全 文 ：植物生理学通讯 1 9 86 ( )S , 60一骆
P la . t P h y s `0 10 9夕 C o 解扔 u n玄e a t i o .
烟台柴胡总皂戒的薄层层析和高效液相色谱 (HPL )C 鉴定 .
.宋长铣 赵厚民
(江苏省植物研究所 , 南京 ) ` (江苏省理化测试中心 , 南京 )
ID E N T IF IC A T IO N O F S AIK Q SA P O N IN F RO M B uP l
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( P h夕 s i c e a ” d C h e n f s e ” 夕 T e s亡 C e ” * r e o f J亡a 。夕 s u P r o 口 i” e e e )
柴胡是重要的中药材。 日本学者从三 岛柴 胡
( B
u p le “ r “ m f a l c a t“ m ) 根中共分离得到 1 2 种 皂
贰工1 1。
197 9年春天以来 , 我们以烟台柴胡为材料 , 提
取分离皂贰 。 现将几年结果小结如下 。
材 料 和 方 法
材料系从江苏连云港 、 山东济南购得。 土名北
柴胡 , 又称竹叶柴胡 , 经鉴定为烟台柴胡 (肠 lP e -
` r “ m e h i o e 件: e D C . f
.
o a o h e r e k亩` ) , 取报研细备
用 。
一 、 总乌试的获得
在回流的条件下 , 以95 %乙醇在沸水浴上提取
根粉。 提取液经减压浓缩后 ,除去水不溶物 ,用正丁
醇一水进行液一液分配 , 至正丁醇层对 L加 b er m a n n -
tI B u r hc a r d反应皇阴性为止 。 合并正丁醇层 ,减压
浓缩至二定体积 , 用 乙醚或丙酮沉淀粗皂俄 。
将粗皂贰拌样上硅藻土柱 , 依次用含毗吮的抓
仿一甲醇 ( g : 1 ) 、 ( 8 : 2 ) 和 乙酸乙醋一甲醇 ( 8 : 2 ) [ 5 ]洗
脱 , 将氛仿一甲醇 (8 :幻的洗脱物浓缩拌样上硅胶柱 ,
用 乙酸乙醋一乙醇 ( 8 : 2) 洗脱 , 即得总皂试 ,与此同时
还将粗皂试经过氛仿饱和的水溶液透析 、 M g o 吸
附 、 乙醇再提取等项处理后上硅胶柱 , 依次用氯仿 、
氯仿二乙醇 ( 。 : 1 ) 、 ( s : 2 ) 、 ( 7 . 5 ) ,氯仿一甲醇一水 ( 7 : 3 :
0
.
5 )
、
( 6 : 4 : 0
.
4 [ `〕洗脱 ,则在抓仿一乙醇 ( 8 : 2 ) 、 ( 7 : s )
的流分中洗下总皂贰 , 提供各项鉴定 。
总皂贰的进一步纯化是在去活性硅胶柱上 , 用
正丁醇一乙酸乙酮一水 ( 4小 1 . : 1) 洗脱 。 此 外还在
M e i g e l ( CH P Z o P ) ( M l t s u b l s 五i )反相层析柱上 ,用
75 %甲醇洗脱 。
二 、 薄层层析
根据文献 :F, , ] , 用硅胶 G板 , 分别用氛仿一甲醇
一水 ( 30 : 1 0 : 1 ) 和 乙酸乙醋一乙醇一水 ( 8 : 2 : 1 ) 作展开
剂 。 1 0% H : 5 0 4显色。
柴胡皂贰 a 、 d的标准品由日本柴田承二教授和
中国科学院昆明植物研究所植化室惠赠 。
三 、 高效液相色谱分析
1
. 仪器及色谱分离条件
仪器 : 日本岛津 L C 一 Z F 型高效液相色谱仪 , 附
S P D
一
1型多波长紫外检测器 .
柱子 : 用西德 E . M er ck 公司生产的 L加五r os 。 -
r b R P一 s , s u 固定相装填娇5 x i s o m m色谱柱 。
柱温 : 3 0 ℃ 。
柱压 : l i s k g / e m Z 。
流动相 : 甲醇一水一 乙酸 ( 36 % )一三乙胺 ( 7 5 , 2 5一
。 . 3 , 。 . 3 , V / V ) 。 甲醇 、 乙酸 、 三乙胺均为分析纯 ,
水为重蒸馏水 。
流速 : l m l / m王on
波长 : 2 54 n m 。
灵敏度 : 。 . 16 A U F (S 满刻度吸光度 ) 。
2
. 实验方法
取前面制得的烟台柴胡皂贰和柴胡皂贰 a 、 d标
准品于磨口试管内 , 用甲醇 (分析纯 )溶解 。 用微量
本文 19 85年 5 月 9 日收到 , 198 6年 5 月 8 日修改定稿’
. 承中国科学院南京土壤研究所陆长清同志及本所金
传嘉 、 单文碘 、 王翔燕等同志协助进行紫外 、 红外鉴定 ,
刘守炉同志鉴定植物标本 , 特此致谢 l
DOI : 10. 13592 /j . cnki . ppj . 1986. 05. 014
住射器分别吸取姻台柴胡皂试和柴胡皂试 a、 d的甲
辞液 , 通过高压六通阀进入色谱柱 , 按上述分离条
件进行色谱分析。
俄 , 虽然获得同上述相近似的结果 , 但是样品的报
失较大。
3
. 表1和图 2一4是高效液相色谱的分析结果。
结 果 和 讨 论
1
. 总皂贰为黄白色无定形粉末 , 熔点为2 02 一
卫06 ℃ (用 K of ler 显微熔点仪测定 , 未校正 。 此结果
与文献报道的柴胡皂试C的熔点 20 2一 2 10 ℃相近 ) 。
抱沫反应和 L i e b e r m a n n 一 B u r e五a r d反应均明显。
红外光谱测定表明其在 l o s o c m 一立处有一宽峰 (贰类
的特征峰 ) 。 紫外光谱测定表明其 最大吸 收 值在
2 54 n m (与柴胡皂贰 a 、 e的最大吸收值 25 z n 。 [ 5 ]比 ,
已发生向红位移 ) 。
2
. 图 1 是用 乙酸乙醋一乙醇 : 水 (8 : 2 : 1) 所展开
钓薄层层析谱 。 可以看出 , 总皂贰包含柴胡皂贰纵
。 、 d在内的 7 个组分。 当然 , 层析谱上部的两个斑
点不太明显 , 表明是微量组分 。
用氯仿一甲醇一水 ( 3。 : 10 : 1) 展开 , 总皂贰也是
被分离成 7个组分 , 层析谱上部也是两个微量组分 ,
然而结果同文献 z[, ” ]一样 , 柴胡皂试 a 、 d没有分离 。
由此可以证明 , 总皂贰包含柴胡皂贰 a 、 c 、 d
在内 5一 6个组分 , 另外 , 还有两个微量皂试 。
总皂试纯化后在这两种溶剂系统所展开的薄层
〔层析谱上仍显出两个斑点 。
此外 , 我们也试验过用制备性薄层层析纯化皂
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田 1 柴胡皂试的薄层层析讲
展开剂 , 乙酸乙醋一乙醇一水 ( 8 , 2 : l)
显色剂: 10 书H Z SO 。
1
, 柴胡皂戒a( 标准品 ) ; 2 . 总皂戒根据文献`2城定
柴胡皂戒 c 的位置 ; 3 . 从去活性柱上洗脱下来的皂戒 ;
` . 从反相柱上洗脱下来的皂戒 ; 5 . 柴胡皂戒 d( 标准品 .)
表 1 柴胡息俄的HP LC结果
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显然 , 所有的 H P L C谱上的第 1峰 (保留时间为
:2
.
12 士 0 . l m 玉n ) 是流动相的溶剂峰 。 但是如从去活
J性柱上洗脱下来的皂试图谱 (图 4 , 中 ) ,该峰的峰高
虽然只有柴胡皂试 a的图谱 (图2) 上的相 应 值 的 一
半 , 然而进样星只有它的 1 / 4 0 , 而比柴胡皂贰 d的图
谱 (图 3) 上的相应值几乎高出 1倍 。 再如从反相柱上
扶脱下来的皂试的图谱 (图 4 , 右 ) , 进样量只有图2
;的 3 / 4。 , 图 3的 1 / 3 ,溶剂峰的峰高却为图 2 的 2 倍 ,
图 3 的 6 . 6倍 。 总皂贰的 H P L C谱 (图 4 , 左 )悄况亦
然 。 我们以往曾作过空白试验 , 表明进样量越大 ,
溶剂峰越高 。 根据以上讨论 , 可以丛为柴胡皂试的
溶剂峰可能还夹杂着保留时间与之相近的组份峰 。
据此 ,从图表可以看出 : ( l) 从日本柴田教授和昆明
植物所得到的柴胡皂贰标准品在H P L C上都不是纯
品 , 扣除溶剂峰 , 柴胡皂贰 a 包含 3一 4个组分 , 柴
胡皂试 d 包弯2一 3个组分 。 我们将图 2 、 3中最大峰
田 2 柴胡皂试( a昆明植物所 )的H P L C分离图讲
进样量 ;在。拼 1.
刀 1 1n
困 3柴胡皂俄d( 日本柴田教授 )的H p L C分离圈拼
进样量 : 6川 .
(主成分 )的保留时间 13. 8 3和 9. 42 分分别定为柴胡
皂贰 a和 d 的保留值。 在难得弄到纯度更高的单体
的情况下应该是可行的 。 可惜的是 , 从柴田教授处
得到的柴胡皂试 a 和从昆明植物所得到的柴胡皂盆
(面 n )
图 4 柴胡皂俄的 H P L C分离巴谱
左 : 总皂戒 ; 中 : 从去活性愧上冼
进 样量 :瞥瞥锐 ;毋 1渺相赴洗脱下来的皂“
d在H P L C谱上没有显示出明显的主峰 , 但仍包含
保留时间为 13 . 83 和 9 . 43 分的组分 , 对于柴胡皂试
a 、 d的保留值的确定是会有参考意义的 。 ( 2) 总皂
贰在H P L C上出现 9卿牵, 根据以上对溶剂峰的讨
论 , 可以认为它包含柴胡皂贰 a 、 d在内8一 9个组分 ,
而以 d 为主成份。 ( 3) 同理 , 经过 纯 化 的 皂贰 在
H P L C上分离出 6一 7个组分 , 包含 a 、 d , 以 d 为主 。
和薄层层析相比 , 上述结果充分说明作为分离
鉴定手段 , H P L C 比常规方法灵敏 , 也有利于用制
备性 H P L C分离出纯度更高的单体来。
由于标准品的量太少 , 不能进行定最 测定 , 这
是本工作的缺点 , 也是我们今后努力的方向。
今 考 文 献
[ 1〕 宋长铣 , 1 9 5 4 , 植物生理学通讯 1 9 5 4( 1 ) : 3 1一 3 ` .
[幻 赤掘昭 、香川清水 , 1 0 7 4 , 生药学杂志 2 5 , 12 2一 12`
[ 3 ] 柴田承二等 , i , 6 6 , 药学杂志 5 6 : 1 1 3 2一 2 1 37
[选1 Isb u H
.
o t a 忿. , 1 0 5 0 , C h e m . p h a r . B u l l . 2 8 : 2 3 67 ·
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上海植生所举办 “ 生物生产力与光合作用测定技术 ” 培训班
中科院上海植生所于 1 9 8 6年 7 月28 日至 8 月 27 日举办了 “生物生产力与光合作用测定技术 ” 培训班。 参
加的学员共 30 人 , 他们来 自16 个省 、 市的农 、 林研究所和大学生物系等单位 , 中年科技人员占三分之二。
培训内容有酶学及亚细胞器各水平的各种光合反应 、 叶片的气体交换 、 群体结构 、 各生态类型的光合
特性 、 水势 、 田间小气候等多种技术方法 。
培训班采取了三种学习形式 : 1 . 教员讲课。 系统地向学员介绍光合作用机理和生理生态的一般知识和
新进展以及有关技术 , 使学员掌握总体的情况 。 2 ` 学员实习 。 具体进行各种技术操作 , 每个学员都有亲自
动手的机会 , 以便回去以后能开展这方面的工作。 3 . 学术交流 。 举行学术报告和墙报展览。 这批学员中很
多都是有一定学术成就的科技工作者 , 培训班提供条件 , 使他们的学术观点得以互相介绍 。 这进一步扩大
了学员的视野 , 提高了学习的效果 。
为了搞好这次培训 , 该所抽调 18 位中青年科技人员担任教学工作 , 一些科学家也承担了部分教学任务 。
为期一个月的培训班 , 达到了预期的目的 , 学员们反映较好。 有些学员认为培训班的教学方法有一定
参考价值 , 许多实习可直接用于教学 , 也为培养研究生打开了路子 。 许多学员还建议今后多办这样的培讥
班 , 让边远地区的实际工作者能经常得到学习新技术的机会 。
(据 《上海植生所 简报》 ) .
太湖水面无土栽培陆生植物研究通过鉴定
由中科院上海植生所与中科院南京地理所协作进行的太湖水面无土栽培陆生植物研究 , 已 于 1 9 8 6年 , 、
月 15 一 17 日在东山举行的自然湖泊水面无土栽培鉴定会上通过鉴定 。 参与鉴定会的同志认为 , 在大水面 .七以
无土栽培方式种植 30 余种陆生植物并获成功 , 对开发利用自然水面 , 扩大种植面积 , 提供了有参考价位的
资料。 栽培所用的浮框和蛇皮袋两种方式制作简单 , 使用方便 , 肥料利用率较高 , 有进一步推广的可能性卜
是一项具发展前景的工作。
( 黄国宏 )
备月扣玉劣鸽妈鸽类劣备类妈类备类备类己右翻冬
《生物生产力和光合作用测定技术 》 已出版发行
本刊编辑部不断收到读者来信 , 询问和要求预订 《生物生产力和光合作用 测定技术 》一书。 现该书已由
科学出版社正式出版发行 , 每本定价 5 . 0 元 。 读者可直接向北京朝内大街 13 7 号科学出版社发行处邮购科
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