全 文 ：［收稿日期］ 20140728(015)
［基金项目］ 广西科学研究与技术开发计划项目(桂科攻 11107009-3-4)
［第一作者］ 刘吉成，主管药师，理学硕士，从事食品药品分析与药品质量标准研究，Tel:13877502503，E-mail:liujichenggood@ 126. com
［通讯作者］ * 卢文杰，主任药师，从事天然药物研究与开发，Tel:13878817722，E-mail:luweijie0771@ 163． com
广西多叶越南槐 HPLC指纹图谱的建立
及与山豆根 HPLC指纹图谱一致性比较研究
刘吉成1，卢森华1，谢巍2，卢文杰3*
( 1. 广西玉林食品药品检验所，广西 玉林 537000; 2. 广西中医药大学，南宁 530001;
3. 广西中医药研究院，南宁 530022)
［摘要］ 目的:建立多叶越南槐的 HLPC指纹图谱分析方法，为科学评价和有效控制多叶越南槐药材的质量提供参考依
据;并通过指纹图谱比较多叶越南槐与山豆根的相似性，为多叶越南槐与山豆根同源性研究提供参考数据。方法:采用反相
高效液相色谱法，Agilent Eclipse-C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈-0. 05 mol·L
－1磷酸二氢钾溶液(用三乙胺调
pH 6. 4)梯度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 215 nm，柱温 30 ℃，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》2004A版软件
进行数据处理。结果:建立的多叶越南槐指纹图谱有 14 个共有峰，指认了 7 个共有峰;各批药材指纹图谱比较相似度大部分
在 0. 90 以上，基本符合指纹图谱研究技术的要求;多叶越南槐与山豆根指纹图谱相比较，相似度均在 0. 90 以上。结论:该方
法精密度、稳定性及重复性较好，特征性及专属性强，可以有效地用于多叶越南槐药材的质量控制，为开发和利用多叶越南槐
药材资源提供科学依据，通过多叶越南槐与山豆根指纹图谱的比较，可推测出多叶越南槐与山豆根成分相似，亲缘关系相近。
［关键词］ 多叶越南槐;山豆根;高效液相色谱;指纹图谱
［中图分类号］ Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2014)23-0089-06
［doi］ 10． 13422 / j． cnki． syfjx． 2014230089
Establishment of the HPLC Fingerprint of Sophora tonkinensis var． polyphylla
from Guangxi and Comparison of Concordance with
HPLC Fingerprint of S． tonkinensis
LIU Ji-cheng1，LU Sen-hua1，XIE Wei2，LU Wen-jie3*
(1. Guangxi Yulin Institute for Food and Drug Control，Yulin 537000，China;
2. Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530001，China;
3. Guangxi Institute of Chinese Medicine and Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China)
［Abstract］ Objective:to establish the HLPC fingerprint methods of Sophora tonkinensis var． polyphylla
and provide reference for scientific evaluation and quality control of S． tonkinensis var． polyphylla herb． To provide
reference data for the Homology study of ophora tonkinensis polyphylla and S． tonkinensis through comparing the
fingerprints． Method:An HPLC methods was used． An Agilent Eclipse XDB-C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)
column was adopted，and the mobile phase consisted of acetonitrile and 0. 05 mol·L －1 potassium dihydrogen
phosphate solution (adjusted with triethylamine pH 6. 4) with a gradient elution． The flow rate was
1. 0 mL·min －1，column temperature was 30 ℃， and detection wavelength 215 nm． A ‘chromatrographic
fingerprint evaluation system 2004A edition’software was used for data processing． Ｒesult:The establishment
fingerprint of S． tonkinensis var． polyphylla has 14 common peaks and 7 peaks of them were identified using the
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reference retention time and UV-DAD detector extracted spectra dual qualitative indicators． Most of the compare
similarities of fingerprints of each batch herb were above 0. 90，in line with the requirements of fingerprint
technology research． Comparing with the fingerprint of S． tonkinensis var． polyphylla and S． tonkinensis，the
similarity were above 0. 90. Conclusion:The precision，stability and reproducibility of the established method was
good． The method could be effectively used for quality control of S． tonkinensis var． polyphylla herb and provide a
scientific basis for the development and use of the herb． It could be infer that S． tonkinensis var． polyphylla and
S． tonkinensis have similar ingredients and close relationships from the compared study of their fingerprints．
［Key words］ Sophora tonkinensis var． polyphylla;S． tonkinensis;HPLC;fingerprint
多叶越南槐为豆科槐属植物，与山豆根(越南
槐)是同科同属不同的品种，多叶越南槐是越南槐
的一个变种。分布于广西、广东、云南、贵州和江西
等地区［1］。在广西的那坡、靖西、德保、田阳、田林、
龙州、武鸣、凤山、南丹、凌云、乐业等县地区都有多
叶越南槐的分布［2］。其性寒，味苦，具有清热解毒、
消肿利咽之功效，常用于火毒蕴结、咽喉肿痛、齿龈
肿痛、肺热咳嗽、肝炎等疾患的治疗［1］。因多叶越
南槐与山豆根具有相似的性状［3］、成分［4］和药
效［5］，广西民间常把多叶越南槐当作山豆根药材使
用，收载于《广西中药材标准》1990 年版［6］。卢文杰
教授从多叶越南槐中提取分离出生物碱成分有苦参
碱、氧化苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱等［7］，非生物
碱成分有红车轴草苷、高丽槐素、芒柄花素等［8］。
本文采用 HPLC对广西不同产地的多叶越南槐进行
指纹图谱的研究，为系统、科学地评价和有效控制多
叶越南槐药材的质量提供了科学依据;同时将多叶
越南槐指纹图谱与山豆根指纹图谱进行比较，为研
究多叶越南槐与山豆根同源性提供了科学依据。
1 材料
1. 1 仪器 1200 系列高效液相色谱议(美国安捷
伦科技有限公司) ，Millipore Simplicity-185 型超纯水
器(美国密里博) ，AG-204 型电子分析天平(Mettler
Toledo)。
1. 2 试药 实验所用多叶越南槐及山豆根药材样
品从广西各产地采集，详见表 1。样品经广西中医
药研究院卢文杰研究员鉴定为豆科植物多叶越南槐
(Sophora tonkinensis var． polyphylla)和山豆根(S．
tonkinensis)。苦参碱、氧化苦参碱对照品(均由中国
食品药品检定研究院提供，批号分别为 110805-
200508，110780-201007) ;槐果碱、氧化槐果碱、高丽
槐素、芒柄花素、红车轴草苷对照品(均由广西中医
药研究院卢文杰研究员提供，自制，纯度 ＞ 95%) ;
甲醇、乙腈为色谱纯，水为去离子水，其他试剂均为
分析纯。
表 1 多叶越南槐、山豆根产地及采收时间
品种 No． 来源 采摘日期
多叶越南槐 S1 广西祈城 2012-07
S2 百色西林 2011-07
S3 广西合山 2011-10
S4 广西来宾 2011-11
S5 广西祈城 2011-09
S6 广西马山 2012-07
S7 广西东兰 2012-06
S8 广西大化 2011-09
S9 广西都安 2011-10
S10 广西天峨 2011-09
山豆根 S11 广西东兰 2012-07
S12 广西靖西 2012-06
S13 广西天峨 2012-10
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Agilent Eclipse-C18色谱柱(4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ，流速 1. 0 mL·min －1，检测波
长 215 nm，柱温 30 ℃，进样量 10 μL，理论塔板数以高
丽槐素峰计不低于 5 000，流动相乙腈(A)-0. 05 mol·
L －1磷酸二氢钾水溶液(B) (用三乙胺调 pH 6. 4)进
行梯度洗脱(0 ～ 65 min，5% ～80%A)。
2. 2 供试品溶液的制备 取多叶越南槐或山豆根
粉末约 1 g，精密称定，置具塞锥型瓶中，加入无水乙
醇-氨水(3 ∶ 2)2 mL，放置 0. 5 h 后加入三氯甲烷
25 mL，在 70 ℃水浴中回流 2 h，冷却，滤过，水浴上
挥干溶剂，残渣加甲醇适量使溶解，转移至 10 mL量
瓶中，加甲醇定量至刻度，摇匀，用 0. 45 μm 微孔滤
膜滤过，取续滤液即得。
2. 3 对照品溶液的配制 分别取氧化苦参碱、氧化
槐果碱、苦参碱、槐果碱、红车轴草苷、芒柄花素、高
丽槐素对照品约 10 mg，精密称定，分别置 25 mL 量
瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
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2. 4 方法学的考察
2. 4. 1 精密度试验 取 1 号多叶越南槐药材粉末
约 1 g，精密称定，按 2. 2 项下的方法制备供试品溶
液，按 2. 1 项下色谱条件连续进样 6 次，测定。结果
显示，各色谱峰相对保留时间的 ＲSD 0. 01% ～
0. 3%;各色谱峰相对峰面积的 ＲSD 0. 4% ～ 4. 8%;
表明仪器的精密度良好。
2. 4. 2 重复性试验 取 1 号多叶越南槐粉末 6 份，
每份约 1 g，精密称定，按 2. 2 项下的方法制备供试
品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定。结果显示，
6 份样品的各色谱峰相对保留时间的 ＲSD 0. 01% ～
0. 1%;各色谱峰相对峰面积的 ＲSD 2. 1% ～ 4. 7%。
表明样品重复性良好。
2. 4. 3 稳定性试验 取重复性试验项下一供试品
溶液，按 2. 1 项下色谱条件，分别在 0，2，4，8，12，
24 h进行测定。结果显示，各色谱峰相对保留时间
的 ＲSD 0. 02% ～ 0. 3%;各色谱峰相对峰面积的
ＲSD 0. 4% ～ 4. 4%;表明供试品溶液在 24 h 内
稳定。
2. 5 多叶越南槐指纹图谱的建立
2. 5. 1 各批次指纹图谱的采集 取 10 批不同产地
的多叶越南槐药材粉末约 1 g，精密称定，按照 2. 2
项下的方法制备供试品溶液，并按 2. 1 项下色谱条
件进行测定，记录 10 批次多叶南槐药材的色谱图，
以《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》
建立多叶越南槐药材 HPLC指纹图谱。
2. 5. 2 参照色谱峰的建立 本实验中的高丽槐素
为多叶越南槐中已知主要成分，而且高丽槐素所在
指纹图谱中的 8 号峰保留时间适中，峰面积明显，故
选用高丽槐素(8 号峰)作为参照峰(图 1)。
8．高丽槐素
图 1 混合对照品溶液色谱
2. 5. 3 共有峰的确定 运用《中药色谱指纹图谱
相似度评价系统 A 版》对指纹图谱数据分析评价，
10 批次图谱都具有的色谱峰标定为共有指纹图谱
峰。本文共标定 14 个共有指纹峰(图 2)。相似度
软件设置，选择 1 号多叶越南槐药材的图谱为参照
图谱，以平均数法作为生成对照指纹图谱的方法，设
定时间窗宽度为 0. 1 min，软件自动匹配图谱，系统
根据多叶越南槐药材的共有模式，生成对照指纹图
谱为多叶越南槐指纹图谱。以参照峰的保留时间和
峰面积作为 1，分别计算 10 批多叶越南槐药材共有
指纹峰的相对保留时间和相对峰面积(表 2，3)。结
果表明，不同批次的多叶越南槐药材共有峰相对保
留时间 ＲSD 0. 1% ～ 0. 6%，而相对峰面积 ＲSD 较
大。由此可知，本实验建立的色谱方法可以使不同
批次的多叶越南槐药材具有基本一致的色谱行为，
但药材之间各种化学成分的含量受多种因素的影
响，因此具有较大的差异。
图 2 S1 号多叶越南槐药材色谱
2. 5. 4 共有峰的指认 利用对照品对照法对共有
峰进行指认，取氧化苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐
果碱、红车轴草苷、芒柄花素、高丽槐素对照品，配制
成适量浓度，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，得出 7
种对照品的保留时间分别与特征色谱图中的 1，2，
3，4，5，7，8 号峰保留时间一致，并通过在线 DAD 紫
外吸收光谱对照，1，2，3，4，5，7，8 号峰分别与氧化
苦参碱、氧化槐果碱、苦参碱、槐果碱、红车轴草苷、
芒柄花素、高丽槐素对照品峰一致，因此可以确定 1
号峰为氧化苦参碱、2 号峰为氧化槐果碱、3 号峰为
苦参碱、4 号峰为槐果碱、5 号峰为红车轴草苷、7 号
峰为芒柄花素、8 号峰为高丽槐素。这些特征峰可
作为控制多叶越南槐药材质量的指标之一。
2. 5. 5 多叶越南槐相似度评价 本实验采用《中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版》对多叶
越南槐药材 HPLC 指纹图谱进行相似度计算，计算
结果见表 4。10 批次多叶越南槐药材与对照指纹图
谱的相似度计算结果大部分均大于 0. 90，只有少量
批次之间相似度小于 0. 90，表明各批次多叶越南槐
药材与对照指纹图谱有较好的一致性，本方法可用
于综合评价药材的整体质量。
2. 6 多叶越南槐与山豆根 HPLC 指纹图谱一致性
的比较 取 3 批不同产地(表 1)的山豆根药材粉
末约 1 g，精密称定，按 2. 2 项下的方法制备供试品
溶液，按 2. 1 项下色谱条件进行测定，记录 3 批次
·19·
刘吉成，等:广西多叶越南槐 HPLC指纹图谱的建立及与山豆根 HPLC指纹图谱一致性比较研究
表 2 10 批多叶越南槐药材样品共有峰相对保留时间
No． 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ＲSD /%
1 0. 289 9 0. 289 3 0. 291 1 0. 290 3 0. 290 1 0. 290 7 0. 291 1 0. 294 3 0. 293 1 0. 293 3 0. 6
2 0. 322 4 0. 323 0 0. 323 7 0. 323 2 0. 324 0 0. 323 6 0. 323 4 0. 326 1 0. 325 4 0. 325 9 0. 4
3 0. 393 3 0. 393 9 0. 394 5 0. 394 1 0. 394 3 0. 394 7 0. 394 3 0. 394 7 0. 394 8 0. 394 5 0. 1
4 0. 435 1 0. 435 8 0. 436 1 0. 435 8 0. 436 3 0. 436 5 0. 436 0 0. 436 4 0. 436 5 0. 436 6 0. 1
5 0. 724 4 0. 724 7 0. 725 6 0. 724 6 0. 725 3 0. 725 2 0. 725 8 0. 726 0 0. 725 7 0. 724 9 0. 1
6 0. 752 1 0. 752 8 0. 753 3 0. 752 2 0. 752 9 0. 752 8 0. 753 2 0. 753 3 0. 752 9 0. 752 2 0. 1
7 0. 916 1 0. 916 3 0. 916 6 0. 916 4 0. 916 3 0. 914 5 0. 916 8 0. 916 8 0. 914 9 0. 916 4 0. 1
8 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 0
9 1. 035 0 1. 034 7 1. 034 7 1. 034 7 1. 035 0 1. 034 9 1. 034 6 1. 034 5 1. 034 5 1. 034 5 0. 1
10 1. 265 6 1. 273 2 1. 275 2 1. 274 3 1. 275 6 1. 274 7 1. 274 6 1. 274 8 1. 274 1 1. 274 5 0. 2
11 1. 526 5 1. 522 5 1. 524 9 1. 523 8 1. 525 0 1. 524 9 1. 524 3 1. 524 2 1. 523 7 1. 523 2 0. 1
12 1. 608 7 1. 605 2 1. 604 9 1. 606 7 1. 608 1 1. 608 5 1. 607 4 1. 607 4 1. 607 4 1. 606 5 0. 1
13 1. 635 7 1. 632 0 1. 634 1 1. 633 3 1. 634 2 1. 634 5 1. 633 4 1. 633 3 1. 633 4 1. 632 3 0. 1
14 1. 853 5 1. 848 5 1. 851 9 1. 851 3 1. 852 3 1. 853 0 1. 850 2 1. 851 4 1. 851 8 1. 848 8 0. 1
表 3 10 批多叶越南槐药材样品共有峰相对峰面积
No． 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 ＲSD /%
1 2. 623 2 3. 485 8 7. 693 4 2. 621 0 3. 409 1 3. 118 3 3. 148 2 3. 642 7 3. 086 5 2. 576 3 42. 6
2 0. 881 0 0. 688 7 2. 748 1 0. 870 3 0. 585 8 1. 175 6 1. 269 8 0. 994 0 0. 984 6 0. 082 5 67. 2
3 0. 347 2 1. 173 3 1. 297 7 0. 530 8 0. 541 0 0. 606 5 0. 332 3 0. 427 3 0. 468 2 0. 285 3 58. 3
4 0. 196 7 0. 223 0 0. 486 6 0. 157 8 0. 108 8 0. 242 4 0. 219 0 0. 166 7 0. 198 9 0. 023 4 58. 8
5 0. 778 4 0. 789 9 1. 041 1 0. 786 2 0. 562 0 0. 540 9 0. 733 5 0. 778 5 0. 652 8 0. 564 7 20. 9
6 0. 192 8 0. 136 0 0. 284 9 0. 105 4 0. 083 5 0. 066 9 0. 131 0 0. 147 3 0. 095 7 0. 134 8 45. 6
7 0. 052 1 0. 088 8 0. 201 5 0. 061 1 0. 084 2 0. 082 9 0. 039 0 0. 049 2 0. 066 7 0. 048 4 60. 5
8 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 1. 000 0 0
9 0. 205 6 0. 119 9 0. 266 3 0. 164 7 0. 165 2 0. 096 1 0. 260 4 0. 182 7 0. 212 1 0. 188 4 29. 1
10 0. 104 4 0. 190 2 0. 124 5 0. 062 5 0. 146 4 0. 097 0 0. 075 8 0. 256 8 0. 096 6 0. 303 9 55. 1
11 0. 064 4 0. 129 1 0. 089 6 0. 078 7 0. 101 4 0. 143 2 0. 093 4 0. 135 9 0. 096 4 0. 129 5 25. 1
12 0. 081 3 0. 138 1 0. 158 0 0. 059 6 0. 130 6 0. 121 4 0. 096 1 0. 099 8 0. 090 5 0. 130 9 27. 2
13 1. 154 6 2. 205 5 0. 965 6 1. 374 3 2. 215 3 2. 732 2 1. 692 9 2. 574 6 1. 976 6 3. 175 0 35. 7
14 0. 192 4 0. 371 3 0. 315 3 0. 249 0 0. 353 5 0. 412 4 0. 269 6 0. 404 1 0. 309 3 0. 462 0 24. 8
多叶越南槐药材的 HPLC 色谱图，运用《中药色谱
指纹图谱相似度评价系统 A 版》计算机软件选择
编号为 1 的多叶越南槐药材图谱为参照图谱，以
平均数法作为对照指纹图谱的生成方法，设定时
间窗宽度为 0. 1 min 对山豆根药材和多叶越南槐
药材色谱图进行叠加(图 4) ，进行相似度计算(表
5) ，由结果可得 10 批次多叶越南槐药材与山豆根
药材指纹图谱的相似度计算结果均大于 0. 90，表
明各批次多叶越南槐药材与山豆根药材指纹图谱
有较好的一致性，多叶越南槐与山豆根的化学成
分相似，亲缘关系较近(S11，S12，S13 代表山豆
根)。
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 利用 Agilent 1200 系列高效
液相色谱仪进行全波长扫描，本着指纹图谱的确认
必须遵循信息量最大化的原则，对 205，210，215，
220，254，280 nm 扫描的各波长下的色谱图进行分
析比较，结果发现，在 215 nm 处供试品的各色谱分
离峰基线分离、基线平稳，信息量大，固选择 215 nm
作为检测波长。
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表 4 多叶越南槐药材 HPLC指纹图谱相似度计算
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 SＲ
S1 1 0. 957 0. 943 0. 993 0. 938 0. 908 0. 988 0. 962 0. 984 0. 854 0. 981
S2 0. 957 1 0. 886 0. 974 0. 968 0. 936 0. 959 0. 962 0. 975 0. 897 0. 981
S3 0. 943 0. 886 1 0. 921 0. 864 0. 803 0. 927 0. 885 0. 910 0. 721 0. 909
S4 0. 993 0. 974 0. 921 1 0. 967 0. 944 0. 990 0. 969 0. 990 0. 880 0. 993
S5 0. 938 0. 968 0. 864 0. 967 1 0. 978 0. 958 0. 946 0. 964 0. 893 0. 978
S6 0. 908 0. 936 0. 803 0. 944 0. 978 1 0. 948 0. 938 0. 954 0. 905 0. 963
S7 0. 988 0. 959 0. 927 0. 990 0. 958 0. 948 1 0. 970 0. 994 0. 872 0. 990
S8 0. 962 0. 962 0. 885 0. 969 0. 946 0. 938 0. 970 1 0. 984 0. 954 0. 987
S9 0. 984 0. 975 0. 910 0. 99 0. 964 0. 954 0. 994 0. 984 1 0. 905 0. 996
S10 0. 854 0. 897 0. 721 0. 880 0. 893 0. 905 0. 872 0. 954 0. 905 1 0. 918
SＲ 0. 981 0. 981 0. 909 0. 993 0. 978 0. 963 0. 99 0. 987 0. 996 0. 918 1
注:SＲ-由软件生成的对照指纹图谱。
表 5 多叶越南槐及山豆根药材 HPLC指纹图谱相似度计算
No． S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 S13 SＲ
S1 1. 000 0. 957 0. 943 0. 993 0. 938 0. 908 0. 988 0. 962 0. 984 0. 854 0. 941 0. 948 0. 911 0. 975
S2 0. 957 1. 000 0. 886 0. 974 0. 968 0. 936 0. 959 0. 962 0. 975 0. 897 0. 991 0. 978 0. 914 0. 984
S3 0. 943 0. 886 1. 000 0. 921 0. 864 0. 803 0. 927 0. 885 0. 910 0. 721 0. 861 0. 884 0. 903 0. 921
S4 0. 993 0. 974 0. 921 1. 000 0. 967 0. 944 0. 990 0. 969 0. 990 0. 880 0. 965 0. 970 0. 901 0. 989
S5 0. 938 0. 968 0. 864 0. 967 1. 000 0. 978 0. 958 0. 946 0. 964 0. 893 0. 968 0. 990 0. 903 0. 981
S6 0. 908 0. 936 0. 803 0. 944 0. 978 1. 000 0. 948 0. 938 0. 954 0. 905 0. 939 0. 963 0. 902 0. 964
S7 0. 988 0. 959 0. 927 0. 990 0. 958 0. 948 1. 000 0. 970 0. 994 0. 872 0. 948 0. 965 0. 893 0. 985
S8 0. 962 0. 962 0. 885 0. 969 0. 946 0. 938 0. 970 1. 000 0. 984 0. 954 0. 946 0. 964 0. 966 0. 988
S9 0. 984 0. 975 0. 910 0. 990 0. 964 0. 954 0. 994 0. 984 1. 000 0. 905 0. 963 0. 975 0. 920 0. 994
S10 0. 854 0. 897 0. 721 0. 880 0. 893 0. 905 0. 872 0. 954 0. 905 1. 000 0. 889 0. 906 0. 994 0. 928
S11 0. 941 0. 991 0. 861 0. 965 0. 968 0. 939 0. 948 0. 946 0. 963 0. 889 1. 000 0. 973 0. 904 0. 976
S12 0. 948 0. 978 0. 884 0. 970 0. 990 0. 963 0. 965 0. 964 0. 975 0. 906 0. 973 1. 000 0. 919 0. 988
S13 0. 901 0. 914 0. 903 0. 901 0. 903 0. 902 0. 893 0. 966 0. 920 0. 994 0. 904 0. 919 1. 000 0. 943
SＲ 0. 975 0. 984 0. 921 0. 989 0. 981 0. 964 0. 985 0. 988 0. 994 0. 928 0. 976 0. 988 0. 943 1. 000
注:SＲ-由软件生成的对照指纹图谱。
图 3 共有模式建立对照指纹谱
3. 2 流动相的选择 中药材成分复杂，选用单一流
动相很难达到很好的分离效果，本实验采用梯度洗
脱方法，通过调控洗脱程序和流动相比例，使样品在
整个分析时间段达到充分的分离。大多数情况下，
图 4 10 批多叶越南槐(S1 ～ S10)
和 3 批山豆根(S11 ～ S13)HPLC叠加色谱
醇-水系统由于热力学和可压缩性因素的影响，在梯
度洗脱时易导致基线飘移。为了避免在梯度洗脱时
·39·
刘吉成，等:广西多叶越南槐 HPLC指纹图谱的建立及与山豆根 HPLC指纹图谱一致性比较研究
基线的飘移，作者选用乙腈-水［即乙腈-0. 05 mol·L －1
磷酸二氢钾水溶液(三乙胺调 pH 6. 45) ］系统做流
动相，乙腈在 UV短波长检测 HPLC 级吸收最少，产
生的噪声少，梯度基线产生的鬼峰也少。加入磷酸
并用三乙胺调 pH的目的是为了改善色谱峰的分离
程度及改善峰形［9-10］。
3. 3 提取方法的选择 本实验对不同提取溶剂
(甲醇、三氯甲烷、95%乙醇、75%乙醇)和不同的提
取方法(超声提取和回流提取)进行比较，结果发
现，三氯甲烷回流 120 min 提取的供试品溶液色谱
峰数多，组分含量高，信息较丰富［11-12］。
3. 4 指纹图谱的建立 指纹图谱的评价指标是指
供试品指纹图谱与该品种对照用指纹图谱及供试品
之间指纹图谱的相似性。除个别品种视具体情况而
定外，一般成品指纹图谱相似度计算结果在 0. 9 ～
1. 0 作为符合要求。从 10 批样品的高效液相色谱
指纹图谱中可以看出，不同产地多叶越南槐药材各
色谱峰的相对保留时间基本一致，所含成分基本相
同，符合指纹图谱的要求。本实验对多叶越南槐药
材所建立的指纹图谱，为多叶越南槐药材的质量控
制提参考，进而对于其相应制剂的质量控制也会起
积极的作用天然产物常因产地和生长年限不同，各
成分含量有一定的差异，在图谱中也可看出各色谱
峰相对峰面积有较大差异，说明有效成分的含量有
较大差别。
3. 5 实验的创新 本文创立了多叶越南槐药材的
HPLC指纹图谱，并对药材中的 7 种成分进行了指
认和确定，同时与 3 批次不同产地的山豆根药材进
行指纹图谱相似度进行了比较，发现了多叶越南槐
药材与山豆根具有相似的化学成分，可推测出多叶
越南槐药材与山豆根药材亲缘关系相近。
［参考文献］
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［责任编辑 顾雪竹］
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第 20 卷第 23 期
2014 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 20，No． 23
Dec．，2014