全 文 ：照山白黄酮类化学成分的研究＊
杨秀岭 1, 2 ,袁志芳 1 ,许慧君 1 ,范丽芳1 ,霍长虹 1 ,张兰桐 1＊＊
(1.河北医科大学 药学院 ,石家庄 050017;2.河北医科大学 第二医院 , 石家庄 050000)
摘要 目的:对照山白中的黄酮类成分进行研究。方法:用乙醇提取 ,聚酰胺柱 、硅胶色谱柱 、制备液相分离 , 以光谱数据鉴定
结构。结果:鉴定了 6个黄酮类化合物 ,分别为槲皮素(Ⅰ )、山柰酚(Ⅱ)、槲皮素 -3 -O-β -D-葡萄糖苷(Ⅲ)、金丝桃苷
(Ⅳ)、槲皮苷(Ⅴ)和杨梅苷(Ⅵ )。结论:化合物 Ⅲ 、Ⅴ 、Ⅵ 为首次从该植物中分离得到。
关键词:照山白;黄酮类成分
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254-1793(2010)09-1750-03
StudiesontheflavonoidcompoundsofRhododendrommicranthum＊
YANGXiu-ling1, 2 , YUANZhi-fang1 , XUHui-jun1 , FANLi-fang1 ,
HUOChang-hong1 , ZHANGLan-tong1＊＊
(1.SchoolofPharmacy, HebeiMedicalUniversity, Shijiazhuang050017, China;
2.TheSecondAffiliatedHospitalofHebeiMedicalUniversity, Shijiazhuang050000, China)
Abstract Objective:ToinvestigatetheflavonoidconstituentsofRhododendrommicranthum.Methods:Various
chromatographictechniqueswereemployedforisolationandpurificationoftheconstituents.Thechemicalcompo-
nentswereisolatedbypreparativeHPLC, polyamideandsilicagelcolumnchromatography.Thechemicalstructures
wereelucidatedonthebasisofphysic-chemicalpropertiesandspectraldata.Results:Sixcompoundswereisola-
tedandidentified:quercetin(Ⅰ ), kaempferol(Ⅱ), quercetin-3-O-β -D-glucosides(Ⅲ), hyperin(Ⅳ),
quercitroside(Ⅴ)andmyricitrin(Ⅵ ).Conclusion:CompoundsⅢ , ⅤandⅥ areobtainedfromthisplantforthe
firsttime.
Keywords:Rhododendrommicranthum;flavonoid
照山白为杜鹃花科植物照山白 Rhododendrom
micranthumTurcz的枝叶 ,广泛分布于东北各省及河
北 、甘肃 、山东 、四川等省 。具有祛痰止咳 、止痛 、降
血压等功效 ,主要用于治疗急慢性支气管炎 、哮喘 、
痢疾 、痛经 、产后周身疼痛[ 1] 。实验研究表明 ,照山
白总黄酮有较好的抗炎 、镇痛和治疗前列腺增生的
作用[ 2] 。为了进一步探讨有效成分 ,本文对黄酮类
成分进行了研究 ,从中分离得到 6个单体化合物 ,分
别为槲皮素(Ⅰ )、山柰酚(Ⅱ)、槲皮素 -3 -O-
β -D-葡萄糖苷(Ⅲ)、金丝桃苷(Ⅳ)、槲皮苷(Ⅴ)
和杨梅苷(Ⅵ ),其中化合物Ⅲ 、Ⅴ、Ⅵ为首次从该植
物中分离得到。
1 仪器与材料
X-4显微熔点仪(上海精密科学仪器有限公
司 ,温度计未校正);美国 Finnigan公司 LCQ型液
相色谱 -离子阱质谱联用仪:配有电喷雾离子化
源(ESI)、直接进样用注射泵和 250 μL进样器以
及 LCQ数据处理系统;Agilent1100 system(紫外光
电二极管阵列检测器 );Waters高效液相色谱仪
(515泵 , 2996检测器);BrukerAVANCEDRX-
500核磁共振仪;对照品金丝桃苷 、槲皮素和山柰
酚均购自中国药品生物制品检定所;硅胶 (200 ～
300目 ,青岛海洋化工厂);聚酰胺(30 ～ 60目 , 浙
江台州市路桥四甲生化塑料厂);照山白药材购于
石家庄市乐仁堂 ,经河北医科大学药学院聂凤禔
教授鉴定 。
2 提取与分离
取干燥的照山白叶 1 kg,加 70%乙醇 8 L浸泡
—1750— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
＊
＊＊
河北省中医药管理局指导性科研项目(05174)
通讯作者 Tel:(0311)86266419;E-mail:zhanglantong@ 263.net
1 h,回流提取 3次(每次 3 h),提取液合并 ,加等量
的水放置沉淀过夜 , 抽滤 , 减压浓缩 , 得浸膏
127.5g,将浸膏用 100 mL水分散 ,上聚酰胺柱(柱
子规格 120 cm×10cm,湿法装柱),先用水洗至无梫
木毒素反应 , 然后再分别用 10%乙醇 、 30%乙醇 、
50%乙醇和 95%乙醇洗脱 ,分别洗至颜色变浅或无
色 ,收集洗脱液。 50%乙醇和 95%乙醇的洗脱液上
硅胶柱(根据样品量来确定柱子的大小 ,样品与硅
胶的比例为 1∶70), 以氯仿 -甲醇梯度洗脱
(100∶0※98∶2※ 95∶5※ 90∶10※85∶15※80∶20),
TLC跟踪监测 ,相同部分合并 、浓缩 ,再以甲醇溶解 ,
制备液相进一步分离 [色谱柱:μ-BondapackC18柱
(300mm×7.8 mm, 10 μm);流动相:乙腈 (A)-
1%醋酸溶液(B),梯度洗脱(0 min, 15% A;45 min,
20% A;55 min, 30% A;80 min, 15% A);流速:
2.0mL· min-1;检测波长:355 nm;柱温:30 ℃,进
样量:50 μL] ,得到化合物 Ⅰ(22 mg)、Ⅱ(16 mg);
10%乙醇和 30%乙醇的洗脱液减压回收溶剂 ,甲醇
重结晶 ,得化合物Ⅳ ,母液蒸干 ,硅胶柱色谱 ,以氯
仿 -甲醇梯度洗脱(100∶0※95∶5※90∶10※85∶15※
80∶20※75∶25※70∶30), TLC跟踪监测 ,相同部分合
并 、浓缩 ,再以甲醇溶解 ,制备液相进一步分离 (色
谱条件同上),得化合物 Ⅲ(45mg)、Ⅳ(200 mg)、Ⅴ
(110mg)和Ⅵ (300mg)。化合物Ⅰ～Ⅵ的结构式见图 1。
图 1 化合物Ⅰ ～ Ⅵ 的结构式
Fig1 StructuresofcompoundsⅠ -Ⅵ
3 结构鉴定
化合物 Ⅰ :黄色粉末 , mp314 ～ 316 ℃,盐酸 -
镁粉反应显红色 , Molish反应阴性。 UVλ为
253.6 nm、366.8 nm(甲醇), LC/ESI-MSm/z303
[ M++H] ,其薄层色谱显示与槲皮素对照品 Rf值
相同 ,紫外灯下显示相同的颜色 ,高效液相色谱测定
保留时间相同 ,与槲皮素对照品的混合熔点不下降。
故鉴定化合物 Ⅰ为槲皮素(quercetin)。
化合物Ⅱ:黄色结晶 , mp275 ～ 277℃。盐酸 -
镁粉反应呈橙红色 。 Molish反应阴性。 UVλ为
260.7 nm、362.2 nm(甲醇), LC/ESI-MSm/z287
[ M++H] ,其薄层色谱显示与山柰酚对照品 Rf值
相同 ,紫外灯下显示相同的颜色 , HPLC测定保留时
间相同 ,故鉴定化合物Ⅱ为山柰酚(kaempferol)。
化合物Ⅲ:黄色粉末 , mp228 ～ 230℃,盐酸 -镁
粉反应阳性 , Molish反应阳性。 UVλ为 253.6 nm、
357.4 nm(甲醇);LC/ESI-MSm/z465[ M++H] ,
二级质谱 303(苷元 +H);13 C-NMR(CD3 OD)δ:
158.0(C-2), 137.0(C-3), 177.0(C-4), 162.1
(C-5), 99.4(C-6), 165.5(C-7), 94.8(C-8),
157.9(C-9), 104.4(C-10), 121.7(C-1′),
115.9(C-2′), 145.9(C-3′), 151.4(C-4′),
116.2(C-5′), 121.7(C-6′), 102.3(C-1″), 74.6
(C-2″), 77.6(C-3″), 71.9(C-4″), 77.7(C-
5″), 60.9(C-6″)。以上碳谱数据与文献 [ 3]基本
一致 ,故确定化合物 Ⅲ为槲皮素 -3-O-β -D-葡
萄糖苷(quercetin-3-O-β -D-glucosides)。
化合物Ⅳ:黄色粉末 , mp228 ～ 230 ℃,盐酸 -镁
粉反应呈红色 , Molish反应阳性。UVλ为253.6nm、
355.1 nm(甲醇), LC/ESI-MSm/z465[ M+ +H] ,
二级质谱 m/z303(苷元 +H),其薄层色谱显示与金
丝桃苷对照品 Rf值相同 ,紫外灯下显示相同的颜色
斑点 , HPLC测定保留时间相同 ,与金丝桃苷对照品
混合熔点基本不变 ,确定化合物Ⅳ为金丝桃苷(hy-
perin)。
化合物Ⅴ:黄色针晶 , mp184 ～ 185℃,盐酸 -镁
粉反应显红色 , Molish反应阳性。UVλ为 254.8 nm、
347.9 nm(甲醇);LC/ESI-MSm/z449[ M++H] ,二
级质谱 m/z303(苷元 +H);1H-NMR(CD3OD)δ:
7.14(6′-H), 7.03(2′-H), 6.72(5′-H), 5.96(6-
H), 6.14(8-H), 5.09(1″-H), 0.68(CH3);13C-
NMR(CD3OD)δ:158.2(C-2), 135.9(C-3), 179.3
—1751—药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)
(C-4), 162.7(C-5), 100.0(C-6), 165.7(C-
7), 94.9(C-8), 159.2(C-9), 105.7(C-10),
122.8(C-1′), 116.5(C-2′), 146.1(C-3′),
149.5(C-4′), 117.1(C-5′), 122.8(C-6′),
103.2(C-1″), 71.8(C-2″), 71.9(C-3″), 73.0
(C-4″), 71.7(C-5″), 17.6(C-6″)。以上数据与
文献 [ 4]对照 ,确认其结构为槲皮素 -3 -O-α-
L-鼠李糖苷即槲皮苷(quercetin-3-O-α-L-
rhamnopyranoside, quercitroside)。
化合物 Ⅵ :黄色粉末 , mp180 ～ 182 ℃,盐酸 -
镁粉反应显红色 , Molish反应阳性 。 UVλ为 259.5
nm、350.3 nm(甲醇);LC/ESI-MSm/z465[ M+ +
H] ,二级质谱 m/z319(苷元 +H);1H-NMR(DM-
SO)δ:6.71(1H, s, 6-H), 6.91(1H, s, 8-H), 7.43
(2H, s, 2′, 6′-H), 5.72(1H, s, 1″-H), 4.53(2″-
H), 4.16(3″-H), 3.68(4″-H), 3.96(5″-H),
1.37(1H, d, J=6.0 Hz, 6″-H);13C-NMR(DMSO)
157.0(C-2), 134.2(C-3), 177.6(C-4), 161.2
(C-5), 99.2(C-6), 166.3(C-7), 93.8(C-8),
156.5(C-9), 103.3(C-10), 119.5(C-1′),
108.1(C-2′), 146.2(C-3′), 137.1(C-4′),
146.2(C-5′), 108.1(C-6′), 102.0(C-1″), 70.1
(C-2″), 70.4(C-3″), 71.4(C-4″), 70.5(C-
5″), 17.6(C-6″)。以上数据与文献 [ 4]报道的杨
梅素 -3-O-鼠李糖苷的数据基本一致 ,故鉴定化
合物Ⅴ为杨梅苷(myricitrin)。
参考文献
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Peng(王鹏).Studyonthechemicalconstituentsofthestemandleav-
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2 YANGXiu-ling(杨秀岭), YUANZhi-fang(袁志芳), ZHANG
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Rhododendrommicranthum(照山白总黄酮的药理作用研究).Chin
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(本文于 2009年 7月 6日修改回)
李云龙所长会见新加坡卫生科学局林建伟局长一行
受国家食品药品监督管理局委托 , 2010年 8月 17日下午 ,中国药品生物制品检定所所长李云龙会
见了新加坡卫生科学局局长林建伟一行四人 。
会见结束后 ,林建伟局长一行参观了中药室及中药标本馆 ,并就相关问题与实验室技术人员进行了
交流 。
国家食品药品监督管理局国际合作司陈星宇副巡视员等 ,中国药品生物制品检定所副所长王军志
以及相关部门负责人参加了此次会见。
详见 www.nicpbp.org.cn
—1752— 药物分析杂志 ChinJPharmAnal2010, 30(9)