全 文 ：收稿日期:2010-01-27;　修订日期:2010-04-17
基金项目:国家科技支撑计划重点项目(No.2007BAI25B05);
四川省青年基金项目(No.07ZQ026-011);
国家中医药管理局项目(No.06-07ZP43)
作者简介:李厚聪(1984-),男(土家族), 湖北巴东人, 现任湖北民族学院
医学院教师 ,硕士学位 ,主要从事民族药资源的教学与科研工作.
薏苡非种仁部位甲醇提取物的指纹图谱研究
李厚聪1 ,袁　玮 2 ,李　莹 2 ,刘　圆2
(1.湖北民族学院·医学院 ,恩施 湖北　445000;　2.西南民族大学少数民族药物研究所 ,成都 四川　610041)
摘要:目的 建立薏苡药材茎中甲醇部位的 RP-HPLC指纹图谱的研究方法。方法 采用 KromasilC18色谱柱(Dikma公
司 , 4.6 mm×250 mm, 5 μm), 以甲醇 -水为流动相梯度洗脱 ,流速 1 ml· min-1 , 柱温 30 ℃, 检测波长 263 nm。结果 用
梯度洗脱得到的色谱图各色谱峰分离较好 ,达到指纹图谱要求。 10个产地薏苡药材共标定了 12个共有峰。结论 该方
法简便 、实用 、可靠 , 可以作为评价薏苡药材质量的基础。
关键词:薏苡;　高效液相色谱;　指纹图谱
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.019
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)09-2174-02
ChromatogrambyFingerprintofCoixlacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf
LIHou-cong1 , YUANWei2 ,LIYing2 , LIUYuan2
(1.MedicalSchoolofHubeiInstituteforNationalities, Enshi445000 , China;2.EthnicPharmacologialInsti-
tuteofSouthwestUniversityforNationalities, Chengdu610041, China)
Abstract:ObjectiveToestablishreversed-phasehighperformanceliquidchromatography(RP-HPLC)fordetermination
offingerprintofC.lacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf.MethodsThesamplewasseparatedonaKromasilC18(4.6
mm×250 mm, 5 μm)columnwithgradientelution.Themobilephaseconsistedofmetholandwater.Theflowratewas1.0 ml
· min-1;thetemperatureofcolumnwasat30℃;UVdetectionwavelengthwasat263nm, andrecordingtimewas75min.Re-
sultsHPLCchromatogrambyFingerprintofC.lacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapfwasobtained.12commonpeaks
intheHPLCprofilewerefoundinC.lacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapfin10 differentgrowingareas.Conclusion
Thismethodissimple, practicableandreliableandcanbeusedforthequalitycontrolofC.lacryma-jobiL.var.mayuen(Ro-
man.)Stapf.
Keywords:C.lacryma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf;　RP-HPLC;　Fingerprint
　　薏苡为禾本科薏苡属植物薏苡 C.lacryma-jobiL.var.
mayuen(Roman.)Stapf和川谷 C.lacryma-jobiL.的干燥全草 、
果实和种仁。
《中国药典》从 1963年版开始收载禾本科植物薏苡 C.lacry-
ma-jobiL.var.mayuen(Roman.)Stapf的干燥成熟种仁;2005年
版记载薏苡仁粉末的鉴别 、油脂类成分的薄层鉴别和甘油三油酸
酯的含量测定项;功效为健脾渗湿 、除痹止泻 、清热排脓;用于水
肿 、脚气 、小便不利 、湿痹拘挛 、脾虚泄泻 、肺痈 、肠痈;扁平疣的治
疗 [ 1] 。薏苡根收载于上海市中药材标准 1994年版中 , 有清热 、利
尿和驱虫作用 [ 2] 。
薏苡的根 、茎 、叶 、果实 、种仁等药用部位在中国的蒙古族 、藏
族 、苗族 、彝族 、侗族 、佤族 、傈僳族 、傣族 、壮族 、毛难族 、瑶族 、哈
尼族 、景颇族 、水族 、基诺族等民族中均有大量使用 [ 3] ,而现有文
献中关于薏苡根 、茎 、叶的研究涉及较少。
有研究报道 [ 4]表明薏苡抗肿瘤活性成分主要集中在甲醇部
位 , 甲醇部位化学成分复杂 ,为更好地控制薏苡药材的质量 ,本文
采用 HPLC-DAD法建立了薏苡非种仁部位的指纹图谱 , 为薏苡
非种仁部位(根 、茎和叶)药材的质量控制提供新方法 , 为正确 、
科学和合理开发利用等方面提供一定的实验依据。
1　材料与仪器
1.1 　试剂与材料 甲醇为色谱纯(美国迪马公司);水为重蒸水;
其他试剂均为分析纯。实验所用药材 ,室温阴干 , 经刘圆教授 、戴
斌 、彭朝忠副教授鉴定。来源见表 1。
表 1　薏苡药材来源
编号 产地 海拔 /m 采集时间
S1 陕西汉中汉台区 1 300 2007-10-03S2 四川峨眉山 1 200 2007-04-10
S3 四川新津 470 2007-08-13
S4 广西恭城 500 2007-05-08
S5 云南大度岗 1 300 2007-04-08S6 成都中医药大学植物园 524 2007-07-02
S7 四川大学华西植物园 494 2007-06-11
S8 湖北恩施 950 2007-11-24
S9 云南景洪 570 2007-07-08S10 五块石药材市场 不详 不详
1.2 　仪器 Waters2695 高效液相色谱仪;Waters2996 DAD检测
器(美国 Waters公司);EmpowerPro色谱工作站;KQ-250B型超
声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);METTLERAE240电子
分析天平(梅特勒 -托利多仪器(上海)有限公司);中药色谱指
纹图谱相似度评价系统 A版;DPS2000数据处理系统 。
2　方法
2.1　色谱条件 色谱柱:KromasilC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,
5 μm);流动相为甲醇 -水梯度洗脱 , 甲醇为 A相 , 水为 B相 , 梯
度洗脱表见表 2;流速 1 ml· min-1;柱温 30 ℃;检测波长 263
nm;分析时间 75 min。
2.2　样品溶液的制备 称取薏苡药材粉末约 1 g,过 60目筛 , 精
密称定 ,准确加入 10 ml的甲醇 , 称重 , 超声提取 30 min, 放冷加
甲醇补足损失重量摇匀 ,过滤 , 滤液蒸干 , 用 10 ml甲醇溶解并定
·2174·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9
容 , 吸取滤液 ,过微孔滤膜(0.45μm), 取续滤液备用。
表 2　梯度洗脱
时间 t/min A(%) B(%)
0 30 70
5 30 70
25 50 50
30 60 40
33 60 40
35 65 35
36 70 30
40 75 25
45 80 20
48 80 20
50 90 10
53 100 0
2.3　 方法学考察
2.3.1　精密度实验 取 10号供试品溶液 ,连续进样 5次 , 测定
12个主要色谱峰(特征峰的保留时间和峰面积比值), 结果表明
各主要色谱峰的相对保留时间 RSD<2 %,峰面积 RSD<10 %,
表明精密度良好。
2.3.2　稳定性实验 取 10号供试品溶液 , 分别于 2, 8, 16, 24,
48, 72h检测指纹图谱 , 记录各主要色谱峰保留时间及峰面积比
值。结果表明各色谱峰的相对保留时间 RSD<2 %,在 12个共
有峰中有 9个峰的峰面积 RSD接近或超过 10%, 通过分析数据
发现供试品溶液在 48 h内稳定。
2.3.3　重复性实验 取五块石薏苡药材根茎粉末 5份 , 每份 1.0
g,精密秤定 , 按 “ 2.2”项下样品溶液的制备方法制备供试液 , 检
测指纹图谱 , 记录 12个主要色谱峰的保留时间和峰面积比值 , 结
果表明各主要色谱峰的相对保留时间 RSD均在 1 %以内 , 说明
重复性良好。
3　结果
3.1　共有峰的标定 对上述条件下的液相色谱指纹图谱分析比
较 , 找出比较稳定的共有峰共 12个。见图 1。
图 1　共有峰的标定
3.2　共有峰和重叠率计算 在计算重叠率时 , 以第 1批样品色谱
指纹图谱作为标准药材 ,其他批次的药材与其对照来计算共有峰
和重叠率。共有峰的结果见表 3。
表 3　 10批样品的色谱指纹图谱共有峰的相对峰面积
峰号 相对峰面积 SrS1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
RSD(%)
保留时间 峰面积
1 3.94 5.22 8.46 10.50 7.12 6.13 8.16 6.49 3.94 8.46 0.33 38.82
2 4.43 0.83 8.71 8.72 2.79 5.84 7.96 3.88 4.43 8.71 1.65 57.47
3 27.49 6.71 17.63 17.24 8.44 42.20 25.27 5.83 27.49 17.63 0.2 86.91
4 2.75 3.59 5.42 7.01 9.65 5.55 1.50 6.76 2.75 5.42 0.2 34.92
5 0.60 1.79 1.21 1.36 6.30 1.59 0.97 1.27 0.60 1.21 0.08 49.53
6 3.48 3.47 2.54 0.97 3.75 1.82 1.91 8.51 3.48 2.54 0.07 64.31
7 0.22 1.06 0.79 0.98 1.59 0.47 0.72 1.09 0.22 0.79 0.03 29.65
8 0.22 1.07 0.68 1.56 1.09 0.43 0.94 2.96 0.22 0.68 0.12 69.66
9 0.37 0.76 0.88 0.96 1.05 0.82 0.75 0.56 0.37 0.88 0.02 35
　　将各样品的相对保留值均一一列出 ,可清楚的看到他们之间
的共有峰情况 , 同时可计算出各批样品中峰的重叠率。色谱指纹
图谱重叠率(Rateofoverlap:Rov)是从质的角度考虑待测样品与
标准样品之间的相关性。其计算公式为:重叠率(%)=(共有峰
数 ×2)/(标准药材峰数 +待鉴药材峰数)×100 %。
计算得 10个批样品的重叠率从第 1批到第 10批分别为
100%, 59.65%, 64.62 %, 64.71 %, 58.06 %, 63.49 %, 80.56
%, 72.73%, 86.37 %, 64.62%。
3.3 　八强峰 色谱指纹图谱八强峰是指某样品的色谱峰中相对
面积值 Sr较大的前 8个色谱峰。通过分析八强峰的数据可以以
量的角度对比不同批样品和不同部位之间的差异。其八强峰结
果见表 4。
表 4　八强峰结果
峰号 相对保留值 /相对峰面积(α/Sr)
1 2 3 4 5 6 7 8
峰面积和(%)
S1 1.000 /27.49 1.702 /12.06 0.233/9.95 1.196/6.93 0.222 /6.37 0.414 /4.77 0.376/4.43 0.277/3.94 75.95
S2 2.027 /24.89 0.214 /14.98 0.203/14.44 1.000/6.71 0.277 /5.22 3.733 /4.42 3.864/3.59 4.573/3.47 77.72
S3 1.000 /17.63 1.196 /11.18 0.376/8.71 0.277/8.46 3.864 /5.42 0.251 /5.18 0.214/5.02 3.584/4.52 66.12
S4 1.000 /17.24 0.277 /10.50 0.376/8.72 3.864/7.01 1.196 /6.94 0.251 /5.78 3.935/4.76 3.733/3.49 64.44
S5 3.864 /9.65 1.000 /8.44 0.277/7.12 0.251/6.68 4.222 /6.30 3.935 /6.17 1.241/5.92 3.574/5.71 56.00
S6 1.000 /42.20 1.196 /7.39 0.277/6.13 0.376/5.84 3.864 /5.55 0.251 /4.37 1.702/3.09 0.414/2.88 77.46
S7 1.000 /25.27 1.196 /11.67 0.277/8.16 0.376/7.96 0.222 /7.85 1.702 /3.24 0.251/2.85 3.733/2.34 69.34
S8 0.214 /9.95 1.196 /8.82 4.573/8.51 3.864/6.76 0.277 /6.49 1.000 /5.83 3.935/5.76 3.584/5.48 57.60
S9 1.000 /27.49 1.702 /12.06 0.233/9.95 1.196/6.93 0.222 /6.37 0.414 /4.77 0.376/4.43 0.277/3.94 75.95
S10 1.000 /17.63 1.196 /11.18 0.376/8.71 0.277/8.46 3.864 /5.42 0.251 /5.16 0.214/5.02 3.584/4.52 66.09
从表 4可以看出 , 上述八强峰的峰面积百分比均低于 80 %, 八强
峰的含量较低。其中相对保留值 α为 1.000、0.277的峰为 10批
样品的共有峰 , 表明这两种组分为薏苡的最主要组分。 α值为
0.376和 3.864的色谱峰为 10个样品所共有 , 其中该峰有 7个样
品已进入八强峰。 10批样品的八强峰顺序有很明显的差别。
3.4　特征指纹峰 在样品中均存在的色谱峰可以认为是该品种
所特有 ,被称为特征指纹峰。特征指纹峰的入选条件 ,首先应该
是全部样品所共有 , 其次是 90%以上样品所共有。
根据特征指纹峰的选择原则 , 确定 10批或 9批药材所共有
的色谱峰为薏苡药材的特征指纹峰。符合以上条件的色谱峰共
有 13个。这 13个特征指纹峰包括了 2个八强峰。这 13个色谱
峰可作为判断薏苡的群体特征峰。其余色谱峰为部分样品所共
·2175·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9 时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期
有 , 可作为不同样品的特征峰。
3.5　相似度 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统A版》对
各批样品色谱图的原始数据文件进行分析 , 以 10批样品生成的
对照谱图(平均值法)作为对照模板 ,计算各色谱图的整体相似
度。 10批被测样品的指纹图谱和测定结果见表 5。
表 5　10批样品的相似度计算结果
样品编号 对照指纹图谱
S1 0.939
S2 0.378
S3 0.908
S4 0.889
S5 0.607
S6 0.944
S7 0.959
S8 0.612
S9 0.937
S10 0.896
从表 5可以看出 , 除 S2、S5、S8外其他 7个批次的药材相似
度均在 0.88以上 , 其他 7个批次甲醇提取部位的相似度较高。
4 　讨论
4.1　样品制备方法及检测条件的考察 分别考察了甲醇回流 、甲
醇超声 、氯仿浸润甲醇超声 、氯仿超声甲醇溶解 、甲醇超声后挥去
甲醇再用甲醇溶解等方法制备样品 ,结果选择甲醇超声后挥去甲
醇再用甲醇溶解的方法制备的供试品 ,峰面积较大 ,且能够较全
面的反映薏苡药材中化学成分的信息 ,效果较好 , 故采用甲醇超
声后挥去甲醇再用甲醇溶解的方法。
本实验采用甲醇 —水梯度洗脱系统 , 分别考察了 0.8, 1.0,
1.2 ml· min-1 3个流速 , 1.0 ml· min-1分离效果较好;分别考
察了 15, 25, 35℃柱温时的分离效果 , 30 ℃柱温时分离效果较
好。
4.2 　检测波长的选择 在按 “ 2.2”项制备样品溶液 ,在 “ 2.1”色
谱分离条件下 , 对薏苡甲醇提取物进行了 PDA200 ～ 400 nm紫外
扫描 , 参考波长—时间—吸收强度三维色谱图 ,并比较不同波长
的色谱图 ,主要考察色谱图丰度 、基线稳定情况 , 最后选择波长为
263 nm。
用建立的分析方法分别测定了 10批不同产地的薏苡药材甲
醇提取部分的指纹图谱 , 并用特定的数字化技术对 HPLC指纹图
谱中的数据进行分析和处理 , 确定了薏苡药材的 12个特征指纹
峰 ,计算了 10批药材的重叠率和相似度。研究结果表明 ,用重叠
率和相似度评价 , 结果基本一致 , 但并不完全相同。通过对各批
药材的指纹图谱测定结果的分析 , 发现不同产地间药材差异很
大 ,提示产地对薏苡药材的质量有很大的影响。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:260.
[ 2 ] 　李杨汉.禾本科作物形态解剖 [ M].上海:上海科技出版社 , 1979:
488.
[ 3 ] 　贾敏如 ,李星炜.中国民族志要 [ M] .北京:中国医药科技出版社 ,
2005:174.
[ 4 ] 　Chang, H.C, Y.C.Huang, W.C.Hung.Antiproliferactiveandchemo-
preventiveeffectsofadlayseedonlungcancerinVitroandinVivo
[J].J.Agric.FoodChem.2003, 51:3565.
收稿日期:2009-12-03;　修订日期:2010-03-03
基金项目:国家自然科学基金(No.J0830412);
大学生创新性实验计划项目
作者简介:王林江(1979 -),男(汉族),河南鹤壁人 ,现任郑州大学化学系
讲师 , 硕士学位 ,主要从事天然药物化学和结构化学研究工作.
＊通讯作者简介:徐　顺(1962-), 男(汉族),河南开封人 , 现任郑州大学
化学系教授 , 博士学位 ,主要从事药物化学和药物分子设计研究工作.
不同产地白英中多糖含量的测定
王林江 ,雷　倩 ,马双良 ,汪晓敏 ,徐　顺＊
(郑州大学 ,河南 郑州　450052)
摘要:目的 测定不同产地白英多糖的含量 , 为白英的质量评价提供理论依据。方法 利用水提醇沉法从白英中提取得到
多糖 , 采用苯酚 -硫酸法测定 3个产地白英的多糖含量。 结果 不同产地白英多糖含量分别为:安徽 1.66%, 浙江
1.84%,江苏 1.62%。结论 苯酚 -硫酸法简便 、快速 、准确 、重现性好 , 适合测定白英中多糖含量 , 不同产地白英多糖的
含量差异不大 , 为白英的质量评价提供理论参考。
关键词:白英;　多糖;　苯酚 -硫酸法
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.09.020
中图分类号:R248.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)09-2176-02
　　白英 SolanumlyratumThunb.系茄科植物 , 全草作为传统中
药已有二千多年的历史 , 最早见于 《本经 》记载 , 多产于浙江 、江
苏 、安徽 ,性味苦 、辛 、微寒。常与他药伍用治疗肺癌 、胃癌 、肝癌
等多种癌症 , 此外还用于治疗感冒发热 、黄疸性肝炎 、胆囊炎 、水
肿等。白英的化学成分研究表明白英中含有黄酮类 、多酚类 、有
机酸类 、多糖类 、倍半萜类 、甾醇类 、香豆素类等多种化合物 [ 1] 。
多糖是构成生命的基本物质之一 , 广泛存在于动物细胞膜 、
植物和微生物细胞壁中 , 是一类天然高分子化合物。随着对多糖
结构的逐步深入了解 , 多糖化合物的生物活性研究得以迅速发
展。多糖在抗肿瘤 、免疫调节 、抗衰老 、降血糖及降血脂等方面显
示出良好的应用前景 [ 2, 3] 。 白英中的多糖具有多种生物活
性 [ 4, 5] , 不仅可以作为广谱免疫促进剂具有调节免疫功能 , 还可
以抗感染 、抗辐射 、抗凝血 、降血糖 、预防和治疗肿瘤等。植物多
糖的含量可以在一定程度上体现该药材免疫作用的强弱。白英
多糖是其主要成分之一 [ 6 , 7] ,但目前有关白英多糖的研究报道较
少 , 不同产地白英多糖的含量比较也未见报道。本实验利用水提
醇沉法从白英中提取得到多糖 ,采用苯酚 -硫酸法 [ 8, 9]显色测定
了 3个不同产地白英中多糖的含量 ,为选取优良药用白英产地提
供依据 , 为白英质量评价做出补充 , 也为其药理作用的进一步研
究提供基础。
1　药材 、试剂与仪器
1.1　药材 安徽产白英购于北京同仁堂 , 浙江和江苏产地的白英
购于郑州市医药公司。经鉴定均为茄属植物白英。
1.2　试剂 无水葡萄糖(对照品)天津化学试剂三厂生产 , 其它
·2176·
时珍国医国药 2010年第 21卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.9