全 文 ：收稿日期:2002-04-30;修订日期:2002-06-13
基金项目:内蒙古自然科学基金项目(990303-2)
作者简介:杨静(1957—), 女 ,内蒙古五原县人 ,实验
师 ,从事牧草化学分析及显微照像技术等工作.
缘毛雀麦各类型同工酶比较分析
杨　静 , 石凤翎 , 张晓丽
(内蒙古农业大学生态环境学院草原系 , 内蒙古　呼和浩特　010019)
摘要:采用聚丙稀酰胺凝胶电泳技术对缘毛雀麦 15 个类型及无芒雀麦 2 个类型的过氧化物
酶和酯酶同工酶进行了分析 ,明确了其酶谱特征及分布 , 并通过酶谱差别探讨了缘毛雀麦类型之
间的差异及这些类型与无芒雀麦的差异 ,为缘毛雀麦各类型的鉴别提供了参考依据。
　　关键词:缘毛雀麦;无芒雀麦;类型;同工酶
　　中图分类号:S543.8　　文献标识码:A　　文章编号:1000-6311(2002)05-0045-03
Study on the Isozymes of Different Types of Bromus ci liatus.YANG Jing ,SHI Feng-
ling ,ZHANG Xiao-li(College of Ecology and Env ironmental Science , Inner Mongolia
Agricultural University , Hohhot 010019 , China):Grassland of China , No.5 , 2002 ,
pp.45 ～ 47.
Abstract:Peroxidase isozymes and esterase isozymes of fifteen types of Bromus ci liatus
and tw o types of Bromus inermis were tested by PAGE (polyacrylamide gel elec-
trophoresis).The features and dist ributions of isozyme zymog rams w ere analyzed for
distinguishing the dif ferences , the dif ferences in zymograms among dif ferent types of
Bromus cil iatus and between these types and tw o types of Bromus inermis were stud-
ied .Reference foundat ion w as provided fo r distinguishing various type of Bromus
ciliatus.
Key words:Bromus cil iatus;Bromus inermis;Type;Isozyme
　　同工酶技术已被广泛利用在农作物 、蔬
菜 、牧草育种研究及品种鉴定上。同工酶是
基因的直接产物 ,是基因表达的结果 ,可作为
遗传标记 。许多试验证明 ,同工酶技术简便 、
灵敏度高 、重现性强 ,测定结果便于观察 、记
录和保存 。缘毛雀麦(Bromus ci liatus)是草
甸草原和典型草原地区很有栽培前途的野生
优良牧草 ,其草质柔嫩 ,营养丰富 ,适口性好 ,
是一种放牧和打草兼用的优良禾本科牧草。
经过几年驯化 ,发现其变异类型较多 ,本研究
旨在利用同工酶技术分析各类型间的遗传差
异及其与无芒雀麦 (Bromus inerm is)种间
的遗传差异。
1　材料和方法
1.1　试验材料
供试材料为 15个缘毛雀麦类型和 2个无
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第 24卷　第 5期　　　　　　　　　　　　中　国　草　地　　　　　　　　　　　　2002 年 9 月
Vol .24　No.5 　 　　　　　　　　　　　Grassland of China　　　　　　　　 　　　　Sep.2002
芒雀麦品种 , 其中缘毛雀麦的 15个类型是在
内蒙古农业大学牧草试验站选育出来的变异
类型。缘毛雀麦不同类型的编号分别为 1、2 、
3 、4 、5 、6 、7 、8 、9 、10 、11 、12、13 、14 、15;产于内蒙
古克旗的野生无芒雀麦编号为 16 ,加拿大卡
尔顿无芒雀麦编号为 17 ,并将它们作为对照。
1.2　样品制备
称取样品 1g ,剪碎 、放入冰浴的研钵中 ,
加入 5ml 已制备好的提取液 ,研磨成匀浆 ,
在 4000 r/min的离心机上离心 5 min ,取上
清液装入小瓶中 ,分别加入 5ml 30%的甘油
放入低温冰箱内保存备用 。
1.3　电泳
将已磨好的样品用微量进样器各取 20μl
(过氧化物酶)和 70μl(酯酶)分别加入已制好
的凝胶样品槽中 , 以 0.5%的溴酚兰作为前
沿指示剂 ,在 0 ～ 4°C的冰箱中电泳 ,当前沿
指示剂接近底板 1 ～ 2.5cm 时停止电泳 ,取
出电泳槽进行剥胶和染色显带处理 。
1.4　数据分析
根据染色酶谱带位置计算 Rf值(Rf 值
=酶带迁移距离/前沿距离),并绘制酶带模
式图 、标定酶带位置及相对含量。
2　结果与分析
2.1　过氧化物酶同工酶
由表 1和图 1可以看出 , 15个类型缘毛
雀麦共表现出 12条过氧化物酶同工酶带 ,其
中 5号 、6号 、7号和 9号酶带共有率很高 ,说
明不同类型材料之间具有较为紧密的亲缘关
系。但同时也可以看出 ,任意两种类型的过
氧化物酶酶谱都不相同 ,表明过氧化物酶酶
谱能够把不同类型的材料较好地区分开来 。
特征酶带是品种或类型鉴别的重要依据 ,无
芒雀麦的两个类型与缘毛雀麦的类型相比 ,
前者具有特征酶带 1条(除 4号具有外 ,其它
缘毛雀麦类型均无),将无芒雀麦与缘毛雀麦
各类型明显区分开来。4号缘毛雀麦与17号
无芒雀麦虽然共有 4条酶带 ,但仍有 5条酶
带不同 ,在基因型表现上两者之间的差异明
显。总之 ,过氧化物酶酶谱分析能够有效地
区分缘毛雀麦的各种类型 。
表 1　缘毛雀麦及无芒雀麦各类型过氧化物酶 Rf值
材料
编号
酶　　带　　及　　其　　Rf　　值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
1 0.15 0.32 0.39 0.54
2 0.15 0.26 0.32 0.36 0.45 0.60
3 0.10 0.23 0.34 0.39 0.46 0.54 0.59
4 0.03 0.08 0.21 0.28 0.34 0.39 0.45 0.52
5 0.27 0.32 0.38 0.44 0.50 0.56
6 0.25 0.30 0.35 0.42 0.48
7 0.25 0.30 0.39 0.45 0.52
8 0.26 0.33 0.38 0.48 0.55
9 0.20 0.29 0.36 0.44 0.51
10 0.16 0.21 0.28 0.38 0.49
11 0.25 0.45
12 0.23 0.27 0.31 0.37 0.46
13 0.21 0.43 0.49
14 0.20 0.27 0.33 0.40 0.50
15 0.24 0.31 0.49 0.55
16 0.04 0.19 0.33 0.48 0.57
17 0.03 0.21 0.28 0.46 0.57
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中国草地　2002 年　第 24卷　第 5期
图 1　缘毛雀麦及无芒雀麦过氧化物酶酶谱模式
2.2　酯酶同工酶
各类型的酯酶同工酶具有 3个显著特征
(图2和表 2):一是不同类型间酶带数差异极
大(最多为 6条 ,最少为 1条);二是平均酶带
数目显著少;三是不同类型间共有酶带数少。
酶带数目差异和共有酶带少这两个特征 ,是类
型或品种鉴定的依据。由酯酶同工酶酶谱分
析认为 ,缘毛雀麦不同类型之间基因型表现存
在明显差异 ,说明用酯酶同工酶对植物品种或
类型加以鉴定能够得到可靠的结果。
图 2　缘毛雀麦不同类型酯酶酶谱模式
3　讨论
品种鉴定的电泳技术多用于进行农作物
表 2　缘毛雀麦各类型酯酶 Rf值
材料编号
酶　　带　　及　　其　　Rf　　值
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0.68
2 0.44 0.56 0.64 0.72 0.78 0.84
3 0.49 0.54 0.69 0.79
4 0.48 0.64
5 0.49 0.57 0.73 0.91
6 0.59 0.79
7 0.58
8 0.54 0.69
9 0.65 0.85
10 0.80
11 0.85 0.78 0.92
12 0.55
13 0.76
14 0.43 0.51
品种鉴定 ,而在牧草品种鉴定方面应用较少 。
近年来 ,随着科学的发展和实验水平的提高 ,
同工酶技术越来越受到重视 ,它可以更准确
地分析实验鉴定品种。用同工酶谱进行牧草
品种鉴定 ,也是一种简便 、准确 、可行的方法 。
在牧草酶谱检索表还不健全的情况下 ,尽管
我们还无法对每一个类型进行正确鉴定 、命
名 ,但至少我们可以把外观相近 、且不是一个
种或一个品种的牧草区别开。这种方法对于
鉴定一些用传统方法难以鉴别的类型或外部
形态相似的类型无疑是有效的 。
酶谱带数的多少 ,可能与不同类型的基
因表达的酶蛋白中种类多少有关 ,酶谱带颜
色的差别 ,可能是不同类型基因表达的酶蛋
白量的不同所致 。试验表明 ,缘毛雀麦各类
型的过氧化物酶和酯酶及其 Rf 值能确定各
类型均不属于同一类型。
参考文献:
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的初步探讨[ J] .中国草业科学 , 1988 ,(5):35～ 38.
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杨　静　石凤翎　张晓丽　缘毛雀麦各类型同工酶比较分析