全 文 ：薄层荧光扫描法测定小叶买麻藤等植物中 类化合物含量
丁永胜 , 何丽一＊
(中国医学科学院 、中国协和医科大学药物研究所 ,北京 100050)
摘要:目的 建立小叶买麻藤中 6种 类化合物的含量测定方法。方法 在高效硅胶薄层板上 , 买麻藤丙素 、
ε-viniferin 、白藜芦醇 、异丹叶大黄素 、银松素以甲苯—冰醋酸—甲醇(3∶1∶0.2)为展开剂 ,进行二次展开;异丹叶大黄
素-3-O-β-D-吡喃葡糖苷以甲苯—乙酸乙酯—冰醋酸—甲醇(1∶2∶0.5∶0.2)为展开剂 , 一次展开 ,展开后用液体石蜡
—正己烷(1∶1)浸板 ,荧光扫描法测定。结果 6种化合物的线性关系良好 ,相关系数在 0.9914 ～ 0.9999 , 回收率为
94.4%～ 104.8%, RSD在 2.3%～ 5.1%之间。用此法测定了小叶买麻藤等 12 种药用植物中此类化合物的含量和
分布。结论 为研究和开发含 类化合物的药用资源提供了简便 、灵敏 、准确的含量测定方法。
关键词:薄层荧光扫描法;小叶买麻藤; 类化合物
中图分类号:R927.2 文献标识码:A 文章编号:0513-4870(2000)06-0454-03
小叶买麻藤 Gnetum parvi folium (Warb.)C.
Y.Cheng 是裸子植物买麻藤科 Gnetaceae 买麻藤属
Gnetum L.的植物 。在买麻藤科属植物中以小叶买
麻藤的药效较为明确 。关于其化学研究报道较少 ,
60年代以来 ,人们对小叶买麻藤抗风湿性关节炎等
药理作用进行了研究 ,发现有多方面的生理活性 。
研究结果表明 ,小叶买麻藤中的主要成分为 类
(stilbenes ,又称二苯乙烯类)化合物及其低聚体 、黄
酮 、少量的生物碱以及有机酸类化合物[ 1 ,2] 。 类
有广泛的生物活性 ,多数化合物有抗菌 、抗真菌作
用 、并有降血脂 、扩张毛细血管 、降压 、保肝 、抗过敏 、
干扰微管功能和抗小鼠 P338白血病的作用[ 3 , 4] ,目
前此类有效成分已引起人们浓厚的兴趣 。本文采用
薄层荧光扫描法首次测定了小叶买麻藤等 12 种植
物中的 6种 类化合物:异丹叶大黄素-3-O-β-D-吡
喃葡糖苷(isorhapo tigenin-3-O-β-D-glucopyranoside ,
I)、买麻藤丙素(gnetifolin C , II)、ε-viniferin (III)、
白藜 芦 醇 (resveratol , IV)、异 丹 叶 大 黄 素
(isorhapotigenin , V)、银松素(pinosylvine , VI)在植
物中的分布和含量。
材 料 和 方 法
仪器和药品 薄层色谱扫描仪 Shimadzu CS-
930;高效硅胶薄层板(10 cm×10 cm ,烟台化工研究
收稿日期:1999-09-10
＊联系人 Tel:(010)63165235 , Fax:(010)63017757 ,
E-mail:he-liyi@263.net
所);定量毛细管:0.5 , 1 , 2 , 3 , 4 , 5 μL , Drummond
Scientific Co , USA;展开室 CAMAG 双底展开室 12
cm ×4 cm ×12 cm ;浸板槽自制;超声振荡器
HQQ005(无锡超声电子仪器厂);离心机 80-1(上海
手术器械厂);紫外灯(上海硕村电光仪器厂);甲醇 、
甲苯 、冰醋酸 、正己烷 、液体石蜡 ,均为分析纯;对照
品 、植物样品由本所植化室林茂研究员和植物室马
林同志提供 ,植物由植物室宋万志研究员鉴定。
色谱分离条件 固定相用高效硅胶薄层板(10
cm ×10 cm);分离化合物 II ～ VI 用展开剂:甲苯—
冰醋酸—甲醇(3∶1∶0.2),进行二次展开 ,每次展开
前预饱和 30 min;分离化合物 I 用展开剂:甲苯—乙
酸乙酯 —冰醋酸—甲醇(1∶2∶0.5∶0.2),一次展开;
展距 9 cm;相对湿度:<50%;室温:>16℃。
结 果
1 激发光波长与发射光波长的选择
取 6种对照品溶液点样于高效薄层板上 ,按“色
谱分离条件”项下操作 ,用扫描仪进行各化合物斑点
的原位紫外光谱扫描。由于 6种化合物的结构单元
相同 ,它们的紫外吸收图谱表现一致 ,最大吸收波长
均在 313 nm 处 ,故选此波长为激发光波长。经过
选择以 2号滤光片(400 nm)为发射光波长。
2 测定方法
精密称取样品粉末 100 mg ,加入 80%甲醇 2
mL ,超声提取 30 min ,3 000 r·min-1离心 5 min ,取
上清液点样 。按“色谱分离条件”项下操作 。展开后
用液体石蜡—正己烷(1∶1)浸板处理 ,暗处放置 30
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DOI :10.16438/j.0513-4870.2000.06.013
min后 ,用荧光扫描法测定 ,以外标法计算含量。6
种被测化合物的色谱扫描图见图 1。
Fig 1 HPT LC chromatog ram of six stilbenes
I.Iso rhapo tigenin-3-O-β-D-g lucopyranoside;II.
Gnetifolin C;III.ε-Viniferin;IV.Resveratol;
V.Isorhapotigenin;VI.Pinosylvine.Developing
solvent:toluene—glacial acetic acid—methanol(3
∶1∶0.5), tw ice development
3 标准曲线
精密称取 6种对照品 I ～ VI 配制成各约 0.1
mg·mL-1的混合液 ,点样 0.5 , 1.0 ,1.5 , 2.0 和 2.5
μL于薄层板上 ,按“测定方法”项下进行操作。结果
见表 1。
4 精密度
取对照品混合液 ,在同一块薄层板上分别点同
样的量 7次 ,按“测定方法”项下进行操作 ,荧光扫描
Tab 1 Data of cal ibration curves of six stibenes
St ilbene
Regression equation
(Y :peak area , X:ng)
Correlat ion
coeff icient
Linear
range/ng
I Y =7.609×102+1.427×102X 0.9914 52.2～ 260.7
II Y =-1.159×103+6.712×10X 0.9970 25.0～ 125.0
III Y =-2.101×103+2.069×102X 0.9945 25.0～ 125.0
IV Y =1.066×104+1.455×102X 0.9953 50.0～ 250.0
V Y =1.643×104+3.688×102X 0.9949 48.4～ 242.0
VI Y =2.827×103+2.093×102X 0.9999 17.4～ 87.0
I.I sorhapotigenin-3-O-β-D-g lucopy ranoside;I I.Gnetifolin
C;II I.ε-Viniferin;IV.Resveratol;V.Isorhapotig enin;
VI.Pinosylvine
法测定 ,结果表明 ,6种对照品 7次测得峰面积的相
对标准偏差在 2.3%～ 5.1%之间。
5 最小检测限
以信噪比 S/N >3为最小检测量的依据 ,测得
I , II , IV和 V 为 10 ng , III 为 5 ng ,VI 为 7 ng 。
6 回收率
精密称取已知含量的小叶买麻藤生药粉末 100
mg ,定量加入不同量的 6 种对照品 ,按“测定方法”
项下操作计算。结果回收率在 94.4%～ 104.8%。
7 样品分析
精密称取小叶买麻藤等 12 种生药粉末各 100
mg 3份 ,按“测定方法”项下操作计算 ,结果见表 2 ,
表明除小叶买麻藤中含有全部被测成分外 ,湖南射
干 、四川鸢尾 、北京鸢尾 、湖北扁竹根中不含此类物
质 ,其他几种植物均含有部分 类化合物 ,其中以白
藜芦醇和异丹叶大黄素居多 。
Tab 2 Contents and distribution of stilbenes in different species(n=3)
Species Habitat Content / %
I II III IV V VI
Gnetum parvi folium (w arb)C.Y.Cheng (小叶买麻藤) Fujian 0.23 0.08 0.02 0.16 0.07 0.01
Gnetum montan um M arkgr.(大叶买麻藤) Yunnan 0.23 - - 0.05 0.15 -
P lolygonum cusp idatum S ieb.etzuec(虎杖) Hebei - - - 0.09 - -
Belamcanda chinensis(L.)DC.(射干) Hubei - - - 0.09 0.02 -
Guizhou - - - 0.03 - -
Hunan - - - - - -
Iris d ichotoma Pall.(白花射干) Shanxi 0.07 - - 0.17 0.02 -
Bei jing 0.01 - - 0.09 0.01 -
Iris tectorum Maxim (鸢尾) Sichuan - - - - - -
Bei jing - - - - - -
Iris confusa Sealy root (扁竹根) Hubei - - - - - -
Vi ti s vini fera L.(葡萄藤) Xinjiang - - 0.05 0.03 - -
I.Isorhapo tig enin-3-O-β-D-glucopyranoside;II.Gnetifo lin C;III.ε-Viniferin;IV.Resveratol;V.Isorhapotigenin;
VI.Pinosylvine
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讨 论
本文首次建立高效硅胶薄层分离 、荧光光密度
扫描测定小叶买麻藤等 12种生药中的 类化合物
的含量 ,方法简便 、灵敏 、准确 。由于 类含有多个
羟基和烯键 ,对光 、热较为敏感 ,化学性质不稳定 ,展
开后 ,斑点荧光在短时间内很快下降 ,无法用于定量
分析 。实验表明 ,展开后的薄层板用高粘度 、难挥发
的液体石蜡—正己烷(1∶1)浸板处理后 ,不仅使荧光
稳定而且可使荧光增强。实验中所用的样品和对照
品溶液 ,应于冰箱(4℃)中保存 。对于较难分离的组
分 ,采用二次展开的方式 ,一般可以得到较为满意的
分离效果。湿度对色谱行为有很大影响 ,当相对湿
度大于 50%时 ,展开剂易分层 ,影响分离结果 。在
发射光波长选择中 , 1号滤光片(333 nm)灵敏度最
高 ,但其线性范围太窄 ,且基线噪音较高 , 2号滤光
片灵敏度虽较低 ,但可克服上述缺点 ,故选 2号滤光
片(400 nm)作为发射光波长。
致谢 本工作得到本所林茂 、宋万志研究员和马林同志
的帮助。
参考文献:
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DETERMINATION OF SIX STILBENES IN GNETUM PARVIFOLIUM
(WARB.)C.Y.CHENG BY HPTLC FLUORESCENT SCANNING
DING Yong-Sheng , HE Li-Yi
(Inst itute of Materia Medica , Chinese Academy of Medical Sciences
and Peking Union Medical Col lege , Bei jing 100050 , China)
ABSTRACT:AIM To establish a TLC fluorescent scanning method for separation and determination of
the six stilbenes:iso rhapo tigenin-3-O-β-D-glucopy ranoside(I), gnetifolin C(II), ε-viniferin(III), resveratol
(IV), isorhapotigenin (V)and pinosylvine (VI)in Gnetum parvi folium .METHODS The separation of
stilbenes II ～ VI w as accomplished on the silica gel plate by tw ice development using the mobile phase toluene-
g lacial acetic acid-methanol(3∶1∶0.5).The separation of I w as achieved by using the mobile phase toluene—
ethyl acetate—glacial acetic acid —methanol(1∶2∶0.5∶0.2).After separation of the stilbenes , the plate was
dipped into a mixture of paraf fin oil—hexane (1∶1)to protect the f luo rescence.The contents of six stilbenes
w ere determined by HPTLC fluo rescent scanning wi thλex =313 nm andλem=400 nm(No.2 filter).RESULTS
The calibration curves showed good lineari ty in the range of 17.4 ～ 260.7 ng.The recoveries were 96.4%～
104.8%w ith RSD% 2.3% ～ 5.1%.The method has been applied to the analysis of various samples.
CONCLUSION It offered a simple , sensitive , and accurate method for research and utilization resources of
stilbenes.
KEYWORDS:thin layer chromatography;Gnetum parvi fol ium (Warb)C.Y.Cheng;stilbenes
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