全 文 ：收稿日期:2014-04-24; 修订日期:2014-09-12
基金项目:辽宁省科技厅科研项目(No． 2011412004) ;
辽宁省高校创新团队支持计划(No． LT 2021018)
作者简介:孙丽霞(1987-) ，女(汉族) ，山东临沂人，沈阳药科大学在读硕
士研究生，主要从事中药药效物质基础与质量控制研究工作．
* 通讯作者简介:孙立新(1967-) ，女(满族) ，辽宁抚顺人，沈阳药科大学
教授，博士学位，主要从事药物质量控制方法及药物代谢动力学研究工
作．
了哥王抗肿瘤成分提取富集工艺的研究
孙丽霞，张辰辰，刘 希，魏 岚，孙立新*
(沈阳药科大学，辽宁 沈阳 110016)
摘要:目的 优选了哥王抗肿瘤成分的提取及富集工艺。方法 分别以浸膏率、半数抑制浓度(IC50)及西瑞香素的含量为
考察指标，采用 L9(3
4)正交设计法，优选了哥王抗肿瘤成分的最佳提取条件;采用单因素考察法，确定了哥王抗肿瘤成分
的最佳富集工艺条件。结果 了哥王中抗肿瘤成分的最佳提取工艺为 75%乙醇，提取 4 次，每次 2 h;了哥王中抗肿瘤成
分的最佳富集工艺:采用 HPD － 100 大孔吸附树脂，药材(g)与树脂(g)比例为 5∶ 7，干法上样，用 11 BV水及 10 BV25%
乙醇洗脱去掉杂质后，以 4 BV75%乙醇洗脱，洗脱流速为 2 BV /h。结论 该实验所采用的方法适合了哥王抗肿瘤成分的
提取富集。
关键词:了哥王; 正交设计; 提取工艺; 单因素考察; 富集工艺
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 01． 025
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)01-0065-03
了哥王 Wikstroemia indica(L．)C． A． Mey．始载于《岭南采药
录》，为瑞香料荛花属植物，具清热解毒、化痰散结、通经利水之
功效。近年来本课题组研究表明了哥王提取物具有抗肿瘤活
性［1］，但了哥王抗肿瘤成分的提取工艺未经优化。本研究通过
正交实验优选了哥王中抗肿瘤成分的最佳提取工艺;并首次采用
大孔吸附树脂对其抗肿瘤活性成分进行富集，为其进一步开发利
用提供参考。
1 材料与仪器
了哥王购于安徽亳州药材市场，经沈阳药科大学路金才教授
鉴定为 Wikstroemia indica (L．)C． A． Mey．;人宫颈癌 HeLa 细胞
由本实验室传代保种;西瑞香素对照品由本实验室自制(采用峰
面积归一化法计算，纯度为 99． 1%)。
DK －98 － II 电热恒温水浴锅(天津市泰斯特仪器有限公
司) ;旋转蒸发器 ＲE － 52AA (上海亚荣仪器厂) ;MK3 型酶标仪
(美国 Thermo) ;BC － JI60S型 CO2 培养箱(上海博讯实业有限公
司医疗设备厂) ;LC － 6A 高效液相色谱仪(日本 SHIMADZU) ;
SPD － 6A紫外检测器(日本 SHIMADZU) ;Sepu3000 色谱工作站
(杭州普惠科技有限公司)。
2 方法与结果
2． 1 出膏率的测定 将约 5 g 药材加入对应体积分数的乙醇浸
泡过夜后，回流提取。热滤，合并滤液，减压浓缩，干燥至恒重，计
算出膏率。
2． 2 半数抑制浓度(IC50)的测定 收集对数生长期的 HeLa 细
胞，PBS洗涤后，用 ＲPMI － 1640 培养基重悬细胞，调整细胞浓度
4 × 104 /ml，加于 96 孔板，每孔 100 μl，埋板 24 h后加药。实验孔
每孔加不同质量浓度了哥王药液各 100 μl，阳性对照孔加 5 －氟
尿嘧啶 100 μl(终浓度为 100 μg /ml) ，阴性对照孔加 100 μl ＲPMI
－ 1640 培养基，每个浓度设 4 个复孔，于 37℃、5% CO2 饱湿条件
下培养 48 h 后，弃去培养液，每孔加 20 μl 5 mg /ml MTT溶液，于
37℃、5% CO2 饱湿继续温育 4 h，弃去各孔内上清液，每孔加 150
μl DMSO，振荡 10 min，使结晶物充分溶解，酶标仪 492 nm 处测
吸光度(A)值。NOSA 2． 30 软件 BLiss法计算 IC50。
2． 3 西瑞香素的含量测定［2］
2． 3． 1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18(250 mm × 4． 6 mm，5
μm) ;流动相为甲醇 － 0． 05%磷酸水溶液(49:51，V /V) ;流速 1． 0
ml·min －1;检测波长 345 nm;柱温 40 ℃ 。
2． 3． 2 对照品溶液的制备 精密称取西瑞香素对照品 4． 75 mg，
置于 50 ml量瓶中，加 70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 95
μg·ml －1储备液。
2． 3． 3 供试品溶液的制备 取正交试验中各个干浸膏约 0． 05 g，
精密称定，用 70%甲醇溶解并转移至 50 ml量瓶中，以 70%甲醇
稀释至刻度，摇匀，经 0． 45 μm 滤膜滤过，即为了哥王提取工艺
优化实验供试品溶液;量取各大孔吸附树脂洗脱液适量，除去溶
剂，用 70%甲醇溶解并转移至 5 ml容量瓶中，以 70%甲醇稀释至
刻度，摇匀，经 0． 45 μm 滤膜滤过，即为大孔吸附树脂富集工艺
优化实验供试品溶液。
2． 3． 4 标准曲线的制备 依次精密量取西瑞香素标准储备液
0． 1，0． 5，1． 0，2． 0，3． 0，4． 0 ml，分别置 10 ml量瓶中，以 70%甲醇
稀释至刻度，摇匀。依次测定峰面积。以西瑞香素标准溶液的浓
度(μg·ml －1)为横坐标(C) ，峰面积为纵坐标(Y)作标准曲线。
得回归方程:Y = 695 47C + 543 2． 9 (r = 0． 999 9，n = 6)
2． 4 了哥王抗肿瘤活性成分提取工艺优化实验
2． 4． 1 正交实验设计 考虑到大量提取的实际条件，在预实验的
基础上，提取溶剂的加入量为药材量的 10 倍，采用 L9(3
4)设计
实验，考察影响了哥王提取的主要因素:乙醇体积分数、提取时
间、提取次数的最佳参数，每个因素选择 3 个水平，因素水平安排
见表 1。
表 1 因素水平
水平
A
乙醇体积分数 /%
B
回流时间 /h
C
提取次数
D
误差
1 50 1 2
2 75 1． 5 3
3 95 2 4
2． 4． 2 统计方法 采用 SPSS11． 5 软件正交设计分析方法。
2． 4． 3 试验结果 正交试验结果见表 2，方差分析见表 3。
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以浸膏率为考察指标，极差值显示，A2B3C3 为佳;方差分析
表明:A因素对浸膏率有显著的影响(P ﹤ 0． 05)。以西瑞香素
为考察指标，极差值显示，A2B3C2 为佳;方差分析表明:A、B、C 因
素均无显著性影响(P ＞ 0． 05)。以 IC50为考察指标，极差值显
示，A3B3C3 为佳;方差分析结果表明:A、B、C 因素均无显著性影
响(P ＞ 0． 05)。综上，确定最佳提取工艺为 A2B3C3，即 75%乙
醇，提取 4 次，每次 2 h。
表 2 L9(34)正交试验设计和结果
试验号 A B C D
浸膏率
/%
西瑞香素
/mg·g － 1
IC50(相当于原药材量)
/mg·ml － 1
1 1 1 1 1 9． 33 1． 950 5． 633
2 1 2 2 2 10． 79 2． 204 6． 723
3 1 3 3 3 11． 63 2． 302 2． 110
4 2 1 2 3 10． 76 2． 297 1． 790
5 2 2 3 1 11． 64 2． 433 2． 579
6 2 3 1 2 11． 12 2． 321 2． 872
7 3 1 3 2 10． 08 1． 807 1． 739
8 3 2 1 3 9． 18 2． 109 3． 227
9 3 3 2 1 10． 06 2． 187 2． 644
浸膏率 k11 10． 58 10． 06 9． 88 10． 34
k12 11． 17 10． 54 10． 54 10． 66
k13 9． 77 10． 94 11． 12 10． 52
Ｒ1 1． 400 0． 880 1． 240 0． 32
西瑞香素 K21 2． 152 2． 018 2． 127 2． 190
K22 2． 350 2． 249 2． 229 2． 111
K23 2． 034 2． 270 2． 181 2． 236
Ｒ2 0． 316 0． 252 0． 102 0． 125
IC50 K31 4． 822 3． 054 3． 911 4． 285
K32 3． 080 4． 843 3． 719 3． 778
K33 2． 537 2． 542 2． 809 2． 376
Ｒ3 2． 285 2． 301 1． 102 1． 909
表 3 方差分析统计结果
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
浸膏率 A 2． 964 2 1． 482 19． 20 *
B 1． 165 2 0． 582 4 7． 544
C 2． 310 2 1． 155 14． 96
D(误差) 0． 154 4 2 0． 077 20
西瑞香素 A 0． 153 0 2 0． 076 52 6． 345
B 0． 117 2 2 0． 058 58 4． 858
C 0． 015 83 2 0． 007 912 0． 656 1
D(误差) 0． 024 12 2 0． 012 06
IC50 A 11． 04 2 4． 276 1． 457
B 4． 193 2 4． 379 1． 492
C 2． 077 2 1． 039 0． 353 8
D(误差) 3． 537 2 2． 935
F0． 05(2，2)=19． 00，* P ＜0． 05
2． 4． 4 验证实验 按确定的最佳工艺，进行 3 次验证试验，结果
见表 4。结果表明，该工艺重现性较好，稳定可行。
表 4 验证试验结果
标号
出膏率
/%
西瑞香素含量
/mg·g － 1
IC50(相当于原药材量)
/mg·ml － 1
IC50(提取物量)
/μg·ml － 1
1 11． 92 2． 442 1． 523 181． 6
2 11． 70 2． 431 1． 799 210． 5
3 11． 75 2． 436 1． 942 228． 2
2． 5 大孔吸附树脂富集工艺条件优化
2． 5． 1 大孔树脂的筛选 取 AB － 8，D101，X － 5，HPD － 100 大孔
树脂各 1 g，置 250 ml锥形瓶中，加入 50 ml 浓度为 0． 2 g /ml(浓
度以相当于原药材的量计)的了哥王提取物溶液，30 ℃条件下振
荡吸附 12 h，充分吸附后过滤，测定滤液中剩余西瑞香素浓度，计
算各树脂的比吸附率。将静态吸附的树脂用蒸馏水洗净后抽干，
加 50 ml 75%乙醇，振荡 12 h，充分解吸后过滤，测定滤液中剩余
西瑞香素浓度，计算各树脂的解吸率。结果见表 1。结果表明，
HPD － 100 型树脂效果较好。
2． 5． 2 上样方法考察 树脂选用 HPD － 100。干法上样:取大孔
树脂 20 g装柱，精密称相当于 10 g药材的 75%乙醇提取物，拌入
10 g树脂中，挥干溶剂，加样于装好的树脂柱中，静置 12 h，依次
用 5 BV 蒸馏水，5 BV50%乙醇，5 BV95% 乙醇洗脱，流速为 2
BV /h，收集水和乙醇洗脱液。湿法上样:取大孔树脂 30 g，装柱
待用。精密称相当于 10 g药材的 75%乙醇提取物，用 10 ml蒸馏
水超声加热溶解并离心，离心液加样于装好的树脂柱中。其它条
件同干法上样。测定洗脱液干膏重及西瑞香素含量。结果见表
6。结果表明干法上样较好。
表 5 四种大孔吸附树脂吸附性能比较 %
树脂型号 比吸附率 解吸率
AB －8 88． 8 98． 6
D101 85． 6 98． 5
HPD － 100 89． 4 99． 1
X － 5 86． 2 96． 2
表 6 上样方法的考察
上样方法 洗脱剂 洗脱物量 / g 出膏率 /% 西瑞香素量 /mg·g － 1
湿法 水 0． 179 7 14． 02 0． 135 5
50%乙醇 0． 088 5 6． 905 2． 056
95%乙醇 0． 119 6 9． 33 5． 854
干法 水 0． 170 1 13． 27 0
50%乙醇 0． 596 1 46． 51 7． 170
95%乙醇 0． 882 0 68． 90 23． 58
2． 5． 3 最佳拌样比 将大孔树脂各 15 g 装柱待用，按树脂(g) :
药材(g)为 1∶ 1，1∶ 1． 5，1∶ 2，1∶ 2． 5 的比例依次精密称取 4 份
了哥王抗肿瘤提取物，各拌入 10 g 树脂中，干法上样，收集水洗
脱液，测定各组干膏重及西瑞香素的含量。结果见表 7。结果表
明，拌样比 1∶ 2 时西瑞香素及其它成分泄漏量较小，最佳拌样比
选 1∶ 2。
2． 5． 4 上样量考察 取大孔树脂 10 g，15 g，18 g，20 g分别装柱，
精密称相当于 20 g药材的 75%乙醇提取物，拌入 10 g 树脂中，干
法上样，收集水洗脱液，测定各组干膏重及西瑞香素的含量。结
果见表 8。结果表明，装柱树脂(g)与药材(g)比例为 18∶ 20 时
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1
能较好地吸附有效成分。
表 7 拌样比结果
树脂:药材量
/g·g － 1
洗脱物量
/g
出膏率
/%
西瑞香素泄漏量
/mg
西瑞香素泄露百分率
/%
1:1 0． 176 4 14． 46 0 0
1:1． 5 0． 268 5 14． 67 0 0
1:2 0． 403 3 16． 53 0． 178 9 0． 376 9
1:2． 5 0． 681 5 22． 35 2． 245 3． 786
表 8 上样量考察结果
树脂量
/ g
洗脱物量
/ g
出膏率
/%
西瑞香素泄漏量
/mg
西瑞香素泄露百分率
/%
10 0． 527 0 21． 60 0． 865 1． 823
15 0． 402 5 16． 50 0． 180 9 0． 381 2
18 0． 370 6 15． 19 0 0
20 0． 358 9 14． 71 0 0
2． 5． 5 乙醇洗脱浓度的考察 精密称相当于 20 g药材的 75%乙
醇提取物，拌入 10 g树脂中，干法上样，以 5 BV蒸馏水洗去杂质
后，分别以 25%、50%、75%、95%的乙醇洗脱，测定出膏率、IC50
及西瑞香素的含量。结果见表 9。结果显示:25%乙醇洗脱物无
抗肿瘤活性。75%与 95%乙醇洗脱液出膏率相近，75%乙醇洗脱
液中西瑞香素含量最高，且抗肿瘤效果较好，故最高洗脱浓度初
步定为 75%乙醇。
表 9 洗脱剂不同浓度的比较
乙醇浓度
/%
出膏率
/%
西瑞香素含量
/mg·g － 1
IC50(相当于原药材量)
/mg·g － 1
25 9． 34 1． 204 －
50 49． 75 7． 071 12． 94
75 69． 95 25． 13 3． 64
95 70． 56 22． 18 6． 65
为进一步富集有效提取物，选取 35%、45%、55%、65%、75%
的乙醇梯度洗脱。结果发现 35%乙醇及 75%乙醇洗脱液有抗肿
瘤活性，故以 25%乙醇为除杂溶剂，收集 25%后至 75%的部分。
2． 5． 6 洗脱流速考察 取大孔吸附树脂 18 g 4 份，分别装柱，采
用干法上样法，分别以 1、2、3、4 BV /h 流速，用 5 BV75%乙醇洗
脱，测定出膏率及干膏中西瑞香素的含量，结果见表 10。结果表
明最佳流速为 2 BV /h。
表 10 冼脱流速考察结果
流速 /BV·h －1 出膏率 /%
西瑞香素量
/mg·g － 1
1 54． 16 30． 18
2 55． 37 31． 03
3 47． 30 30． 30
4 42． 60 31． 14
2． 5． 7 水及除杂溶剂洗脱体积考察 取 HPD － 100 大孔树脂 18
g装柱待用，采用干法上样法，按流速为 2 BV /h，依次以水，25%
乙醇洗脱。
水用量:上样静置过夜后，用蒸馏水洗脱，每 BV(56 ml)为 1
流份，取每 1 流份 1ml，以 Molish 反应检测，第 12 流份开始呈阴
性，且无西瑞香素泄露，故确定水洗 11 个保留体积。
25%乙醇用量:每 BV(56 ml)为 1 个考察单位，将洗脱液回
收溶剂至干，测干膏重。结果见图 1。当洗至 11 BV时，干膏量无
明显增加，故以 10 BV 25%乙醇除杂。
图 1 25%乙醇洗脱用量考察
2． 5． 8 乙醇洗脱体积的考察 取大孔吸附树脂 18 g装柱，采用干
法上样法，以 75%乙醇洗脱，每 1 BV为 1 个考察单位，收集 6 份，
测定累计出膏率和西瑞香素累计转移率。结果见表 11。本着节
约的原则，确定以 4 BV乙醇溶液洗脱。
表 11 乙醇洗脱体积考察
乙醇洗脱体
积 /BV
乙醇洗脱
物量 /g
累计出
膏率 /%
洗脱物中西瑞香
素含量 /mg·g － 1
西瑞香素累计
转移率 /%
1 0． 637 3 26． 12 3． 577 7． 536
2 0． 549 9 48． 65 16． 25 41． 77
3 0． 099 8 52． 74 10． 59 64． 07
4 0． 048 9 54． 75 9． 12 83． 3
5 0． 018 5 55． 50 2． 132 87． 8
6 0． 014 0 56． 08 0． 872 89． 6
2． 5． 9 验证实验 对优选的方案即 HPD － 100 型大孔吸附树脂，
药材(g)与树脂(g)比例为 5 ∶ 7，干法上样，用 11 BV 水及 10
BV25%乙醇洗脱后，以 4 BV75%乙醇洗脱，洗脱流速为 2 BV /h，
进行 3 次验证实验。结果见表 12。实验结果重复性较好，表明该
工艺条件稳定可行。
表 12 验证试验结果
标号
出膏率
/%
富集物中西瑞
素含量 /mg·g －1
西瑞香素
转移率 /%
IC50(富集物量)
/μg·ml －1
IC50(相当于原药材量)
/mg·ml －1
1 56． 00 30． 04 81． 2 90． 8 1． 329
2 57． 57 29． 32 81． 4 105． 6 1． 504
3 55． 96 28． 64 77． 31 110． 2 1． 614
3 讨论
乙醇价格低，无毒，穿透力强，故本实验采用乙醇为提取溶
剂。
西瑞香素在了哥王中含量较大［3］，有抗肿瘤［4］作用，对 HeLa
细胞有良好的抑制作用［5］，因此本实验选取西瑞香素含量为考察
提取工艺的指标之一，从质量控制方面考察提取工艺的合理性。
本实验以 IC50作为考察提取工艺的指标之一，从药效学方面考察
工艺的合理性，更直观、更全面地反映了结果的可靠性。实验结
果显示，西瑞香素含量与 IC50无直接相关性，说明了哥王提取物
成分复杂，可能是多种成分协调发挥抗肿瘤作用。
大孔吸附树脂多采用液体上样，但本实验中的了哥王抗肿瘤
成分水溶性较差，所以在实验中采用干法上样来进一步富集有效
成分。
原药材中西瑞香素含量为 2． 436 mg·g －1，提取物中西瑞香
素平均含量为 20． 66 mg·g －1，富集物中西瑞香素含量平均值为
29． 33 mg·g －1。有效成分含量测定结果提示:经过提取纯化处
理后，有效成分含量提高。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期
原药材的 IC50值为 1． 755 mg·ml
－1，提取物的 IC50平均值为
206． 8 μg·ml －1，富集物的 IC50平均值为 102． 2 μg·ml
－1，体外药
效试验结果提示:经提取纯化处理后，了哥王药效没有减弱，但实
际用量减少了，达到富集除杂的目的。
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收稿日期:2013-12-22; 修订日期:2014-08-19
基金项目:广东省中医药局科研基金(No． 2008195;No． 20131242)
作者简介:罗 丹(1988-) ，女(汉族) ，贵州毕节人，南方医科大学中医药
学院在读硕士研究生，学士学位，主要从事温病湿热病证的临床与基础研
究工作．
* 通讯作者简介:文小敏(1964-) ，男(汉族) ，湖南邵阳人，南方医科大学
中医药学院教授，主任医师，硕士研究生导师，博士学位，主要从事温病湿
热病证的临床与基础研究工作．
三仁汤对脾胃湿热证大鼠
IL-2、胸腺和脾脏指数影响的实验研究
罗 丹1，李云鹏1，马文校1，武凯歌1，洪 冰2，钱益啸1，文小敏1*
(1．南方医科大学中医药学院，广东 广州 510515; 2．南方医科大学中西医结合医院，广东 广州 510315)
摘要:目的 探讨三仁汤对脾胃湿热证大鼠 IL － 2、胸腺和脾脏指数的影响作用。方法 将 50 只雄性Wistar大鼠随机分为
正常组、模型组、三仁汤(高、中、低剂量)组，利用复合因素复制脾胃湿热证动物模型。通过称量法计算胸腺和脾脏指数，
同时采用放射免疫法检测大鼠血清白介素 2(IL － 2)的水平。结果 造模成功后的各模型组大鼠胸腺、脾脏指数及血清 IL
－ 2 降低，三仁汤(高、中、低剂量)组可以升高模型组大鼠上述指标的水平(P ＜ 0． 05) ;且以中剂量组效果最好。结论 复
合因素造模可以使脾胃湿热证大鼠免疫功能发生异常改变，三仁汤可以调节脾胃湿热证大鼠免疫功能，这可能是清热祛
湿的机理之一。
关键词:三仁汤; 脾胃湿热证; IL － 2
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 01． 026
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)01-0068-02
脾胃湿热证是临床常见病证，而广东地处岭南，其特殊地理
位置及气候因素使人们更是易于感受湿热病邪而发病，且症状复
杂，病程较久，病势缠绵难愈，在发生发展过程中，各种致病因素
的刺激会使躯体做出应激反应，而导致神经内分泌免疫功能
(Neuroendocrine Immune Functions，NEI)发生反应。温病大家吴
鞠通在临床实践中创制出用来治疗湿热初起的经典名方“三仁
汤”，此方能宣上、畅中、渗下，具清利湿热、宣畅三焦气机之功。
本课题组在前期工作中，通过复合因素(外部湿热环境、肥甘饮
食及微生物)复制出脾胃湿热证大鼠模型，发现三仁汤对脾胃湿
热证大鼠神经内分泌相关指标有影响［1］，而本实验拟从免疫指
标方面探讨三仁汤的作用，为进一步中药开发和临床应用提供实
验依据。
1 材料与仪器
1． 1 三仁汤药物组成 参照《温病条辨》原组成比例，法半夏、苦
杏仁各 15 g，生薏苡仁、飞滑石各 18 g，白蔻仁、川厚朴、白通草、
淡竹叶各 6 g。以上药物购自南方医院中药房。各药物在水中浸
泡 30 min，加水量约为药量 8 倍，煎煮 3 次，煎煮中用冷凝管收集
蒸汽中挥发的药物成分，将 3 次药汁混合，离心取澄清药汁，依据
《中药药理研究方法学》中人与大鼠剂量换算公式(大鼠按每只
200 g体质量计算)［2］，浓缩配制成 0． 41，0． 82，1． 64 g /ml浓度药
液，冰箱保存备用。
1． 2 高糖高脂饲料 普通饲料中混入 12%猪油，8%蜂蜜加工而
成，由南方医科大学实验动物中心提供。
1． 3 实验动物 SPF 级雄性 Wistar 大鼠 50 只，购自南方医科大
学实验动物中心，合格证号［SCXK(粤)2006 － 0015］，体质量
(200 ± 20)g，随机分为 5 组，每组 10 只。
1． 4 菌种及试剂 侵袭性大肠杆菌，浓度为 109 /ml，由南方医科
大学微生物实验室提供。IL － 2 放免试剂盒均购自北京普尔伟
业生物科技有限公司。
1． 5 实验仪器 AvantiTM230 型超速冷冻离心机(美国 BECK-
MAN公司) ;PL303 型电子天平(梅特勒托利多仪器〈上海〉有限
公司) ;SN － 695 型放射免疫 r计数测量系统(上海核辅光电仪器
有限公司) ;南方医科大学公共卫生热带学院仿真模拟气候仓
(可以调节温度、湿度、风速等)。
2 方法
2． 1 动物分组 将 50 只 SPF 级雄性 Wistar 大鼠随机分成 5 组，
分别为正常对照组、脾胃湿热证组、三仁汤(低剂量、中剂量、高
剂量)组，每组 10 只。造模组动物均于造模前禁食 12 h，自由饮
水。
2． 2 造模方法 ①正常对照组:在温度 20 ～ 28 ℃，相对湿度
50% ～60%的环境下，以普通混合饲料喂养。②脾胃湿热证大鼠
模型:肥甘饮食饲料(在普通饲料中混入 12%猪油，8%蜂蜜)喂
养 10 d，然后置于仿真模拟气候仓［环境设置为:温度(33 ± 2)
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时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 1