全 文 ：３　讨论
在全球工业化发展的今天，恶性肿瘤的发病率，
尤其是肺癌也呈现不断上升的趋势［５－６］。虽然外科
技术和放、化疗技术的迅猛发展，为治愈肿瘤提供了
可能，但是外科手术的局限性和化疗药物诸多不良
反应，对患者的恢复极其不利。生物治疗肿瘤方案
也因价格昂贵，使之发展遭遇到了瓶颈。近年来，中
医在防治肿瘤方面的逐步体现了它的优势。
由于现在医疗模式的转变，开发特异性强、高
效、不良反应小的抗肿瘤药物已经迫在眉睫。与其
他的抗肿瘤药物相比，天然植物的化学成分对肿瘤
细胞的多靶点效应成为其抗肿瘤作用的重要特点和
优势。
有研究表明，蒲公英提取物对人黑色素瘤细胞
的生长具有一定的抑制作用［７－８］。同时，蒲公英的倍
半萜内酯糖苷水解产物吉玛酸可诱导人急性早幼粒
白血病 ＨＬ－６０细胞向单核细胞系／巨噬细胞系分
化［９］，提示蒲公英可能在人急性早幼粒白血病治疗
方面很有研究前景。并且我们的研究也发现，蒲公
英提取物可以抑制小鼠体内肺肿瘤的生长。但是其
治疗机制目前仍不清楚。ＩＦＮ－γ是机体防御系统
的重要组成部分，其可与多种免疫细胞包括白细胞
和血小板、免疫分子相互协同，相互制约，促成了机
体最佳的抗肿瘤免疫状态。本实验通过将不同质量
浓度的蒲公英提取物处理Ｌｅｗｉｓ荷瘤小鼠肿瘤组织
后，发现该组织的ＩＦＮ－γ表达下调，并且呈现质量
浓度和时间依赖性，提示该药物抗肿瘤的机制可能
和抑制ＩＦＮ－γ表达有关。作为一种无毒且具有多
种活性的抗肿瘤成分，蒲公英极具开发潜力，其分子
结构可以作为抗肿瘤新药设计的结构基础。但其是
否能作为治疗肿瘤的临床药物，还需进一步研究以
及在大规模、严密的实验中得到证实。
参考文献：
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ｃｏｒｅａｎｕｍ　ＮＡＫＡＩ，ｉｎｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｃｕｔｅ
ｐｒｏｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ　ｌｅｕｋｅｍｉａ　ＨＬ－６０ｃｅｌｓ［Ｊ］．Ｂｉｏｌ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ，
２００２，２５（１１）：１４４６－１４５０．
［收稿日期］２０１３－０６－０３
［基金项目］广西中医药管理局中医科技专项（编号：ＧＺＺＹ１２－２１）　［作者简介］宋飞，女，主管药师，学士，研究方向：中药民族药研究，电话：
０７７２－３８３７２４１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｏｎｇｘｕｅｌｚ＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］曾瑜，女，药师，硕士，研究方向：新药研究与开发，电话：０７７２－３８３７２４１，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｙｇｒｙｙ
＠２１ｃｎ．ｃｏｍ
华凤仙总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机制探讨
宋飞，曾瑜　 （广西医科大学第四附属医院，广西 柳州５４５００５）
［摘要］　目的：研究华凤仙总黄酮（ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，ＴＦＩＣ）对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其机
制。方法：采用结扎大鼠左冠状动脉前降支法，建立心肌缺血再灌注损伤模型。取７２只ＳＤ大鼠随机分为假手术组，模型组，
阳性对照组，ＴＦＩＣ低、中、高剂量组，每组１２只。术前１０ｄ，ＴＦＩＣ组灌胃给予不同剂量ＴＦＩＣ（５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），模
型组（普萘洛尔２５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），其余２组给予生理盐水２０ｍｌ·ｋｇ－１。测定术后２ｈ心肌酶谷草转氨酶（ＡＳＴ）、肌酸磷酸激
酶（ＣＫ）、肌酸激酶同功酶 ＭＢ（ＣＫ－ＭＢ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，以及血清中超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、谷胱甘肽过氧物酶
（ＧＳＨ－Ｐｘ）、丙二醛（ＭＤＡ）的含量，以ＲＴ－ＰＣＲ半定量检测细胞凋亡蛋白酶（Ｃａｓｐａｓｅ－３）、腺嘌呤核苷酸转位酶１（ａｄｅｎｉｎｅｎｕ－
·５１５·中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７
ｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｏｒ　１，ＡＮＴ１）ｍＲＮＡ的表达，并采用电子显微镜和光镜观察各组大鼠心肌组织变化情况。结果：与模型组比
较，ＴＦＩＣ药物组高、中剂量能显著降低心肌酶的水平，以及降低心肌组织中ＡＮＴ１ｍＲＮＡ的表达（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），ＴＦ－
ＩＣ药物组能显著提高血清中ＧＳＨ－Ｐｘ，、ＳＯＤ含量，降低血清中 ＭＤＡ含量及心肌组织中Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ的表达，差异有显
著性（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），心肌病理组织变化观察表明ＴＦＩＣ能明显改善心肌缺血再灌注损伤。结论：ＴＦＩＣ对大鼠心肌缺
血再灌注损伤有明显的保护作用，其机制可能与清除氧自由基和减轻心肌细胞凋亡有关。
［关键词］　华凤仙总黄酮；心肌缺血再灌注损伤；作用机制；心肌病理组织
［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）０７－０５１５－０６　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．０７．０４
Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　ｏｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｓｃｈｅ－
ｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｒａｔｓ
ＳＯＮＧ　Ｆｅｉ，ＺＥＮＧ　Ｙｕ（Ｔｈｅ　Ｆｏｕｒｔｈ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ｌｉｕｚｈｏｕ　５４５００５，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌ．（ＴＦ－
ＩＣ）ｏｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ（ＭＩＲＩ）ｉｎ　ｒａｔｓ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ＭＩＲＩ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ　ｂｙ　ｌｉｇａｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ
ａｎｔｅｒｉｏｒ　ｄｅｓｃｅｎｄｉｎｇ　ｃｏｒｏｎａｒｙ．Ｓｅｖｅｎｔｙ－ｔｗｏ　ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ　ｉｎｔｏ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ
ａｎｄ　ＴＦＩＣ　ｈｉｇｈ，ｍｅｄｉｕｍ，ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｇｒｏｕｐｓ（ｎ＝１２）．Ｒａｔｓ　ｉｎ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐｓ　ｗｅｒｅ　ｐｅｒｆｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ＴＦＩＣ（５０，１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１·
ｄ－１）１０ｄａｙｓ　ｂｅｆｏｒｅ　ｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ　ｗａｓ　ｐｅｒｆｕｓｅｄ　ｗｉｔｈ　ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ　２５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１，ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ
ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ，ＮＳ　ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｉｎｓｔｅａｄ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｇｌｕｔａｍｉｃ－ｏｘａｌ（ｏ）ａｃｅｔｉｃ　ｔｒａｎｓａｍｉｎａｓｅ（ＡＳＴ），ｃｒｅａｔｉｎｅ　ｐｈｏｓ－
ｐｈｏｋｉｎａｓｅ（ＣＫ），ｃｒｅａｔｉｎｅ　ｐｈｏｓｐｈｏｋｉｎａｓｅ　ｉｓｏｅｎｚｙｍｅ（ＣＫ－ＭＢ），ｌａｃｔｉｃ　ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ（ＬＤＨ），ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｇｌｕｔａ－
ｔｈｉｏｎｅ　ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ（ＧＳＨ－Ｐｘ），ｍａｌｏｎｄｉａｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＲＴ－ＰＣＲ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　Ｃａｓｐａｓｅ－３，
ＡＮＴ１ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａ－ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ　ｗｅｒｅ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｏｐｔｉｃａｌ　ｍｉ－
ｃｒｏｓｃｏｐｅ　ａｎｄ　ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＭＩＲＩ　ｇｒｏｕｐ，ＴＦＩＣ　ｈｉｇｈ，ｍｅｄｉｕｍ　ｄｏｓｅ
ｇｒｏｕｐ　ｃｏｕｌｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ　ｅｎｚｙｍｅ，ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＮＴ１ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｔｉｓｓｕｅ
（Ｐ＜０．０１ｏｒ　Ｐ＜０．０５）．ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐｓ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｃｒｅａｓｅ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ　ａｎｄ　ｄｅｃｒｅａｓｅ　ｓｅｒｕｍ　ＭＤＡ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｔｈｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ　ｉｎ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｔｉｓｓｕｅ（Ｐ＜０．０１ｏｒ　Ｐ＜０．０５）．Ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｌｅｃｔｒｏｎ　ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｙ　ａｎｄ　ｏｐｔｉｃａｌ
ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ，ＴＦＩＣ　ｃｏｕｌｄ　ａｍｅｌｉｏｒａｔｅ　ｔｈｅ　ｄａｍａｇｅ　ｏｆ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｐａｔｈｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ．ＣＯＮＣＬＵＳＩＯＮ　ＴＦＩＣ　ｈａｓ　ａ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｐｒｏｔｅｃ－
ｔｉｖｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ＭＩＲＩ　ｉｎ　ｒａｔｓ．Ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｍａｙ　ｂｅ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｃｌｅａｒｉｎｇ　ｏｘｙｇｅｎ　ｆｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌｓ　ａｎｄ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｍｙ－
ｏｃａｒｄｉａｌ　ｃｅｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｆａｃｔｏｒｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：ＴＦＩＣ；ＭＩＲＩ；ｍｅｃｈａｎｉｓｍ；ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｐａｔｈｏ－ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ
　　华凤仙为凤仙花科植物华凤仙花（Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ　Ｌ．）的全草，别名水凤仙、水指甲花、象鼻
花等，据《中药大辞典》记载［１］，华凤仙具有清热解
毒，活血散淤，消肿拔脓之功效，常用于治疗跌打损
伤，抗血栓，肺结核，小便混浊，湿热带下，瘭疽，痈疮
肿毒等病症，是壮族民间常用的草药。目前，有关华
凤仙药理学研究的报道较少，主要是化学成分及生
药学研究，彭定基等［２－３］报道，其主要化学成分含有
黄酮类、挥发油类等。我们在研究中发现其总黄酮
对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有保护作用。
心肌缺血再灌注损伤时，心肌酶 ＡＳＴ、ＬＤＨ、
ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ等酶在血清中的表达异常，检测这些酶
在血清中的表达量，可以反映ＴＦＩＣ保护心肌损伤
的能力；同时，心肌缺血再灌注损伤可导致代谢产物
和氧自由基的大量聚积，ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ等是体内清
除氧自由基抗氧化酶系统的成员［４－５］，检测ＳＯＤ、
ＧＳＨ－Ｐｘ活性能反映ＴＦＩＣ对机体内抗脂质过氧化
的能力。此外，心肌细胞的凋亡与心肌缺血再灌注
损伤密切相关［６］，Ｃａｓｐａｓｅ－３与 ＡＮＴ１的表达与心
肌细胞的凋亡的程度及心功能损伤程度密切相
关［７－８］，对Ｃａｓｐａｓｅ－３与 ＡＮＴ１的定量分析，可以直
观反映ＴＦＩＣ对心肌细胞的保护能力。本实验通过
观察 ＴＦＩＣ对大鼠心肌酶（ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫ－
ＭＢ）、体内清除氧自由基抗氧化酶（ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ、
ＭＤＡ）、心肌细胞凋亡因子（Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＡＮＴ１）的表
达水平，以阐明ＴＦＩＣ对大鼠心肌缺血再灌注损伤
的保护作用，为壮药华凤仙的临床的科学使用提供
依据。
１　材料
ＡＬＣ－Ｖ８型动物呼吸机（上海奥尔科特生物科
技有限公司）；ＭＳ４０００型生物信号定量记录分析系
统（广州市龙飞达科技有限公司）；ＲＭ２２３５型组织
切片机（德国ＬＥＩＣＡ）；ＧＸ２１光学显微镜（日本 Ｏ－
ＬＹＭＰＵＳ）；７１７０型生化分析仪（日本日立公司）；
·６１５· 中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７
７２２Ｎ可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公
司）；ＰＴＣ　２００多通道ＰＣＲ扩增仪（美国 ＭＪ）；Ｇｅｌ
ｄｏｃ　２０００凝胶成像分析系统（美国 Ｂｉｏ－Ｒａｄ）；Ｅｐ－
ｐｅｎｄｏｒｆ　５８１０Ｒ低温高速离心机（德国）。
华凤 仙 总 黄 酮 （ｔｏｔａｌ　ｆｌａｖｏｎｅｓ　ｏｆ　Ｉｍｐａｔｉｅｎｓ
ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ，ＴＦＩＣ，柳州市工人医院制剂组自行制备，总
黄酮纯度９３％）；普萘洛尔片（河北永丰药业有限公
司，批号２０１１０５０１）；水合氯醛（国药集团化学试剂有
限公司，批号２０１０１０２６）。ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ试剂
盒（南京建成生物工程研究所），ＡＳＴ、ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ、
ＬＤＨ（英国朗道公司）。ＲＮＡ 提取液Ｔｒｉｚｏｌ、反转录
酶Ｍ－ＭｕＬＶ、ＲＮＡ酶抑制剂ＲＮＡｓｉｎ（均购于ｉｎｖｉｔｒｏ－
ｇｅｎ公司）；Ｃａｓｐａｓｅ－３上游引物：５’ＧＡＡＡＧＣＡＴＣ－
ＣＡＧＣＡＡＴＡＧＧＣ　３’，Ｃａｓｐａｓｅ－３ 下 游 引 物：５’
ＴＧＡＧＴＴＣＣＴＴＣＣＴＴＴＣＴＴＴＧＴＧＣ　３’，ＰＣＲ产物片
段为１９１ｂｐ。ＡＮＴ１上游引物：５’ＴＣＴＴＣＡＡＧＴＣＴ－
ＧＡＴＧＧＣＣＴＧ　３’，ＡＮＴ１ 下 游 引 物：５’ＴＣＡ－
ＣＡＣＴＣＴＧＧＧＣＡＡＴＣＡＴＣ　３’，ＰＣＲ产物片段为１７１
ｂｐ。β－ａｃｔｉｎ上游引物：５’ＡＡＣＣＣＴＡＡＧＧＣＣＡＡＣ－
ＣＧＴＧＡＡＡＡＧ　３’，下 游 引 物：５’ＴＣＡＴＧＡＧＧ－
ＴＡＧＴＣＴＧＴＣＡＧＧＴ　３’，ＰＣＲ产物片段为２４０ｂｐ，以
上引物由上海申友公司合成。
ＳＤ大鼠，ＳＰＦ级，体质量（１８０±１０）ｇ，雌雄各
半，桂林医学院动物实验中心提供，动物许可证号：
ＳＣＸＫ桂２００７－０００１。
２　方法
２．１　分组及给药　取７２只ＳＤ大鼠，随机分为模
型组，假手术组，阳性对照组，ＴＦＩＣ高、中、低剂量
组，每组１２只。ＴＦＩＣ低、中、高剂量分别为（５０，
１００，２００ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）。阳性对照组：普萘洛尔
（２５ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），术前灌胃给药，连续１０ｄ。假
手术组、模型组给予生理盐水２０ｍｌ·ｋｇ－１。
２．２　大鼠心肌缺血再灌注损伤模型的制备［９］　各
组大鼠以１０％水合氯醛麻醉（３．５ｍｌ·ｋｇ－１），仰卧
位固定，将银针电极插入四肢皮下，连接 ＭＳ４０００Ｕ
生物信号定量记录分析系统。分离气管并插管后立
即正压人工呼吸（呼吸频率７０次／ｍｉｎ，潮气量２０
ｍｌ·ｋｇ－１，吸呼比１∶１）。从左侧第３，４肋间打开胸
腔，暴露心脏，剪破心包膜，在肺动脉圆锥左缘与左
心耳右缘之间，平左心耳下缘２ｍｍ处进针，进针深
度１～２ｍｍ，宽度２～３ｍｍ，用５／０无损伤缝合线
穿过心肌层，绕过冠状动脉左前降支，除假手术组不
结扎外，其余组均结扎。３０ｍｉｎ后解除结扎，再灌
注。以心电图ＳＴ段抬高、Ｔ波高耸作为心肌缺血
的标志；以抬高的ＳＴ段下降，Ｔ波逐渐恢复确定再
灌注的成功。
２．３　大鼠血液标本采集及检测　再灌注２ｈ后，颈
总静脉取血，离心（４　０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１０ｍｉｎ），取
上清液，分装，－２０℃保存备用。部分严格按照试
剂盒方法测定血浆中ＳＯＤ活力、ＧＳＨ－Ｐｘ、ＭＤＡ含
量；部分采用日立７１７０生化分析仪检测血浆ＡＳＴ、
ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ、ＬＤＨ水平。
２．４　心肌组织病理学的检测　再灌注２ｈ后，取大
鼠结扎线以下的心肌组织，用４％甲醛溶液固定，脱
水，常规石蜡包埋，切片，ＨＥ常规染色。光镜下观
察心肌组织病理学变化。
２．５　心肌超微结构的观察　再灌注２ｈ后，各组选
取２只大鼠，于结扎线下方剪取心肌组织１ｍｍ３，迅
速放入预冷的２．５％戊二醛固定，用 ＰＢＳ漂洗１０
ｍｉｎ　３次，再放入１％锇酸（四氧化锇），固定２ｈ，再
用ＰＢＳ漂洗１０ｍｉｎ　３次，脱水，环氧树脂６１８包埋，
３８，４５，６０℃依次聚合３６ｈ，切片，醋酸铀－枸橼酸铅
双染色，在透射电子显微镜下观察心肌超微结构的
变化。
２．６　ＲＴ－ＰＣＲ法检测Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＡＮＴ１ｍＲＮＡ表
达　Ｔｒｉｚｏｌ提取缺血区心肌组织总 ＲＮＡ（每组６
只），反转录成ｃＤＮＡ，取５μｌ　ｃＤＮＡ作ＰＣＲ扩增，
Ｃａｓｐａｓｅ－３反应条件：９５℃预变性３ｍｉｎ，９４℃３０ｓ，
５９℃３０ｓ，７２℃２５ｓ，３２循环后７２℃延伸５ｍｉｎ；
ＡＮＴ１反应条件：９５℃预变性３ｍｉｎ，９４℃３０ｓ，５８
℃３０ｓ，７２℃２５ｓ，３０循环后７２℃延伸５ｍｉｎ；β－
ａｃｔｉｎ反应条件：９５℃预变性３ｍｉｎ，９４℃３０ｓ，６０
℃３０ｓ，７２℃２５ｓ，２８循环后７２℃延伸５ｍｉｎ，以
上扩增产物在２％琼脂糖凝胶电泳分离，溴乙锭显
色，扩增产物条带用 ＵＶＩ凝胶成像分析系统处理，
用目的基因条带与β－ａｃｔｉｎ条带光密度的比值作为
目的基因ｍＲＮＡ的相对含量。
２．７　数理学统计　应用ＳＰＳＳ　１３．０软件进行统计
学处理，计量资料均采用珚ｘ±ｓ表示，组间均数比较
采用单因素方差分析。
３　结果
３．１　血浆心肌酶的变化　与模型组比较，假手术
组、普萘洛尔组及 ＴＦＩＣ药物组大鼠中血清 ＡＳＴ、
ＬＤＨ的含量显著降低，差异有显著性（Ｐ＜０．０１或
Ｐ＜０．０５）；而假手术组、普萘洛尔组及ＴＦＩＣ高、中
剂量组中大鼠血清的ＣＫ、ＣＫ－ＭＢ含量显著降低，
差异有显著性（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），而低剂量组
则无显著性差异（表１）。心肌酶含量随ＴＦＩＣ药物
组剂量的增加而降低，呈一定的量－效关系。
３．２　血浆ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ、ＭＤＡ的变化　与模型组
·７１５·中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７
比较，假手术组、普萘洛尔组和ＴＦＩＣ药物组大鼠血
清中 ＭＤＡ的含量降低，差异有显著性（Ｐ＜０．０１）；
ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ的含量升高，差异有显著性（Ｐ＜
０．０１或Ｐ＜０．０５）（表２）。ＴＦＩＣ药物组呈一定的
量－效关系。
３．３　心肌组织结构的病理变化　光镜下观察，假手
术组心肌细胞排列整齐，着色均匀，肌纤维横纹清
晰，无细胞肿胀，未见变性坏死和炎性细胞浸润（图
１－Ａ）；模型组心肌排列紊乱，细胞肿胀明显，肌纤维
部分断裂，横纹模糊或消失，可见心肌细胞成片状坏
死，周围有炎性细胞浸润，红细胞漏出明显（图１－
Ｂ）；ＴＦＩＣ低剂量组心肌排列紊乱，细胞肿胀明显，
肌纤维排列紊乱，周围有炎性细胞浸润、红细胞漏出
等，但是较模型组轻（图１－Ｃ）；ＴＦＩＣ中剂量组的肌
纤维排列局部紊乱，周围可见部分炎性细胞浸润及
红细胞漏出，但是较ＴＦＩＣ低剂量组有明显改善（图
１－Ｄ）；ＴＦＩＣ高剂量组心肌细胞排列基本规整，部分
心肌细胞水肿变性，肌纤维间隙水肿，偶尔可见散在
的红细胞，少见炎性细胞浸润（图１－Ｅ）；普萘洛尔组
除心肌细胞间隙水肿程度较假手术组严重外，其余
基本相同（图１－Ｆ）。
３．４　心肌组织超微结构的病理变化　在透射电镜
下观察，假手术组心肌细胞超微结构正常，肌膜完
整，细胞核膜完整，核质均匀，肌原纤维平行排列，
明、暗带清楚（图２－Ａ）；模型组：心肌细胞严重水肿、
界限不清，肌膜破坏，肌原纤维松弛、拉长，Ｉ带明显
增宽，肌原纤维形成大量异常收缩带，部分肌节周期
性结构破坏，肌丝断裂、溶解，Ｚ线扭曲、变形，形成
大量肌溶灶（图２－Ｂ）；ＴＦＩＣ低剂量组损伤程度同模
型组基本相似，但有所减轻（图２－Ｃ）。ＴＦＩＣ中剂量
图１　大鼠心肌形态学变化情况（×４００）
Ａ．假手术组；Ｂ．模型组；Ｃ．ＴＦＩＣ低剂量组；Ｄ．ＴＦＩＣ中剂量组；Ｅ．
ＴＦＩＣ高剂量组；Ｆ．普萘洛尔组
Ｆｉｇ　１　Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｒａｔｓ’ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ（×４００）
Ａ．ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｃ．ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；
Ｄ．ｍｉｄｉｕｍ　ｄｏｅｓ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｅ．ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｆ．ｐｒｏ－
ｐｒａｎｏｌｏｌ　ｇｒｏｕｐ
组心肌纤维仍肿胀，肌膜不平整，肌原纤维周期性结
构破坏明显减轻，肌溶灶减少，其损伤程度较低剂量
组明显减轻（图２－Ｄ）；ＴＦＩＣ高剂量组损伤程度较中
剂量组明显减轻，但是心肌纤维仍肿胀，肌膜不平整
情况，肌原纤维周期性结构破坏进一步减轻，肌溶灶
进一步减少（图２－Ｅ）。普萘洛尔组心肌损伤程度较
ＴＦＩＣ高剂量组轻，但部分心肌纤维仍见肿胀，有的
细胞膜下可见少量积液（图２－Ｆ）。
３．５　ＲＴ－ＰＣＲ半定量检测Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＡＮＴ１ｍＲ－
ＮＡ的表达　与模型组相比，ＴＦＩＣ药物组能有效的
降低心肌组织中Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达，有显著性差异
（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），ＴＦＩＣ高、中剂量能明显提
高ＡＮＴ１的表达，有显著性差异（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜
０．０５）。提示ＴＦＩＣ可抑制心肌缺血再灌注损伤大
鼠心肌组织中的Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＡＮＴ１表达，以减少心
肌细胞凋亡，见表３，图３，４。
表１　华凤仙总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌酶的影响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
Ｔａｂ　１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｏｎ　ＡＳＴ，ＬＤＨ，ＣＫ，ＣＫ－ＭＢ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ＭＩＲＩ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
组别 ＡＳＴ／Ｕ·Ｌ－１　 ＬＤＨ／Ｕ·Ｌ－１　 ＣＫ／Ｕ·Ｌ－１　 ＣＫ－ＭＢ／Ｕ·Ｌ－１
模型组 ３７６．１３±４３．９９　 ２　４４９．０９±２６８．８０　 ８　００３．４１±７６７．７２　 ８　１２９．２５±８１３．５９
假手术组 １６１．３７±４６．２９ａ ５５２．２２±６３．３１ａ ２　０２５．２４±２９６．２７ａ ２　０８４．７１±７１２．６６ａ
普萘洛尔组 ２２０．７５±３５．２７ａｃ　 ８０８．１３±９３．４５ａｃ　 ３　９６２．３０±４１１．８４ａｃ　 ３　９３９．０６±６５１．２７ａｃ
ＴＦＩＣ高剂量组 ２０２．１７±３７．５１ａｃ　 ８５３．５１±９１．１６ａｃ　 ３　８８３．８０±１９２．７３ａｃ　 ４　３７１．８０±５７６．５０ａｃ
ＴＦＩＣ中剂量组 ２４６．１０±３０．０５ａｃ　 １　０２５．６３±９６．４３ａｃ　 ５　２２９．００±７５９．５３ａｃ　 ６　７８１．０３±４９５．４３ａｃ
ＴＦＩＣ低剂量组 ２７２．３１±５１．６７ａｃ　 １　６２３．３１±２１６．１１ｂｃ　 ７　８０４．８０±８６８．３７ｃ　 ７　９９２．１４±５９２．１８ｃ
注：与模型组比较，ａＰ＜０．０１，ｂ　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，ｃ　Ｐ＜０．０１，ｄ　Ｐ＜０．０５
表２　华凤仙总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠 ＭＤＡ，ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ的影响（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
Ｔａｂ　２　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｏｎ　ＭＤＡ，ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ　ｉｎ　ｓｅｒｕｍ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ＭＩＲＩ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝１２）
组别 ＭＤＡ／ｎｍｏｌ·ｍｌ－１　 ＳＯＤ／Ｕ·ｍｌ－１　 ＧＳＨ－Ｐｘ／μｍｏｌ·ｍｌ－１
模型组 ７．５６±１．７０　 ６９．７３±１０．２８　 １　６０７．１５±８４．２４
假手术组 １．３８±０．２１ａ １７２．５０±１０．２７ａ ３　８０４．００±７０．６２ａ
普萘洛尔组 ２．７３±１．０９ａｃ　 １２４．７０±１４．４５ａｃ　 ２　９１１．３２±８０．５２ａｃ
ＴＦＩＣ高剂量组 ３．１７±０．６０ａｃ　 １１９．８３±１２．５９ａｃ　 ２　８７６．８８±９７．９７ａｃ
ＴＦＩＣ中剂量组 ３．９３±０．５４ａｃ　 ９９．０４±８．２１ａｃ　 ２　４９８．００±１０４．３３ａｃ
ＴＦＩＣ低剂量组 ４．７６±０．８２ａｃ　 ９０．０１±９．３１ｂｃ　 ２　０００．４１±２１９．１４ｂｃ
注：与模型组比较，ａＰ＜０．０１，ｂ　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，ｃ　Ｐ＜０．０１，ｄ　Ｐ＜０．０５
·８１５· 中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７
图２　各组心肌组织超微结构病变情况（×２５　０００）
Ａ．假手术组；Ｂ．模型组；Ｃ．ＴＦＩＣ低剂量组；Ｄ．ＴＦＩＣ中剂量组；Ｅ．
ＴＦＩＣ高剂量组；Ｆ．普萘洛尔组
Ｆｉｇ　２　Ｕｌｔｒａｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｒａｔ　ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｅｄ　ｄｉｓｃ（×２５　０００）
Ａ．ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ ；Ｂ．ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｃ．ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ
ｇｒｏｕｐ；Ｄ．ｍｉｄｉｕｍ　ｄｏｅｓ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｅ．ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；
Ｆ．ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ　ｇｒｏｕｐ
表３　ＲＴ－ＰＣＲ检测Ｃａｓｐａｓｅ－３、ＡＮＴ１ｍＲＮＡ表达量的影响
（珚ｘ±ｓ，ｎ＝６）
Ｔａｂ　３　Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＡＮＴ　１ｍＲＮＡ、Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ　ｉｎ
ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｔｉｓｓｕｅｓ　ｉｎ　ｒａｔｓ　ｗｉｔｈ　ＭＩＲＩ（珚ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 Ｃａｓｐａｓｅ－３／β－ａｃｔｉｎ　 ＡＮＴ１／β－ａｃｔｉｎ
模型 １．６２±０．２７　 ０．２７±０．０５
假手术 ０．５１±０．１０ａ ０．９３±０．０８ａ
普萘洛尔 ０．８０±０．０７ａｃ　 ０．７２±０．１７ａｃ
ＴＦＩＣ高剂量组 ０．８４±０．１１ａｃ　 ０．６９±０．１５ａｃ
ＴＦＩＣ中剂量组 ０．９６±０．１６ａｃ　 ０．５０±０．０５ｂｃ
ＴＦＩＣ低剂量组 １．２１±０．２０ｂｃ　 ０．３２±０．１６ｃ
注：与模型组比较，ａＰ＜０．０１，ｂ　Ｐ＜０．０５；与假手术组比较，ｃ　Ｐ＜
０．０１，ｄ　Ｐ＜０．０５
图３　Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ电泳图像电泳图像
Ａ．模型组；Ｂ．ＴＦＩＣ低剂量组；Ｃ．ＴＦＩＣ中剂量组；Ｄ．ＴＦＩＣ高剂量
组；Ｅ．普萘洛尔组；Ｆ．假手术组
Ｆｉｇ　３　Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ｉｍａｇｅ　ｏｆ　Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ
Ａ．ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｃ．ｍｉｄｉｕｍ　ｄｏｅｓ　ｏｆ　ＴＦ－
ＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｄ．ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｅ．ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｆ．
ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ
图４　ＡＮＴ１ｍＲＮＡ电泳图像电泳图像
Ａ．假手术组；Ｂ．普萘洛尔组；Ｃ．ＴＦＩＣ高剂量组；Ｄ．ＴＦＩＣ中剂量
组 ；Ｅ．ＴＦＩＣ低剂量组；Ｆ．模型组
Ｆｉｇ　４　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＡＮＴ１ｍＲＮＡ
Ａ．ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ；Ｂ．ｐｒｏｐｒａｎｏｌｏｌ　ｇｒｏｕｐ；Ｃ．ｌｏｗ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ
ｇｒｏｕｐ；Ｄ．ｍｉｄｉｕｍ　ｄｏｅｓ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；Ｅ．ｈｉｇｈ　ｄｏｓｅ　ｏｆ　ＴＦＩＣ　ｇｒｏｕｐ；
Ｆ．ｍｏｄｅｌ　ｇｒｏｕｐ
４　讨论
在心肌缺血时，由于细胞膜及线粒体损伤，使得
细胞膜的通透性增加，心肌酶ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫ－
ＭＢ等酶释放至血液中，因此检测心肌酶的活性表
达，是判断心肌细胞损伤程度的重要指标之一，特别
是心肌酶中ＣＫ、ＬＤＨ的含量与缺血缺氧程度呈正
比［１０－１１］。同时，心肌缺血再灌注时，由于细胞内自由
基的生成与清除失衡，导致儿茶酚胺增多和游离脂
肪酸堆积以及大量的大量氧自由基产生，引起细胞
膜的脂质化，降低膜的流动性，使得清除自由基的酶
类ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ等酶的活性降低，而 ＭＤＡ是自由
基引发的脂质过氧化终末代谢产物，ＭＤＡ的活性
能反映氧自由基的含量和脂质过氧化程度。作为体
内清除氧自由基抗氧化酶系统的成员，ＳＯＤ，ＧＳＨ－
Ｐｘ，ＭＤＡ直接反映机体内自由基的清除能力，因
此，针对心肌缺血再灌注发生的病理、生理、生化特
点，我们检测心肌酶 ＡＳＴ，ＬＤＨ，ＣＫ，ＣＫ－ＭＢ以及
清除自由基的酶类ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ等因子的活性表
达，有助于了解ＴＦＩＣ保护大鼠心肌缺血再灌注损
伤的保护作用。本实验结果表明，与模型组比较，
ＴＦＩＣ能有效地降低大鼠血清中 ＭＤＡ含量，增加
ＳＯＤ，ＧＳＨ－Ｐｘ的含量，差异有显著性（Ｐ＜０．０１或
Ｐ＜０．０５）；同时，当给药剂量达到５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１
时，心肌酶活性降低，大鼠血清中 ＡＳＴ、ＣＫ、ＣＫ－
ＭＢ、ＬＤＨ表达量与明显低于 ＭＩＲ组，差异有显著
性（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。
心肌缺血再灌注还导致心肌细胞的凋亡，心肌
细胞 凋 亡 的 程 度 决 定 心 功 能 的 损 伤 程 度［６］，
Ｃａｓｐａｓｅ－３和ＡＮＴ１的表达与心肌细胞凋亡密切相
关。Ｃａｓｐａｓｅ－３是半胱氨基酸天冬氨基酸特异性蛋
白酶，是细胞凋亡蛋白酶级联反应重要途径［１２］。有
研究［１３］发现，Ｃａｓｐａｓｅ－３抑制剂 Ａｃ－ＤＥＶＤ－ＣＨＯ能
对体外循环心肌细胞Ｃａｓｐａｓｅ－３基因转录水平上具
有调控作用，降低了Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达，从而抑制了
心肌细胞凋亡。董淑英等［１４］发现心肌缺血再灌注
时心肌组织的Ｃａｓｐａｓｅ－３表达水平显著提高，抑制
心肌组织中Ｃａｓｐａｓｅ－３的表达，可减轻心肌细胞的
损伤。ＡＮＴ１是心肌线粒体内膜中含量最多的蛋
白，是构成线粒体通透性转运孔道的主要成分，参与
细胞凋亡，并且与线粒体内 ＡＴＰ含量呈协调变
化［１５］，当ＡＮＴ心肌缺血再灌注时，心肌中的ＡＮＴ１
ｍＲＮＡ的表达量减少。本研究表明，ＴＦＩＣ能有效
的降低心肌组织中Ｃａｓｐａｓｅ－３ｍＲＮＡ和增高ＡＮＴ１
ｍＲＮＡ的表达，以降低心肌缺血再灌注时大鼠心肌
细胞的凋亡。
此外，在急性心肌缺血时，由于大量氧自由基过
度激活细胞膜的脂质过氧化作用，破坏细胞膜磷脂
形成脂质过氧化物，造成心肌超微结构损。本实验
采用组织病理学检查与心肌细胞超微结构病变，观
·９１５·中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７
察ＴＦＩＣ对 ＭＩＲ大鼠心肌缺血在灌注的保护作用。
组织病理学检查表明，ＴＦＩＣ可明显减少心肌细胞
的坏死数量，减轻细胞水肿程度及心肌组织间的炎
性细胞浸润、红细胞渗漏等，初步表明ＴＦＩＣＦ对心
肌细胞有保护作用；心肌细胞超微结构观察表明，
ＴＦＩＣ可以可延缓心肌细胞坏死、凋亡过程，减轻缺
血再灌注心肌细胞超微结构损伤，且心肌细胞超微
结构的改变是反映细胞损伤和修复最直观的指标。
综上所述，ＴＦＩＣ能大鼠心肌缺血再灌注损伤
具有一定的保护作用，其作用机制极有可能与ＴＦ－
ＩＣ能减少心肌酶释放，清除氧自由基，抑制氧自由
基的产生，下调Ｃａｓｐａｓｅ－３蛋白表达，上调ＡＮＴ１蛋
白表达等作用等有关。
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［收稿日期］２０１３－０５－２１
［基金项目］山东省中医药科技发展计划项目（２０１１－１８０）；山东省中药炮制规范２０１２版标准研究；中医药行业科研专项２０种中药饮片炮制技
术规范研究（编号：２０１２０７００４－９）　［作者简介］张慧芳，女，硕士，讲师、主管中药师，研究方向：中药饮片鉴别、炮制及分析，电话：
１３９５７９８９６４４，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｈｕｉｆａｎｇ１１５＠１６３．ｃｏｍ　［通讯作者］戴衍朋，男，硕士，助理研究员，研究方向：中药炮制及分析，电话：０５３１－
８２９４９８２９，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄａｉｙａｎｐｅｎｇ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
正交试验设计优选升麻最佳蜜炙工艺
张慧芳１，戴衍朋２　 （１．金华职业技术学院医学院，浙江 金华３２１０１７；２．山东省中医药研究院，山东 济南２５００１４）
［摘要］　目的：优选升麻的最佳蜜炙工艺。方法：以传统外观性状和内在质量（异阿魏酸和总有机酸含量）为评价指标，采用
Ｌ９（３４）正交试验法，对炒炙温度、炒炙时间、炼蜜与水的比例和闷润时间四因素进行考察。结果：升麻最佳蜜炙工艺为，炼蜜
加等体积的水，加入净升麻片，拌匀，闷润３０ｍｉｎ，置锅内，１８０℃（锅底温度）炒炙２５ｍｉｎ。结论：优选的升麻蜜炙工艺稳定可
行，可用于指导蜜升麻饮片的生产。
［关键词］　升麻；蜜炙；正交试验
［中图分类号］Ｒ２８３．３　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１－５２１３（２０１４）０７－０５２０－０４　ＤＯＩ：１０．１３２８６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｈｉｎｈｏｓｐｐｈａｒｍａｃｙｊ．２０１４．０７．０５
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｈｏｎｅｙ－ｆｒｉｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｏｆ　Ｒｈｉｚｏｍａ　Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｍｅｔｈｏｄ
ＺＨＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｆａｎｇ１，ＤＡＩ　Ｙａｎ－ｐｅｎｇ２（１．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｊｉｎｈｕａ　Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｏｃａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｊｉｎｈｕａ
３２１０１７，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｊｉｎａｎ　２５００１４，Ｃｈｉｎａ）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：ＯＢＪＥＣＴＩＶＥ　Ｔｏ　ｏｐｔｉｍｉｚｅ　ｈｏｎｅｙ－ｆｒｉｅｄ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｆｏｒ　Ｒｈｉｚｏｍａ　Ｃｉｍｉｃｉｆｕｇａｅ．ＭＥＴＨＯＤＳ　Ｔｈｅ　ｔｒａｄｉｔｉｏｎ－
ａｌ　ｏｕｔｗａｒｄ　ａｐｐｅａｒａｎｃｅ　ａｎｄ　ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ　ｑｕａｌｉｔｙ（ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｉｓｏｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｔｏｔａｌ　ｏｒｇａｎｉｃ　ａｃｉｄ）ｗｅｒｅ　ｃｈｏｓｅｎ　ａｓ　ｉｎｄｅｘｅｓ．Ｔｈｅ
ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅｆｉｎｅｄ　ｈｏｎｅｙ　ａｎｄ　ｗａｔｅｒ，ｓｏａｋｉｎｇ　ｍｏｉｓｔｅｎｉｎｇ　ｔｉｍｅ，ｆｒｉｅｄ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｆｒｉｅｄ　ｔｉｍｅ　ｗｅｒｅ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ
ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　Ｌ９（３４）．ＲＥＳＵＬＴＳ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｗａｓ　ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｒｅｆｉｎｅｄ　ｈｏｎｅｙ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｔｈｅ　ｓａｍｅ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ
·０２５· 中国医院药学杂志２０１４年４月第３４卷第７期Ｃｈｉｎ　Ｈｏｓｐ　Ｐｈａｒｍ　Ｊ，Ａｐｒ　２０１４，Ｖｏｌ　３４，Ｎｏ．７