全 文 ：收稿日期:2004-07-22
沉水樟体外植株再生体系的建立
翟晓巧1 ,翟翠娟2 ,康伟玲3
(1.河南省林业科学研究院 ,郑州 450008;2.河南农业大学;3.郑州市惠济一中)
摘要:以沉水樟幼嫩茎段为材料 ,对其体外植株高效再生系统进行了研究。在对比激素种类和激素浓度组合
对沉水樟茎段芽诱导和根诱导影响的基础上 , 筛选出了其茎段芽诱导的最适培养基为 MS + 0.2 IBA + 5
BA ,根诱导的最适培养基为 1/2MS+0.3IAA 。芽诱导率最高可达到 86.7%。 该研究结果为沉水樟基因工
程 、细胞工程操作 、新品种培育及其工厂化育苗奠定了坚实的基础。
关键词:沉水樟;激素;培养基;植株再生
中图分类号:S792.23　　　文献标识码:A　　　文章编号:1003-2630(2004)03-0004-02
In Vitro Plantlet Regeneration of Cinnamomum micranthum
ZHAI Xiao-qiao
(Henan Academy of forestry , Zhengzhou 450008 , China)
Abstract:This paper deal with the in vitro plantlet regeneration of Cinnamomum micranthunm.The results indi-
cated that shoo t and roo t induction media are MS + 0.2 IBA + 5 BA and 1/ 2MS+0.3IAA respectively.The
highest Shoot induction rate is 86.7%.this result laid a solid foundation for its gene engineering , cell engineering
and new cultivars breeding.
Key words:Cinnamomum micranthunm;Hormone;Medium;Plantlet regeneration
　　沉水樟(Cinnamom um micranthunm Hay)是樟科 , 樟属
的一种常绿阔叶乔木。其木材纹理通直 ,结构均匀细致 , 气
味芳香 ,是优良的船舶 、家具用材。另外其枝叶可以提取樟
脑油 ,沉水樟精油是配制多种香精及香料的原料。沉水樟属
国家三级保护植物 ,是渐危树种。沉水樟常用种子和扦插方
式进行育苗 ,种子繁殖方式不利于优良无性系的保持且生长
速度慢 ,扦插育苗又受到可用材料少的限制。但是其组织培
养研究还没有见到。为扩大沉水樟的无性繁殖途径 , 在短期
内快速获得大量的苗木满足生产栽培需要 ,本文进行了沉水
樟的组织培养试验。
1　材料与方法
1.1　试验材料
试验材料选用沉水樟树(15 年树龄)当年生的幼嫩茎段。
先将采回的枝条用自来水洗干净 ,然后在超净工作台下先用
0.1%的 HgCl2 消毒 5分钟 ,再用无菌水清洗 4 次后 , 将茎段
剪成长度约为 3cm 的小段接种在不含激素的 MS 培养基上
(培养基中附加 2.0%的蔗糖和 0.7%的琼脂粉), 在培养室
内进行培养。 40d 后可以获得 8cm 高的无菌苗 ,无菌苗的茎
段作为诱导不定芽的材料。培养基的灭菌方法 , 在 121℃的
条件下灭菌 20 分钟。以下培养基的灭菌方法同此。培养温
度 25±2℃, 光照强度 1500Lx。
1.2　芽诱导培养基的筛选
将沉水樟无菌苗的茎段剪成长度为 2cm 的小段放在芽
诱导培养基上 , 基本培养基采用 MS , 激素选用生长素 IBA、
NAA 和 IAA , 细胞分裂素选用 BA 。生长素浓度设 0.1mg/ L
(简写 0.1 ,写法下同)、0.2 和 0.3 与 BA 浓度 1、3、5 、7 的 36
种激素浓度组合试验。 每个组合 10 瓶 , 每瓶 3 个外植体。
培养基中附加 2.5%的蔗糖和 0.7%的琼脂粉。培养 30d 时
统计芽诱导结果 ,以诱导芽肉眼清晰可见为统计标准。培养
条件同上。
1.3　根诱导培养基的筛选
芽诱导培养基上形成的不定芽长到 4cm 时 , 从芽的基部
剪下 ,放入根诱导培养基中。基本培养基采用 1/2MS , 分别
附加浓度为 0.1、0.3和 0.5的 NAA、IBA 和 IAA 。培养基中
附加 2.0%的蔗糖和 0.7%的琼脂粉。每个浓度组合 10 瓶 ,
每瓶 1 颗芽。 25d 时统计根诱导情况。
2　结果与分析
2.1　芽诱导培养基的筛选
2.1.1　IBA 与 BA 浓度组合对沉水樟茎段芽诱导的影响
从表 1 可以看出 , 沉水樟茎段在 IBA 与 BA 不同浓度
组合的培养基上芽诱导率不同 , 其诱导率在 0 ～ 86.7%的范
围内变化。当 IBA 浓度为 0.1 时 , 随 BA 浓度从 1 ～ 7 的升
高 , 芽诱导率从 0 升高到 40.0%;当 IBA 浓度为 0.3 和
0.5 时 , 随 BA 浓度从 1 ～ 7 的升高 , 芽诱导率的变化趋势
相同 , 均呈现出先升高后下降的趋势 , 且两者均在 5BA 处
的诱导率达到最大值。其中 0.2IBA+5BA 的激素组合芽诱
导率 86.7%高 于 0.3IBA + 5BA 培养基 上的 诱导 率
(76.7%)。以上表明沉水樟茎段芽的诱导受到 IBA 与 BA
浓度组合的影响。
第 24 卷第 3 期
2 0 0 4 年 9 月　　　　　　 　　 河 南 林 业 科 技Journal of Henan Forestry Science and Technolog y　　　　　　　　　Vo l.24 No.3Sep.2 0 0 4
表 1　IBA 与 BA 浓度对沉水樟茎段芽诱导的影响
IBA 浓度/
(mg/ L)
BA浓度/
(mg/ L)
外植体数
/个
诱导芽外植体
数/个
芽诱导率
/ %
0.1
0.1
0.1
0.1
0.2
0.2
0.2
0.2
0.3
0.3
0.3
0.3
1
3
5
7
1
3
5
7
1
3
5
7
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
0
0
5
12
14
22
26
19
13
18
23
14
0
0
16.7
40.0
46.7
73.3
86.7
63.3
43.3
60.0
76.7
46.7
2.1.2　IAA 与 BA 浓度组合对沉水樟茎段芽诱导的影响
沉水樟茎段在 IAA 与 BA 不同浓度组合的培养基上芽
诱导率不同(表 2), 其芽诱导率在 0 ～ 73.3.%的范围内变
化。当 IAA 浓度为0.1 、0.3 和 0.5时 , 随 BA浓度从1 ～ 7 的
升高 ,芽诱导率均呈现出升高的趋势。但是 3 种 IAA浓度与
4 种 BA 浓度组合中芽诱导率升高的幅度不同。 0.1IAA 与
BA组合上芽诱导率变化幅度最小(0 ～ 30.0%), 0.2IAA 与
BA组合上芽诱导率变化幅度最大(0 ～ 73.3%)。从诱导率
的高低看 ,可以选择 MS+0.2IAA+7BA 为沉水樟茎段芽诱
导的培养基。
表 2　IAA与 BA浓度对沉水樟茎段芽诱导的影响
IAA浓度/
(mg/ L)
BA浓度/
(mg/ L)
外植体数
/个
诱导芽外植
体数/个
芽诱导率
/ %
0.1
0.1
0.1
0.1
0.2
0.2
0.2
0.2
0.3
0.3
0.3
0.3
1
3
5
7
1
3
5
7
1
3
5
7
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
0
2
5
9
5
16
19
22
3
5
10
15
0
6.7
16.7
30.0
16.7
53.3
63.3
73.3
10.0
16.7
33.3
50.0
2.1.3　NAA 与 BA 浓度组合对沉水樟茎段芽诱导的影响
NAA与 BA的不同浓度组合对沉水樟茎段芽诱导的影
响从表 3可以看出 , 芽诱导率在 0 ～ 70.0%的范围内变化。
当 NAA 浓度为 0.1、0.3和 0.5 时 , 随 BA浓度的升高芽诱导
率均呈现增大的趋势。但在 0.1NAA和 0.3NAA 分别与 BA
的 4 种浓度组合中 , 芽诱导率普遍较低 , 最高分别只有
26.7%和 43.3%。 0.2NAA 与 BA 的 4 种浓度组合中 , 芽诱
导率最高达到 70.0%。
从以上 3 种生长素种类 IBA 、IAA 和 NAA与 BA浓度组
合对沉水樟茎段芽诱导分析结果看 , 3 种生长素与 BA 结合
使用均可以诱导出较高的不定芽(最高芽诱导率均在 70%以
上)。从最高芽诱导率看 , 选择MS+0.2IBA+5BA 为沉水樟
茎段芽诱导的最适培养基。
表 3　NAA 与 BA 浓度对沉水樟茎段芽诱导的影响
NAA 浓度/
(mg/ L)
BA浓度/
(mg/ L)
外植体数
/个
诱导芽外植
体数/个
芽诱导率
/ %
0.1
0.1
0.1
0.1
0.2
0.2
0.2
0.2
0.3
0.3
0.3
0.3
1
3
5
7
1
3
5
7
1
3
5
7
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
30
0
0
3
8
4
11
16
21
0
5
9
13
0
0
10
26.7
13.3
36.7
53.3
70.0
0
16.7
30.0
43.3
2.2　根诱导培养基的筛选
从表 4 可以看出 ,沉水樟幼芽在含有不同种类和浓度的
生根培养基上根诱导率有很大的不同。当生长素为 IAA时 ,
浓度在 0.3和 0.5 时根诱导率均可以达到 100%;当生长素
为 IBA 和 NAA时 , 随浓度从 0.1 到 0.5 的增大 ,根诱导率均
表现出升高的趋势 ,生根率最高达到 70%。在不含生长素的
培养基上没有根的形成。以上表明 , 沉水樟幼芽根的形成需
要生长素的诱导且与生长素的种类和浓度密切相关。从 3
种生长素 IAA 、IBA和 NAA对沉水樟幼芽根诱导的结果看 ,
IAA的诱导生根能力最强 , 根诱导率最高 , 因此选择 0.3I A
A 作为适宜沉水樟幼芽根诱导的生长素种类和浓度 。。
表 4　生长素对沉水樟根诱导的影响
激素浓度/(mg/ L) 接种芽数 生根芽数 生根率/ %
0
0.1IAA
0.3IAA
0.5IAA
0.1IBA
0.3IBA
0.5IBA
0.1NAA
0.3NAA
0.5NAA
10
10
10
10
10
10
10
10
10
10
0
3
10
10
2
5
7
1
3
6
0
60
100
100
20
50
70
10
30
60
3　结论
通过对沉水樟茎段芽和根的诱导试验 ,可以得出如下结
论:
1)茎段芽诱导的培养基为 MS+0.2IBA+5BA。
2)根诱导的培养基为 1/ 2MS+0.3IAA。
(责任编辑:王文彬)
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