全 文 :基金项目:国家科技支撑计划项目(2012BA130B02)
作者简介:艾力克木·吐尔逊(1984-),男(维吾尔族),在读硕士,研究方向:新疆特色维药的开发与利用研究。
通信作者:热娜·卡斯木,女(维吾尔族),教授,博士生导师 ,研究方向:新疆特色维药的开发与利用研究,E-mail:renakasimu@vip.sina.com。
·维医维药·
维药铁力木的生药学特征及其不同萃取部位
抗血小板聚集作用研究
艾力克木·吐尔逊1,热娜·卡斯木1,王金辉1,木太力普·吐逊2
(1新疆医科大学药学院,乌鲁木齐 830011;2乌鲁木齐市中医医院,乌鲁木齐 830000)
摘要:目的 研究维药铁力木的生药学特征及其不同萃取部位的抗血小板聚集作用,为其鉴别和应用提供参
考依据。方法 采用性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等方法对维药铁力木进行生药学鉴定;以体外抗血小板聚集
实验(比浊法)评价铁力木不同萃取部位的抗血小板聚集作用。结果 铁力木粉末中散在花粉粒、草酸钙簇晶、螺
纹导管、非腺毛,数量较多,可见平轴式气孔、腺毛、方形或多边形的薄壁细胞。维药铁力木中可能含有甾体类、油
脂类、酚类、蒽醌类、黄酮类、强心苷类、香豆素类化合物;展开系统为石油醚-乙酸乙酯-丙酮-冰醋酸(10∶1∶1∶
0.2)的高效硅胶G板上齐墩果酸与铁力木样品在相同的位置出现了明显的斑点 (Rf =0.48);体外抗血小板聚集
实验结果显示,铁力木石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水萃取部位均有不同程度的抑制血小板聚集作用,其中正丁醇
萃取部位的作用最强。结论 本研究初步确定了维药铁力木的粉末特征和可能含有的化学成分及其齐墩果酸薄
层色谱鉴别方法,其不同萃取部位均有抗血小板聚集作用,为维药铁力木的鉴定及进一步开发利用提供了参考
依据。
关键词:维药铁力木;显微鉴别;理化鉴别;抗血小板聚集
中图分类号:R29 文献标识码:A 文章编号:1009-5551(2014)06-0678-04
doi:10.3969/j.issn.1009-5551.2014.06.006
A study on Pharmacognostical characteristics of mesua ferrea
Linn and its anti-platalet aggregation effect from different parts
Alikemu Tuerxun1,Rena Kasimu1,WANG Jinhui 1,Mutailifu Tuxun2
(1 College of Pharmacy,Xinjiang Medical University,Urumqi 830011,China;
2 Urumqi Hospital of Traditional Chinese Medicine,Urumqi 830000,China)
Abstract:Objective To study the pharmacognostic characteristics of mesua ferrea Linn and evaluate its
anti-platelet aggregation effect from different parts,and to provide a reference for the identification and ap-
plication.Methods The morphological,microscopic identification and physical-chemical identification
were employed in the pharmacognostical study of mesua ferrea Linn.The effect of vitro anti-platelet ag-
gregation was evaluated by turbidimetry.Results The mesua ferrea Linn powder can be seen in non-glan-
dular hairs,spiral vessels.The mesua ferrea Linn.probably contained steroids,fats and oils,phenols,
anthraquinone,flavonoids,cardiac glycosides,coumarins.The extending system is petroleum ether-ethyl
acetate-acetone-acetic acid(10∶1∶1∶0.2)as developing solvent.Mesua Ferreasample and oleanolic acid
shows same characteristics on TLC(Rf=0.48.The vitro experiment of platelet aggregation showed that
mesua ferrea Linn.petroleum ether,ethyl acetate,n-butanol and water extraction sites have different lev-
els of inhibition of platelet aggregation,and the level of inhibition in the extract from n-butanol is the high-
est.Conclusion The study provides a reference for the identification and application of mesua ferrea Linn.
第37卷 第6期 新 疆 医 科 大 学 学 报 Vol.37 No.6
2014年6月 Journal of Xinjiang Medical University Jun.2014
Key words:mesua ferrea Linn.;microscopic identification;physical and chemical identification;anti-platelet aggregation
铁力木是藤黄科铁力木属植物铁力木 (mesua
ferrea Linn.)的干燥花蕾,分布于中国云南、广西、
广东至热带北缘、印度、缅甸、斯里兰卡、印尼、泰国
及马来西亚等地,是维吾尔医常用药材,其维吾尔名
为那尔米西克,常用于湿寒性或黏液质性疾病,如寒
性心虚、抑郁症、神经衰弱及湿性胃虚等[1]。铁力木
不仅被维吾尔医药记载,还被国内的傣族医药和国
外的巴基斯坦、泰国等国家的传统医药中记载。目
前国内外对铁力木的研究不多见,国内主要研究了
铁力木种子的化学成分和活性、铁力木树的引种和
栽培等方面,国外一些学者从铁力木中分离得到了
几种香豆素类化合物[2]。研究表明,铁力木具有较
强的抗癌和抗氧化活性[3-5]。但尚未见有关维药铁
力木的生药学研究及其抗血小板聚集作用的研究报
道,因此本研究维药铁力木生药学特征及其不同萃
取部位的抗血小板聚集作用,旨在为其鉴别和应用
提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 仪器 薄层色谱自动点样仪(Linomat5瑞士
CAMAG公司),BC-2300准全自动三分群血液细胞
分析仪(深州迈瑞生物医疗电子股份有限公司),
490-4D 血小板凝聚仪 (CHRONO-LOG,USA),
TDL-5A离心机(上海菲恰尔分析仪器有限公司),
薄层色谱摄像仪(Reprostar3瑞士 CAMAG公司),
OLYMPOSBH-2显微镜及莱卡数码显微镜,SAR-
TORIUS AI104电子天平。
1.2 材料 药材铁力木由新疆维吾尔自治区维吾
尔医院药房提供,经新疆维吾尔自治区维吾尔医院
制剂中心质检部鉴定为藤黄科铁力木属植物铁力木
(mesua ferrea Linn.)的 干 燥 花 蕾 (批 号:
201210418),薄层用硅胶 G板(青岛海洋化工集团
公司),齐墩果酸标准品(中国食品药品检定研究院,
批号:110709-201206),凝血酶(CASRN9002-04-4,
USA,批号:T4648),实验中所用试剂均为分析纯。
1.3 实验动物 SPF级新西兰种兔,体质量为(1.
8±0.5)kg,均为雄性,由新疆医科大学实验动物中
心提供[生产许可证:SCXK(新)2011-0004]。
1.4 性状鉴别 取性状完整的药材并进行观察、照
相及描述。
1.5 显微鉴别[6] 取1g药材用研钵研成粉末,经
80目筛,分别用水合氯醛和蒸馏水处理制成临时装
片,于显微镜下观察和视频采集。
1.6 理化鉴别 取60g药材粉末分成3份,分别
用100mL 95%乙醇、100mL石油醚和100mL蒸
馏水回流提取2h,过滤,浓缩至20mL,按照文献[7
-8],系统地配置和使用化学试剂,观察反应结果,
初步鉴别铁力木可能含有的化学成分。
1.7 薄层鉴别 取7mg齐墩果酸对照品加甲醇
定容至10mL,配成0.7mg/mL的齐墩果酸对照溶
液,取1g药材加甲醇20mL回流提取30min,滤液
浓缩至2mL,此液为供试品溶液。利用高效薄层色
谱技术将供试品和对照品各2μL 点在5cm×
10cm羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G高效薄层
板上,展开条件进行筛选,在选择好的展开条件下进
行展开,取出晾干,喷完显色剂后在105℃的薄层加
热器上加热数分钟,显色后在可见光和紫外灯
(365nm)下观察斑点颜色和位置。
1.8 测定抗血小板活性 (1)供试品溶液的制备:
称取粉粹过的铁力木药材1kg,加8倍的95%乙
醇,在80℃水浴锅回流提取3次,合并提取液浓缩
至浸膏完全干燥。总提取物与适量的水混悬,依次
用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,萃取液浓缩至浸
膏备用。铁力木正丁醇和水萃取物直接用生理盐水
溶解,配成适宜的浓度,石油醚和乙酸乙酯萃取物用
乙醇助溶,乙醇浓度低于5%,生理盐水作为空白。
(2)测定方法:采用比浊法[9-10]进行抗血小板凝聚
作用的测定。每次以1只新西兰种兔作为供血动
物,耳缘静脉采血,枸橼酸钠1∶9(V∶V)抗凝,
1 000r/min离心10min得到上层液即富血小板血
浆 (platelet-rich-plasma,PRP),余 下 部 分 以
3 000r/min离心15min,得到贫血小板血浆(plate-
let-poor-plasma,PPP),用PPP调零和稀释PRP中
的血小板数至200×109/L,PPP调零,以270μL
PRP加30μL受试样品,37℃条件下预热5min,加
入凝血酶(凝血酶终浓度为10U/mL),测定由凝血
酶诱导的血小板聚集率。血小板聚集率越高,则说
明受试样品抗血小板聚集能力越弱。在490-4D型
血小板聚集仪上进行血小板聚集测定,观察5min
视其最大聚集率,计算最大抑制率 (%)=(对照管
血小板聚集率-样品管血小板聚集率)/对照管血小
板聚集率×100%。
1.9 统计学处理 采用SPSS 17.0软件进行统计
学处理,数据以均数±标准差 (-x±s)表示,采用单
因素方差分析,检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 药材形状 本品略呈研棒状,长1~2cm,表
面光滑,质地硬而脆。花冠圆球形,直径0.3~
0.5cm,褐黄色。花瓣4个,倒卵形,重覆瓦状抱合,
976 第6期 艾力克木·吐尔逊,等:维药铁力木的生药学特征及其不同萃取部位抗血小板聚集作用研究
花瓣彼此分离,展开时呈“十”字形。花瓣内为雄蕊
群,搓碎后可见众多棕褐色细长的花丝,花药以基着
式着生在花丝上。气香,味微苦。
2.2 粉末结构 本药材粉末中花粉粒数量较多,其
中有1~3个萌发孔的、无萌发孔的和刺状散孔的花
粉粒,三孔花粉粒数量最多,其萌发孔多位于赤道
上,除了有些三孔花粉粒形状接近三角形以外其他
的均为圆形,花粉粒直径27~38μm。导管数量也
较多,都是螺纹导管,导管螺旋直径为9~15μm。
草酸钙蔟晶较多,分布于药材粉末的每一个部位,草
酸钙蔟晶有球形的、多角形星状的和方形的,直径为
6~20μm。腺毛特别少,腺头为单个细胞,腺柄由多
个细胞组成。非腺毛有单细胞非腺毛和多细胞非腺
毛,其中多数为多细胞非腺毛,有的呈镰刀状,顶端尖
锐或稍钝。气孔为平轴式气孔,直径为21~26μm。
薄壁细胞呈类方形或多边形,排列整齐,见图1。
1:花粉粒;2:导管;3:草酸钙蔟晶;4:非腺毛;5:气孔;6:
薄壁细胞
图1 铁力木(mesua ferrea Linn.)粉末性状
2.3 理化鉴别结果 通过系统定性试验结果得知,
维药铁力木可能含有甾体、油脂类、黄酮、醌类、酚
类、强心苷、香豆素、有机酸、糖类及苷类成分,见
表1。
表1 铁力木提取物的定性试验结果
鉴定对象 试剂 结果 鉴定对象 试剂 结果
糖及苷类 Molish试剂 + 黄酮 盐酸一镁粉 +
Fehling试剂 + 黄酮 三氯化铝 +
三氯化铁 - 浓氨水 -
明胶实验 + 泡沫试验 -
酚类 三氯化铁 - 皂苷 醋酐-浓硫酸 -
醋酸镁 + 碘化铋钾 -
蒽醌类 硼酸试验 + 生物碱 碘-碘化钾 -
荧光试验 - 硅钨酸 -
有机酸 pH试纸 + 苦味酸 -
挥发油 油斑检查 - 内醇开闭环试验 +
碱性苦味酸 + 香豆素 异羟肟酸铁 +
强心苷 三氯化铁-醋酸 + 磷钼酸 +
2.4 薄层鉴别 通过一系列比较后选定固定相为
高效硅胶G板,展开系统为石油醚-乙酸乙酯-丙酮-
冰醋酸(10∶1∶1∶0.2),显色剂为10%硫酸,在此
条件下供试品和对照品Rf 值为0.48,喷完显色剂
后在可见光下相同的位置出现了紫色的斑点,将喷
完显色剂的板子置紫外灯(365nm)下观察,同样在
相同的位置出现了黄色荧光斑点,见图2。
A:齐墩果酸对照品;B:铁力木供试品
图2 齐墩果酸和铁力木样品TLC图
2.5 抗血小板聚集实验结果 铁力木正丁醇萃取
部位由凝血酶诱导的抗血小板聚集作用最强,
10μg/mL表现出显著的抑制作用(P<0.01),其抑
制能力与同浓度的其他组分比较也较为明显 (P<
0.05);水、乙酸乙酯、石油醚萃取部位也具有强的抗
血小板聚集作用,其10μg/mL抑制作用显著 (P<
0.01)。血小板聚集率与各组分质量浓度之间存在
着明显地剂量依赖性,见表2。
表2 铁力木不同萃取部位对血小板聚集的影响(-x±s,n=8)
组别/(μg/mL) 血小板聚集率/%
对照组 84.56±4.80
铁力木石油醚萃取物
10 72.99±4.27*
100 65.34±9.60**
1 000 60.57±4.69**
铁力木正丁醇萃取物
10 64.70±3.10**
100 54.00±3.20**
1 000 43.30±3.60**
铁力木乙酸乙酯萃取物
10 69.80±3.10**
100 64.00±2.99**
1 000 61.60±3.30**
铁力木水萃取物
10 71.10±2.50*
100 69.00±3.30**
1 000 61.40±2.30**
注:与对照组比较,*P<0.05,**P<0.01。
3 讨论
086 新 疆 医 科 大 学 学 报 第37卷
显微鉴别、理化鉴别包括薄层鉴别为药材真伪
鉴别的重要依据,是《中国药典》中药质量评价的基
本方法。本研究显微鉴别、理化鉴别实验表明,铁力
木 (mesua ferrea Linn.)在其粉末结构和薄层色谱
方面具有可作为鉴别依据的特征,其主要的粉末显
微特征为花粉粒、草酸钙蔟晶及导管,其数量极多,
其中花粉粒多为球形三孔花粉粒,其萌发孔多位于
赤道上,花粉粒直径为27~38μm。草酸钙蔟晶有
球形的、多角形星状的和方形的,直径为6~20μm。
导管均为螺纹导管,导管螺旋直径为9~15μm。在
其薄层鉴别实验,展开系统为石油醚-乙酸乙酯-丙
酮-冰醋酸(10∶1∶1∶0.2),显色剂为10%硫酸,
此条件下齐墩果酸对照品和铁力木供试品在Rf 值
为0.48处出现了紫色斑点。以上特征可作为药材
真伪鉴别的重要参考依据。体外实验表明铁力木正
丁醇萃取部位的抑制凝血酶诱导的血小板聚集活性
最强。现代研究认为血小板聚集率可影响血粘度,
血粘度及血小板聚集率等指标的异常是引发冠心
病、血栓等心血管疾病的重要因素之一。因此,本课
题将针对铁力木进行更进一步的跟踪分离分析及药
理实验研究,为开发抑制血小板聚集及相关疾病的
新药提供依据。
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(本文编辑 施洋
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(本文编辑 杨晨晨)
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