛生芽和单芽诱导生根有极显著的差异，丛生芽不利于诱导生
根，而单芽条对诱导生根有利。单因素方差分析结果表明，不同生长调节剂对单芽条诱导生根率无显
第 41 卷 ﹒30﹒
著差异。NAA 诱导根数较多，根细长；IBA 诱导根数较少，但根粗壮较短。生长调节剂诱导单芽条生
根的最佳配方是 MS + IBA 1 + NAA 1。
2.6 试管苗移栽
将瓶内生根的健壮试管苗放入大棚内，打开瓶盖，炼苗 3～5 d，取出试管苗移栽时，不能伤及苗
的叶尖或根尖，流水洗净根上粘附的琼脂，再将其移入消毒的基质（腐叶土∶生黄土= 2∶1）中，浇
足定根水，注意保温（22～28 ℃），用塑料布覆盖，使其栽苗环境湿度为 90%左右，移苗后 1 周内注
意通风透气，并逐渐去掉覆盖。30 d 后成活率达 95%以上（图版 I: E）。
2.7 离体保存
常温下继代保存：采用离体保存培养基 MS + 6-BA 0.5 + NAA 0.2 保存丛生芽，继代周期可延长至
2 个月。
降低培养温度可延缓保存培养物的生长。丛芽接种在培养基○11 上，分别在(20±3) ℃和 12 ℃ 条件
下培养，以每瓶培养物褐化超过 20%为标准，确定每种温度下培养物的继代周期分别为 4 个月和 8 个
月。若要从保存培养物状态恢复到快繁状况，可将培养物接种在培养基②上，经过 1 个半月培养，便
可形成丛芽。由此可见，降低培养温度有利延长继代周期。值得指出的是，温度在 12 ℃以下不利培养
物的保存，表现为褐化严重或死亡。
生长抑制剂对保存培养物也会产生影响。脱落酸（ABA）、三十烷醇（TA）0.1～2 mg/L、青鲜素
（MH）和比九（B9）50 mg/L 保存培养物均会产生毒害作用，培养 30 d 均无生长和增殖，且褐化死亡，
仅矮壮素（CCC）10 mg/L，在室温下保存培养物继代周期可达 3 个月。
3 讨论
本研究通过对云南龙竹储藏种子萌发率的研究，发现种子极难萌发且萌发率低，仅为 3.85%，同
时芽增殖和生长均缓慢，因此，要解决大量快速繁殖，应采用植物离体快繁技术。一般情况下，竹类
植物组培较其他植物困难[8]，云南龙竹地下茎类型为合轴丛生型，丛生竹在组织培养中丛生芽增殖方
式有两种，即：丛芽基部直接再生丛芽（图版I: A-1）和丛芽基部产生致密光滑乳白色愈伤组织团，然
后愈伤组织团再分化为丛芽团（芽数多达数十个）（图版I: A-2）。丛芽增殖以MS + 6-BA 2 + NAA 0.2
为最佳培养基，加入葡萄糖可用于离体保存。此外，30 g/L蔗糖浓度较适合丛芽增殖和生长，而有机添
加物对丛芽增殖无显著影响。要获得健壮正常的植株并诱导生根，建议以单芽形式诱导生根为佳，培
养基选用MS + IBA 1 + NAA 1 为佳（图版I: B-1, B-2）。当培养基的生长调节剂改为 6-BA 5～6 mg/L或
TDZ 1～2 mg/L时，会出现 2%～5%的苗和叶色变异，表现为白化苗（图版I: C-1）；竹基部茎为紫红色
（图版I: C-2）、叶片或苗上部为白色的白化苗；或丛芽团的叶片呈现不规则的白绿相间花纹（图版I: D-1,
D-2）。白化苗的发生既有遗传因素，也可能是离体培养的诱导因素。生长调节剂是否造成云南龙竹遗
传变异，是否与水稻、小麦等花药培养[11-12]中产生白化的发生原因类似，仍值得进一步探讨。此外，
云南龙竹保存培养物用生长抑制剂方法不适合，而降低生长抑制剂使用浓度是否有利于离体保存尚待
深入研究。
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图版Ⅰ 云南龙竹的快速繁殖和离体保存
A-1.丛芽基部直接再生丛芽；A-2.丛芽基部产生致密光滑乳白色愈伤组织团，然后愈伤组织团再分化为丛芽团，芽数多达数十个（箭头 C）；
B-1.丛芽生根苗；B-2.单芽生根苗；C-1.白化苗；C-2.紫茎白化苗；D-1,D-2.丛芽叶片叶色变异(不规则白、绿相间)；E.移栽苗