全 文 ：李 媛，侯可雷． 五莲山野生迎红杜鹃组织快繁技术［J］． 江苏农业科学，2014，42(8):55 － 56，180．
五莲山野生迎红杜鹃组织快繁技术
李 媛，侯可雷
(日照职业技术学院，山东日照 276826)
摘要:以野生迎红杜鹃幼嫩枝芽为试验材料，进行组织培养技术研究。结果表明:当年生野生迎红杜鹃嫩枝的最
佳消毒方法为，先用 0． 25 g /L多菌灵浸泡 45 min，然后用 75%乙醇溶液消毒 30 s，再用 0． 1% HgCl2 消毒 6 min;最佳
启动培养基配方为 Ｒead + 3 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA + 30 g /L蔗糖 + 6． 5 g /L琼脂粉，pH值 5． 5，该条件下诱芽率达
到 89． 73%;最佳继代增殖培养基配方为 1 /2 Ｒead + 2 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA;最适生根培养基配方为 Ｒead +
0． 5 mg /L NAA + 20 g /L蔗糖。
关键词:迎红杜鹃;正交设计;组织培养
中图分类号:S685． 210． 4 + 3 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2014)08 － 0055 － 02
收稿日期:2013 － 11 － 06
基金项目:日照职业技术学院自然科学基金(编号:11Y165)。
作者简介:李 媛(1982—)，女，山东临沂人，硕士研究生，讲师，从事
植物组织培养教学和科研工作。 E － mail:angelalee1231 @
163． com。
杜鹃花是世界著名的园林观赏植物，也是我国十大传统
名花之一，与龙胆、报春并称为世界三大高山野生花卉［1］。
我国杜鹃花栽培历史悠久，种质资源丰富，在环境绿化、园林
观赏等方面应用很广［2 － 3］。五莲山位于山东省日照市，是我
国野生杜鹃花资源的主要分布地之一，拥有迎红杜鹃(Ｒhodo-
dendron mucronulatum)、映山红(Ｒhododendron simsii)、照山白
(Ｒhododendron micramthum)等三大品系共 40 多个杜鹃花品
种，是长江以北地区最大的野生杜鹃花栖息地［4］。迎红杜鹃
别称迎山红、万荆子、蓝荆子、尖叶杜鹃等［5］，属杜鹃花科杜
鹃花属的落叶灌木，生于山地灌丛及石砬子上，喜光、喜湿润，
稍耐阴，耐寒冷，喜酸性土壤，忌高温、干旱，花粉红绚丽，秋叶
绿、红、黄相间，娇艳优美，盛花期长达 1 个月，彩叶期长达
2 个月，是花带、花境、花丛等园林景观设计的优良素材［6］。
迎红杜鹃在长江以北地区少有推广［7］，仅停留在少量野
生苗被移植应用的水平上，主要是因为常规繁殖方法下繁殖
系数较低，而且其对生长环境要求苛刻，驯化栽培有一定难
度［8 － 11］。本研究探讨了迎红杜鹃快速繁殖技术，该技术在较
短时间内凭借少量母本材料获得了较多无性系名贵苗木，以
期为该树种更好地服务于未来城乡绿化建设提供支持。
1 材料与方法
1． 1 材料
在五莲山采集野生迎红杜鹃嫩枝条。在连续晴天 3 d以
上、枝条无露水时进行取样，取样时间一般在 09:00—10:00，
剪取无病虫害、生长健壮的枝梢。
1． 2 试验方法
1． 2． 1 外植体消毒灭菌 用流水冲洗、去除外植体表面附着
物后，放入洗洁精稀释液中逐个清洗并浸泡 5 min，再置于流
水中 1 h以上，彻底洗去洗涤剂后转入超净工作台内，进行灭
菌处理。对外植体先用 0． 25 g /L多菌灵浸泡，再用 75%乙醇
溶液浸泡，最后用 0． 1% HgCl2 进行消毒。每种消毒剂的消
毒时间设 3 个水平，采用 L9(3
4)正交设计进行试验(表 1)。
每个处理重复 3 次。统计外植体污染率、褐化率、成活率。
表 1 外植体消毒灭菌正交试验因素水平
水平
因素
A:0． 25 g /L多菌灵
消毒时间(min)
B:75%乙醇溶液
消毒时间(s)
C:0． 1% HgCl2
消毒时间(min)
1 15 15 4
2 30 30 6
3 45 60 8
1． 2． 2 启动培养基配方筛选 采用 L9(3
4)正交试验探索培
养基(1 /4 MS、Ｒead、WPM)、激素(ZT、NAA)对迎红杜鹃茎段
诱导的影响，培养基中加 30 g /L蔗糖、6． 5 g /L琼脂，pH值为
5． 5，因素水平见表 2。每瓶接种 1 个外植体，每次每个处理
接种 10 瓶，重复 3 次。
表 2 启动培养基配方筛选正交试验因素水平
水平
因素
A:培养基 B:ZT(mg /L) C:NAA(mg /L)
1 1 /4MS 1 0． 1
2 Ｒead 2 0． 5
3 WPM 3 1． 0
1． 2． 3 继代培养基配方筛选 以改良 Ｒead培养基为基本培
养基，以 ZT为影响因素，ZT设 1、2、3 mg /L等 3 个水平，每个
组合 30 瓶，重复 2 次，统计增殖率。
1． 2． 4 生根培养方案 基本培养基选用 Ｒead 和 1 /2 Ｒead，
蔗糖浓度分别为 10、20、30 g /L。每个处理接种 10 株组培苗，
3 次重复，生长调节剂均为 0． 5 mg /L NAA，pH值 5． 5，40 d后
调查其生根率。
1． 2． 5 驯化移栽 选取根系健壮且数量多的幼苗，将其培养
瓶移出光照培养箱，放在 18 ～ 25 ℃室温下炼苗。炼苗结束后
将幼苗从培养瓶中取出，洗净根部的培养基，将其移栽到已灭
菌并完全冷却的基质 (沙、珍珠岩、营养土体积比为
1 ∶ 1 ∶ 2)中。
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2 结果与分析
2． 1 不同消毒方法对杀菌效果的影响
由表 3 可以看出，不同消毒剂、消毒时间对迎红杜鹃外植
体的杀菌效果有显著差异。从接种后的迎红杜鹃组培苗情况
来看，最好消毒方法为 A8 处理，即 0． 25 g /L 多菌灵浸泡
45 min，75%乙醇溶液消毒 30 s，0． 1%HgCl2 消毒 6min。该消
毒方式能够保证迎红杜鹃外植体褐化率最低，感染率最低，成
活率最高。对西洋杜鹃组培苗的成活率进行极差分析，同样
可以得出最佳消毒方式是 A8 处理。
表 3 消毒方法对杀菌效果的影响
处理
因素
A:0． 25 g /L
多菌灵
消毒时间
B:75%
乙醇溶液
消毒时间
C:0． 1%
HgCl2
消毒时间
褐化率
(%)
感染率
(%)
成活率
(%)
A1 1 1 1 15． 00 65． 00 20． 00
A2 1 2 2 16． 67 18． 33 65． 00
A3 1 3 3 40． 00 11． 67 48． 33
A4 2 1 2 30． 00 45． 00 25． 00
A5 2 2 3 58． 33 26． 67 15． 00
A6 2 3 1 28． 33 46． 67 25． 00
A7 3 1 3 51． 67 13． 33 35． 00
A8 3 2 2 10． 00 8． 33 81． 67
A9 3 3 1 46． 67 16． 67 36． 66
2． 2 不同培养基配方对出芽诱导效果的影响
由表 4 可见，不同基本培养基和激素配比对茎段芽的诱
导培养影响(出芽率)差异显著。极差分析和方差分析可知，
各因素对出芽率影响效果的大小依次为:培养基类型 ＞ ZT浓
度 ＞ NAA浓度。3 种基本培养基对出芽率的影响差异显著，
使用 Ｒead基本培养基的出芽率最高(B6 处理);ZT浓度在高
水平时对迎红杜鹃出芽有促进作用;NAA 浓度为 0． 1 mg /L
时诱导出芽效果最佳。
表 4 芽诱导培养效果
处理
因素
A:培养基 B:ZT
(mg /L)
C:NAA
(mg /L)
出芽率
(%)
B1 1 1 1 6． 53
B2 1 2 2 12． 24
B3 1 3 3 18． 67
B4 2 1 2 62． 89
B5 2 2 3 68． 54
B6 2 3 1 89． 73
B7 3 1 3 47． 60
B8 3 2 1 55． 42
B9 3 3 2 58． 16
2． 3 ZT浓度对增殖培养的影响
由表 5 可以看出，Ｒead + 3 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA 和
Ｒead + 2 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA 处理的增殖系数较高，可
以达到 4 以上。但 ZT浓度达到 3 mg /L 时，增殖苗较细小瘦
弱，且有部分玻璃化。因此，迎红杜鹃的适合增殖培养基为
Ｒead + 2 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA。
2． 4 不同配方对生根培养的影响
由表 6 可知，基本培养基为 1 /2 Ｒead、蔗糖浓度为 20 g /L
表 5 ZT浓度对增殖系数的影响
培养基配方 增殖系数
Ｒead + 1 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA 2． 8
Ｒead + 2 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA 4． 2
Ｒead + 3 mg /L ZT + 0． 1 mg /L NAA 4． 6
时，迎红杜鹃组培苗瓶内生根效果最好，生根率达到
81. 72%，与其他组合处理差异较大，说明迎红杜鹃组培苗瓶
内生根所需的基本培养基和蔗糖浓度均较低。
表 6 不同配方对生根效果的影响
基本培养基 蔗糖浓度(g /L) 生根率(%)
Ｒead 30 31． 83
20 59． 24
10 42． 89
1 /2 Ｒead 30 56． 73
20 81． 72
10 67． 34
3 结论
野生迎红杜鹃外植体表面携带各种污染微生物，消毒较
困难，仅靠提高消毒剂浓度和消毒时间，虽然在一定条件下能
将细菌、真菌等污染微生物全部杀死，但同时会将植物外植体
细胞杀死或损坏大部分外植体从而引起褐变，最终会导致外
植体死亡。消毒时间过短又无法完全清除外植体上的真菌、
细菌等。因此，如何在外植体污染率、成活率、褐变率间找到
动态平衡点，选择合适的消毒剂种类、浓度和消毒时间是关
键。多菌灵是一种广谱、低毒、内吸性杀菌剂，虽然不能防止
细菌污染，但对多种霉菌生长有强烈抑制作用，具有较好的防
霉效果，它和 HgCl2、乙醇溶液联合组成的复合消毒剂的效果
明显好于单一使用某种消毒剂。本研究表明，先用 0． 25 g /L
多菌灵浸泡 45 min，然后用 75%乙醇溶液消毒 30 s，最后用
0. 1% HgCl2 消毒 6 min，是最好的迎红杜鹃外植体消毒方式，
该方式能保证较高的外植体成活率以及较低的褐化率、污
染率。
迎红杜鹃的最佳启动培养基是 Ｒead + 3 mg /L ZT +
0． 1 mg /L NAA。迎红杜鹃是一种对培养基渗透压反应敏感
的植物，盐分浓度低及 NH +4 /NO
－
3 高的基本培养基对迎红杜
鹃的培养效果较好，如本研究使用的 1 /4 MS、Ｒead、WPM。
Ｒead培养基减少了 NH4NO3、KNO3 用量，加入(NH4)2 SO4 使
NH +4 ∶ NO
－
3 为 1 ∶ 1，同时去除碘化钾(KI)，将培养基 pH 值
降至 5，更适于耐寒落叶杜鹃的培养［12］。高浓度的 ZT 能够
很好地刺激杜鹃组培苗诱导出芽，增殖系数高;但其浓度过高
时，培养的试管苗细弱，容易形成玻璃苗。
为了获得大量组培苗，须要对芽诱导培养后获得的芽体进
行增殖培养。使用较高浓度的细胞分裂素和一定浓度的生长
素能有效提高芽体的增殖速率，并获得较高品质的新芽，但此
过程中必须控制好二者间的浓度关系。细胞分裂素浓度过高
将会降低芽体质量，从而抑制芽体的增殖效果。适合迎红杜鹃
增殖的培养基配方为 Ｒead +2 mg /L ZT +0． 1 mg /L NAA。
杜鹃花是木本植物，瓶内生根培养困难，生根率较低，需
(下转第 180 页)
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引起，48． 9%由环境差异和试验误差等其他因素引起，说明生
殖构件穗长的表型可塑性比较大。
3 结论与讨论
影响植物种群生殖分配的因素非常复杂，遗传特性、自然
环境、生长年限、栽培管理等方面都制约着植物种群的生殖分
配，其存在的差异也很可能受多重因素的交互作用影响而不
容易被发现。生殖生长分配 =平均穗长 /平均株高 × 100%;
生殖分配 =繁殖器官生物量 /地上植株总生物量;用各构件的
生物量占地上全株总生物量的比例作为生物量分配的数量指
标，即叶生物量分配 = 叶 生 物 量 /地 上 全 株 总 生 物
量 × 100%［9］。
本试验结果表明，在华北剪股颖种群生殖分配格局中，生
殖分配与叶生物量分配、秆生物量分配呈明显的负相关，说明
营养元素在植株体内按一定比例流动;生殖生长分配与秆生
长分配呈明显的负相关，说明在生殖生长过程中植株体内的
营养元素从各构件流向繁殖器官。
在生殖构件穗长与株高的线性函数中，a值为 － 4． 151 6，
可见当株高达到 13． 62 cm时才有生殖构件穗生长，说明植株
的营养生长和生殖生长具有按比例生长的高度协调性。
在穗生物量与地上全株生物量的线性函数中，a 值为
－ 0． 007 8，说明华北剪股颖地上全株生物量积累到 0． 029 g
时，才开始有生殖构件穗的物质积累。
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12031 － 12034．
(上接第 56 页)
要较低的培养基浓度和蔗糖浓度;也可采用组培苗瓶外微条
扦插生根的方法，不仅能够迅速扩大繁殖系数，而且能省去生
根培养时间，提高商品化生产效率。
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