全 文 ：⒇文章编号: 1008 3464 ( 2002) 02 0108 03
箭根薯的试管繁殖
何惠英 , 兰芹英 , 张艳军
(中国科学院 西双版纳热带植物园 , 云南 勐腊 666303)
摘要: 本实验用箭根薯成熟种子为材料 , 培育出无菌幼苗 , 再用幼叶、 叶柄进行试管繁殖。经实验得出
各阶段适宜的培养基分别为: ( 1) 种子萌发: MS+ 6 BA 1 mg /L (单位下同 ) + N AA 0. 1; ( 2)诱导愈伤
组织: M S+ 6 BA 1+ 2, 4 D 1. 5+ KT0. 2; ( 3)丛芽诱导: MS+ 6 BA 0. 5+ N AA 0. 5; ( 4) 生根培养:
1 /2 M S+ NAA 0. 5。
关键词: 箭根薯 ; 萌发 ; 愈伤组织 ; 丛芽
中图分类号: Q945　　　文献标识码: A
In vitro propagation of Tacca chantrieri
HE Hui ying , LAN Qing ying , ZHANG Yan jun
(Xishuangbanna Tropical Bo tanical Garden, the Chinese Academy of Sciences,
M engla 666303, China)
Abstract: Tacca chantrieri bear many seeds, but only few o f the seeds ( about 12% ) can germi-
nate, so tissue culture w ould be a good means fo r multiplying plants o f T . chantrieri . In this experi-
ment , young leaves and leaf stalks, obtained from ma ture T . chantrieri seeds, w ere used as explants
fo r in vit ro propaga tion. The appropriate media fo r respectiv e culture stages w ere as follow s. The
medium of seed germinarion w as M S+ 6-BA 1 mg /L+ N AA 0. 1 mg /L, that of cal lus inducing w as
M S + 6 BA 1 mg / L+ 2 , 4 D 1. 5 mg / L+ K T 0. 2 mg / L , that o f shoot inducing w as M S+
6 BA 0. 5 mg /L+ N AA 0. 5 mg /L, tha t of roo ting w as 1 /2 M S+ N AA 0. 5 mg /L.
Key words: Tacca chantrieri; germination; callus; buds
箭根薯 ( Tacca chantrieri Andre)又叫老虎须 , 为箭根薯科 ( Taccaceae)多年生常绿草本植物 , 其
叶大 (长可达 60 cm , 宽 20 cm ) , 深绿色 , 花暗紫色 , 花果期 4～ 11月 , 生长于海拔 170～ 1 300 m的
热带雨林林下、 水边、 山谷阴湿处。箭根薯的根状茎味苦、 性凉 , 药用有清热解毒、 消炎止痛的功效 ,
治刀伤、 胃及十二指肠溃疡、 肝炎、 高血压、 胃痛、 烧烫伤、 疮疡。箭根薯花形独特 , 小苞片线形且
长长的下垂 , 尤为优美。箭根薯集观叶、 观花、 药用于一身 , 其野生资源越来越少 , 现已被列为国家
三级保护植物。因此 , 用组织培养方法对其进行快速繁殖和离体种质保存是必要的。
1　材料与方法
材料取自西双版纳热带植物园阴生植物区。将成熟的箭根薯果实洗净 ,用 75%的酒精泡 2～ 3 min,
第 21卷　第 2期
Vol. 21, No . 2
广 西 农 业 生 物 科 学
Journal o f Guangx i Ag ric. and Bio l. Science
2002年 6月　
June, 2002　
⒇ 收稿日期: 2001 08 20
基金项目: 中国科学院生物分类区系学科发展特别支持项目 ( 980302)
作者简介: 何惠英 ( 1970 ) , 女 , 云南宣威人 , 中国科学院西双版纳热带植物园研究实习员。
然后在超净工作台上用 0. 1% Hg Cl2灭菌 5～ 6 min后用无菌水洗 3～ 4遍 , 用吸水纸吸干水后再用解
剖刀开果实 (一个果实有数十粒种子 ) , 取出种子接种于种子萌发培养基 MS+ 6 BA 1 mg /L (单位下
同 ) + N AA 0. 1上。待种子发芽长成 3～ 4 cm ( 2～ 3片叶 ) 的小苗后 , 取叶片、 叶柄为外植体接种于
诱导愈伤组织培养基 MS+ 6 BA 1+ 2, 4 D 1. 5+ KT 0. 2上。愈伤组织转在丛芽诱导培养基
MS+ 6 BA0. 5+ N AA 0. 5上 ,丛芽多次继代即能大量增殖。小苗达 3～ 4 cm便可转入生根培养基
1 /2 M S+ N AA 0. 5上生根。
除生根用 1 /2M S为基本培养基外 ,其它是 M S为基本培养基 ,所有培养基均加 3%蔗糖 , 7%琼脂 ,
pH6. 4。 培养条件: 温度 26～ 28℃ , 光照 10 h /d, 光强 2000 lx。
2　结果与分析
2. 1　愈伤组织诱导
种子接种 1个月左右才萌发 , 萌发率低。萌发后经 2个星期便可长成 1～ 2片叶的小苗。在超净台
上将小苗的叶片剪成 0. 5 cm× 0. 5 cm的小块、 叶柄长 0. 5 cm的小段接种在 4种不同浓度激素的培养
基上诱导愈伤组织。经实验证明 MS+ 6 BA 1+ 2, 4 D 1. 5+ K T 0. 2最好 ,愈伤组织诱导率为 55. 6%
(见表 1)。接种后 50 d左右外植体即产生愈伤组织 , 叶片上分化的愈伤组织为绿色 , 叶柄上分化的为
浅绿色。
表 1　四种不同培养基对愈伤组织的诱导率
Table 1　 Callus induction rate on four media
培养基
Media /mg· L- 1
接种外植体数
No. o f inoculums
产生愈伤组织数
No. o f induced explants
愈伤组织诱导率 /%
Ca llus induced ra te
M S+ 6 BA 1+ 2, 4 D 0. 5+ KT 0. 2 10 3 30. 0
M S+ 6 BA 1+ 2, 4 D 1+ KT 0. 2 9 2 22. 2
M S+ 6 BA 1+ 2, 4 D 1. 5+ KT 0. 2 9 5 55. 6
M S+ 6 BA 1+ 2, 4 D 2+ KT 0. 2 12 3 25. 0
2. 2　丛芽的诱导
挑选大小基本一致、在愈伤组织诱导程度也较一致的愈伤组织块每组 3块 ( 3块愈伤组织都开始分
化丛芽 ) , 每瓶 1块 , 接种于 4种不同 6 BA浓度的培养基上诱导丛芽。实验表明 M S+ 6 BA 0. 5+
N A A 0. 5对丛芽增殖和小苗生长都较好 , 如表 2所示。接种 20 d左右愈伤组织开始分化丛芽 , 绿色愈
伤组织分化出绿色细小的丛芽 , 成苗稍快 ; 浅绿色的愈伤组织分化出白色球状、 较大的芽 , 芽的数量
少 , 成苗慢 , 但苗大而壮。经多次继代可得到大量小苗 , 在继代过程中若培养基中加入香蕉 (捣碎 , 50
g /L)对小苗生长无明显影响 , 但能增加繁殖倍数。此外在继代培养中叶片上能长出没有经明显愈伤组
织阶段的细小丛芽。
表 2　丛芽增殖及芽增长情况
Table 2　 Callus induced and buds grew up on four media
培养基
M edia /mg· L- 1
接入时愈伤
组织数 /块
No. o f placed
callus
接入时芽数 /个
No. o f placed
buds
30 d后芽数 /个
No. o f buds
30 d la ter
诱导芽数 /个
No . o f
inducing
buds
接入时芽长
Placed buds
Leng th
/cm
30 d后芽长
30 d late r
buds Leng th
/cm
MS+ 6 BA 0. 5+ N AA 0. 5 3 17 38 21 0. 55 1. 10
MS+ 6 BA 1+ N AA 0. 5 3 14 22 8 0. 43 0. 70
MS+ 6 BA 2+ N AA 0. 5 3 18 41 23 0. 60 0. 66
MS+ 6 BA 3+ N AA 0. 5 3 14 28 14 0. 46 1. 30
109第 2期 何惠英等: 箭根薯的试管繁殖
2. 3　生根培养
从丛生芽块上切下长约 3 cm的增殖芽转在生根培养基上生根。半个月后开始生根 , 继续培养 1个
月 , 小苗高可达 6～ 7 cm, 具数条白色的根 , 展开叶片 3～ 4片。在激素相同的情况下 , 用 1 /2M S较用
MS好。实验得出用 1 /2M S+ N AA0. 5最好。
2. 4　移栽
把达到移栽标准 (苗高 6～ 7 cm, 3～ 4片叶 )的小苗放在室内 , 打开封口膜炼苗 2 d (若冬季可炼
苗 3～ 4 d, 雨季则不能超过 2 d, 高温高湿环境炼苗 3 d培养基就会生霉 ) 便可移栽。移栽基质可用河
沙与肥土比为 1∶ 1。移栽后浇水要适量 , 太多易烂根 , 太少会旱死。另外 , 要尽量移栽到静风处。如
条件适合 , 移栽成活率可达 80%。
3　讨　论
箭根薯在组织培养过程中 , 从野外采回的嫩叶片接种未能诱导出愈伤组织 , 用野外自然生长的嫩
叶片作材料进行组织培养的技术和方法有待进一步研究。
从移栽的过程中看出 ,箭根薯对生境的要求很严 ,已成活的苗若被微风连续吹 5～ 6 d就会死亡。而
作为其自然栖息地的热带雨林环境正由于林分的减少、 林下的过度利用而发生较大的改变 , 林分内日
趋空旷 , 其自然更新能力将受到严重挑战。加之不合理的开发利用 , 野外自然生长的个体数量已越来
越少 , 箭根薯的生存受到严重威胁 , 因此对其进行种质保存显得十分必要。 组织培养技术的发展为人
们寻求种质保存提供了新的途径。笔者于 1998年 7月开始进行箭根薯的组织培养和离体保存工作 ,
1999年 8月移栽第一批苗 ,其余的组培苗已作为其离体保存的材料在 15℃下保存 ,用普通培养基半年
继代一次。若在培养基中加入生长抑制剂、 降低保存温度则可延长继代的时间间隔 , 减缓小苗的生长
速度 , 成功有效地进行箭根薯的种质资源保存。种质资源保存途径随着生物科学的发展越来越多 , 但
现在常用的是种子保存和离体保存。 最近笔者在对箭根薯种子保存的进一步研究中发现 , 箭根薯种子
不同种批 (来源地和采集时间不同 ) 的发芽率不同 , 用于做组织培养的这批种子于 1997年 7月采自西
双版纳热带植物园阴生植物区 , 发芽率仅 12% , 而 1999年 10月采于思茅的发芽率高达 90%以上 , 今
后笔者将对箭根薯种子的萌发和贮藏特性进行报道。
参考文献:
[ 1] 　田郎 , 谭海燕 , 张霖 . 金边富贵竹的茎段培养及试管繁殖 [ J]. 园艺学报 , 1999, 26 ( 2): 133～ 134.
[ 2] 　中国科学院中国植物志编辑委员会 . 中国植物志 [M ]. 第十六卷第一分册 . 北京: 科学出版社 , 1985.
[ 3] 　中国科学院昆明植物研究所 . 西双版纳高等植物名录 [M ]. 昆明: 云南民族出版社 , 1996. 555.
[ 4] 　伊华林 , 邓秀新 . 植物种质离体保存技术研究进展 [ J]. 植物学通报 , 1999, 16 ( 5): 574～ 581.
(责任编辑　梁健 )
110 广 西 农 业 生 物 科 学 第 21卷