全 文 ：收稿日期:2012-03-28; 修订日期:2012-09-30
基金项目:河北省科技支撑计划项目( No． 10276435)
作者简介:周晓霞( 1979-) ，女( 汉族) ，河北景县人，现任衡水学院应用化
学系讲师，硕士学位，主要从事药物分析研究工作．
葛根、粉葛药材中大豆苷元含量的测定
周晓霞
(衡水学院，河北 衡水 053000)
摘要:目的 建立测定中药葛根、粉葛中大豆苷元含量的测定方法。方法 采用薄层荧光扫描法。甲醇作为提取剂，以硅
胶 G板为薄层吸附剂，三氯甲烷 －无水乙醇( 10∶ 1) 为展开剂，在激发波长 λex = 260 nm处扫描大豆苷元色谱峰的荧光
强度。结果 在 0． 0488 ～ 0． 244μg范围内，大豆苷元标准品的点样量与其薄层荧光扫描色谱峰的面积存在良好的线性关
系，( r = 0． 999) 。以此法测得葛根、粉葛样品中大豆苷元的含量分别为 0． 323%和 0． 0598%。结论 该法准确度高，稳定
性、重现性良好，可用于葛根、粉葛中大豆苷元含量的定量分析。
关键词:大豆苷元; 葛根; 粉葛; 薄层荧光扫描法
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 11． 030
中图分类号:R284． 1 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2012) 11-2732-02
Determination of Daidzein in Chinese Herbal Medicine Puerariae Lobatae Radix and Puer-
ariae Thomsonii Radix
ZHOU Xiao-xia
( The Chemistry Department of Hengshui College，Hengshui，Hebei 053000，China)
Abstract: Objective To establish a measuring method for Daidzein in Puerariae Lobatae Radix and Puerariae Thomsonii Radix．
Methods The analytic method was thin － layer fluorescence scanning． The sample was extracted by methanol． The absorbent was
glue G，the developing solvent was chloroform，absolute ethyl alcohol ( 10∶ 1) ，scanning the fluorescence intensity of Daidzein in
excitation wavalength 260nm． Results The data showed good linearity in the range of 0． 0488 ～ 0． 244μg( R = 0． 999) ． Using this
method，the contents of daidzein in PLR and PTR Samples were determined to be 0． 0323% and 0． 0598%，respectively． Conclu-
sion The method is accurate，stable，reproducible and it can be used for the determination of Daidzein in Puerariae Lobatae Radix
and Puerariae Thomsonii Radix．
Key words: Daidzein; Puerariae Lobatae Radix; Puerariae Thomsonii Radix; Thin － layer fluorescence scanning
葛根为豆科多年生藤本植物野葛 Pueraria lobata(Willd．)
Ohwi．或甘葛藤 Pueraria thomsonii Benth．的干燥根。《中国药典》
(2010 年版)将甘葛作为粉葛，野葛作为葛根分列收载，两者并无
严格区分。葛根甘、辛，凉。归脾、胃、肺经，具有解肌退热、升阳
止泻、通经活络、透发麻疹等作用［1］。葛根在我国的药用历史悠
久，早在《神农本草经》中就有记载，原名葛，列为药品中的中品，
历代本草均有记载［2］。据文献［3 ～ 5］报道，葛根中除含有淀粉、蛋
白质、糖类、纤维素、脂肪、果胶等还含有多种人体必须的微量元
素和各种氨基酸以及具有保健作用的各种化学成分。我国卫生
部已经在 1998 年 3 月将葛根正式列入既是食品又是药品的名
录之中，葛粉在日本被誉为“王室贡品”［6］。葛根分布广泛，资源
丰富，全国各地均有分布，其中以长江流域和黄河流域各省、自治
区以及北京、天津等地分布最多［7］。大豆苷元是葛根、粉葛的有
效活性成分，具有抗菌作用［8］、抗骨质疏松［9 ～ 11］、抗心律失常作
用［12］、抗缺氧作用［13］、抗肿瘤［14 ～ 16］等作用，另外可以治疗早期
神经性耳聋［17］，药用价值较高。目前文献报道的大豆苷元含量
测定方法有时间分辨荧光免疫法［18］、紫外 －可见分光光度法［19］
和高效液相色谱法［20］。本文建立了中药葛根、粉葛中大豆苷元
的薄层荧光扫描法，所用有机溶剂少，实验效果良好，有望为中药
葛根、粉葛的质量控制提供依据。
1 仪器与材料
CS － 9301PC薄层扫描仪(Shimadzu) ;硅胶 G 板(100 mm ×
100 mm) ，青岛海洋化工厂;薄层色谱展开缸(上海信谊仪器厂制
造)。
大豆苷元(Daidzein 中国药品生物制品检定所，供含量测定
用，编号:1502 － 200101) ;葛根药材(Puerariae Lobatae Radix 购自
石家庄乐仁堂大药房，简称 PLR) ;粉葛药材(Puerariae Thomsonii
Radix 购自石家庄乐仁堂大药房，简称 PTR) ;无水甲醇(天津市
科密欧化学试剂有限公司，色谱纯) ;三氯甲烷(深圳市三品化工
科技有限公司，分析纯) ;无水乙醇(上海科兴商贸有限公司，分
析纯)。
2 方法
2． 1 大豆苷元对照品溶液的制备 准确称取大豆苷元固体
0． 002 44 g ，以无水甲醇配制浓度为 97． 6 μg·ml －1的标准溶液，
作为储备液，使用时用水适当稀释。
2． 2 供试品溶液的制备 精密称取葛根粉和粉葛粉(均过 40 目
筛)1． 000 g于 10 ml容量瓶中，无水甲醇定容至刻度，摇匀，置于
冰箱内，静置过夜。
2． 3 薄层扫描条件 以三氯甲烷 －无水乙醇(10∶ 1)为展开剂，
将硅胶 G板置于薄层色谱展开缸中饱和 10min，然后用定量毛细
管将对照品和供试溶液分别晾于硅胶 G 板上，上行展开，晾干。
在薄层扫描仪上进行荧光扫描，波长 λ为 260 nm。
3 结果
3． 1 大豆苷元标准曲线的制作 精密吸取大豆苷元对照品 0． 5，
1． 0，1． 5，2． 0，2． 5μl，葛根溶液 1． 0，1． 0，1． 0μl，粉葛溶液 1． 0，
1． 0，1． 0μl点于同一个硅胶 G 板上，以三氯甲烷 －无水乙醇(10
∶ 1)为展开剂，展开并晾干，在波长 260 nm 下扫描薄层荧光曲
线。
图 1 为大豆苷元对照品的薄层荧光色谱图，图 2 是大豆苷元
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质量 m与积分吸光强度(面积)A的关系。由图 2 可得回归直线
方程为 A = 22 930． 1m + 2 365． 2，R = 0． 999 。结果表明，在
0． 0488 ～ 0． 244 μg的范围内，大豆苷元标准品的质量与积分荧光
强度之间存在良好的线性关系，可作为定量分析的依据。
图 1 大豆苷元的簿层荧光色谱图
图 2 大豆苷元质量和荧光强度的线性关系
3． 2 葛根中大豆苷元含量的薄层荧光扫描法测定 图 3 和图 4
为大豆苷元与葛根药材的薄层荧光色谱图。由图可知，所选展开
剂能够将葛根中的待测组分大豆苷元与其它组分分离，这是利用
薄层荧光扫描法定量葛根中大豆苷元的基础。
图 3 大豆苷元与葛根的薄层荧光色谱图
图 4 葛根样品的薄层荧光色谱图
根据以上结果计算葛根中大豆苷元的含量，实验数据列于表
1。由表可见，薄层荧光法测葛根药材中大豆苷元的含量为
0． 0323%。
表 1 葛根中大豆苷元含量测定
编号
点样体积
/μl
点样质量
/μg
A
积分面积
大豆苷质量
/μg
含量
(%)
平均含量
(%)
RSD
(%)
1 1． 0 100 3090． 25 0． 0316 0． 0316
2 1． 0 100 3123． 12 0． 0331 0． 0331 0． 0323 2． 4
3 1． 0 100 3100． 30 0． 0321 0． 0321
3． 3 粉葛中大豆苷元含量的薄层荧光扫描法测定 移取大豆苷
元对照品溶液和粉葛溶液各 1． 0 μl，在以三氯甲烷 －无水乙醇
(10∶ 1)为展开剂的薄层色谱展开缸中依法展开，晾干，扫描薄
层荧光色谱图，得到图 5 和图 6。由图可见在此展开剂条件下，
粉葛中的大豆苷元与其他组分分离完全，这是用薄层荧光法对粉
葛中的大豆苷元进行定量的依据。
图 5 大豆苷元与粉葛的薄层荧光色谱图
图 6 粉葛样品的薄层荧光色谱图
根据以上结果计算粉葛中大豆苷元的含量，数据列于表 2。
由表 2 可见，薄层荧光扫描法测得粉葛药材中大豆苷元的含量为
0． 0598%。
表 2 粉葛中大豆苷元含量测定
编号
点样体积
V /μl
点样质量
m /μg
A
积分面积
大豆苷元质量
m /μg
含量
(%)
平均含量
(%)
RSD
(%)
1 1． 0 100 3763． 9 0． 0610 0． 0610
2 1． 0 100 3720． 4 0． 0591 0． 0591 0． 0598 1． 8
3 1． 0 100 3725． 0 0． 0593 0． 0593
3． 4 稳定性实验 精密吸取大豆苷元对照品溶液 1． 0 μl ，葛根
溶液 1． 0 μl ，粉葛溶液 1． 0 μl交叉点于同一个硅胶板上，在上述
相同的展开剂中展开，晾干，每隔 10 min 在薄层扫描仪上扫描一
次光谱，结果表明在 1 h 内大豆苷元对照品、葛根及粉葛溶液的
荧光强度几乎不变，RSD%分别为 0． 8%、0． 97%、1． 6%(n = 6)。
3． 5 精密度实验 准确吸取大豆苷元供试品溶液 1． 0 μl，点于硅
胶 G板上，在上述相同的展开剂中展开，晾干，连续扫描此斑点
的荧光强度，考察光谱数据的精密度，RSD%为 1． 3%。实验结果
见表 3。
表 3 大豆苷元精密度实验数据
NO． Area RSD(%)
1 4440． 1
2 4484． 4
3 4512． 5
4 4579． 3 1． 3
5 4585． 3
6 4495． 4
4 讨论
葛根、粉葛是我国常用中药之一，目前文献报道的方法对环
境污染大，灵敏度低。大豆苷元作为葛根、粉葛的主要活性成分，
也是常用的质量控制指标。本研究采用薄层荧光扫描的方法，以
三氯甲烷 －无水乙醇(10∶ 1)为展开剂，对两种中药材中的大豆
苷元进行检测，结果证明，在该展开剂下大豆苷元和其他成分分
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 11 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 11 期
离效果良好，结果可靠，重现性良好，可作为葛根、粉葛的质控方
法之一，适用于葛根、粉葛中大豆苷元的测定。本研究为有效的
控制中药葛根、粉葛的质量提供了实验依据，为两种中药材的进
一步开发应用奠定了基础。
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收稿日期:2012-04-30; 修订日期:2012-08-17
基金项目:贵州省科技厅科技基金［No． J( 2012) 2064］;
贵州省科技厅、贵阳中医学院联合基金［No． ( 2010) LKZ7017］;
贵州省贵阳市科技局项目［No． ( 2009) 3 － 028］
作者简介:陈云志( 1968-) ，男( 土家族) ，贵州印江人，现任贵阳中医学院
副教授，硕士学位，主要从事中西医结合基础与临床工作．
黄芪对异丙肾上腺素致心肌肥厚大鼠
维生素 D-FGF-23-Klotho轴的调节作用研究
陈云志1，杨长福1，柴艺汇2，郭 军3，陈昱江3，王瑶瑶3
(1．贵阳中医学院基础医学院，贵州 贵阳 550002;
2．贵阳中医学院研究生院，贵州 贵阳 550002; 3．贵阳中医学院第一临床医学院，贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 观察黄芪对异丙肾上腺素致大鼠心肌肥厚模型血清 25 羟维生素 D3、FGF － 23、Klotho的影响。方法 选用 40
只雄性 SD大鼠，随机分为 4 组: 对照组，模型组，黄芪 8 g·kg －1组，卡托普利 0． 05 g·kg －1组。异丙肾上腺素 2． 4 mg·
kg －1皮下注射，连续 7d，造模结束，药物干预 6 周后酶联免疫法 ( ELISA 法) 检测血清 25 羟维生素 D3［25 ( OH) D3］、
Klotho、成纤维细胞生长因子( FGF － 23) ，大鼠心肌标本 HE染色，观察组织病理改变。结果 与对照组比较，模型组血清
25( OH) D3、Klotho降低，伴随血清 FGF － 23 升高( P ＜ 0． 05) 。心肌 HE 染色见心肌排列紊乱，纤维化增生。与模型组比
较，黄芪 8 g·kg －1干预后，血清 25( OH) D3、Klotho升高，FGF － 23 降低( P ＜ 0． 05) 。心肌纤维化程度减轻。结论 黄芪具
有调节异丙肾上腺素致心肌肥厚大鼠模型维生素 D － FGF － 23 － Klotho轴的作用，逆转异丙肾上腺素致大鼠的心肌肥厚。
关键词:心肌重塑; 成纤维细胞生长因子 － 23; Klotho; 黄芪; 卡托普利
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 11． 031
中图分类号:R285． 5 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2012) 11-2734-03
心肌重塑是高血压、心力衰竭等心血管疾病的共同病理过
程，是心血管疾病发生、发展和维持的病理基础。抑制心肌重塑
对保护心功能具有重要意义。黄芪是临床常用中药，含皂苷、黄
酮等多种成分，具有抗多种原因导致的心肌损伤和纤维化，改善
心功能、保护心肌、改善心肌重塑，在心血管疾病治疗中发挥广泛
的药理作用［1］。前期运用非关联文献的 ARROWSMITH 方法发
现黄芪与维生素 D之间在心血管系统保护作用中包含了非常有
价值的隐式规则。提出黄芪作用于维生素 D 轴起到治疗作用假
说［2］。本实验在此基础上探讨黄芪对异丙肾上腺素致心肌肥厚
大鼠模型维生素 D － FGF － 23 － Klotho 的调节作用，阐述黄芪改
善心肌重塑的机制。
1 材料与仪器
1． 1 动物 雄性 SD大鼠，清洁级，体质量(180 ± 20)g，由第三军
医科大学野战外科研究所医学实验动物中心提供，许可证号
SCXK(渝)2007 － 0005。
1． 2 药物与试剂 异丙肾上腺素 1 mg·ml －1(ISO，上海禾丰制
药有限公司生产，批号 100702)。黄芪注射液 20 g·(10 ml)－ 1
(正大青春宝药业有限公司生产，批号 1009282) ，卡托普利 25 mg
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