全 文 ：HPLC法测定薏苡非种仁部位薏苡素的含量
张明昶，麻秀萍，徐文芬，田 甜，贾宪生* (贵阳中医学院，贵州贵阳 550002)
摘要 ［目的］建立薏苡非种仁部位中薏苡素的 HPLC测定方法。［方法］采用高效液相色谱法。色谱柱为 Agilent HC-C18色谱柱(4． 6
mm ×250 mm，5 μm);流动相为乙腈 －0． 1%磷酸水(V∶V =25∶75);流速为1． 0 ml /min;柱温为25 ℃;检测波长为232 nm。［结果］薏苡非
种仁部位中薏苡素的含量:根 ＞皮 ＞茎。［结论］该方法准确、专属性强，可为薏苡非种仁部位的综合开发利用提供参考。
关键词 薏苡非种仁部位;薏苡素;含量测定;HPLC
中图分类号 S567． 2 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2010)28 －15586 －02
Determination of Coixol in Roots，Seed Capsules and Stems of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf by HPLC
ZHANG Ming-chang et al (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang，Guizhou 550002)
Abstract ［Objective］To establish a method for the determination of coixol in roots，stems and seed capsules of Coix lacryma-jobi L． var． ma-
yuen(Roman．)Stapf herbs by HPLC． ［Method］HPLC was used and the conditions were as follows:Agilent HC-C18 column (4． 6 mm × 250
mm，5 μm)，mobile phase of acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid (V∶V = 25∶75)，flow rate of 1． 0 ml /min，column temperature of 25 ℃ and
detection wavelength of 232 nm． ［Result］The content of coixol in different parts of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf． were
as follows:root ＞ seed capsule ＞ stem． ［Conclusion］This method is accurate and specific，which is useful for the integrative exploitation of in
roots，seed capsules and stems of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf．
Key words Roots;stems and seed capsules of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf．;Coixol;Content determination;HPLC
基金项目 贵州省教育厅自然科学类重点科研项目(黔教科 2008027)。
作者简介 张明昶(1956 － ) ，男，重庆人，硕士，副教授，从事中药制剂
的研究。* 通讯作者:副主任药师。
收稿日期 2010-06-07
薏苡［Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf］为
禾本科植物。贵州省黔西南州是薏苡栽培主产区之一，现有
栽培面积近 1． 33 hm2，年产薏仁米近 4万 t。薏苡的根、茎及
种皮是薏仁米加工生产的废弃物可否综合开发利用是值得
探讨和研究的课题。薏苡根收载于贵州省中药材、民族药材
质量标准(2003年版) ，为贵州少数民族用药。其具有清热
利湿、健脾和杀虫等功效，用于治疗热淋、血淋、石淋、黄疸、
水肿、白带过多、脚气、风湿痹痛和蛔虫病等症［1］。薏苡根中
含有薏苡素、豆甾醇、β-和 γ-谷甾醇和蛋白质等多种成分，其
中的有效成分 －薏苡素对癌细胞有抑制作用，且对中枢神经
系统有镇静、镇痛的作用［2］，此外还具有保键抗衰美容之功
效［3］。薏苡的茎也为民族用药［4］，但尚未收载于贵州省中药
材、民族药材质量标准(2003 年版) ，种皮的利用途径尚未见
报道。笔者对薏苡根及茎和种皮等非种仁部位薏苡素的含
量进行了定量分析，以期为其进一步的开发及资源的可持续
利用提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象及其预处理。研究对象采自贵州薏苡主产
区晴隆县紫马乡、碧痕乡、大厂乡、沙子乡，经贵阳中医学院
何顺志教授鉴定为禾本科植物薏苡［Coix lacryma-jobi L． var．
ma-yuen(Roman．)Stapf］的干燥根、皮和茎，晒干，备用。
1． 1． 2 主要设备。Agilent1100 型高效液相色谱仪，由美国
安捷伦公司生产;CSF-1B超声波清洗仪，由上海超声波仪器
厂生产。
1． 1． 3 主要试剂。薏苡素对照品 (批号:116K1386，纯度为
99． 59%) ，由德国 Sigma 公司提供;乙腈，为市售色谱纯;磷
酸、丙酮、甲醇，均为市售分析纯;重蒸水。
1． 2 方法
1． 2． 1 色谱条件及系统适用性试验。色谱柱为 Agilent HC-
C18(4． 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为乙腈-0． 1%磷酸水(V
∶V =25∶75) ;流速为 1． 0 ml /min;柱温为 25 ℃;检测波长为
232 nm;进样体积为 10 μl。理论塔板数以薏苡素计算不低
于 5 000;分离度大于 1． 5;拖尾因子为 0． 95。
1． 2． 2 对照品溶液的制备。精密称取薏苡素对照品适量，
加甲醇溶解并制成浓度为 0． 117 0 mg /ml的溶液，备用。
1． 2． 3 供试品溶液的制备［5］。取薏苡根粉末 (过 40 目筛)
约 2 g(精确至 0． 000 1 g)于圆底烧瓶中，加入 50 ml丙酮，索
氏提取至提取溶液近无色，冷却，挥干溶剂，得薏苡素粗提
物。用甲醇溶解粗提物，转移至 25 ml 的容量瓶中，定容至
25 ml，溶液用微孔滤膜(0． 45 μm )滤过，取滤液进样分析。
薏苡皮、茎供试品溶液的制备参照此方法进行。
1． 2． 4 线性关系考察。分别精密吸取薏苡素对照品溶液
(0． 117 0 mg /ml)2、4、6、8、10 μl，按上述色谱条件分别进样，
测定其峰面积，以峰面积(A)为纵坐标，进样量(X)为横坐标
绘制标准曲线。
1． 2． 5 方法学考察。
1． 2． 5． 1 专属性考察。精密吸取薏苡素对照品溶液和薏苡
根供试品溶液各 10 μl，进样分析，采用二极管阵列检测器检
测，得对照品和薏苡根供试品溶液色谱图及薏苡素紫外光
谱图。
1． 2． 5． 2 精密度试验。精密吸取薏苡素对照品溶液 10 μl，
连续进样 6次，测定薏苡素峰面积相对标准偏差(RSD)。
1． 2． 5． 3 稳定性试验。精密称取同一薏苡根供试品溶液，
分别于 0、2、4、6、8、10、12 h 进样分析，每次进样 10 μl，计算
峰面积 RSD值。
1． 2． 5． 4 重复性试验。取薏苡根粉末(过 40目筛) ，按供试
品溶液制备方法制备薏苡根供试品溶液 6份，在上述色谱条
件下进样分析，计算峰面积 RSD值。
1． 2． 5． 5 加样回收率试验。取已知含量的薏苡根供试品粉
末约 1 g，(精确至 0． 000 1 g)6份，分别精密加入薏苡素对照
品溶液各 6 ml，制备供试品溶液，测定薏苡素的平均回收率
及 RSD值。
责任编辑 刘群燕 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2010，38(28):15586 － 15587，15589
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.28.109
1． 2． 6 样品含量测定。按上述方法对不同来源薏苡非种仁
部位样品进行测定，外标法计算薏苡素的含量。
2 结果与分析
2． 1 线性关系考察结果 计算得回归方程为:A =
2 001． 296 86X +11． 985 343 (r = 0． 999 9) ，表明薏苡素在
0. 234 0 ～1． 170 μg质量范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2． 2 方法学考察结果
2． 2． 1 专属性考察结果。对图 1 中(a)、(b)的 UV 光谱图
比较可知，薏苡素对照品和薏苡根供试品溶液中薏苡素的保
留时间一致，且紫外光谱图一致，表明该方法的专属性良好。
注:a －薏苡素对照品 U;b －薏苡根中薏苡素。
Note:a． comparative coixol;b． coixol in the roots of Coix lacryma-jobi．
图 1 薏苡素对照品及薏苡根中薏苡素的 UV光谱
Fig． 1 Ultraviolet spectrum of sample standards of coixol and the roots of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf
2． 2． 2 精密度试验结果。计算薏苡素峰面积的 RSD 值为
0． 96%，表明仪器精密度良好。
2． 2． 3 稳定性试验结果。计算得薏苡素峰面积的 RSD值为
0． 29%，表明薏苡根供试品溶液在 12 h内稳定。
2． 2． 4 重复性试验结果。通过重复性试验计算得薏苡素峰
面积的 RSD值为 0． 33%，表明方法的重复性良好。
2． 2． 5 加样回收率试验结果。计算得薏苡素的平均回收率
为 97． 48%，RSD值为 2． 4%。
2． 3 样品含量测定结果 按上述色谱条件测得薏苡素对
照品及样品色谱图如图 2所示，计算其含量如表 1 所示。由
表 1可知，薏苡非种仁部位中薏苡素的含量薏苡非种仁部位
中薏苡素的含量:根 ＞皮 ＞茎。
注:a．薏苡素对照品;b．薏苡根供试品。
Note:a． control coixol;b． test samples of the roots of Coix lacryma-jobi．
图 2 薏苡根中薏苡素的高效液相色谱图谱
Fig． 2 HPLC of sample standards of coixol and the roots of Coix lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf
表 1 薏苡非种仁部位中薏苡素的含量 (n =3)
Table 1 Contents of coixol in roots，seed capsules and stems of Coix
lacryma-jobi L． var． ma-yuen(Roman．)Stapf
样品来源
Sources
采集时间
Picking
time
薏苡素含量∥mg /g
Content of coixol
根
Root
皮
Seed capsule
茎
Stem
晴隆紫马乡 2009 －10 0． 695 4 0． 003 3 痕量
晴隆碧痕乡 2009 －11 0． 681 2 0． 006 4 痕量
晴隆大厂乡 2009 －10 0． 606 3 0． 008 5 痕量
晴隆沙子乡 2009 －11 0． 583 2 0． 001 3 痕量
3 结论与讨论
(1)按拟定的色谱条件，分别采用 Agilent HC-C18(4． 6
mm × 250 mm，5 μm)和 Diamonsi1 C18(5 μm，4． 0 mm × 250
mm)色谱柱进样分析，Agilent HC-C18柱分离效果优于 Dia-
monsi1 C18柱，故选择 Agilent HC-C18柱进行样品分析。
(2)该试验比较了乙腈 －水(50∶50)、乙腈 －水(20∶80)、
乙腈 －水 (25∶75)、乙腈 － 0． 1%磷酸(50∶50)、乙腈 － 0． 1%
磷酸(20∶80)、乙腈 －0． 1%磷酸(25∶75)这几种流动相对薏苡
素分离的影响。试验表明，以乙腈 － 0． 1%磷酸(25∶75)为流
动相，薏苡素出峰时间合适且分离效果良好，选择作为流动
相条件。
(3)该试验以薏苡根为供试品，比较了超声和回流提取
2种方法，结果表明，索氏回流提取薏苡素含量较高，故被选
(下转第 15589页)
7855138 卷 28 期 张明昶等 HPLC法测定薏苡非种仁部位薏苡素的含量
浓度;W为样品重量。
2 结果与分析
2． 1 乙醇体积分数对姜辣素提取效果的影响 由图 1 可
知，姜辣素提取率随其乙醇体积分数的增大呈现先增大后减
小的趋势，当乙醇体积分数为 60%时提取效果最好。故选择
60%乙醇作为提取溶剂。
图 1 乙醇体积分数对姜辣素提取效果的影响
Fig． 1 The effects of ethanol volume fraction on the extraction
results of gingerol
2． 2 正交试验结果 由表 2 直观分析可知，不同因素影响
干姜中姜辣素的提取率的主次顺序为:回流次数 ＞乙醇用量
＞回流时间，最优组合为 A3B3C3，即加入 5. 5 ml 60%乙醇，
提取 3次，每次 2. 0 h。经方差分析可知，乙醇用量和回流次
数对干姜中姜辣素提取的影响达显著水平，而回流时间的影
响不显著。为缩短生产周期，节约成本，故选择 B2，即提取时
表 2 L9(3
4)正交试验结果
Table 2 The results of L9(3
4)orthogonal test
试验号
No． of test
A B C
D
(空白)
提取率∥%
Extraction rate
1 1 1 1 1 1． 99
2 1 2 2 2 3． 30
3 1 3 3 3 3． 98
4 2 1 2 3 3． 64
5 2 2 3 1 4． 10
6 2 3 1 2 2． 80
7 3 1 3 2 4． 34
8 3 2 1 3 3． 36
9 3 3 2 1 4． 56
k1 3． 090 3． 323 2． 717 3． 563
k2 3． 513 3． 587 3． 833 3． 563
k3 4． 087 3． 780 4． 140 3． 563
R 0． 997 0． 457 1． 423 0
间为 1. 0 h。综直观分析及方差分析可得，干姜中姜辣素的
最佳提取工艺为:加入 5. 5 ml 60% 乙醇提取 3 次，每次
1. 0 h。
2． 3 最佳提取工艺的验证 由表 3 可知，应用优化后工艺
条件进行提取，其平均值比单因素下的提取率高，并且 3 次
提取率基本平行，说明优化后的工艺条件提取效果好，重复
性好。
表 3 最佳提取工艺验证试验结果
Table 3 The results of validation test for the optimum extraction
process
试验号
Test No．
药材取样量∥g
Weight of drug materials
samples
提取率∥%
Extraction
rate
1 5． 004 4． 72
2 5． 002 4． 80
3 4． 999 4． 84
平均值 Average value 5． 002 4． 79
3 结论与讨论
3． 1 关于提取方法的选择 前期试验中，对常用的提取方
法进行了考察，包括回流法、超声法、浸渍法和渗漉法。发现
常用的提取方法中以回流法的提取效率最佳，故该研究在此
基础上进一步对工艺参数进行优化。
3． 2 关于标准品的选择 目前，市面上所售姜辣素对照品
价格昂贵，而香草醛的结构与姜辣素相似，吸光行为一致，但
价格便宜，故该研究选择香草醛作对照标准品，其能够满足
提取工艺优化的需要［4］。
3． 3 关于换算常数的确定 干姜中的姜辣素为 6，8，10-姜
辣素的混合体，其平均分子量为 304． 46，香草醛的分子量为
152． 15，故姜辣素与香草醛的换算系数应为 2． 001
(304． 46 /152． 15)［5］。
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284．
(上接第 15587 页)
择为样品提取方法。
(4)该试验对晴隆县 4个乡镇薏苡非种仁部位样品进行
了测定，薏苡根中薏苡素含量显著高于皮中薏苡素的含量，
茎中薏苡素含量未检出。
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9855138 卷 28 期 傅秀娟等 正交试验法优化干姜中姜辣素的提取工艺