全 文 ：现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2009, Vol.25, No.5
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了哥王中西瑞香素含量的HPLC法测定

李艳敏，姜建国，曾治平
（华南理工大学轻工与食品学院，广东 广州 510640）
摘要：本文目的是建立了哥王中西瑞香素含量测定方法，为了哥王的质量评价提供依据。方法是采用HPLC法测定其西瑞香素的
含量，色谱柱：Alltech ODS (4.6 mm ×250 mm, 5 μm)；流动相：甲醇-0.2 %磷酸水溶液 (体积比55:45)；流速为1.0 mL·min-1；检测波
长340 nm，柱温为35 ℃；进样量为10 μL。结果表明西瑞香素在4.0~20 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系，其回归方程为
Y=4.3662X-7.5398（r = 0.9997）。平均回收率为99.98 %，RSD=1.70 %(n=5)。可见本法具有操作简便准确，回收率好，精密度、重现
性高，分析快速的优点，可作为了哥王药材的质量控制方法。
关键词：HPLC；了哥王；西瑞香素；含量测定
中图分类号：TS207.3；文献标识码：A；文章篇号:1673-9078(2009)05-0563-03
Determination of Daphnoretin Content in Wikstroemia indica（L.）
C. A. Mey. by HPLC
LI Yan-Min, JIANG Jian-Guo, ZENG Zhi-Ping
（College of Light Industry and Food sciences, South China University of Technology, Guangzhou 510640, China）
Abstract: A novel method for the determination of the content of daphnoretin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey (W.indica ) was
established in this paper. The content of daphnoretin in W.indica was determined by HPLC on an Alltech C_(18) (250 mm×4.6 mm, 5μm)
column using a mixture of methanol and 0.2% phosphoric acid solution (55:45) as mobile phase with the flow rate was 1.0 mL•min-1 and UV
detection wavelength of 340 nm. Column temperature and sample volume were 35 ℃ and 10μL, respectively. Results showed that, within the
linear range of 4.0~20 μg, the regression equation was Y=4.3662X-7.5398（r = 0.9997）. The average recovery and RSD of the method were
98.98 % and 1.70 %, respectively. The method was simple, accurate, sensitive and reproducible, which could be used in the quality control of
daphnoretin in Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey.
Key words: HPLC, Wikstroemia indica, Daphnoretin, Content

中药了哥王为瑞香科植物了哥王Wikstroemia
indica（L.）C.A.Mey.的干燥根或根皮,主产于两广，浙
江、江西也有出产。性昧苦寒、微辛，有毒。功能清
热解毒，化痰散结，消肿止痛。主治风湿性关节炎，
淋巴结炎，瘰疬，痈肿，跌打损伤，具有抑菌、抗病
毒抗炎镇痛、止咳祛痰等作用[1]。本品有毒，对皮肤
有刺激性，所含树脂有强烈的泻下作用[2]。文献报道
含有黄酮、多糖类、酸性树脂、挥发油、甾体类、皂
苷等成分。了哥王含有南荛酚、牛蒡苷元、松脂酚、
山萘酚等多种化学成分[3]还含西瑞香素[4]、芫花素[5]
收稿日期：2008-12-01,
基金项目：国家科技支撑计划资助项目2006BAD27B04
作者简介：李艳敏（1983-），女，在读硕士生，主要从事天然产物化学和生
物分离技术方面的研究工作
通讯作者：姜建国教授，主要从事天然产物化学和生物分离技术方面的研究
工作
等。了哥王超声提取液中有效成分的含量测定目前尚
无研究报道，因此，我们采用高效液相色谱法测定了
哥王超声提取液中西瑞香素的含量，方法如下。
1 仪器与材料
1.1 仪器
Didnex-P680 高 效 液 相 色 谱 仪 ； PDA-100
Photodiote Array 检测器；CQ2250超声波清洗仪(上海
声源仪器有限公司)；FA1104N 电子分析天平（上海
精科天平厂）。
1.2 试药
西瑞香素对照品由广州药物研究所提供，经归一
法标定，含量为99.6%，流动相甲醇为色谱纯（美国
Tedia公司），水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯。
1.3 药材
了哥王购于广州市清平药材市场，产地为广东德
DOI:10.13982/j.mfst.1673-9078.2009.05.031
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庆。由广东药学院天然产物化学系王定勇教授鉴定为
了哥王（Wikstroemia indica（L.）C.A.Mey）的干燥根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为Alltech ODS柱（4. 6 mm ×250 mm, 5
μm,）；流动相：甲醇-0.2 %磷酸溶液（体积比55∶45）；
流速：1.0mL·min-1；检测波长340 nm；进样量10 μL；
柱温：35 ℃；在此条件下供试品中西瑞香素成分能与
其他成分达到较好的分离。对照品、供试品在约10 min
相同时间有一色谱峰（见图1）。


A. 对照品，B.了哥王提取液，1.西瑞香素
图1 对照品、供试品液相色谱图
Fig.1 HPLC chromatogram of the sample and standards
2.2 对照品溶液的制备
精密称取西瑞香素对照品10 mg，置于25 mL的容
量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成0.40
mg•ml-1的对照品溶液，经0.45μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 供试品溶液的制备
取了哥王生药研成细粉，过40目筛，精密称取细
粉约25 g，置具塞锥形瓶中，加入100 mL甲醇，称定
重量，超声处理45 min，放至室温，加溶剂补足质量，
摇匀，滤过，取续滤液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，即
得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取西瑞香素对照品溶液10、15、20、
25、30、35、40、45和50 μL进样测定，按上述色谱条
件测定其峰面积，并以进样质量数X（μg）为横坐标，
峰面积Y为纵坐标，得回归方程为：Y=4.3662X-7.5398
（R=0.9997）。结果表明：西瑞香素对照品在4.0~20 μg
范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
精密吸取同一份对照品溶液10 μL，按上述色谱条
件，重复进样7次，测定供试品溶液中西瑞香素峰面积
值。结果供试品峰面积值的相对标准差RSD=1.07 %
(n=7)，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
精密称取同一批次样品5份，每份各约25 g，按供
试品溶液制备项下方法制备并测定，结果RSD=1.65 %
(n=5)，表明此方法的重复性良好。
2.7 稳定性试验
精密吸取供试品溶液，按上述色谱条件，每隔1 h，
测定供试品溶液中西瑞香素峰面积值，共测定到第6
h，结果RSD=1.93 %，供试品溶液在所测的6 h内较稳
定。
2.8 加样回收率试验
分别精密称取已知含量的样品5份，每份约25 g，
按供试品制备方法制备，分别加入西瑞香素对照品适
量并测定，计算回收率。结果平均回收率99.98 %，
RSD=1.70 %（n=5）（见表1）。
表1 西瑞香素加样回收率试验结果
Table 1 Recovery rate of daphnoretin
样品
样品中含量
/μg
加入量
/μg
测出量
/μg
回收率/%
平均回
收率/%
RSD/%
1 11.18 4.0 14.87 97.96
2 11.34 4.0 15.59 101.63
3 11.28 4.0 15.03 98.36
4 11.15 4.0 15.26 100.73
5 11.32 4.0 15.51 101.24
99.98 1.70
2.9 样品的测定
表2 样品中西瑞香素含量的测定结果
Table 2 Content of daphnoretin in different batches
样品 取样量/g 含量/(μg/g) 平均含量/(μg/g)
1 25.023 0.455
2 25.015 0.448
3 25.120 0.461
4 25.853 0.453
5 25.940 0.442
0.452
取不同批次了哥王的干燥药材 5 份，每份约 25g，
按供试品制备方法制备，分别精密吸取对照品溶液和
供试品溶液，按上述色谱条件测定，结果见表 2。
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3 讨论
3.1 流动相的选择
分别以甲醇-水、甲醇-水-磷酸、乙腈-水、乙腈-
水-磷酸为流动相比较分离效果。其中甲醇-水-磷酸为
流动相时可以达到最佳分离效果，故采用甲醇-水-磷
酸为流动相[6]。
3.2 流动相的pH值对分离的影响
流动相的pH值对分离的影响较大，以甲醇和磷酸
水溶液作为流动相，pH值越低，分离效果越好，考虑
到色谱柱对pH值的耐受性，因此选择体积分数为0.2%
的磷酸水溶液。
3.3 提取方法的选择
分别考察超声提取和回流提取两种方法。结果表
明，超声提取的效果较好，峰面积较大，含量较高，
故选择超声提取方法。
3.4 提取溶剂的选择
精密称取了哥王25 g共3份，分别置于锥形瓶中，
称定重量，加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯各100 mL，超
声处理45 min，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，
取续滤液作为供试品溶液，测得西瑞香素含量分别为
0.45，0.36，0.25 μg /g。甲醇提取物中西瑞香素含量
较高，杂质对分离度干扰小，供试品峰的分离效果好，
故采用甲醇作为提取溶剂。
3.5 提取时间的选择
精密称取了哥王25 g共4份，分别置于锥形瓶中，
各加入甲醇100 mL，称定重量，分别超声处理20、30、
45和60 min，放至室温，加溶剂补足重量，滤过，取
续滤液作为供试品溶液，测得西瑞香素分别为 0.19、
0.24、0.45和0.42 μg/g，故选用45 min提取时间。
4 结论
目前,对了哥王化学成分的研究文献报道的很少。
本实验研究表明西瑞香素为了哥王中可控成分之一,
故将其作为药材中的指标性成分进行含量测定,可有
效地控制了哥王的质量。
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